组蛋白精氨酸甲基化酶在人体外受精发育阻滞胚胎中的功能研究

探究组蛋白精氨酸甲基化酶(PRMT)在体外受精的人类胚胎发育阻滞中的作用。方法 收集丢弃的70枚体外受精人类胚胎，选取12枚正常发育的胚胎为正常组，12枚发育阻滞胚胎为阻滞组。蛋白印迹和免疫荧光检测2组组蛋白精氨酸甲基化酶6(PRMT6)蛋白质水平，蛋白印迹检测组蛋白H3在精氨酸2的二甲基化(H3R2me2)和组蛋白H3在赖氨酸4的三甲基化(H3K4me3)水平。敲除46枚发育阻滞胚胎中的PRMT6(PRMT6敲除组，n=46),qPCR和蛋白印迹检测阻滞组和PRMT6敲除组的PRMT6 RNA、PRMT6蛋白、H3R2me2和H3K4me3水平，多能性标记Oct4、Nanog和Sox2,观察阻滞组和PRMT6q敲除组胚胎培养7 d的情况。结果 与正常组相比，阻滞组的PRMT6蛋白质水平显著增加[(1.160±0.054)比(1.530±0.13)],H3R2me2升高[(1.340±0.019)比(1.710±0.011)],H3K4me3水平下降[(1.650±0.030)比(1.220±0.015)],差异有统计学意义(P<0.05)。与阻滞组比较，PRMT6敲除组PRMT6 RNA[(1.660±0.029)比(1.230±0.017)]、PRMT6蛋白[(1.400±0.030)比(1.050±0.058)]及H3R2me2蛋白水平显著下调[(1.410±0.011)比(1.340±0.019)],而H3K4me3水平升高[(1.710±0.011)比(1.340±0.019)];多能性标记Oct4[(1.710±0.016)比(1.160±0.049)]、Nanog[(1.690±0.089)比(1.260±0.051)]和Sox2[(1.680±0.091)比(1.310±0.057)]的水平被下调，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 敲除PRMT6可以挽救部分发育阻滞的胚胎，甚至单个发育受阻的胚胎也可以发育成融合胚胎。敲除PRMT6可促进人体外受精发育阻滞胚胎的发育。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞组蛋白H3赖氨酸4三甲基化水平的研究

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞（PBMCs）组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）三甲基化(Me3)水平。方法 梯度密度离心法分离8例RA患者和8例健康者的PBMCs,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术（ChIP-chip）在全基因组范围内对RA患者及健康者的PBMCs组蛋白H3K4me3进行高通量的筛选。染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应（ChIP-qPCR）验证芯片结果。定量反转录聚合酶联反应（qRT-PCR）检测H3K4me3显著差异基因的mRNA表达水平。结果 RA患者与健康对照相比较,鉴定出364个基因存在H3K4me3显著差异,其中有66个基因显示有H3K4me3 程度增高, 298个基因有H3K4me3 程度降低;ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片结果一致。结论 RA患者与健康者之间的PBMCs存在组蛋白H3K4me3显著改变。ChIP-chip技术有利于进一步揭示RA分子机制,发现新的治疗靶点。     

H3K27me3在肿瘤中的研究进展

组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（trimethylated histone H3 at lysine 27，H3K27me3）是最常见的组蛋白甲基化修饰之一，由多梳抑制复合物2产生，而多梳抑制复合物2组成部分改变，如zeste基因增强子人类同源物2功能改变或过表达会表现出H3K27me3表达失衡，使细胞增殖分化失控，导致肿瘤发生。目前已在多种肿瘤中发现H3K27me3的组蛋白修饰缺失，例如乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等。然而，H3K27me3在不同肿瘤中的表达和预后存在异质性。本文总结并探讨了H3K27me3在不同肿瘤中的表达、生物学功能及其对肿瘤的诊断、治疗及预后的价值，为肿瘤研究提供新思路。     

冷冻保存时长对卵裂期胚胎组蛋白表观遗传修饰的影响

【目的】研究不同的冷冻保存时长对人类卵裂期胚胎的组蛋白表观遗传修饰的影响。【方法】采用经患者知情同意捐献用于科研的慢速冷冻的卵裂期胚胎,根据冷冻时长分为6、9和12年组,以新鲜胚胎为对照组,每组6枚捐献胚胎。采用细胞免疫荧光技术观察去乙酰化酶HDAC1、组蛋白（H3K9ac、H3K4me3、H3K9me3）的表达量在各组胚胎中的差异,并以单细胞RT-qPCR技术检测去乙酰化酶HDAC1、甲基化酶（SUV39H1、SET?DB1）、去甲基化酶KDM5A对应mRNA的表达量。【结果】4组胚胎的去乙酰化酶HDAC1、组蛋白（H3K9ac、H3K4me3和H3K9me3）的蛋白表达量无统计学意义的差异（P>0.05）。同时去乙酰化酶HDAC1、甲基化酶SUV39H1对应mRNA的表达量也无统计学意义的差异（P>0.05）。随着胚胎冷冻时长的增加,甲基化酶SETDB1对应mRNA的表达量有递增趋势,然而差异无统计学意义（P>0.05）。去甲基化酶KDM5A对应的mRNA的表达量也随冷冻时长的增加而增强,差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】慢速冷冻保存时长对卵裂期胚胎的组蛋白（H3K9ac、H3K4me3和H3K9me3）的蛋白表达量无显著影响,甲基化酶（SUV39H1、SETDB1）对应的mRNA表达量没有明显影响;但随着冷冻保存时长增加,胚胎去甲基化酶KDM5A对应的mRNA表达量增加,有可能导致胚胎转录抑制程度增强。     

IgA肾病患者CpG岛组蛋白H3赖氨酸4三甲基化水平的研究

目的研究IgA肾病患者CpG岛组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)水平。方法采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)对15例IgA肾病患者和15例健康者的外周血单个核细胞(PBMCs)H3K4me3进行高通量的筛选,染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶链反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果。定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测H3K4me3显著差异基因的mRNA表达水平。结果与健康对照组相比,IgA肾病患者的83个基因存在H3K4me3显著差异,其中有39个基因显示H3K4me3水平增高,44个基因H3K4me3水平降低;ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片结果相符,基因H3K4me3异常变化影响mRNA的表达。结论 IgA肾病患者PBMCs基因组H3K4me3存在显著改变,异常基因有助于研究IgA肾病的发病机制。     

H3K27me3聚集MEG3 lncRNA启动子通过MDM2/p53途径诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡逃逸

目的 从组蛋白甲基化与长链非编码 RNA ( ln-cRNA)相互作用角度探讨多发性骨髓瘤( MM)细胞凋亡逃逸的具体机制.方法 MTT法检测细胞增殖活性;Annex-inV-FITC/PI双标流式细胞术检测下调组蛋白H3第27位赖氨酸上三甲基化H3K27me3 的表达是否可以诱导多发性骨髓瘤细胞株—RPMI8226 细胞凋亡; RT-PCR 法检测 RP-MI8226细胞中人母系表达基因( MEG3) lncRNA及鼠双微体基因 2 ( MDM2 )的 mRNA 表达; Western blot 检测 RP-MI8226 细胞中 Zeste 基因增强子同源物 2 ( EZH2 )、H3K27me3、MDM2 及 p53 蛋白表达; ChIP Real -time PCR检测RPMI8226细胞中 H3K27me3 的结合位点.结果 在RPMI8226 细胞中,下调 H3K27me3 可诱导细胞凋亡;H3K27me3可直接结合于 MEG3lncRNA 启动子; RPMI8226细胞中抑制了 H3K27me3 可上调 MEG3lncRNA 表达; RP-MI8226经MEG3lncRNA 小干扰 RNA ( MEG3lncRNA -siR-NA)干预下调MEG3lncRNA时,细胞内MDM2 mRNA水平明显升高,并诱导 MDM2 蛋白表达.给予 MDM2 拮抗剂后, Ub-p53 表达降低, p53 降解被抑制.结论 MM 中H3K27me3结合MEG3 lncRNA启动子,MEG3lncRNA启动子H3K27me3高表达导致MEG3 lncRNA表达缺失. MEG3 ln-cRNA表达缺失解除MDM2的抑制, MDM2与p53直接结合介导p53泛素化,促使p53降解,细胞凋亡逃逸.     

乏氧对人口腔鳞状细胞癌细胞中叉头蛋白P3表达的影响及其机制

目的：观察乏氧对人口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞中叉头蛋白P3（FOXP3）表达的影响,阐明乏氧调控FOXP3表达的表观遗传学机制。方法：选取人OSCC细胞株FaDu和OECM-1细胞,常氧和乏氧条件下培养18h。采用实时定量PCR方法检测细胞中FOXP3 mRNA的相对表达水平,Western blotting 法检测FaDu和OECM-1细胞中FoxP3蛋白表达水平,染色质免疫沉淀-定量PCR（ChIP-qPCR）法检测FOXP3基因启动子上组蛋白修饰H3K4乙酰化（H3K4ac）、H3K4三甲基化（H3K4me3）和H3K27三甲基化（H3K27me3）水平。采用组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）基因沉默的FaDu细胞,以实时定量PCR和ChIP-qPCR法检测FaDu细胞中HDA3 mRNA相对表达水平和FOXP3mTNA表达抑制率。结果：与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3 mRNA相对表达水平均明显降低,分别下降65.6%（P<0.01）和75.7%（P<0.01）;Western blotting检测,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3蛋白表达水平明显低于常氧条件下;染色质免疫沉淀实验,与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu细胞中FOXP3基因启动子上的H3K4ac和H3K4me3水平明显降低（P<0.01）,而H3K27me3水平无明显差异。与无HDAC3基因沉默的FaDu细胞比较,HDAC3基因沉默的FaDu细胞中缺氧诱导的FOXP3启动子上H3K4ac和H3K4me3表达抑制率明显降低（P<0.05）,缺氧诱导的FOXP3mRNA相对表达抑制率降低（P<0.05）。结论：乏氧可通过HDAC3介导的FOXP3基因启动子上H3K4ac水平下调而抑制OSCC细胞中FOXP3的表达。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞组蛋白H3赖氨酸4三甲基化水平检测及意义

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)组蛋白H3赖氨酸4(H3K4)三甲基化(Me3)水平.方法 梯度密度离心法分离8例RA患者和8例健康者的PBMCs,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(chIP-chip)在全基因组范围内对RA患者及健康者的PBMCs组蛋白H3K4me3进行高通量的筛选.染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果.定量反转录聚合酶联反应(qRT-PCR)检测H3K4me3显著差异基因的mRNA表达水平.结果 RA患者与对照比较,鉴定出364个基因存在H3K4me3显著差异,其中有66个基因显示有H3K4me3程度增高,298个基因有H3K4me3程度降低;ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片结果一致.结论 RA患者与健康者之间的PBMCs存在组蛋白H3K4me3显著改变.ChIP-chip技术有利于进一步揭示RA分子机制,发现新的治疗靶点.     

组蛋白去甲基化酶LSD1去除亲代组蛋白H3K4me2促进复制偶联的核小体装配

目的 探索真核细胞内影响与调控复制偶联的核小体组装及解聚的表观遗传学机制。方法 人骨肉瘤细胞系（U2OS）转染对照和组蛋白H3K4去甲基化酶（lysine-specific demethylase 1, LSD1）siRNA,双胸苷阻滞或胸苷-诺考达唑联合阻滞同步化细胞,释放后在不同时间点进行流式细胞术分析,检测LSD1敲低对细胞周期的影响;免疫印迹试验检测LSD1 siRNA敲低效率;U2OS细胞同步化后进行免疫荧光共聚焦显微镜观察,检测LSD1、组蛋白H3K4二甲基化、一甲基化（H3K4me2/1）在细胞周期中的表达水平;U2OS细胞转染对照、LSD1 siRNA后进行微球菌核酸酶（micrococcal nuclease, MNase）消化后检测核小体装配效率;免疫共沉淀实验检测与LSD1存在相互作用的体内蛋白。结果 组蛋白H3K4去甲基化酶LSD1能促进复制偶联的核小体装配。结论 复制前期LSD1催化亲代组蛋白H3K4me2去甲基化,导致H3K4me2被清除至一定水平,有助于复制偶联的核小体装配。本研究不仅揭示了LSD1之前未被阐明的生物学功能,同时拓宽了对表观遗传生物学功能的...     

PI3K/AKT/mTOR途径在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌萎缩中的作用

目的研究PI3K/AKT/mTOR信号通路在慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法采用单纯熏香烟法复制慢阻肺大鼠动物模型。采用Western blot技术检测慢阻肺大鼠趾长伸肌中PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、总的及磷酸化的mTOR（t-mTOR,p-mTOR）、总的及磷酸化的GSK-3β（t-GSK-3β,p-GSK-3β）、总的及磷酸化的4E-BP1（t-4E-BP1,p-4E-BP1）、总的及磷酸化的p70S6K1（t-p70S6K1,p-p70S6K1）蛋白表达变化。结果 Western blot分析结果显示,大鼠趾长伸肌组织中PI3K的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）;t-mTOR、p-mTOR、t-GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05,其中p-GSK-3β两组对照P〈0.01）;t-4E-BP1和t-p70S6K1的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）,p-4E-BP1和p-p70S6K1的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05）。结论慢阻肺大鼠趾长伸肌组织内PI3K/AKT/mTOR信号通路被激活,可能是骨骼肌萎缩的代偿机制之一。     

蛋白质甲基转移酶的结合蛋白在肺癌组织中的表达

目的探讨蛋白质甲基转移酶的结合蛋白在肺癌组织中的表达。方法采用蛋白质免疫杂交（Westernblot）方法,利用H4R3sme2抗体检测11例肺癌病人组织样品当中的组蛋白H4R3对称性双甲基化（H4R3sme2）水平。结果发现11例肺癌患者组织样品中,组蛋白H4R3对称性双甲基化（H4R3sme2）水平癌组织都比癌旁组织有显著提高。结论发现在所有肺癌组织中H4R3sme2修饰水平都有显著提高,表明PRMT5在调控肺癌发生中是通过促进组蛋白H4R3sme2的表观遗传修饰,抑制肺癌细胞中抑癌基因的表达,诱导肺癌发生。     

司美替尼对恶性周围神经鞘瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨MEK1/2抑制剂司美替尼（selumetinib）对恶性周围神经鞘瘤（MPNST）细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:用不同浓度的司美替尼处理细胞株ST88-14和STS26T,通过CCK-8、克隆形成、Transwell、细胞划痕、流式细胞术检测司美替尼对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。实时荧光定量PCR检测多梳抑制复合物2（PRC2）核心组分的mRNA表达水平。免疫印迹试验检测组蛋白3上的第27位赖氨酸的三甲基化（H3K27me3）的表达。结果:司美替尼抑制ST88-14、STS26T细胞增殖（t=16.44,P<0.05;t=16.21,P<0.05）、侵袭（t=10.51,P<0.05;t=8.44,P<0.05）、迁移（t=4.02,P<0.05;t=2.21,P<0.05）;与对照组相比,10 μmol/L和20 μmol/L司美替尼可使ST88-14、STS26T细胞凋亡率显著升高（t=14.64、10.10,均P<0.05;t=3.06、13.10,均P<0.05）;与对照组相比,司美替尼作用于ST88-14、STS26T细胞48 h,PRC2核心组分SUZ12和EZH2的mRNA水平显著升高（t=13.39、16.84,均P<0.05;t=6.10、12.93,均P<0.05）;与对照组相比,20 μmol/L司美替尼可显著增加ST88-14,STS26T细胞H3K27me3的表达（t=12.82,P<0.05;t=18.78,P<0.05）。结论:司美替尼通过促进H3K27me3表达抑制MPNST细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

组蛋白修饰对COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞趋化因子表达的影响

目的探讨COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)炎症因子表达是否与组蛋白修饰有关。方法熏烟法建立大鼠COPD模型。取大鼠肺组织进行病理观察,提取AECⅡ进行碱性磷酸酶染色鉴定和电镜鉴定;实时定量PCR检测AECⅡ三种趋化因子:单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、IL-8及巨噬细胞炎性蛋白2α(MIP-2α)的mRNA表达;Westernblot检测组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)蛋白表达;染色质免疫共沉淀(ChIP)检测趋化因子启动子区组蛋白H3、H4乙酰化和H4K9甲基化修饰情况。结果 COPD组IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA表达较正常对照组分别增加4.48倍、3.14倍、2.83倍;COPD组AECⅡ细胞HDAC2蛋白表达较正常对照组降低(0.25±0.15比0.66±0.15,P0.05),且HDAC2的下降程度与IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA表达增高程度呈负相关(r值分别为-0.960、-0.914、-0.928,P均0.05)。COPD组趋化因子基因启动子区H3、H4乙酰化水平较正常对照组均升高,H4K9甲基化水平则降低(P均0.05)。结论 COPD模型大鼠AECⅡ的IL-8、MCP-1、MIP-2α三种趋化因子基因表达增加,HDAC2介导的组蛋白修饰在COPD炎症反应中发挥重要作用。     

吉非替尼通过促进H3K27甲基化水平抑制恶性周围神经鞘瘤细胞的增殖

目的:研究表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼（gefitinib）对恶性周围神经鞘瘤（MPNST）细胞增殖、迁移的影响。方法:选择STS26T细胞、ST88-14细胞,分为对照组和给药组（10 μmol/L）,其中药物IC50实验、蛋白印迹实验给药组浓度分为5、10、15 μmol/L。CCK-8法检测吉非替尼对STS26T、ST88-14的半数抑制浓度并绘制药物IC50曲线;平板克隆形成实验检测吉非替尼对细胞增殖能力的影响;划痕实验检测吉非替尼对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR检测加药后各组细胞Kras、SUZ12、EED、EZH2 mRNA的表达情况;蛋白印迹实验检测加药后Kras、组蛋白H327位赖氨酸三甲基化蛋白（H3K27me3）的表达。结果:STS26T、ST88-14细胞的药物IC50曲线显示半数抑制浓度均为10 μmol/L（t=11.42、16.51,均P＜0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（10 μmol/L）STS26T、ST88-14细胞增殖能力显著降低（t=5.48,P＜0.05;t=4.89,P＜0.01）、细胞迁移能力显著降低（t=4.94,P＜0.01;t=4.75,P＜0.01）;与对照组比较,吉非替尼给药组（10 μmol/L）STS26T细胞中Kras mRNA表达显著降低（t=4.87,P<0.01）,SUZ12、EED、EZH2表达显著升高（t=11.36、15.54、13.19,均P＜0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（10 μmol/L）ST88-14细胞中Kras mRNA表达显著降低（t=13.75,P<0.05）,SUZ12、EED、EZH2表达水平显著升高（t=12.56、7.48,16.33,均P＜0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（5、10、15 μmol/L）STS26T、ST88-14细胞Kras蛋白表达显著降低（t=13.70、15.21,均P<0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（5、10、15 μmol/L）STS26T、ST88-14细胞H3K27me3蛋白表达显著增加（t=14.31、12.40,均P<0.05）。结论:EGFR抑制剂吉非替尼通过促进MPNST中PRC2的表达,提高表观遗传学标志物H3K27me3的表达,降低MPNST细胞株增殖、迁移的能力。     

LATS2对恶性周围神经鞘瘤细胞的调控作用及分子机制探讨

目的:探讨大肿瘤抑制激酶2（LATS2）对恶性周围神经鞘瘤（MPNST）细胞增殖和迁移的影响及机制。方法:LATS2过表达慢病毒感染ST88-14、STS26T细胞,实验分为阴性对照组及LATS2过表达组,利用CCK-8、细胞划痕实验检测过表达LATS2对细胞增殖、迁移的影响。实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹实验检测细胞中LATS2、多梳抑制复合物2（PRC2）核心组分、Yes相关蛋白（YAP）、含有PDZ结合位点的转录共激活因子（TAZ）的mRNA和蛋白表达,以及组蛋白H3第27位赖氨酸上的三甲基化（H3K27me3）水平。结果:与对照组相比,LATS2过表达抑制ST88-14、STS26T细胞增殖（t=4.219、14.66、11.5,均P<0.05;t=5.674、7.118、10.77,均P<0.01）、迁移（t=4.838、4.736,均P<0.01）。与对照组相比,LATS2过表达不影响ST88-14、STS26T细胞中YAP/TAZ的mRNA和总蛋白水平,但升高其蛋白磷酸化水平（t=6.233、3.759,均P<0.01;t=3.44、2.947,均P<0.05）。与对照组相比,LATS2过表达不影响ST88-14、STS26T细胞中PRC2核心组分SUZ12、EZH2、EED的mRNA和蛋白水平,但H3K27me3水平明显升高（t=6.569、16.68,均P<0.01）。结论:LATS2在MPNST细胞系中表达下降,过表达LATS2升高H3K27me3表达水平,同时促进YAP/TAZ的磷酸化,从而抑制MPNST细胞的增殖、迁移,在MPNST中发挥肿瘤抑制因子的作用。     

白血病细胞株K562中HIF1-α的表达及其对下游基因的影响

目的 探讨白血病细胞株K562中低氧诱导因子1-α（HIF-1α）表达的增加对下游靶基因的影响及意义。方法氯化钴（CoCl2）做化学缺氧诱导剂,加入K562细胞培养基,分别培养0、4、8、16h。Real—TimeRT—PCR及Western印迹法分别检测剧F-1αrnRNA和蛋白水平的表达。Real—TimeRT—PCR检测不同时间HIF-1α下游靶基因VEGF、MDR1／MDR3、survivin、Bcl-2、Caspase-3、Bax等的表达。分析HrF-1α表达的变化对下游基因转录活性的影响和意义。结果随着CoCl2作用时间的增加,K562细胞H伊一JdmRNA水平表达略有增加,但变化不大（P〉0．05）,蛋白水平增加明显。下游VEGF、MDR1／MDR3、survivin、Bcl-2转录活性增加（P〈0．05）,而Bax、Caspase一3表达先增加后减少。结论CoCl2主要增加K562细胞株HIF-1α蛋白的表达。HIF-1α蛋白使VEGF、MDR1／MDR3、survivin、Bcl-2等促肿瘤存活基因的转录活性增加,而最终减少了Caspase-3、Bax等促肿瘤细胞凋亡基因的表达。因此．HIF-1α可能是调控白血病进展的关键调节因子。     

心肌营养素-1预处理减轻缺氧复氧对心肌细胞损伤的机制研究

目的观察心肌营养素-1(CT-1)预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型细胞损伤、凋亡及血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响,进一步探讨其心肌保护机制。方法选择H9C2大鼠心肌细胞株,实验分为对照组、缺氧复氧组(H2/R24组)、各浓度CT-1预处理组,酶标仪检测细胞上清中LDH释放率,RT-qPCR检测HO-1 mRNA,Western Bolt检测活Cleaved Caspase3及HO-1蛋白。设计合成靶向HO-1的特异性siRNA片段,通过脂质体转染至H9C2细胞中,48 h后给予CT-1预处理及缺氧复氧(si-HO-1组)并重复检查HO-1 mRNA及蛋白的表达、LDH释放率、Cleaved Caspase3表达验证干扰效果。结果与H2/R24组相比,各浓度CT-1预处理组细胞上清LDH释放率下降,Cleaved Caspase3表达减少,而HO-1 mRNA及蛋白表达水平与H2/R24相比均明显增加。经siRNA干扰后,si-HO-1组HO-1表达水平与对照组相当,较H2/R24组、CT-1组则明显减少;而LDH释放率、Cleaved Caspase3蛋白表达较H2/R24组下降,而较CT-1组升高。结论 CT-1能通过上调HO-1表达,减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。