葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响

目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg~(-1))、转染组、空转组、葱白加转染组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P 0. 05,P 0. 01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P 0. 05); PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P 0. 05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P 0. 05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P 0. 05)。PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异。结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关。     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和脂肪酸β氧化限速酶CPT-1表达的影响

目的探讨葱白提取物治疗高脂饮食诱导的非酒精性肝病大鼠可能的分子机制。方法采用高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝模型,并应用小干扰RNA技术抑制转染组大鼠辅激活因子(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator`1α,PGC-1α)的表达,将48只Wistar大鼠随机分为6组,观察各组大鼠的一般情况,计算肝指数,油红染色法观察各组大鼠肝脏组织的病理形态学变化,并运用RT-PCR法和Western-blot法分别检测PGC-1α和脂肪酸β氧化限速酶肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)的表达水平。结果各组大鼠体重无明显差异,模型组精神较差,偶见腹泻便溏情况,活动度明显不及葱白治疗组。与正常对照组相比,模型组大鼠肝指数明显升高(P0.05);与模型组比较,葱白组肝指数下降(P0.05),转染葱白组与模型组肝指数差异不明显。从油红染色可见模型组大鼠肝细胞内较多橘红色脂滴聚集,细胞肿胀明细;葱白组胞内脂滴明显减少;转染葱白组胞内脂滴数量介于模型组和葱白治疗组之间。PGC-1α和CPT-1的表达情况:与空转组比,转染组PGC-1α的表达水平降低(P0.05),CPT-1的表达水平也下降(P0.05)。和正常组比,模型组PGC-1α与CPT-1的表达水平均降低(P0.05);和模型组比,葱白组PGC-1α与CPT-1的表达水平均增加(P0.05),转染葱白组两者的表达则与模型组无明显差异(P0.05)。结论辛温通阳中药葱白提取物治疗NAFLD依赖PGC-1α的转录活化水平,从而调控肝细胞脂肪酸β氧化发挥作用。     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠ACCase和CPT-1表达的影响

目的:探讨葱白提取物治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)可能的作用机制。方法:60只大鼠分为正常组、模型组、低剂量葱白组、中剂量葱白组、高剂量葱白组、易善复组,每组10只。采用高脂饮食造模,造模10周后经组织病理学鉴定模型制备成功后给予不同剂量药物干预4周。光镜下观察肝组织HE染色组织结构;检测血浆黏度、全血黏度及血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝组织游离脂肪酸(FFA)的含量;Realtime PCR检测大鼠肝脏乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1)mRNA的表达情况。结果:模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性,舌像评分、肝指数、血浆黏度和全血黏度以及血清AST、ALT、TC、TG水平明显升高(P0.05),ACCase mRNA表达升高(P0.05),CPT-1 mRNA的表达下降(P0.05);低、中、高剂量葱白组及易善复组肝脂肪变性减轻,舌像评分、肝指数、血浆黏度和全血黏度以及血清AST、ALT、TC、TG水平降低(P0.05),以高剂量葱白组和易善复组下降明显,高剂量葱白组和易善复组差异无统计学意义(P 0.05)。结论:葱白提取物治疗NAFLD有效,其机制与促进CPT-1表达及降低ACCase表达有关。     

电针“足三里”穴对脾气虚大鼠心肌PGC-1α/NRFs/TFAM信号通路表达的影响

目的:观察电针"足三里"穴对脾气虚模型大鼠心肌PGC-1α/NRFs/TFAM信号通路相关分子表达的影响。方法:将32只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、非经非穴组。除正常组外,其余3组均采用劳倦过度和不规则饮食复合法建立脾气虚证大鼠模型。造模成功后,针刺组给予电针双侧"足三里"穴治疗,非经非穴组予以电针双侧非经非穴点治疗,每日1次,每次20 min,共治疗7 d。采用荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织PGC-1α、NRF1、NRF2、TFAM的mRNA表达水平。采用Western Blot检测大鼠心肌组织PGC-1α及NRF1的蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组和非经非穴组大鼠心肌组织PGC-1α、NRF1、NRF2、TFAM的mRNA表达以及PGC-1α和NRF1的蛋白表达水平均明显降低(P0.05);与模型组相比,针刺组大鼠心肌组织PGC-1α、NRF1、NRF2、TFAM的mRNA表达以及PGC-1α和NRF1的蛋白表达水平有所升高(P0.05),非经非穴组未见显著性差异(P0.5)。结论:电针"足三里"穴可以上调脾气虚大鼠心肌组织PGC-1α、NRF1、NRF2、TFAM基因以及PGC-1α和NRF1蛋白的表达水平,可以通过促进线粒体生物合成,提高线粒体呼吸功能,进而调控能量代谢而发挥健脾益气作用。     

葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型PPAR-α及PGC-1表达的影响

目的:观察葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型中PPAR-α及PGC-1表达的影响,探讨其防治脂肪肝的作用机制。方法:建立游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型。用不同浓度葱白提取物进行干预24h后,MTT检测的细胞活性;油红O染色观察细胞内的脂滴;生化细胞内TG、ALT、AST含量;RT-PCR和Western Blotting分别检测细胞内PPAR-α、PGC-1基因的mRNA和蛋白表达。结果:游离脂肪酸诱导24h后,油红O染色显示脂肪变性;模型组TG含量较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);各组转氨酶没有明显变化;同时胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达降低。而葱白提取物各剂量组胞内的TG较模型组显著降低,差异有统计学意(P<0.05,P<0.01),并且胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达显著升高,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:葱白提取物对脂肪变性肝细胞有明显的保护作用,其机制可能与PPAR-α、PGC-1基因表达上调有关。     

苍附导痰汤通过miR-29a靶向调节PGC-1α表达对大鼠卵巢颗粒细胞代谢的影响

目的探讨苍附导痰汤通过miR-29a及其靶向PGC-1α信号通路对多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞能量代谢相关基因表达的影响。方法利用TargetScan4.0及Pictar程序预测miR-29a可能的靶基因为PGC-1α,体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠卵巢颗粒细胞(Ovarian granulosa cells,OGCs),用脂质体Lipofectamine2000转染miR-29a mimic进入OGCs,转染48h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测PGC-1α的mRNA和蛋白的表达变化;构建含野生型及其突变型PGC-1α3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因(DLR)表达系统(pMIR-PGC-1α-3'UTR)的pEGFP质粒,将细胞分为正常组,空载体组,转染miR-29a组,PGC-1α3'组,PGC-1α3'突变组,分别转染至大鼠胰岛素抵抗细胞模型OGCs中,双萤光素酶报告基因系统检测各组萤光素酶活性变化,并采用RT-PCR确定PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量。结果 OGCs转染miR-29a mimic 48h后,PGC-1的mRNA和蛋白的水平均下调,与正常组比较差异具有统计学意义(P0.05)。双萤光素酶报告基因系统显示,转染miR-29a组可特异抑制带有PGC-1α的3'UTR报告基因表达(P0.05),转染组PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量表达下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);苍附导痰汤组可逆转转染miR-29a造成的PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量表达下降,与转染miR-29a组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论经验证PGC-1α是miR-29a的靶基因,在OGCs中过表达miR-29a能特异抑制带有PGC-1α的3'UTR报告基因表达;苍附导痰汤通过miR-29a靶向PGC-1α信号通路改善PCOS胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗,其机制可能是苍附导痰汤通过抑制miR-29a靶向结合PGC-1α的3'UTR,促进PGC-1α及其下游的NRF-1、ERRα的mRNA表达量,促进线粒体进行生物合成、葡萄糖的利用、脂肪酸氧化来实现的。     

通络益肾方对糖尿病肾病大鼠线粒体功能障碍的保护作用

目的探究通络益肾方对糖尿病肾病大鼠足细胞线粒体功能的影响。方法制备DN大鼠模型(链脲佐菌素+右肾切除联合高脂饮食),随机分为正常对照组、模型组、缬沙坦组、通络益肾方早期组(成模时即灌胃给药)、中期组(成模后9周灌胃给药)、晚期组(成模后22周开始给药),正常对照组予假手术及普通饲料喂养。共持续26周。第9、22周末分别处死正常对照组、模型组、缬沙坦组、中药早期组各10只大鼠,余大鼠26周末处死。检测24 h U?Pr,肾功能,电镜观察足细胞线粒体形态,实时荧光定量PCR检测TFAM、PGC?1αmRNA表达,流式细胞术检测线粒体膜电位。结果模型组大鼠线粒体损伤随时间延长持续加重;缬沙坦组及中药早期组线粒体损伤程度减轻。与模型组比较,中药早期组24 h U?Pr、Scr、BUN均降低(P<0.05,P<0.01)。26周时,与中药早期组比较,中期组、晚期组24 h U?Pr、Scr、BUN表达升高(P<0.01)。模型组PGC?1α、TFAM mRNA表达呈时间依赖性递减(P<0.01);早期组TFAM、PGC?1αmRNA表达升高(P<0.01);26周时,与早期组比较,中期组、晚期组表达降低(P<0.01);模型组线粒体膜电位水平持续下降,中药组大鼠线粒体膜电位水平升高。结论通络益肾方通过改善DN足细胞线粒体功能而减轻肾损伤,早期给药效果优于中、晚期。     

当归芍药散对AD大鼠线粒体稳态及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的：探讨当归芍药散对阿尔茨海默病(AD)大鼠线粒体形态和功能的影响及作用机制。方法：采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)构建AD模型大鼠。40只大鼠随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低、中、高剂量(12、24、36 g·kg^-1)组,连续灌胃14 d后透射电镜观察大鼠海马区线粒体形态变化,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测活性氧(ROS)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)、PGC-1α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、PGC-1α蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠海马区线粒体损伤明显,ROS产生和细胞凋亡率显著增高(P<0.01),MFN2、COXⅣ、PGC-1α mRNA表达显著下调,Drp...     

基于LKB1/AMPK/PGC-1α的泽泻汤改善非酒精性脂肪肝作用机制研究

以棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的脂质堆积细胞模型和高脂诱导的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)动物模型,探讨泽泻汤(Zexie Decoction)体内外改善NAFLD的药效,以LKB1/AMPK/PGC-1α通路为切入点探讨其可能作用机制。MTT结果显示泽泻汤对HepG2细胞活力无影响,泽泻汤剂量依赖性下调PA诱导的肝细胞培养基谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平,降低高脂饮食(high-fat diet,HFD)小鼠血浆ALT、AST及肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平。尼罗红染色观察PA诱导的细胞内脂质沉积,PA诱导的肝细胞脂质蓄积显著增加,体外细胞脂质堆积模型诱导成功,泽泻汤有效改善PA诱导的肝细胞脂质堆积;小鼠肝脏油红染色结果同样表明,泽泻汤剂量依赖性减少HFD小鼠肝脏脂质堆积。线粒体膜电位染色显示泽泻汤能够逆转PA诱导肝细胞损伤引起的线粒体膜电位的下降;同时泽泻汤激活PGC-1α上调其靶基因ACADS、CPT-1α、CPT-1β、UCP-1、ACSL-1、NRF-1等的表达;Western blot及免疫组化结果显示泽泻汤可体内外上调LKB1、p-AMPK、p-ACC、PGC-1α蛋白表达水平。综上所述,泽泻汤能够有效改善NAFLD,其机制可能与调控LKB1/AMPK/PGC-1α通路相关。     

四君子汤对脾虚大鼠骨骼肌SDH活性及PGC-1α基因和蛋白表达的影响

目的观察脾虚模型大鼠骨骼肌线粒体SDH活性、骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白表达变化及四君子汤对其影响,探讨脾虚证能量代谢障碍机制。方法采用皮下注射利血平(0.5mg·kg~(-1)·d~(-1))方法建立脾虚大鼠模型,造模成功后,将模型组大鼠分为四君子汤组和脾虚组,每组各7只,另设正常组7只。四君子汤给药组灌胃四君子汤10g·10ml~(-1)·kg~(-1),脾虚组和正常组灌胃等量的生理盐水,每日1次,持续3周,记录大鼠的一般状况,3周后检测大鼠尿D-木糖排泄率,提取骨骼肌线粒体,检测大鼠骨骼肌线粒体SDH活性、骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白的表达情况。结果与正常组相比,脾虚组大鼠骨骼肌线粒体SDH活性显著降低(P0.01);大鼠骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白表达显著降低(P0.01);与脾虚组相比,四君子汤组大鼠骨骼肌线粒体SDH活性升高(P0.05),大鼠骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白表达升高(P0.05)。结论脾虚模型大鼠骨骼肌线粒体存在功能损伤,呼吸链酶活性降低,导致线粒体氧化磷酸化下降,机体生物合成、能量代谢障碍;健脾益气中药可提高线粒体氧化磷酸化水平,改善能量代谢。     

冠心舒通胶囊对慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢的影响

目的观察冠心舒通胶囊对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢的影响及可能机制。方法 80只SD大鼠随机选取20只作为空白组,余采用左冠状动脉前降支结扎法配合力竭式游泳及节食方法复制慢性心力衰竭大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、西药组、冠心舒通胶囊组。造模后西药组给予赖诺普利片1.5 mg/(kg·d)灌胃,冠心舒通胶囊组给予冠心舒通胶囊10.0 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组分别给予等容积蒸馏水3 ml/次灌胃,均每日1次。持续28天后,测定各组大鼠血浆B型尿钠肽(BNP)、三磷酸腺苷(ATP)浓度,测定心肌组织过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(mt TFA)基因和蛋白表达。结果与空白组比较,模型组、西药组、冠心舒通胶囊组血浆BNP水平升高,血浆ATP浓度和心肌组织PGC-1α、NRF-1、mt TFA mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。与模型组比较,西药组、冠心舒通胶囊组血浆BNP水平降低,而ATP浓度、PGC-1α、NRF-1、mt TFA mRNA及蛋白表达均升高(P0.05),并且西药组、冠心舒通胶囊组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论冠心舒通胶囊可能通过激活与心肌能量代谢有关的PGC-1α、NRF-1、mt TFA因子,增加线粒体的产能,从而改善和纠正心力衰竭。     

山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死大鼠心肌保护作用的影响

目的观察山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死(acute coronary infarction,AMI)心肌线粒体保护作用及对糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支制备AMI大鼠模型,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、山茱萸总苷预防给药组(总苷预防组)、山茱萸多糖治疗组(多糖治疗组)和山茱萸总苷治疗组(总苷治疗组),每组12只,除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余各给药组分别灌胃给予对应的药物治疗。进行超声心动图及血流动力学检测评价心功能;Masson三色染色法进行心肌梗死面积测定;荧光实时定量PCR法检测心肌组织线粒体发生相关基因过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(αsubunit of peroxisome proliferators-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1α)、PGC-1β、心肌细胞核呼吸因子(nuclear respiratory factor-1,NRF-1)和GSK-3βmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌梗死面积增大,心功能下降,PGC-1α、PGC-1β和NRF-1 mRNA表达降低,GSK-3βm RNA表达升高(均P0.05)。与模型组比较,总苷预防组、总苷治疗组和多糖治疗组心肌梗死面积缩小,心功能改善,NRF-1 mRNA表达升高,总苷预防组和多糖治疗组PGC-1α和PGC-1βmRNA表达升高,多糖治疗组GSK-3βmRNA表达降低(均P0.05)。与总苷预防组比较,总苷治疗组短轴缩短率(fractional shortening,FS)、主动脉收缩压(aortic systolic blood pressure,SBP)升高,多糖治疗组射血分数(ejection fraction,EF)降低,总苷治疗组和多糖治疗组PGC-1α、PGC-1β及NRF-1 mRNA表达下降,多糖治疗组GSK-3βmRNA表达下降(均P0.05)。与总苷治疗组比较,多糖治疗组FS、EF、左室收缩末压(left ventricular end systolic pressure,LVESP)、SBP、GSK-3βmRNA降低(P0.05)。结论山茱萸总苷及山茱萸多糖具有改善AMI大鼠心功能、缩小心肌梗死面积、促进心肌线粒体生物合成的作用;山茱萸总苷及多糖对AMI大鼠心肌细胞线粒体保护作用可能是通过GSK-3β信号通路实现。     

基于AMPK/PPARα/PGC-1α信号通路探讨金合欢素改善代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱作用机制北大核心CSCD

目的:探究金合欢素对代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过果糖诱导自发性高血压(SHR)大鼠建立代谢综合征大鼠模型,灌胃给予金合欢素25、50 mg/kg, 7 w后检测收缩压(SBP)、胰岛素抵抗数指数(HOMA-IR),试剂盒检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)的含量;ELISA法检测腓肠肌组织中ATP含量;采用qPCR法测定大鼠腓肠肌中线粒体DNA(mtDNA)拷贝数;Western Blot法检测UCP 3、线粒体融合蛋白(MFN2)、线粒体裂变因子(MFF)、线粒体动力相关蛋白(Drp1)、线粒体途径凋亡指标蛋白(Cytochrome c)、能量代谢相关蛋白AMPK、p-AMPK、PPAR α、PGC-1α的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠SBP、HOMA-IR、体质量以及血清中LDL-C、TG含量显著升高(P<0.01),血清中HDL-C、腓肠肌质量、ATP含量、mtDNA拷贝数显著降低(P<0.01),腓肠肌组织线粒体中UCP 3、MFN2、Cytochrome c蛋白表达显著下调(P<0.01),MFF、Drp1蛋白表达显著上调(P<0.01),腓肠肌组织中AMPK蛋白磷酸化表达、PPAR α、PGC-1α蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,金合欢素各组能明显改善代谢综合征大鼠SBP、HOMA-IR、体质量以及血清中HDL-C、LDL-C、TG的含量;升高腓肠肌质量和ATP含量、mtDNA拷贝数,明显上调UCP 3、MFN2、Cytochrome c蛋白表达,下调MFF、Drp1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),促进大鼠腓肠肌线粒体融合并抑制其分裂;上调AMPK蛋白磷酸化、PPAR α、PGC-1α蛋白表达(P<0.01)。结论:金合欢素可能通过激活AMPK/PPAR α/PGC-1α通路,促进代谢综合征大鼠骨骼肌线粒体融合并抑制其分裂,增强线粒体功能进而改善代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱。     

电针“足三里”对慢性疲劳综合征大鼠骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子α信号通路基因表达的影响

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子α(PGC-1α)信号通路,观察针刺"足三里"对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠骨骼肌细胞线粒体氧化应激的影响,阐释针刺"足三里"防治CFS的部分作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、足三里组、非经非穴组,每组10只。采用多因素造模法复制CFS模型。足三里组电针双侧"足三里",非经非穴组电针双侧非经非穴,每日1次,每次20min,持续10d。检测造模前后、治疗后大鼠抓力变化;Western blot法检测大鼠骨骼肌三磷酸腺苷(ATP)合酶、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(SIRT 1)以及PGC-1α蛋白的表达;荧光定量PCR技术检测大鼠骨骼肌ATP合酶、SIRT 1以及PGC-1αmRNA的表达。结果:造模后,模型组、足三里组、非经非穴组大鼠抓力较正常对照组明显下降(P0.05),治疗后足三里组大鼠抓力较模型组明显升高(P0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠骨骼肌ATP合酶蛋白表达、ATP合酶mRNA表达明显下调(P0.05,P0.01),p-AMPK/AMPK差异无统计学意义(P0.05),SIRT 1蛋白表达明显升高(P0.01),PGC-1α蛋白及mRNA的表达明显降低(P0.01)。与模型组相比,足三里组大鼠骨骼肌ATP合酶mRNA表达明显上调(P0.01),p-AMPK/AMPK上调(P0.05),SIRT 1蛋白及mRNA、PGC-1α蛋白及mRNA的表达明显上调(P0.01)。结论:针刺"足三里"可使CFS大鼠骨骼肌AMPK表达明显增加,提高SIRT 1的表达,进一步直接或间接激活PGC-1α,提高线粒体的ATP合成,改善机体线粒体氧化应激反应,维持机体能量代谢,从而起到对CFS的治疗作用。     

参蛤散对心力衰竭大鼠线粒体功能的影响

目的探讨参蛤散治疗心力衰竭的可能作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、参蛤散组、比索洛尔组,每组12只。除假手术组外其余各组大鼠采用腹主动脉缩窄法建立心力衰竭大鼠模型,造模后5天,参蛤散组予参蛤散混悬液1.89 g/(kg·d)灌胃,比索洛尔组给予富马酸比索洛尔混悬液1 mg/(kg·d)灌胃,假手术组与模型组给予生理盐水2.5 ml/d灌胃,连续12周。比较各组大鼠血清乳酸、丙酮酸、游离脂肪酸含量以及心脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)和线粒体复合体亚基(包括COX1、COX2、COX3、ATP6、ATP8)mRNA表达。结果模型组大鼠血清乳酸、丙酮酸、游离脂肪酸含量较假手术组显著上升,心脏COX1、COX2、COX3、ATP6、ATP8 mRNA表达降低(P0.05或P0.01)。与模型组比较,参蛤散组血清丙酮酸、游离脂肪酸含量明显下降,COX2、ATP6、ATP8 mRNA表达明显上升(P0.05或P0.01)。模型组、参蛤散组、比索洛尔组大鼠心脏PGC-1α、NRF1、TFAM mRNA表达均较假手术组显著上升,而3组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论参蛤散可能通过上调心脏COX2、ATP6、ATP8mRNA表达水平,减少血清代谢产物堆积,从而保护心脏线粒体功能。     

补肾益气方联合有氧运动对衰老大鼠骨骼肌线粒体生物合成相关信号分子表达的影响

目的观察补肾益气方及有氧运动对D-半乳糖所致衰老大鼠骨骼肌线粒体生物合成相关信号分子丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、心肌细胞增强因子2C(MEF2C)及细胞色素氧化酶(COXⅣ)表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、中药组、运动+中药组、美雄酮组。除正常组外,其余各组每天颈背部皮下注射10%的D-半乳糖(100μg/g)溶液,制作"拟衰老"大鼠模型。模型大鼠分别经补肾益气方药、有氧跑台运动、美雄酮干预10周后,采用ELISA法测定大鼠血清β-半乳糖苷酶(β-Galase)含量,采用甲基百里香酚蓝法(MTB)检测大鼠腓肠肌线粒体钙含量,采用Western blotting法检测大鼠腓肠肌线粒体生物合成信号通路分子p38MAPK、Ca MKⅡ、PGC-1α、MEF2C及COXⅣ蛋白表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠衰老生物学标志物β-Galase、线粒体钙含量显著增高,Ca MKⅡ、MEF2C、PCG-1α蛋白表达明显下降,而P38MAPK蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,中药组可显著降低血清β-GALase蛋白含量、线粒体钙含量(P0.01);运动+中药组可显著降低线粒体钙含量,上调Ca MKⅡ、PGC-1α、MEF2C及COXⅣ蛋白表达;美雄酮组显著降低线粒体钙含量,上调PCG-1α、COXIV蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论衰老大鼠骨骼肌功能减退可能与线粒体生物合成相关信号转导通路分子Ca MKⅡ、p38 MAPK、PCG-1α、MEF2C及能量代谢相关酶蛋白基因(COXIV)表达异常变化有关;补肾益气方联合有氧运动可一定程度改善上述指标的异常变化,延缓骨骼肌衰老。     

二至丸改善自然衰老大鼠卵母细胞线粒体功能的机制研究

目的：研究二至丸对自然衰老大鼠卵母细胞线粒体改善的效应与机制。方法：选用SPF级SD雌性大鼠,随机分为8周龄青年对照组、20周龄老年对照组、20周龄二至丸用药低剂量组和高剂量组。用药30 d后,进行腹腔注射孕马血清促性腺激素(20 IU/只),2 d后给予人绒毛膜促性腺激素(10 IU/只),干预12 h后观察卵母细胞腺苷三磷酸(ATP)、活性氧(ROS)含量及线粒体的数目、形态,检测线粒体动态调控蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)、PTEN诱导蛋白激酶1(PINK1)的蛋白表达水平。结果：和青年对照组相比,老年对照组卵巢卵母细胞ATP的含量减少(P<0.05),细胞内线粒体数量下降,结构紊乱,部分呈空泡化,PGC-1α、OPA1及PINK1蛋白水平下降(P<0.05);二至丸低、高剂量组可提高老年大鼠卵母细胞ATP的浓度(P<0.05),增加细胞内线粒体含量、改善结构及减少ROS的生成(P<0.05),促进PGC-1α、OPA1和PINK1的表达(P<0.05)。结论：二至丸可以改善衰老卵巢内的...     

祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响

目的观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法 SPF雄性SD大鼠32只,随机分为正常组(6只)、造模组(26只),造模结束后随机抽取2只大鼠验证造模成功后,将24只NAFLD大鼠模型随机分为模型组,祛痰活血方低、中、高剂量组,每组6只按6,12,16g/(kg·d)灌胃。干预结束后,检测相关生化指标,行肝组织HE、油红O染色,检测肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)、胰岛素受体-1(IRS-1)蛋白及mRNA表达水平。结果与正常组相比,模型组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低,葡萄糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显升高,肝脏组织中PPARα、CPT-1、IRS-1 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组相比,祛痰活血方各组大鼠ALT、AST、TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高,FBG、FINS及HOMA-IR显著降低(P0.01),以高剂量组效果最好(P0.01);中、高剂量组PPARα、CPT-1、IRS-1 m RNA及蛋白表达明显升高(P0.01),以高剂量组效果最好(P0.05)。结论祛痰活血方能改善NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性程度及炎症反应,其作用机制可能与其激活PPARα /CPT-1通路,改善胰岛素抵抗进而改善NAFLD的脂质代谢有关。     

芪珀生脉颗粒调控线粒体生物合成通路改善房颤大鼠代谢应激的机制研究

目的 探讨芪珀生脉颗粒调控PGC-1α/NRF-1/Tfam通路,促进线粒体生物合成,改善房颤大鼠代谢应激的机制.方法 采用尾静脉注射乙酰胆碱—氯化钙(Ach-CaCl2)建立SD房颤大鼠模型,随机分为空白对照组、模型组、芪珀生脉颗粒大剂量组、芪珀生脉颗粒中剂量组、芪珀生脉颗粒小剂量组和阳性对照药维拉帕米组.用药干预4周后,比较各组大鼠房颤持续时间、血清乳酸及总胆固醇水平、透射电镜观察大鼠心房肌组织线粒体超微结构,测定心房ATP含量,运用Western Blot法检测线粒体生物合成关键蛋白PGC-1 α、NRF-1、Tfam水平.结果 与模型组相比,芪珀生脉颗粒各剂量组大鼠房颤持续时间显著缩短、乳酸及总胆固醇水平降低、心房组织线粒体结构损伤减轻、ATP合成显著增加,同时PGC-1α、NRF-1、Tfam表达显著增加.结论 芪珀生脉颗粒通过促进线粒体生物合成,保护线粒体结构,提高心肌组织ATP含量,改善房颤大鼠心肌代谢应激状态,进而减少房颤发生.