雷公藤多甙对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响

目的 观察雷公藤多甙（multi-glycoside of tripterygium wilfordii Hook．f．,GTW）在体内对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响。方法 运用单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）1-22-3建立大鼠可逆性抗Thy1．1抗体肾炎（简称“抗Thy1．1肾炎”）模型,以GTW干预,并设立对照组。比较24h尿蛋白排泄量（urinary protein excretion,Upro）、肾功能（serum creatinine,SCr;blood urea nitrogen,BUN）、血浆总蛋白（total plasma protein,TP）以及肾小球形态学变化,并检测肾组织中增殖因子（platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB;transforming growth factor-β,TGF-β）mRNA表达水平。结果 GTW抑制抗Thy1-1肾炎模型Upro和系膜损伤;抗Thy1．1肾炎模型肾组织中增殖因子（PDGF-BB、TGF-β）mRNA表达水平与正常组比较,分别为其2．84倍与1．64倍,GTW使PDGF-BB mRNA过高表达水平下调33．1％,与对照组比较,差异有显著性（P〈0．05）。结论 GTW可减少系膜增殖性肾炎模型蛋白尿,抑制系膜细胞增殖和细胞外基质沉积;这些作用可能与下调肾组织增殖因子（PDGF-BB）mRNA的表达有关。     

雷公藤多苷对抗Thy1.1抗体肾炎肾小球内炎症细胞浸润的抑制作用

目的:观察雷公藤多苷(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii.,GTW)对肾小球内浸润的炎症细胞及其相关细胞因子的影响,进一步阐明GTW在体内的抗炎作用.方法:经尾静脉注射500μg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)1-22-3建立2种大鼠抗Thy1.1抗体肾炎模型.将模型鼠随机分为GTW干预组(GTW组)和蒸馏水干预组(对照组).实验1中,在注射抗体前3 d,经灌胃给予较大剂量GTW(75.mg·kg~(-1)·d~(-1))或蒸馏水,直至造模后第7天,处死大鼠;实验2中,在第2次注射抗体同时,经灌胃给予中等剂量GTW(50 mg·kg~(-1)·d~(-1))或蒸馏水,直至造模后第42天,处死大鼠.分别观察7 d内或42 d内模型鼠24 h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)动态变化;在处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球内浸润的巨噬细胞(macrophage,MΦ),T淋巴细胞变化和肾组织内白介素(interleukin,IL)-2和干扰素(interferon,IFN)-γ核酸的表达.结果:实验1中,可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型鼠肾小球内浸润的MΦ明显增多,较大剂量的GTW可以减少模型鼠肾小球内MΦ的浸润和肾组织内IL-2核酸表达;实验2中,不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型鼠肾小球内浸润的活性MΦ,T淋巴细胞明显增多,中等剂量的GTW可以改善模型鼠肾小球内活性MΦ,T淋巴细胞的浸润,以及肾组织内IL-2,IFN-γ核酸表达;对于2种模型,GTW都有减少蛋白尿的作用.结论:不同剂量的GTW在体内对抗Thy1.1抗体肾炎.肾小球内炎症细胞浸润有抑制作用,这些作用与改善肾组织内IL-2和IFN-γ核酸表达有关.     

抗Thy1.1抗体诱导的肾炎模型及其在中药研究中的应用

抗Thy1.1单克隆抗体诱导的抗Thy1.1抗体肾炎模型广泛应用于人类系膜增殖性肾炎的研究领域。该模型的病理特征包括补体依赖性系膜溶解、肾小球内炎症细胞浸润、显著的蛋白尿,以及急性或进展性系膜损伤。文章综述了经静脉注射单克隆抗体1-22-3诱导的可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型和不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型的病理特征；阐述了肾小球内炎症细胞浸润和各种损伤性细胞因子的变化规律；分析了包括系膜细胞增殖和细胞外基质沉积在内的复杂的系膜损伤病变过程。运用该模型,可以说明雷公藤多苷、柴苓汤等中药对系膜损伤和蛋白尿的药理作用,并且,在分子水平阐明这些药物对各种损伤因子的作用机制。     

清利固精颗粒对系膜增殖性肾炎IL-1β及TGF-β1的影响

目的:探讨清利固精颗粒(主药:地骨皮、芡实、土茯苓)对大鼠抗Thy1系膜增殖性肾炎(MsPGN)IL1β及TGFβ1的影响。方法:本研究应用大鼠抗Thy1系膜增殖性肾炎(MsPGN)动物模型,将大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、肾炎康复片组、清利固精组,每组8只大鼠。各实验组于第7天处死大鼠,检测肾小球培养上清IL1β含量,检测肾组织TGF-β1含量。结果:模型组大鼠肾小球培养上清IL1β含量及肾组织TGFβ1含量比正常对照组明显升高(P<0.01);与模型组相比,清利固精组肾小球培养上清IL1β含量及肾组织TGFβ1含量明显下降(P<0.01);清利固精颗粒降低肾组织TGF-β1含量疗效优于肾炎康复片(P<0.05)。结论:清利固精颗粒能降低肾炎大鼠肾小球培养上清IL-1β水平和肾组织TGF-β1含量,抑制细胞增殖及细胞外基质增加,可能是其治疗MsPGN作用机制之一。     

c-myc与Bcl-2在大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎肾小球内的表达

目的 :探讨 SD大鼠抗 Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型肾小球内 c-myc与 Bcl-2的表达在其发病机理中的作用。方法 :用 SD大鼠胸腺细胞免疫新西兰白兔 ,制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 (ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给 SD大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎 (Ms PGN)。用 HE和 PASM染色法计算肾小球内细胞数 ,用免疫组化法系膜区 c-m yc及Bcl-2的表达。结果 :实验组和对照组大鼠肾小球内均有 c-myc和 Bcl-2不同程度的表达 ;实验组肾小球内 c-myc和 Bcl-2的表达均明显多于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :在大鼠 Ms PGN实验模型中 ,c-m yc及 Bcl-2的高表达参与了肾小球系膜增生的发病机理。     

柴苓汤对肾小球肾炎模型大鼠肾小球膜细胞增殖的抑制作用

探讨了柴苓汤、小柴胡汤和柴朴汤对大鼠肾小球膜细胞增殖性肾小球肾炎的作用。Wistar系大鼠静脉注射兔抗大鼠胸腺细胞血清(ATS)诱发肾小球膜细胞增殖性肾小球肾炎。以蛋白尿、肾小球膜细胞增殖性和SOD活性为指标评价汉方方剂的作用。在对大鼠给予ATS日开始至采集肾组织日(第8天     

青蒿素对Heymann肾炎大鼠尿液足细胞及nephrin、podocin mRNA排泄的影响

目的探讨青蒿素对Heymann肾炎大鼠尿液足细胞、足细胞裂孔隔膜蛋白分子nephrin及podocin mRNA排泄的影响。方法 8周龄雄性Wistar大鼠60只,随机选取20只作为对照组,余下40只采用一次性尾静脉注射羊抗Fx1A抗体制作Heymann肾炎模型,再随机分为模型组(n=20)和治疗组(n=20),青蒿素治疗组每日给予青蒿素100 mg/kg灌胃,4周后计数各组尿液足细胞排泄,RT-PCR方法检测各组尿液nephrin、podocin mRNA排泄量。结果Heymann肾炎大鼠足细胞脱落明显增加,青蒿素治疗组尿液足细胞脱落数、nephrin、podocin mRNA排泄均显著低于对照组。结论青蒿素能减少糖尿病大鼠足细胞脱落,有效保护Heymann肾炎大鼠足细胞。     

MACC5对大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎防治作用的研究

目的 :观察中草药有效成分 MACC5对 SD大鼠抗 Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型的防治作用 ,探讨其作用机理。方法 :用 SD大鼠胸腺细胞免疫新西兰白兔 ,制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 ( ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给SD大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎 ( Ms PGN) ,然后腹腔注射 MACC5 ,观察其尿量、尿蛋白定量改变 ,并用 H E染色法检测系膜增殖程度 ,用免疫组化法 ( LSAB)检测其肾小球内细胞增殖核抗原 ( PCNA)的表达。结果 :MACC5两试验组尿量( 2 4小时 )均多于对照组 ( P<0 .0 1) ;MACC5 3.0 m L试验组尿蛋白定量少于对照组 ( P<0 .0 1) ;MACC5两试验组肾小球细胞数均少于对照组 ( P<0 .0 1) ;MACC5两试验组 PCNA的表达均少于对照组 ( P<0 .0 1)。结论 :MACC5对大鼠 Ms PGN实验模型具有利尿、降低尿蛋白和促进肾小球系膜损伤修复的作用。     

升降散对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织TLR4表达的影响

目的：观察升降散对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的治疗作用并探讨其作用机制。方法：40只大鼠随机分为正常对照组、模型组、洛汀新组、升降散组。模型组与药物干预组参照文献方法制备慢性系膜增生性肾小球肾炎模型,药物干预两组于造模第5周起灌服相应药物,于实验前、4周末、12周末测定24小时尿蛋白定量;12周末分别处死各组大鼠,光镜观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学法检测肾脏组织中TLR4表达。结果：模型组24小时尿蛋白较正常对照组增多（P〈0．01）;药物干预两组较模型组明显减少（P〈0．05）。模型组肾小球系膜区、肾间质、近曲小管TLR4阳性表达明显;升降散、洛汀新两药物组肾小球系膜细胞与基质增生、炎症细胞浸润均不明显,TLR4表达较模型组减少（P〈0．05）。结论：升降散能够减少肾炎大鼠尿蛋白排泄量,降低肾组织TLR4表达,抑制肾小球系膜细胞与基质的增生。     

嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.     

Multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook. f. reduces proteinuria through improving podocyte slit diaphragm dysfunction in anti-Thy1.1 glomerulonephritis

Ethnopharmacological relevance

Multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook. f. (GTW) has been proved clinically effective in reducing proteinuria in chronic kidney disease in China. However, the mechanisms involved are still unclear. In this study we examined the effects of GTW at the different dosages on proteinuria and podocyte slit diaphragm (SD) dysfunction in anti-Thy1.1 glomerulonephritis (GN).

Materials and methods

Rats with anti-Thy1.1 GN were divided into 2 groups, a GTW group and a vehicle group, and sacrificed at 30 min, on day 7, and on day 14 in Experiments 1, 2 and 3, respectively. The administration of GTW at the moderate and high doses was started 3 days before or at the same time of antibody injection till sacrifice. Proteinuria was determined in Experiments 1, 2, and 3. After sacrifice, the staining intensity of SD-associated key functional molecules including nephrin and podocin, podocyte structure, mesangial change, macrophage infiltration, and blood biochemical parameters were examined, respectively. Protein and mRNA expressions of nephrin and podocin in glomeruli were also investigated. Besides, liver histological characteristics were analyzed.

Results

In Experiment 1, GTW pretreatment at the medium dose (75 mg/kg body weight) caused no influence on the induction of anti-Thy1.1 GN and the basal nephrin expression. In Experiment 2, the high dosage (100 mg/kg body weight) of GTW ameliorated proteinuria, the distribution of nephrin and podocin, mesangial proliferation, and the activated macrophage accumulation, as compared with vehicle group (P < 0.05). Additionally, it increased mRNA and protein expressions of nephrin and podocin in glomeruli on day 7, but had no influence on podocyte structure. In Experiment 3, the medium dosage (75 mg/kg body weight) of GTW improved proteinuria, the partial matrix expansion, and the distribution of nephrin and podocin on day 14, as compared with anti-Thy1.1 GN rats (P < 0.05). GTW at the high or moderate dose did not affect hepatic function on day 7 and on day 14.

Conclusions

Podocyte SD dysfunction, such as the disordered distribution and down-regulation of nephrin and podocin expression, is critically involved in the pathogenesis of anti-Thy1.1 GN induced by mAb 1-22-3. The restoration of the distribution and expression of nephrin and podocin by GTW could be an important mechanism by which GTW ameliorates proteinuria and podocyte SD dysfunction.     

雷公藤多苷对不可逆性肾小球硬化模型系膜损伤的抑制作用

目的观察雷公藤多苷(GTW)对不可逆性肾小球硬化模型系膜损伤的抑制作用,阐明其在体内延缓肾小球硬化的分子药理机制。方法运用2次注射单克隆抗体(mAb)1223的方法,建立大鼠不可逆性肾小球硬化模型,以经口灌胃GTW(50mg·kg^-1BW)干预42d,并设立对照组。比较24h尿蛋白排泄量(Upro)、肾功能(Scr,BUN)以及肾小球形态学(LM,IF)变化,并检测(RTPCR)模型鼠肾组织中I型胶原(collagentypeI)、转化生长因子(TGFβ)mRNA表达水平。结果GTW抑制肾小球硬化模型鼠Upro和系膜增殖。肾小球总细胞数GTW组(65.67±3.43),对照组(87.02±2.41),P<0.05;细胞外基质积分GTW组(1.20±0.06),对照组(2.77±0.23),P<0.05;α平滑肌肌动蛋白积分GTW组(1.75±0.33),对照组(2.62±0.15),P<0.05;I型胶原积分GTW组(1.68±0.31),对照组(2.06±0.24),P<0.05。GTW使肾小球硬化模型鼠肾组织中collagentypeI,TGFβmRNA表达水平下调53.5%和14.7%,与对照组比较,二者差异均有显著性(P<0.05)。结论GTW抑制肾小球硬化模型鼠Upro和系膜增殖的作用是通过减少细胞因子mRNA的表达来实现的。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞podocin表达的影响

目的观察柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞podoc in表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组,通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）建立大鼠IgAN模型,分别进行药物干预。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球病理变化,并采用免疫组化和实时定量PCR检测足细胞podo-c in蛋白及mRNA的表达。结果与正常组比较,IgAN组大鼠Upr、肾小球系膜细胞、系膜基质相对含量均显著升高（P〈0.01）,大部分足突融合,足细胞podoc in蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。柴芩肾安方组上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异显著（P〈0.01）,且其podoc in蛋白表达高于氯沙坦组（P〈0.01）。结论柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复足细胞podoc in表达有关。     

五味子复方减轻阿霉素肾病小鼠蛋白尿的实验研究

[目的]观察五味子复方(SM)对阿霉素肾病(ADN)小鼠肾皮质WT1蛋白、Nephrin和Podocin mRNA的影响,探讨SM减轻蛋白尿的可能机制。[方法]雄性BALB/c小鼠27只随机分为对照组、ADN模型组和SM治疗组,单次尾静脉注射阿霉素法建立ADN模型,收集尿及肾组织,检测体质量、右肾质量、24 h尿白蛋白排泌率(UAER);光镜下观察肾组织形态改变;免疫荧光检测各组肾小球WT1;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾皮质Nephrin和Podocin mRNA。[结果]治疗组的右肾质量、UAER低于模型组(均P0.05);治疗组Nephrin mRNA和Podocin mRNA表达水平高于模型组(均P0.01);肾小球荧光染色示WT1在对照组正常,模型组呈节段性缺失,治疗组缺失较轻。[结论]SM可以通过上调WT1蛋白、Nephrin和podocin mRNA的表达,保护足细胞,减少ADN小鼠的蛋白尿。     

Effect of Arctiin on Glomerular Filtration Barrier Damage in STZ‐Induced Diabetic Nephropathy Rats

Diabetic nephropathy (DN) is the major life‐threatening complication of diabetes. Abnormal permeability of glomerular basement membrane plays an important role in DN pathogenesis. This study was performed to assess the effect of arctiin, the lignan constituent from Arctium lappa L., on metabolic profile and aggravation of renal lesions in a rat model of streptozotocin (STZ)‐induced DN. STZ‐induced diabetic rats were treated with arctiin at the dosage of 60 or 40 mg/kg/day via intraperitoneal injection for 8 weeks. Blood glucose and 24‐h urinary albumin content were measured, and kidney histopathological changes were monitored. RT‐PCR and immunohistochemistry were used to detect the mRNA and protein levels of nephrin, podocin and heparanase (HPSE) in the kidney cortex of rats, respectively. Treatment with arctiin significantly decreased the levels of 24‐h urinary albumin, prevented the sclerosis of glomeruli and effectively restored the glomerular filtration barrier damage by up‐regulating the expression of nephrin and podocin and down‐regulating HPSE level. Our studies suggest that arctiin might be beneficial for DN. The effects of arctiin on attenuating albuminuria and glomerulosclerosis are possibly mediated by regulating the expression of nephrin and podocin and HPSE in STZ‐induced diabetic rats. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

加味当归补血汤对阿霉素肾病大鼠肾脏足细胞保护机制的研究

目的 利用阿霉素肾病模型研究加味当归补血汤对肾小球足细胞作用的影响。方法 实验动物分为正常组、模型组、贝那普利组和加味当归补血汤组。分别在造模第7、28、42、56天留取尿液标本,观察尿白蛋白定量的动态变化;取肾组织进行光镜、电镜和足细胞表达蛋白nephrin、podocin的免疫荧光检测,并进一步应用分子生物学（RT-PCR及Wetern blot）的方法对肾组织中足细胞裂孔膜表达蛋白的表达情况进行分析。结果（1）尿白蛋白：各治疗组治疗7天尿白蛋白减少不明显,但在28、42、56天表现为非常明显的下降,贝那普利组和加味当归补血汤组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而且加味当归补血汤最为明显;（2）肾脏组织和足细胞的影响：光镜和电镜观察结果显示加味当归补血汤治疗组与贝那普利治疗组和模型组比较,系膜细胞增生情况、肾小管-间质病变情况、足细胞融合和足细胞表达蛋白nephrin、podocin的表达情况均较轻,尿白蛋白定量相对模型组明显减少的情况下仍然存在与肾脏纤维化相关的肾脏病理进展,说明肾脏病变程度相比模型组较轻但不是逆转;（3）治疗第56天肾脏组织足细胞RT-PCR及Wetern blot检测 nephrin、podocin表达;各治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归补血汤对于阿霉素肾病模型具有治疗作用,作用主要是通过减少尿白蛋白,抑制系膜细胞增生和减轻肾小管-间质损伤,保护足细胞裂孔膜结构的完整性。