雷公藤甲素对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素影响人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法:采用细胞药理学实验方法,人肝癌细胞株Bel-7402与雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL及0.25μg/mL)共培养,MTT法检测其对Bel-7402细胞增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组织化学(SABC)染色法检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:作用48h后雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)3个剂量对Bel-7402细胞增殖均有显著抑制作用,P<0.01,抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达38.67%,且呈量效关系,3个剂量组间有显著性差异,P<0.01。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,作用显著,P<0.01,且呈显著的量效关系。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)用药组Bax、Bcl-2表达与对照组比较,无显著性差异,P>0.05。结论:雷公藤甲素能抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用机制可能不是通过Bax、Bcl-2途径。     

皂荚抗肝癌细胞成分的初步研究

目的研究皂荚提取物对人肝癌细胞的增殖、相关癌基因表达的调控作用及端粒酶的影响。方法随机分为对照组、皂荚提取物低、中、高剂量组(0.05、0.1、0.2 mg/mL),检测各组对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖、细胞周期、肝癌相关基因(bax、bcl-2、P53)的表达及端粒酶活性的影响。结果 0.05～0.2 mg/mL质量浓度的皂荚提取液对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖、调控癌基因与抑癌基因、促进癌细胞凋亡、抑制端粒酶活性均具有统计学意义。结论皂荚提取物能够抑制人肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡,对中医药防治肿瘤以及中药临床研究具有一定的参考意义。     

青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的研究中药青蒿琥酯体外诱导K562细胞凋亡的作用及其Fas/FasL蛋白的表达。方法采用MTT法、光学显微镜、透射电镜技术、流式细胞术对青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡进行了系统观察,并应用流式细胞术检测了Fas/FasL蛋白表达水平的改变。结果青蒿琥酯抑制K562细胞的增殖,IC50值为12.41μg/ml,其有时间、剂量-效应关系;50μg/ml的青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,且具有时间-效应关系,同时上调K562细胞Fas蛋白的表达,下调FasL的表达。结论青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,Fas/FasL表达的改变可能是青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的机制之一。     

一种真菌菌丝体甲醇提取物—A7的抗肿瘤活性研究

目的 研究一种真菌菌丝体甲醇提取物－A7的抗肿瘤活性。方法 MTT法观察A7对人BEL－7402肝癌细胞、HCT－8结肠癌细胞、SPC-A－1肺腺癌细胞、GLC－82肺腺癌细胞和EC－109食管癌细胞的生长抑制作用；以小鼠移植性肿瘤S180模型，观察A7的体内抗肿瘤作用。结果 A7对前述癌细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0．8，1．7，4．7，5．0，7．6μg/mL，均小于10μg/mL。动物实验表明，50mg/kgA7对S189实体肉瘤的抑制率达46．8％（P＜0．001）。结论 A7在体外和体内都具有一定的抗肿瘤活性。     

蛇床子素对小鼠肺腺癌和人肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的：检测天然蛇床子素在体外培养小鼠肺腺癌LA795细胞和人肝癌Bel-7402细胞抑制作用。方法：体外蛇床子素对小鼠肺腺癌细胞IA549和入肝癌细胞Bel-7402的抗肿瘤实验采用MTT法,浓度为6．25、12．5、25、50、75、100μg/mL,作用时间24,48h,计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度IC50。结果：蛇床子素体外对小鼠肺腺癌LA795细胞生长抑制率是53．78％,对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率为35．9％,IC50分别为81．3μg／mL和134．8μg/mL,作用48h比24h的细胞生长抑制率要高。结论：蛇床子素体外对小鼠肺腺癌LA795细胞和人肝癌Bel-7402细胞都有细胞生长抑制作用,对小鼠肺腺癌1A795细胞的抑制作用更为显著。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用.方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响.结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性(P＜0.01);可使HepG2细胞Fas、FasL蛋白的表达显著升高(P＜0.01);莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达(P＜0.01),上述作用均呈剂量相关性.结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一.     

补肾健脾复方对流产大鼠蜕膜Fas/FasL表达干预的实验研究

目的:研究补肾健脾复方对肾虚黄体抑制流产大鼠子宫蜕膜组织Fas/FasL表达的影响,进一步探讨中药保胎的免疫学机制.方法:将大鼠分为正常妊娠组、补肾健脾方组、黄体酮组、模型对照组4组.正常妊娠组从妊娠第1天起给予生理盐水8 mL/(kg·d)灌胃,连续11d;其余大鼠均于妊娠第1到第10天灌服羟基脲(450μg/g),第11天灌服米非司酮(3.75μg/g).在造模的同时,补肾健脾方组从妊娠第1天起给予补肾健脾方药8 mL/(kg·d)灌胃,连续10 d;黄体酮组从妊娠第1天起肌注黄体酮针8 mL/(kg·d),隔天1次,连续10 d;模型组从妊娠第1天起给予生理盐水8 mL/(kg·d)灌胃,连续10 d.于大鼠妊娠第12天,处死大鼠,解剖子宫取蜕膜组织,用免疫组织化学S-P法检测Fas和FasL表达.结果:与正常妊娠组对比,模型组蜕膜组织Fas表达增高,FasL表达降低,差别有统计学意义(P＜0.01).与模型组对比,补肾健脾方组Fas表达降低,FasL表达的强度增高,差别有统计学意义(P＜0.05).结论:补肾健脾复方可能一方面通过增加FasL的表达,使受异体抗原刺激增生的Fas阳性T淋巴细胞及时凋亡,使滋养细胞免受淋巴细胞的攻击;另一方面通过降低Fas表达,使Fas/FasL介导的AICD机制恢复平衡协调,从而起到安胎的作用.     

康莱特注射液对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响及机制

目的观察薏苡仁注射液(康莱特注射液)对人肺腺癌细胞A594凋亡的影响,并探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549,分别加入5,10,15,20,25 mL/L康莱特注射液,对照组加等量生理盐水,孵育48 h后,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化;20 mL/L康莱特注射液孵育48 h后,收集细胞,FCM测定细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫印迹(Western blot)法分别测定Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白的表达情况。结果康莱特注射液处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20 mL/L康莱特注射液处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,Bcl-2/Bax比值显著降低。结论康莱特注射液可通过上调A549细胞Caspase-3、Fas和FasL的表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导其凋亡,产生抗肿瘤作用。     

雷公藤甲素对GSDME依赖性肝癌细胞焦亡的影响

目的:探究雷公藤甲素对肝癌细胞Bel-7402焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养肝癌细胞Bel-7402,CCK-8检测不同浓度的雷公藤甲素(2.5、5.0、10.0μg/mL)对肝癌细胞活力影响;PI/DAPI染色观察细胞焦亡形态变化;ELISA试剂盒检测IL-1β和IL-18释放量;Western blotting检测Caspase-3、GSDME、IL-1β和IL-18表达;转染GSDME siRNA 24 h后PI/DAPI染色检测细胞焦亡形态变化。结果:CCK-8检测发现,随着雷公藤甲素浓度增加,Bel-7402细胞活力明显降低(P<0.01);给予雷公藤甲素(10.0μg/mL)能够明显促进细胞焦亡,升高细胞上清液中IL-1β和IL-18含量,促进Caspase-3、GSDME-N、IL-1β和IL-18表达(P<0.05或P<0.01);siGSDME能够明显抑制细胞焦亡形态变化,降低细胞焦亡数目。结论:雷公藤甲素能够促进GSDME依赖性细胞焦亡,抑制肝癌细胞增殖。     

膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究

目的：观察膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究。方法：膈下逐瘀汤配成浓度分别为：膈下逐瘀汤(C1)：0．25×10~(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G2)：0．5×10~(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G3)：1．0×10~(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G4)：2．0×10~(-4)g/mL；顺铂配制成浓度分别为：顺铂(S1)：0．5μg/mL,顺铂(S2)：1．0μg/mL,顺铂(S3)：1．5μg/mL,顺铂(S4)：2．0μg/mL,作用于Bel-7402细胞,用噻唑兰(MTT)比色法检测膈下逐瘀汤各组对Bel-7402细胞生长的影响,并且与顺铂各组相对照,用蛋白印迹试验(Western blot- ting analysis)检测不同浓度药物作用48h、72h时磷酸化AKT的表达水平。结果：膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞的增殖及磷酸化AKT的表达均有显著的抑制作用,膈下逐瘀汤浓度在2．0×10~(-4)g/mL时其48h细胞生长抑制率介于S1组与S2组之间。结论：膈下逐瘀汤抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的机制可能是通过抑制了细胞内磷酸化AKT这一途径而起作用。     

葫芦素B对大鼠肝内Fas及FasL表达的抑制作用

目的：观察葫芦素B对Fas和FasL基因在肝内表达的影响。方法：用脂多 糖（LPS） 诱导大鼠肝细胞损伤模型和免疫组织化学染色法。结果ipLPS 1.4mg/kg 8h肝内Fas和FasL阳性细胞增多,16h时达高峰,以中央静脉周围及肝包膜下最明显,24h后表达降低。sc葫芦素B0.1mg/kg和0.2mg/kg可使Fas和FasL的表达明显降低并呈剂量依赖性。结论;葫芦素B可抑制Fas和FasL在肝内的表达。     

振脾汤对慢性非特异性溃疡性结肠炎大鼠肠组织中Fas、FasL及Survivin表达的影响

目的观察振脾汤对慢性非特异性溃疡性结肠炎(CUC)大鼠肠组织中Fas、FasL及Survivin表达的影响。方法 Wistar大鼠48只随机分为4组,对照组、模型组、中药组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组,各12只。对照组用0.9%氯化钠注射液灌肠1次,其余4组三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法制作CUC动物模型。制模2周后开始,对照组和模型组继续饲养4周;中药组予振脾汤水煎液2 mL(含生药17 g)灌胃,SASP组给予柳氮磺胺吡啶2 mL(含药0.25 g)灌胃,均日1次,连续2周,给药后继续饲养2周。制模6周后处死各组大鼠取肛门至回盲部结肠标本,卵白素-生物素-酶复合物(ABC)免疫组织化学染色法观察各组结肠标本Fas、FasL及Survivin的表达情况。结果模型组、中药组及SASP组Fas蛋白表达阳性细胞率明显高于对照组(P0.05);中药组与模型组比较Fas蛋白表达明显下调(P0.05),SASP组与模型组比较则无明显变化(P0.05)。模型组、中药组及SASP组FasL蛋白表达的阳性细胞率与对照组比较均无明显变化(P0.05),中药组、SASP组与模型组比较均无明显变化(P0.05)。模型组、SASP组Survivin蛋白表达阳性细胞率低于对照组(P0.05)。中药组与对照组的Survivin蛋白表达的阳性细胞无明显变化(P0.05),而SASP组与对照组比较则有较明显变化(P0.05);中药组、SASP组与模型组比较均无明显变化(P0.05)。结论振脾汤能够有效地下调CUC大鼠的结肠黏膜腺上皮细胞中的Fas蛋白表达水平,从而抑制CUC大鼠的结肠黏膜腺上皮细胞的过度凋亡。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞Fas、FasL表达的影响。方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中;用流式细胞仪检测比较各组细胞Fas、FasL蛋白的表达。结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中Fas、FasL表达升高,含药血清组比病毒对照组细胞Fas、FasL表达降低。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达增高;清肺口服液可降低Fas、FasL蛋白表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

补肾,活血复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因Fas,FasL？…

目的：探讨补肾复方下调老年大鼠Ｔ细胞凋亡的分子机理。方法：采用ＲＮＡ酶保护技术,测定各组Ｆａｓ、ＦａｓＬ基因的ｍＲＮＡ水平,并以ＧＡＰＤＨ为内对照基因,对各组Ｆａｓ、ＦａｓＬ基因的转录进行半定量分析。结果：老年对照组Ｆａｓ／ＧＡＰＤＨ、ＦａｓＬ／ＧＡＰＤＨ的积分光密度值分别为０．８１±０．１７、０．８４±０．１２;年轻对照组分别为０．３６±０．１６、０．２６±０．１２。两组比较差异有显著性,活血复     

补肾、活血复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因Fas、FasL转录的影响

目的 :探讨补肾复方下调老年大鼠T细胞凋亡的分子机理。方法 :采用RNA酶保护技术 ,测定各组Fas、FasL基因的mRNA水平 ,并以GAPDH为内对照基因 ,对各组Fas、FasL基因的转录进行半定量分析。结果 :老年对照组Fas/GAPDH、FasL/GAPDH的积分光密度值分别为 0 81± 0 17、0 84± 0 12 ;年轻对照组分别为 0 36± 0 16、0 2 6± 0 12。两组比较差异有显著性。活血复方组Fas/GAPDH、FasL/GAPDH的积分光密度值分别为 0 99± 0 36、0 94± 0 33,与老年对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5) ;两个补肾组Fas/GAPDH为 0 78± 0 11和 0 78± 0 2 0 ,与老年对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5) ;而两个补肾组FasL/GAPDH的积分光密度值为 0 71± 0 2 1和 0 68± 0 15,低于老年对照组 (P <0 0 1)。结论 :补肾复方对T细胞FasL基因的转录具有一定的负调控作用 ,这是补肾复方下调老年大鼠T细胞过度凋亡的分子机理之一     

黄芪糖蛋白诱导佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的研究

目的:探讨黄芪糖蛋白对佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的诱导作用。方法:建立大鼠佐剂性关节炎模型,治疗2周后,取外周血、膝关节滑膜组织,分别使用流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)法检测外周血淋巴细胞和膝关节滑膜组织的细胞凋亡情况,使用免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平。结果:低剂量黄芪糖蛋白可提高外周血CD4+、CD+8细胞的凋亡比例(P<0.05),低、中、高剂量黄芪糖蛋白均可增加膝关节滑膜组织的细胞凋亡率(P<0.01),同时降低Fas表达水平(P<0.01),增强FasL表达水平(P<0.01)。结论:黄芪糖蛋白可诱导佐剂性关节炎大鼠外周血淋巴细胞及膝关节滑膜组织细胞凋亡,且调节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平。     

柚皮苷通过Fas膜受体通路调控髓核细胞凋亡的机制研究

[目的]观察中药骨碎补单体柚皮苷(Naringin)对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响,为治疗椎间盘退变提供理论依据。[方法]对体外培养的人退变椎间盘髓核细胞利用番红O染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定,并对P3代细胞分别用柚皮苷0 g/m L(对照组)、柚皮苷20 g/m L、柚皮苷40 g/m L、柚皮苷80 g/m L的培养基培养人髓核细胞48 h,噻唑蓝(MTT)法选择其抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡的最佳浓度,并用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。实时定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测Fas、Fas L、Caspase-8基因表达。蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测Fas蛋白表达。[结果]MTT法和流式细胞检测均测定20 g/m L柚皮苷为抑制髓核细胞凋亡的最佳浓度(P0.05)。q RT-PCR检测20 g/m L柚皮苷能够抑制Fas、Fas L、Caspase-8 m RNA表达(P0.05)。Western-blot检测显示20 g/m L柚皮苷能够抑制Fas、Fas L、Caspase-8蛋白表达。[结论]柚皮苷可能通过调控Fas/Fasl死亡受体凋亡通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。     

精元康胶囊对骨髓抑制小鼠骨髓细胞凋亡相关基因表达水平的影响

目的:通过观察精元康胶囊对骨髓细胞凋亡相关基因Caspase-3,Fas,FasL等mRNA表达水平的影响,以深入研究、探讨该药的作用机制。方法:60只小鼠分为空白组、模型组、阳性对照利可君32 mg·kg-1组和贞芪扶正3 g·kg-1组、精元康4 g·kg-1组,以环磷酰胺100 mg·kg-1,ip连续3 d造模,同时各组开始ig连续7 d,实时荧光定量PCR检测骨髓抑制模型小鼠骨髓细胞表达Caspase-3,Fas,FasL mRNA的情况。结果:Caspase-3,Fas,FasL mRNA的表达水平精元康胶囊组最低,模型组表达的12与模型组比较有显著差异,与空白组比较无明显差异。结论:精元康胶囊降低促凋亡基因Caspase-3,Fas,FasL的表达,对骨髓细胞凋亡相关通路产生影响,可能是精元康胶囊对化疗致骨髓抑制影响的重要机制。     

化痰散结方对人肺癌细胞Fas-FasL和TNFR1信号通路的影响

目的观察化痰散结方含药血清,对人肺癌 SPC-A1细胞 Fas-FasL 和 TNFR1的表达的影响。方法通过血清药理学方法,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清,与人肺癌细胞 SPC-A1共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察,应用 SABC 法检测 SPC-A1细胞 Fas 和FasL 的表达。用原位杂交方法检测 SPC-A1细胞 TNFR1的表达。结果人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增加;SABC 法显示,化痰散结方含药血清可上调 SPC-A1细胞 Fas(P<0.05),而且可下调 SPC-A1细胞 FasL 的表达(P<0.05)。原位杂交方法显示,含药血清组 SPc-A1细胞 TNFR1的表达明显高于不含药血清组(P<0.01)。结论化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡,其机制可能与上调 SPC-A1细胞 Fas、下调其 FasL 以及上调 TNFR1有关。     

甘草苷对T24细胞增殖和凋亡影响

目的:探讨甘草苷(Liquiritin,LQ)对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的影响及其可能作用机制。方法:实验分为对照组、LQ20、50、100μg/mL组。MTT观察LQ对T24细胞增殖的影响,Annexin V/PI染色,流式细胞术检测LQ对T24细胞细胞凋亡的诱导作用,Western blot检测Caspase 3蛋白表达。结果:与对照组比较,LQ20、50、100μg/mL在24、48、72h均对T24有明显的细胞增殖抑制作用,LQ作用72h后细胞凋亡率增高,Casepase3蛋白含量明显增高。结论:LQ能抑制T24细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其机制与Csaepase3蛋白表达增高有关。