食管鳞状细胞癌中WIF-1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达水平及其与病理指标之间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测62例ESCC组织及30例癌旁组织中WIF-1基因启动子区甲基化状态和mRNA的表达水平,应用SPSS13.0探讨其与临床病理资料的关系。结果 WIF-1基因在癌组织中的甲基化率59.7%(37/62)明显高于癌旁组织13.3%(4/30),差异有显著性(P<0.05);其甲基化状态与年龄、分化程度及淋巴结转移情况相关(P<0.05);而与其他临床资料(性别、部位、浸润深度、临床分期)无明显相关性(P>0.05)。WIF-1基因mRNA在ESCC组的表达量(0.565±0.112)显著低于癌旁正常组(0.666±0.107),差异有显著性(P<0.05)。结论 WIF-1基因启动子甲基化在食管鳞癌的进展过程中起着重要的作用;WIF-1基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关,此基因甲基化与mRNA表达两者之间的关系有待进一步研究。     

抑癌基因RAS启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的关系

目的观察抑癌基因RAS在乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系。方法 选择50例PTC和32例良性甲状腺肿瘤(对照组,包括20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)患者,对2组患者手术获取的标本提取RNA后,反转录为cDNA,进行多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),检测RAS基因的表达情况;运用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测上述组织中RAS基因启动子区甲基化的情况,并对2种抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序。结果 PTC组患者中,有30例(60%)RAS基因启动子发生甲基化;对照组患者中,有10例(31.3%)RAS基因启动子发生甲基化;PTC组织RAS基因启动子甲基化率均显著高于对照组,差异有统计学意义(χ2=6.46,P<0.05)。乳头状甲状腺癌mRNA的半定量的值为0.56±0.10,对照组mRNA半定量的值为0.67±0.16,乳头状甲状腺癌mRNA的表达明显低于对照组,两者差异具有统计学意义(t=2.83,P<0.05)。经DNA测序证实,RAS基因启动子发生甲基化的其CpG岛的碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的,碱基由CG变为TG。结论 PTC患者RAS基因启动子甲基化发生率显著高于良性甲状腺肿瘤患者,而RAS基因mRNA的表达则较良性甲状腺肿瘤降低;推测RAS基因启动子甲基化可能与PTC的发生、发展相关。     

甲状腺肿瘤患者Ras相关区域家族1A基因启动子异常甲基化的检测

目的:研究甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态,探讨其甲基化与临床参数之间的关系。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对78例甲状腺癌组织和12例甲状腺腺瘤中RASSF1A基因的甲基化状况进行分析。结果:RASSF1A基因甲基化率在甲状腺乳头状癌组织中为65.6%(42/61),滤泡癌为93.3%(14/15),甲状腺腺瘤为58.3%(7/12),而正常甲状腺组织中未检测到该基因的甲基化,与甲状腺癌和肿瘤组织之间的差异有统计学意义;RASSF1A基因甲基化与患者性别和肿瘤的浸润和转移无相关性,与年龄呈现正相关。结论:RASSF1A基因甲基化是甲状腺肿瘤组织中常见的分子生物学事件,在甲状腺癌的发生发展过程中可能发挥重要作用。RASSF1A的异常甲基化在良性腺瘤和恶性甲状腺肿瘤均表达,这种遗传的失活是甲状腺肿瘤发生中的一个早期步骤。     

甲状腺乳头状癌组织中TSHR基因启动子甲基化研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌组织中促甲状腺激素受体基因(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)基因启动子区5′端CpE岛甲基化改变的特点与临床特征的关系. 方法 采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测TSHR基因启动子甲基化情况. 结果 (1)甲状腺乳头状癌组织中TSHR基因启动子甲基化的发生率为64.7%(22/34),癌旁组织中TSHR基因启动子甲基化的发生率为26.5%(9/34),癌组织中TSHR基因启动子甲基化率显著高于癌旁组织(P<0.05).(2)有淋巴结转移的甲状腺乳头状癌组织TSHR基因启动子甲基化的发生率为83.3%(15/18),高于无淋巴结转移组43.8%(7/16)(P<0.05). 结论 TSHR基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发展过程中的分子事件之一,可能影响了甲状腺乳头状癌细胞的摄碘的功能.     

乳头状甲状腺癌p16基因蛋白表达及启动子甲基化的研究

目的 研究抑癌基因p16在乳头状甲状腺癌中的表达,分析其启动子区甲基化与肿瘤发生的关系.方法 对50例乳头状甲状腺癌组织和32例对照组织(20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)提取RNA后,反转录为cDNA,进行PCR,检测p16基因的表达情况,运用巢氏MSP(nMSP)检测上述组织中p16基因启动子区甲基化的情况.结果 p16基因启动子在50例乳头状甲状腺癌中有27例发生甲基化,甲基化率为54%,在32例对照组中有5例发生甲基化,甲基化率为15.6%,两组甲基化率差异有统计学意义(x2=12.08,P<0.01),经DNA测序后证实发生了启动子区甲基化的存在.p16基因在50例乳头状甲状腺癌组织中17例(34%)存在表达缺失,在32例对照组中有6例(18.8%)存在表达缺失,两组差异无统计学意义(x2=2.29, P>0.05),乳头状甲状腺癌mRNA的半定量的值为0.51±0.17,对照组mRNA半定量的值为0.72±0.22,乳头状甲状腺癌mRAN的表达明显低于对照组织,两者差异有统计学意义(t=3.66,P<0.01).结论 p16基因启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的发生和发展相关.     

血浆WIF-1基因启动子甲基化检测在肺癌早期诊断中的临床意义

目的检测肺癌患者血浆Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子的甲基化情况并分析其在肺癌早期诊断中的意义。方法应用巢式甲基化特异性PCR(n MSP)法,首先检测肺癌患者血清癌胚抗原(CEA)水平,再分别检测78例肺癌患者、40例肺良性病变患者和40例健康志愿者血浆中WIF-1基因启动子区甲基化状态。结果肺癌患者血清癌胚抗原阳性率为35.90%(28/78),大致接近血浆标本中WIF-1基因启动子区甲基化率34.62%(27/78)。肺良性病变患者血浆中WIF-1基因启动子区甲基化率为2.50%(1/40),健康志愿者血浆中WIF-1基因启动子区未检测出甲基化。肺癌患者血浆WIF-1基因启动子甲基化和血清癌胚抗原二项联合检测的灵敏度为(62.82%),特异度为(90.00%)。不吸烟者WIF-1基因启动子甲基化率低于吸烟者。结论外周血浆中WIF-1基因启动子甲基化有成为肺癌的新的检测手段的可能性,并且对肺癌的初步筛查具有一定的临床意义。     

实时荧光定量PCR法检测EG-1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

目的：通过实时荧光定量PCR法检测内皮衍生基因-1(EG-1)的基因在甲状腺癌组织中的表达,探讨EG-1与甲状腺癌发生、发展的关系。 方法：选取38例甲状腺乳头状癌患者（病例组）和15例良性甲状腺疾病患者的甲状腺组织(对照组）,采用实时荧光定量PCR法检测甲状腺组织中EG-1基因的表达,同时应用免疫组化学法检测EG-1的表达水平。结果：免疫组织化学结果显示, EG-1主要定位于癌细胞的细胞质,甲状腺乳头状癌组织中EG-1 mRNA和蛋白表达水平明显高于良性甲状腺疾病患者 (P<0.05)。EG-1 mRNA表达与组织学分级有关(P<0.05),与性别、年龄无明显关联性(
P>0.05)。结论：EG-1基因在甲状腺乳头状癌组织中表达明显增高,EG-1基因可能在甲状腺癌的发生、发展中起重要作用。     

甲状腺乳头状癌组织中EG-1基因的表达分析

目的:探讨甲状腺乳头状癌组织中内皮衍生基因-1(EG-1)基因的表达及意义。方法:选取腺体外科收治的24例的甲状腺乳头状癌患者,另取10例良性甲状腺疾病病例作为对照组,通过RT-PCR方法对甲状腺组织进行EG-1基因检测。结果:24例甲状腺乳头状癌组织中检测出16例EG-1mRNA的表达,其阳性表达率为73%(16/24);10例甲状腺瘤组织中检测出2例EG-1mRNA的表达,其阳性表达率为20%(2/10);二者相比较,EG-1mRNA在甲状腺乳头状癌组织的阳性表达率高于甲状腺瘤组织(P<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌组织中EG-1基因异常高表达,可能与甲状腺癌的发生有关。     

PTEN异常表达及甲基化与PTC的关系

目的探讨PTEN异常表达及其基因启动子区异常甲基化与甲状腺乳头状癌发生、发展及转移的关系。方法采用免疫组化、western-blot、甲基化特异性PCR(MSP)分析正常甲状腺与甲状腺乳头状癌组织中PTEN蛋白表达差异及PTEN基因启动子区甲基化情况。结果与正常甲状腺组织相比,甲状腺乳头状癌组织中PTEN蛋白表达明显下调(P<0.01),同时笔者发现PTEN基因蛋白的下调与肿瘤的淋巴结转移状况呈负相关(P<0.005),且甲状腺乳头状癌组织中PTEN基因启动子区甲基化程度显著增高。结论 PTEN蛋白低表达是甲状腺乳头状癌的发生、转移的重要原因之一,其低表达与基因启动子区过度甲基化有关。     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生的关系

目的检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1,sFRP-1,DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为:50·0%vs24·0%(P<0·05),36·4%vs12·0%(P<0·05)和36·4%vs8·0%(P<0·01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0·05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81·2%,异常表达率为64·4%,且与组织学类型无关(P>0·05)。结论经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。     

siRNAi沉默DNMT1基因对肺癌细胞WIF-1启动子甲基化的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMT1)siRNAi对人肺癌A549细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子高甲基化的影响.方法 利用pSilencer 4.1-CMV neo载体,通过siRNAi表达载体法制备DNMT1 siRNAi.将DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot检测观察转染前后肺癌A549细胞DNMT1内DNMT1基因的表达改变,并利用甲基化PCR,直接测序法检测WIF-1基因启动子甲基化水平.结果 构建的DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞后,明显抑制DNMT1基因的表达,mRNA表达下降75%,蛋白表达下调82%;同时,WIF-1基因启动子序列较转染前甲基化水平明显降低.结论 靶向DNMT1的siRNAi可明显下调靶基因DNMT1的表达,并逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平.     

乳头状甲状腺癌TSHR基因转录表达和启动子区甲基化研究

目的观察抑癌基因促甲状腺激素受体(TSHR)在乳头状甲状腺癌(PTC组)中的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系。方法选择50例PTC和32例良性甲状腺肿瘤(对照组,包括20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)患者,对两组患者手术获取的标本提取RNA后,反转录为cDNA,进行PCR检测TSHR基因的表达情况;运用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述组织中TSHR基因启动子区甲基化的情况。结果PTC组患者中有34例(68%)TSHR基因启动子发生甲基化,16例(32%)TSHR基因mRNA表达缺失;对照组患者中有7例(21.9%)TSHR基因启动子发生甲基化,4例(12.5%)TSHR基因mRNA表达缺失。PTC组织TSHR基因启动子甲基化率及TSHR基因mRNA表达缺失率均显著高于对照组(χ2值分别为16.61和4.02,P<0.05)。34例发生了TSHR基因启动子甲基化的PTC患者中,有14例(41.2%)TSHR mRNA表达缺失;16例未发生甲基化的PTC患者中,2例(12.5%)发生了mRNA表达缺失,二者mRNA表达缺失率差异有统计学意义(χ2=4.11,P<0.05)。TSHR基因mRNA在...     

甲状腺乳头状癌中TSHR与NIS基因启动子区甲基化状态与侵袭性相关性研究

目的本研究分析甲状腺乳头状癌中促甲状腺素受体与钠碘转运体基因启动子区甲基化状况,探讨甲状腺功能基因甲基化与甲状腺乳头状癌病理侵袭性之间相关性。方法采用甲基化荧光实时特异聚合酶链反应甲状腺乳头状癌中TSHR与NIS基因启动区异常甲基化情况,探讨该区甲基化与病理参数之间的关系,以及两基因甲基化之间相关情况。结果甲状腺癌中NIS与TSHR基因甲基化均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.01)。TSHR启动区域5’-Cp G岛甲基化分别与病灶多少、颈淋巴结转移及局部侵犯有关(P0.05),NIS基因启动子区域5’-Cp G岛甲基化分别与患者年龄、多病灶、颈淋巴结转移及病理分期有关(P0.05),两基因甲基化相关性分析:1TSHR启动子甲基化发生显著高于NIS;2TSHR与NIS基因的启动子区甲基化有关系。结论乳头状甲状腺癌的功能基因TSHR与NIS基因启动区甲基化是常见现象,可能在甲状腺癌的发生发展过程中发挥重要作用,可能与肿瘤侵袭性相关。两组基因甲基化具一定相关性,联合两个基因启动子区域甲基化检测可能更有意义。     

甲状腺乳头状癌钠碘同向转运体基因启动子区域CpG岛异常甲基化状态检测及其意义

目的 通过检测甲状腺乳头状癌中钠碘同向转运体(NIS)基因的启动子区域甲基化状态及其与各项临床指标之间的关系,探讨NIS基因甲基化在甲状腺乳头状癌发病过程中的地位、作用和相关机制.方法 取2007年5～7月手术切除的甲状腺乳头状癌及正常组织标本各11份,液氮保存.针对NIS-L区域设计新的甲基化特异PCR(MSP)引物,对所有亚硫酸氢钠修饰后的甲状腺癌及对照组织标本DNA进行MSP检测,比较肿瘤和对照甲状腺组织的NIS-L甲基化状态,分析其与有关临床指标之间的相关性.结果 实验发现11例甲状腺癌中NIS-L区域CpG岛甲基化率达81.8%(9/11),与肿瘤直径存在相关性,与年龄、性别、AJCC分期、淋巴结转移情况、多灶性等临床指标无相关性;相应对照组织中NIS-L甲基化率为36.4%(4/11),与所有临床指标无相关性.结论 甲状腺乳头状癌组织中NIS-L区域CpG岛甲基化率异常增高,且与肿瘤直径存在相关性.NIS-L与其它NIS表达调控因素的关系有待进一步研究.     

甲状腺乳头状癌组织中NIS和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌及癌旁组织中,甲状腺功能基因钠碘转运体基因(NIS)和甲状腺抑癌基因RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)基因启动子甲基化改变的特点及其相关性.方法 采用甲基化特异性PCR方法分别检测NIS和RASSF1A基因启动子的甲基化状况.结果 ①甲状腺乳头状癌组织中NIS基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P＜0.05).②甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P＜0.05).③功能基因NIS启动子甲基化发生显著高于抑癌基因RASSF1A基因启动子的甲基化(P＜0.05):功能基因NIS和抑癌基因RASSF1A的启动子的甲基化呈正相关(rs=0.41,P＜0.05).结论 RASSF1A基因和NIS基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发生或发展过程中的分子事件,两者的基因甲基化提示呈一定正相关,可能相互影响共同参与了甲状腺乳头状癌发生、发展过程.     

人类乳头状甲状腺癌TGF-β1mRNA表达

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在人乳头状甲状腺癌和良性腺瘤、桥本氏甲状腺炎及正常组织中的表达差别.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及表达峰度定量法,检测4种新鲜甲状腺手术标本组织中TGF-β1 mRNA的表达.结果 TGF-β1 mRNA在4种甲状腺组织中的表达均有较高的阳性率(＞83.3%),乳头状甲状腺癌中TGF-β1 mRNA的表达量较良性腺瘤、桥本氏炎及正常组织均增多(P＜0.05),后三者之间则无差别.结论 TGF-β1 mRNA在乳头状甲状腺癌中表达代偿性增强与癌的发生有关,且可作为乳头状甲状腺癌的诊断指标之一,并辅助鉴别良恶性;RT-PCR则为临床上较为快捷、有效的辅助诊断方法.     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生关系的探讨＊

[摘要] 目的 检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果 正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1、sFRP-1、DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为：50.0% vs 24.0% (P＜0.05)、36.4% vs 12.0% (P＜0.05)和36.4% vs 8.0% (P＜0.01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P＜0.05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81.2%,异常表达率为64.4%,且与组织学类型无关(P＞0.05)。结论 经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。 [关键词] 肺肿瘤 经典Wnt信号途径相关基因 β-连环蛋白     

CK19和甲状腺过氧化物酶表达在甲状腺疾病诊断中的作用

目的 探讨CK19和甲状腺过氧化物酶(TPO)在甲状腺癌和良性甲状腺病变中的表达情况,以提高甲状腺癌的诊断和鉴别诊断水平。方法 应用SP免疫组织化学法检测了62例甲状腺癌(30例典型乳头状癌、22例滤泡型乳头状癌和10例滤泡型癌)和44例良性甲状腺病变(22例结节性甲状腺肿、14例甲状腺腺瘤和8例桥本氏甲状腺炎)中CK19和TPO的表达。结果 CK19在甲状腺癌中表达率为96.8%,在良性甲状腺病变中极少表达或小灶性弱表达,表达率为4.5%,两者有显著性差异(P<0.01);TPO在良性甲状腺病变中的表达率为100%,在甲状腺癌中极少表达或小灶性表达,表达率为3.2%,两者有显著性差异(P<0.01)。结论 CK19和TPO在甲状腺癌的病理诊断和鉴别诊断中具有重要意义和临床实用价值。     

甲状腺乳头状癌miR-34b基因表达及其启动子区甲基化的临床意义研究

目的:探讨miR-34b基因表达及其启动子区甲基化(MSP)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的临床意义。方法:收集2008年10月-2013年1月本院治疗的42例甲状腺乳头状癌患者癌组织标本(实验组)和42例甲状腺腺瘤患者瘤旁组织标本(对照组),检测两组miR-34bmRNA表达(实时定量PCR法)及miR-34b基因启动子区甲基化(甲基化特异性PCR法),并对结果进行分析。结果:实验组miR-34b mRNA相对平均表达量(0.84±0.04),miR-34b基因启动子甲基化阳性率71.4%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);实验组中不同性别、年龄、肿瘤直径、分期和包膜浸润之间,甲基化阳性率比较差异无统计学意义(P0.05);而存在淋巴结转移甲基化率(88.5%)显著高于不存在淋巴结转移(43.8%),差异有统计学意义(P0.05)。结论:miR-34b基因表达及其启动子区甲基化与PTC发生发展具有密切关系,建议临床深入研究。     

单发胃癌和食管/胃双原发癌中胃癌CDH1基因甲基化研究

目的研究单发胃癌和食管/胃双原发癌中胃癌组织CDH1基因启动子区CpG岛甲基化变化及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR法,检测62例单发胃癌、30例食管/胃双原发癌中胃癌组织、癌旁组织及18例正常胃组织CDH1基因甲基化情况。结果单发胃癌和食管/胃双原发癌中胃癌组织CDH1基因甲基化率分别为61.3%和76.7%,癌旁组织分别为22.6%和23.3%,正常胃组织为0。单发胃癌和食管/胃双原发癌患者癌组织CDH1基因甲基化率与癌旁组织、正常组织比较,差异均有统计学意义(P<0.05),癌旁组织CDH1基因甲基化率与正常组织比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。单发胃癌与食管/胃双原发癌中胃癌组织CDH1基因甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。单发胃癌和食管/胃双原发癌患者CDH1基因甲基化与性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史均无关(P>0.05)。结论 CDH1基因甲基化在单发胃癌和食管/胃双原发癌胃癌中是一常见的表观遗传学事件,可能是一个独立的危险因素。