肠出血性大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立能够分泌针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原的特异性单克隆抗体,以期用于该病原菌的检测。方法以敲除毒力基因的O157突变株F25全菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,分别以全菌抗原和热酚水法纯化的O157 LPS抗原用间接ELISA筛选能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定。结果建立了稳定分泌抗O157 LPS抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6,分泌抗体属IgG3亚类,轻链为κ型。腹水抗体ELISA效价达1∶3.2×106。以辛酸/饱和硫酸铵法纯化后抗体效价为1∶1.6×106,亲和常数Ka大于6.14×10-11mol/L。用于协同凝集和间接荧光抗体试验具有良好的特异性。结论该单克隆抗体针对O157的LPS抗原,特异性强,亲和力高,可用于O157的检测或分离鉴定。     

抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

目的筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidiumsuis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性。方法将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选,有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验、间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性。结果获得3株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞株,命名为1E1C5、1E11A5、2B7A1,分别属于Ig M、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1∶3200、1∶1600和1∶3200,小鼠腹水效价分别为1∶1.6×105、1∶1.6×105和1∶0.8×105;ELISA叠加试验表明3株单抗可识别两个不同抗原位点,1E1C5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示3株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应,但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(C.hominis)有微弱的交叉反应。结论获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs,为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础。     

1株猪鼻支原体特异性单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备与鉴定猪鼻支原体单克隆抗体,用于猪鼻支原体诊断及致病机理的研究。方法将猪鼻支原体全菌蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。鉴定其抗体亚型并对纯化单抗的效价、特异性进行鉴定。将该单抗用于菌落免疫杂交试验、间接免疫荧光试验。结果获得了1株猪鼻支原体单抗,命名为Mhr-08。该单抗的亚型属于IgG1,轻链为κ型。ELISA测定该纯化单抗效价为1∶102 400,Western-blot检测结果表明,该单抗与猪鼻支原体全菌蛋白在43kDa处出现特异性反应条带,与猪其他支原体、大肠杆菌及KM2培养基无交叉反应;该单抗为猪鼻支原体表面膜蛋白抗体,可成功应用于菌落免疫杂交试验;将其用于间接免疫荧光试验可成功检测出黏附于猪气管上皮细胞上的猪鼻支原体。结论成功制备和鉴定出1株猪鼻支原体单克隆抗体,该特异性单抗的获得为猪鼻支原体的诊断及致病机理的研究提供了工具。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定

[目的 ]制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶 (LDHp)单克隆抗体 (McAb) ,并对其特异性进行鉴定。[方法 ]用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备McAb ,筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株 ,测定其免疫球蛋白亚类及其效价 ,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。 [结果 ]筛选出 2A5和1H10两株能稳定分泌抗LDHpMcAb的杂交瘤细胞株 ,两株单抗均为IgG2b,2A5和 1H10培养上清的ELISA效价分别为 1∶5 12和 1∶2 5 6 ,腹水效价分别为 1∶2 5 6 0 0和 1∶12 80 0 ,两株单抗与间日疟原虫、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应 ,能识别恶性疟原虫 33kDa的虫源蛋白。 [结论 ]制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗     

浙江省O157大肠杆菌监测及其分子生物学特性

目的了解肠出血性大肠杆菌O157∶H7和其他O157大肠杆菌在浙江省动物、人群中的分布、流行以及PFGE分型、毒力基因携带状况。方法按全国O157∶H7监测方案在5-10月份肠道传染病高发季节,采集全省各地(市)肠道门诊腹泻病人粪便,进行O157大肠杆菌分离培养,并用免疫磁珠分离法对浙江省5个监测点的宿主动物进行O157∶H7分离培养、鉴定,可疑菌株以PCR法检测O157∶H7抗原、志贺样毒素(stx1和stx2)、粘附抹平因子(eaeA)及溶血素(hly)4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析,同时选择14种抗生素进行药敏试验,并将分析结果与本省首株患者粪便中分离的产志贺样毒素的O157∶H7菌株进行比较。结果全省5个监测点2006年共监测动物粪便标本2377份,分离到4株O157∶H7菌株,阳性率为0.17%;同时在绍兴、舟山肠道门诊腹泻病人粪便中分离到2株O157:H?菌株。4株O157∶H7菌株,stx2、Hly、eaeA均阳性,stx1均阴性;2株O157∶H?菌株仅1株携带eaeA毒力基因。脉冲场凝胶电泳分型显示,4株O157∶H7菌株分3个型,除金华地区2006年分离所得2株完全相似外,其它相同地区不同年代分离的O157∶H7菌株及相同年代不同地区分离的O157∶H7菌株则完全不相似。2株O157∶H?菌株1株PF-GE电泳条带降解,另1株与其它O157∶H7菌株电泳条带差异明显。结论浙江省大肠杆菌0157菌株在动物中以携带stx2毒力基因的O157∶H7菌株为主,但在腹泻患者中则以不带志贺样毒素的O157∶H?菌株为主。不同地区分离的O157∶H7菌株PFGE分型差异明显。羊、奶牛是携带stx2毒力基因的O157∶H7大肠杆菌的主要宿主。各级疾控应加强对宿主动物和腹泻病人大肠杆菌O157的分离监测和流行病学调查。     

多重PCR方法械检测EHEC和EPEC毒力基因

目的　建立简易实用的检测EHEC和EPEC多种毒力基因的方法。方法　应用多重PCR同时检测大肠埃希菌菌株的stx1、stx2、EPEC和EHEC共同的eaeA（eaeA-gen）等靶基因;用常规PCR检测EHECO157特异的eaeA（eaeA-O157）基因,以区分EHEC和EPEC的eaeA基因。结果　对分别分离自美国和我国江苏的EHECO157菌株以MPCR检测,stx1、stx2和eaeA-gen基因均阳性,同时常规PCR扩增eaeA-O157也阳性。在8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株中,stx1、stx2和eaeA-O157基因均阴性,仅2株扩增出EPECeaeA基因。在28株EPEC血清型、12株ETEC血清型、12株EIEC血清型大肠埃希菌菌株中,stx1和stx2基因均阴性;3株EPEC血清型菌株eaeA-gen基因阳性。结论　MPCR技术可同时检测菌株的stx1、stx2和eaeA基因,可为EHEC和EPEC感染的诊断及流行病学调查,提供一种简便、实用、经济的技术手段。     

氨基端前B型钠尿肽单克隆抗体的制备及其鉴定

目的通过经典单克隆抗体制备技术制备氨基端前B型钠尿肽(NT-pro BNP)单克隆抗体,将单克隆抗体进行特异性和亲和力鉴定,并用于免疫学检测试剂盒的开发。方法用带His-Trx-标签蛋白的NT-pro BNP免疫Balb/C小鼠制备单克隆抗体。使用PEG1500化学融合法将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用不带标签的NT-pro BNP对获取的杂交瘤细胞进行反复多次克隆筛选,将稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株经腹腔注射Balb/C小鼠诱导产生腹水,经蛋白G亲和纯化后获得NT-pro BNP单克隆抗体并对其进行亲和力和特异性进行鉴定。结果成功进行细胞融合并获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体分泌亚型为Ig G1,可特异性识别NT-pro BNP。经腹腔体内诱生法和蛋白G亲和纯化,获得高质量NT-pro BNP单克隆抗体,经ELISA检测抗体效价在1∶10~5以上。结论通过传统经典单克隆抗体制备技术成功制备NT-pro BNP单克隆抗体,为NT-pro BNP检测试剂盒的研发奠定了基础。     

EHEC O157∶H7基因缺失突变株口服免疫小鼠的实验研究

目的　研究肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7基因缺失突变疫苗候选株EHEC 86 - 2 4 (Δstx/ler)的安全性和免疫保护效果 ,为进一步的临床实验提供依据。方法　对出生 7d昆明鼠经口服途径进行免疫 ,分别在一次免疫和加强免疫 14d后以O15 7∶H7强毒株EDL933(NalR)攻毒 ,观察小鼠的发病情况、疫苗候选株的保护率及攻毒后的带菌消长情况。同时又作了被动免疫实验 ,成年母鼠间隔 14d口服免疫两次 ,所生乳鼠 7d攻毒。结果　疫苗株以 10倍于强毒株最小致死剂量口服接种无致病作用。疫苗株一次免疫保护率可达 6 0 %。因小鼠的易感性随日龄和体重的增加而降低 ,加强免疫后 ,对照组未能全部致死 (死亡 4 0 % ) ,而免疫组全部存活 ;攻毒后免疫组比对照组排菌时间显著缩短 (2 4h/ 2 16h)。两次口服免疫后血清IgG抗体效价达 1∶16 0 0。被动免疫保护率 10 0 %。结论　该突变株通过口服接种能够引起特异性免疫应答反应 ,具有良好的免疫原性和免疫保护作用     

抗寨卡病毒非结构蛋白1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗寨卡病毒非结构蛋白1的小鼠杂交瘤单克隆抗体,并对筛选获得的单抗进行抗体亚型鉴定以及免疫结合特性鉴定。方法将真核表达纯化获得的寨卡病毒非结构蛋白1按50μg/只的量免疫3只SPF级BABL/c小鼠,经过3次皮下多点免疫及1次腹腔加强免疫后测定小鼠血清抗体效价,取抗体滴度高的免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,使用有限稀释法进行亚克隆,采用间接ELISA筛选分泌高滴度单抗的杂交瘤细胞株,使用小鼠单克隆抗体分型试剂盒对筛选的单抗进行亚型鉴定,分别使用免疫印迹与间接免疫荧光法检测单抗与寨卡病毒非结构蛋白1以及寨卡病毒的免疫结合特性。结果寨卡病毒非结构蛋白1免疫刺激小鼠产生高滴度的抗体,ELISA滴度为1∶64000。通过筛选获得2株能高效分泌抗寨卡病毒非结构蛋白1单抗的杂交瘤细胞株(命名为1C9-F12,4B2-F3),分泌的单抗的亚型均为重链γ1和轻链Kappa;Western blot及IFA法检测2株单抗均能与寨卡病毒非结构蛋白1及寨卡病毒发生特异性结合。结论成功筛选到2个抗寨卡病毒非结构蛋白1的小鼠单克隆抗体,该两个单抗均具有寨卡病毒非结构蛋白1及寨卡病毒结合特性,为建立检测寨卡病毒感染的ELISA方法及治疗性抗体研究奠定了基础。     

秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备及鉴定抗秦川黄牛成熟朊蛋白的单抗。方法用重组成熟朊蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以间接ELISA方法筛选能够稳定分泌抗成熟朊蛋白的单抗的杂交瘤细胞株。以亲和层析法纯化腹水抗体,检测其Ig类和亚类、效价、相对亲和力以及特异性,并用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。结果获得了能够稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×105,相对亲和力为0.15μg/ml,Western blot表明该单抗具有较强的特异性。表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。结论抗牛成熟朊蛋白的腹水单抗N64效价高、亲和力和特异性强,可以作为疯牛病免疫诊断的核心试剂。     

抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1,腹水效价为1：20万～1：200万,纯化抗体效价为0．05μg／ml-0．0005μg／ml,4A8抗体纯度达到95％以上,抗体亲和常数分别为5．27×10^6L／mol、3．39×10^6L／mol、1．05×10^7L／mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。     

抗旋毛虫副肌球蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的利用杂交瘤技术制备分泌抗重组旋毛虫副肌球蛋白N端抗原（rTsP3）的单克隆抗体（McAb）并进行鉴定。方法以rTsP3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化,采用间接ELISA法测定培养细胞上清液及腹水中的McAb滴度、相对亲和力及抗体亚类,Western blot法鉴定抗体对抗原识别的特异性。结果获得了2株稳定分泌抗旋毛虫rTsP3的McAb杂交瘤细胞株,分泌的McAb分别为IgG2b亚类κ型和IgG1亚类κ型,亲和力常数分别为8.98×108mol/L和9.7×10^8mol/L,Western blot显示2株单抗均能识别旋毛虫成虫匀浆蛋白、rTsP3及重组副肌球蛋白（rTsPmy）。结论成功制备了抗旋毛虫rTsP3单克隆抗体,该单抗能识别旋毛虫副肌球蛋白抗原。     

蟑螂主要过敏原Blag7单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备蟑螂主要过敏原Bla g7的单克隆抗体(mAb).方法 用含编码Bla g7基因的大肠杆菌菌株Origami/pGS21a,诱导表达并纯化出Bla g7蛋白,以该蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗Bla g7 mAb;通过ELISA、Western blot技术鉴定mAb的特异性.结果 获得...     

羊轮状病毒LLR VP4单克隆抗体的制备与特性研究

目的建立抗羊轮状病毒LLR(G10P〔12])VP4特异的单克隆抗体。方法用纯化羊轮状病毒LLR免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,利用间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法单克隆化,Western-blot鉴定单克隆抗体识别的抗原。结果获得4株稳定分泌抗VP4单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B1、1B8、1F11和1G10,其中1-B1,1-B8,1-G10分泌的抗体为Ig M型,1-F11为IgG1亚类;腹水抗体效价均在1×104以上;单克隆抗体均特异性识别羊轮状病毒LLR VP4。结论1B1、1B8、1F11和1G10分泌的抗体为抗羊轮状病毒LLR VP4特异的单克隆抗体。     

用protein G纯化口蹄疫病毒单克隆抗体的特性分析

目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG亲和层析柱进行亲和层析纯化单体,并用SDS-PAGE和单抗检测方法分析其纯化抗体的纯度和活性。结果经3次亚克隆获得了一株杂交瘤细胞株(10E6),抗体亚类鉴定为IgG2a;SDS-PAGE电泳显示,纯化的抗体纯度较高,只有IgG2a的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;单抗ELISA检测方法显示,纯化的抗体具有良好的活性,其效价为1∶102400,高于腹水效价。结论用proteinG亲和层析法获得了高纯度和高效价的单克隆抗体,将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究奠定基础。     

阴道毛滴虫重组蛋白AP33的免疫保护机制初探

目的探讨阴道毛滴虫重组AP33融合蛋白对宿主的保护性免疫机制。方法用纯化的重组AP33蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清和脾细胞多项免疫指标的变化;实验组与对照组分别用滴虫滋养体进行皮下和腹腔攻击,观察各组小鼠的行为变化和死亡时间。结果重组AP33蛋白免疫小鼠产生高效价抗体;实验组小鼠的CD4+T淋巴细胞有所增高(30.65±3.69)%,CD4+/CD8+比值明显升高(3.96±0.56)%(P<0.01);脾细胞培养上清液中mIL-2、mIFN-γ、mIL-4和mIL-6均有不同程度的升高,尤其mIFN-γ浓度增高最明显;皮下注射组,实验组小鼠背部出现明显溃疡;腹腔注射组,对照组小鼠6d内全部死亡,而实验组小鼠的存活时间比对照组长,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组AP33融合蛋白具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生较好的免疫保护作用,可能成为阴道毛滴虫预防或治疗性多价疫苗的侯选抗原。     

针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定

目的 研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法 利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力。结果 成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×10⁷以上,亲和力为4.44×10⁸ M^-1;Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-...     

结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64单克隆抗体的制备及其特异性

目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并分析mAb的特异性。方法 PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白。重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系。以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb。ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性。结果 本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了MPT64蛋白。亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白。该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2。中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb。该mAb的亲和力为2.813×10^-7 g/mL,属于IgG 1亚类。MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白。结论 本研究制备了MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础。     

Production and Characterization of Murine Monoclonal Antibodies Recognizing Conformational and Linear Epitopes Localized on Human IgA2 Molecules

Background: There are two subclasses of human IgA (IgA1 and IgA2) that differ in antigenic properties and in chemical composition. The constant domains of α1 and α2 heavy chains have >95% sequence homology though major structural differences exist in the hinge region. Quantitation of IgA subclass levels depends on the availability of monoclonal antibodies (MAbs) specific for conserved conformational or linear epitopes restricted to each subclass. Objective: To produce, select and characterize monoclonal antibodies specific for human IgA2. Methods: Splenocytes from BALB/C mice immunized with a human IgA2 myeloma protein were fused with SP2/0 myeloma cells. Fused cells were grown in hypoxanthine, aminopterine and thymidine (HAT) selective medium and cloned by limiting dilution assay. Antibody (Ab) secreting cells were screened by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the specificity of secreted MAbs was further analyzed, using a panel of purified myeloma proteins and some animal sera by ELISA and immunoblotting. The affinity constant (Kaff) was also determined by ELISA. Results: Four murine hybridoma clones designated 2F20G5, 2F20B5, 3F20E3 and 6F20H11 were obtained that secreted MAbs specific for the human IgA2. 2F20G5 and 6F20H11 MAbs react with linear epitope(s) while 2F20B5 and 3F20E3 react with conformational epitope(s) located to human IgA2 subclass. 2F20G5 MAb displays a weak cross-reactivity with monkey and rabbit sera and a strong cross-reactivity with cat and dog sera while the other three MAbs showed no cross-reactivity with the animal sera tested. Conclusion: These MAbs, especially 6F20H11 with high affinity constant (6.03 ×109 M-1) are useful tools for quantitation of human IgA2 subclass levels in various diseases. Cross-reactivity of 2F20G5 MAb with some animalsera suggests phylogenic conservation ofthe epitope recognized by this MAb.     

9型重组腺相关病毒转染大鼠心脏成纤维细胞的体外研究

目的:研究9型重组腺相关病毒(rAAV9)对大鼠心脏成纤维细胞的转染效率及其对细胞生长的影响。方法:分离、获取并培养大鼠心脏成纤维细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的rAAV9(rAAV9-EGFP)转染大鼠心脏成纤维细胞,以转染复数(MOI)将细胞分为未转染病毒A组、B组MOI=1×104、C组MOI=1×105、D组MOI=1×106,倒置荧光显微镜下观察大鼠心脏成纤维细胞中EGFP的表达情况,观察转染后细胞生长形态,应用流式细胞仪检测rAAV9-EGFP对大鼠心脏成纤维细胞的转染效率,应用AlamarBlue法检测rAAV9-EGFP对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响。结果:D组的细胞于转染后24h即可观察到EGFP表达,B组与C组细胞则于48h观察到EGFP的表达。倒置荧光显微镜下观察转染后大鼠心脏成纤维细胞生长及形态正常,镜下观察显示各组细胞表达EGFP的强度随MOI值的增高而增强,同时亦随着时间延长而增强,EGFP表达在转染120h达到高峰,此时检测rAAV9-EGFP对心脏成纤维细胞的转染效率,分别为B组:(2.6±0.2)%,C组:(7.3±1.4)%,D组:(45.1±2.7)%。AlamarBlue法检测表明转染组细胞各时点与未转染组的还原率比值接近于1。结论:rAAV9-EGFP能够有效转染大鼠心脏成纤维细胞,转染后EGFP基因能够有效得以表达,rAAV9对细胞增殖无明显抑制。9型重组腺相关病毒可作为基因治疗心脏疾病研究的理想载体。