2种CCK-8试剂最佳实验条件比较

正在细胞学实验中,MTT(噻唑蓝)比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点,而被广泛使用,但其操作较繁琐,需加入二甲基亚砜(DMSO)溶解甲臜颗粒,且往往因溶解不全而对实验结果造成影响,为克服MTT法的不足,近年来出现了另外一些检测试剂,如XTT试剂[1]、MTS试剂[2],国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8(cell counting kit-8)[3],其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性,不需要裂解细胞,可直接进行比色。     

构建shRNA慢病毒载体抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子受体1（vascular endothelial growth factor receptor 1, VEGFR-1）基因的siRNA前体表达载体．鉴定其对U937细胞株VEGFR—j基因干扰效率。方法体外设计并合成针对VEGFR-1基因的慢病毒shRNA干扰载体．通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人单核白血病细胞株U937．应用Real—TimePCR、Western印迹法检测抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定,与设计序列相同。Real—TimePCR检测显示U937细胞干扰组VEGFR-1mRNA表达率下降75．98％,Western印迹法显示U937细胞干扰组VEGFR-1蛋白表达量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制U937细胞株VEGFR—1基因的表达。     

16例焦虑症患者健康教育路径的应用体会

<正>健康教育路径是遵循整体护理的模式,运用护理程序的方法,对患者进行规范的、全面的、有计划的和有效的健康教育[1],而焦虑症患者对疾病和自身往往缺乏的正确认识,不能妥善看待和处理应激事件,造成疾病迁延,健康教育路径的实施恰恰可以激发患者治疗的主观能动性,形成积极的思维方     

SOCS超甲基化与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤的研究

目的 探讨细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS)基因超甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤(MPD)中的临床作用及其机制.方法 采用甲基化特异性PCR方法检测SOCS1、2、3基因CpG岛甲基化发生情况,直接测序法检测100例MPD患者JAK2V617F突变情况,用实时定量PCR方法检测SOCS1、2、3的mRNA表达情况.结果 100例MPD患者中有27例(27％)存在SOCS1基因超甲基化,9例(9％)存在SOCS2基因超甲基化,34例(34％)存在SOCS3基因超甲基化.在100例MPN患者中,64例(64％) JAK2V617F突变阳性.MPD患者中SOCS1和SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCSl和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05);SOCS1和SOCS3基因JAK2V617F突变组与野生型组相比,其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05).结论 MPD患者中存在JAK2V617F突变及SOCS基因超甲基化,且JAK2V617F突变和SOCS基因甲基化导致SOCS mRNA表达水平降低,SOCS超甲基化和JAK2V617F突变可改变JAK-STAT信号通路等的转录活性而最终影响疾病的发展,这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向.     

SOCS1与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤关系的研究

目的探讨细胞因子信号转导抑制蛋白（suppressorofcytokinesignaling,SOCS）在经典型骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms,MPNs）中的临床作用及其机制。方法采用实时定量PCR检测SOCS1的表达情况,DNA直接测序法检测SOCS1基因突变,甲基化特异性PCR检测SOCS1甲基化发生情况,旨在研究SOCS1在MPNs患者发病机制中的作用,以期为该疾病的诊断和治疗探索新的途径。结果 100例MPNs患者中有37例（37%）存在SOCS1基因甲基化,44例polycythemia vera（PV）有15例（34%）存在SOCS1基因甲基化,48例essential thrombocythemia（ET）有19例（38%）存在SOCS1基因甲基化,8例primary myelofibrosis（MF）有3例（37.5%）存在SOCS1基因甲基化;对照组病例共173例患者中有21例（12%）存在SOCS1基因甲基化：93例Chronic myelocytic leukemia（CML）有15例（16%）存在SOCS1基因甲基化,30例myelodysplastic syndrome（MDS）有4例（13.3%）存在SOCS1基因甲基化,30例acute myeloblastic leukemia（AML）有2例（6.7%）存在SOCS1基因甲基化,20例健康志愿者未发现有SOCS1基因甲基化;MPNs患者中SOCS1基因甲基化组与正常对照组相比,其SOCS1基因的表达量明显减少（P〈0.05）,表明SOCS1基因甲基化可导致SOCS1基因基因表达降低;SOCS1甲基化患者的白细胞计数高于非甲基化患者（P〈0.05）,SOCS1甲基化的MPNs患者较非甲基化患者更易进展为典型MPNs,无甲基化患者未见外周血计数、年龄的相关性;SOCS1基因全序列测序未发现突变。结论 MPNs患者中存在SOCS1基因甲基化,且甲基化导致其基因表达降低,提示SOCS1基因甲基化对疾病发展有提示作用;SOCS1基因甲基化与MPNs患者年龄、外周血细胞计数相关;SOCS1超甲基化可激活JAK-STAT信号通路或伴JAK2突变,这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向。     

胃癌组织中血管内皮生长因子C的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子-C（VEGF-C）与其受体-3（VEGFR-3）与胃癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学染色,检测20例正常胃组织和98例胃癌组织中VEGF-C表达。结果胃癌组织中VEGF-C阳性表达率为71．4％（70／98）,而癌旁组织和正常胃粘膜组织中其阳性表达率为9．2％（9／98）和5．0％（1／20）。98例胃癌组织中VEGF-C表达与患者性别、肿瘤直径大小、肿瘤部位、分化程度、是否存在血管浸润以及浸润深度无显著相关,而与淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移、TNM临床分期显著相关（P＜0．05）。结论 VEGF-C及其受体系统是淋巴管生成的重要调节因子,对于胃癌区域淋巴管生成、淋巴转移途径有非常重要的意义。     

低氧诱导因子-1类泛素化修饰在血液系统肿瘤中的潜在作用

低氧诱导因子-1(HIF-1)在人体内广泛存在,是氧稳态和缺氧反应调节的一种转录因子,它与血管生成、细胞存活、肿瘤侵袭和耐药形成等多种生理、病理生物学过程相关~([1]).HIF-1在肿瘤中的作用现已被广泛研究.而类泛素(Small Ubiquitin-related Modifier)作为翻译后修饰的重要调控因子,是近年基因表达研究的热点之一.     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

贝伐单抗联合化疗药物诱导白血病细胞株凋亡的实验研究

 目的　探讨以血管内皮生长因子（VEGF）为靶点联合贝伐单抗（Bevacizumab,商品名：阿瓦斯丁,Avastin）和化疗药物诱导多种白血病细胞株凋亡的可行性,研究体外应用VEGF、贝伐单抗和化疗药物Ara-C对白血病细胞株增生、凋亡以及细胞周期的影响。方法　应用不同浓度药物作用于体外培养的白血病细胞,CCK-8法检测细胞增生抑制率,流式细胞术（FCM）检测VEGF和贝伐单抗以及联合应用化疗药物后细胞周期和细胞凋亡的变化。结果　VEGF可刺激多种细胞株增生,以U937细胞增生最明显,呈明显的量效关系;FCM检测细胞周期显示VEGF作用组S期细胞较对照组明显增多,而贝伐单抗作用组S期细胞减少;FCM检测显示经VEGF作用组细胞凋亡率较对照组细胞减少,而贝伐单抗作用组细胞凋亡率较对照组增加,但二者与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）,联合应用贝伐单抗和Ara-C 48 h后,细胞凋亡率较单用Ara-C组明显升高（P＜0.05）,联合VEGF、Ara-C组作用48 h后,细胞凋亡率较Ara-C组降低（P＜0.05）,同时联合应用VEGF、贝伐单抗和Ara-C组细胞凋亡率与Ara-C组差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　VEGF可明显刺激部分白血病细胞增长,抵抗化疗药物诱导的凋亡作用,贝伐单抗可通过中和VEGF而在一定程度上抑制细胞的增生,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性。