IFN-γ和TNF-α对甲状腺细胞凋亡的诱导作用

目的探讨IFN-γ和TNF-α对培养的甲状腺细胞凋亡的影响。方法取G raves病(GD)患者甲状腺组织,采用原代细胞培养技术、细胞增殖实验和流式细胞术检测IFN-γ和TNF-α对甲状腺细胞增殖活力、细胞凋亡率以及对Fas蛋白表达率的影响,用ELISA检测IFN-γ和TNF-α刺激甲状腺细胞后培养物上清液中sFas含量的变化。结果与对照组相比,单独IFN-γ组、TNF-α组和IFN-γ/TNF-α联合组甲状腺细胞凋亡率、Fas蛋白表达率以及培养上清液中sFas含量均明显增加(P<0.01),甲状腺细胞增殖活力均明显降低(P<0.01),且IFN-γ/TNF-α联合组效应最强(P<0.01)。单独IFN-γ组、TNF-α组和联合组诱导的细胞凋亡率与Fas蛋白表达率的相关性有统计学意义(P<0.01)。结论IFN-γ和TNF-α能诱导甲状腺细胞凋亡,且这种诱导作用具有协同效应。     

通过FasL通路阻抑肿瘤免疫逃逸的研究

许多白血病和实体瘤细胞通过高表达Fas配体 (FasL)而发生肿瘤的免疫逃逸。为了观察腺病毒载体向肿瘤细胞导入小鼠可溶性Fas(sFas)基因后能否阻抑肿瘤细胞通过FasL发生肿瘤免疫逃逸作用 ,采用AdEasy腺病毒载体系统 ,利用大肠杆菌内质粒间同源重组的方法分别构建携带小鼠sFas基因及增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的重组腺病毒载体 ,扩增纯化后利用空斑试验测定滴度 ,Westernblot检测蛋白的表达。然后 ,分别感染肿瘤细胞 EL4细胞 ,用氚胸腺嘧啶核苷 ( 3 H thymidine,3 H TdR)掺入法检测其诱导靶细胞YAC 1的凋亡率。结果表明 ,获得了重组成功的复制缺陷的腺病毒载体AdsFas和AdEGFP ,密度梯度离心纯化后其滴度达到 10 11pfu/ml,Westernblot分析证实前者能够高效表达出sFas蛋白。转染肿瘤细胞EL4细胞之后与YAC 1细胞混合培养 ,导入sFas组的YAC 1凋亡率在效靶比 (E∶T)为 3∶1,10∶1和 30∶1时分别为 6 %、7%和 9% ,与对照组 (分别为 2 8%、37%和4 5 % )相比明显下降 ,统计学有显著性差异 (P <0 .0 1) ;而导入EGFP组YAC 1凋亡率 (分别为 30 %、36 %和 4 8% )与对照组相似 ,没有统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :腺病毒介导sFas的导入能够明显抑制肿瘤细胞EL4诱导Fas+细胞 YAC 1的凋亡 ,说明通过腺病毒转移sFas基因     

甲状腺肿瘤细胞中p53蛋白的表达与凋亡关系的研究

目的 :研究甲状腺肿瘤细胞中p5 3蛋白的表达及其与细胞凋亡和肿瘤发生、发展的关系 ,初步探讨它们在甲状腺良、恶性肿瘤中的诊断价值。方法 :用免疫组化EnvisionMT法检测甲状腺肿瘤细胞中 p5 3蛋白的表达 ;用TUNEL法检测甲状腺肿瘤细胞凋亡。结果 :p5 3在腺瘤组中无表达 0 0 %( 0 /3 0例 ) ,在腺癌组中阳性表达率为 2 3 3 %( 7/3 0例 ) ,表达强度 12 96± 8 3 0 ,组间比较有显著性差异 ( P <0 0 5 )。细胞凋亡在腺瘤组中阳性表达率为 16 7%( 5 /3 0例 ) ,表达强度 0 11± 0 2 9;在腺癌组中阳性表达率为70 0 %( 2 1/3 0例 ) ,表达强度 0 41± 0 42 ,组间比较有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :p5 3蛋白参与甲状腺癌的发生、发展。p5 3蛋白表达率和凋亡指数 (AI)可作为鉴别甲状腺良、恶性肿瘤的参考指标。     

人参皂甙Re抗大鼠急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达

目的　观察人参皂甙Re抗急性缺血再灌流心肌细胞凋亡及Bcl 2、Bax、Bad和Fas基因蛋白表达 ,探讨人参皂甙Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血 再灌流动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组织化学检测Bcl 2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达 ,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行定量分析。结果　①假手术组未发现心肌凋亡细胞。缺血 再灌流组心肌凋亡细胞数为 (13 4 4 5± 4 5 61)个 /视野 ,Re治疗组 (90 66± 19 2 2 )个 /视野 ,两组间差异有显著性意义 (P <0 0 1)。②免疫组织化学检测发现缺血 再灌流组及Re治疗组Bcl 2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达较假手术组明显增加 (P <0 0 5 ) ,Re治疗组Bcl 2的表达与缺血 再灌流组比较差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,而Bax、Bad、Fas的表达明显下降 (P <0 0 5 ) ,人参皂甙Re治疗组Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Fas比值均较假手术组与缺血 再灌流组明显增大。结论　人参皂甙Re治疗可以抑制急性缺血再灌流诱导的心肌细胞凋亡 ,其作用机制可能是抑制了促凋亡基因Bax、Bad、Fas的表达 ,从而使Bcl 2 /Bax、Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Fas比值增大。     

维生素K3通过上调细胞Fas的表达诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 研究维生素K3(VK3)对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响并探讨其凋亡机制.方法 用人肝癌细胞株SMMC-7721进行传代培养.CCK-8法检测VK3对SMMC-7721细胞的抑制作用.使用Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞核的形态.细胞周期(PI法)、细胞凋亡(Annexin V/PI法)和细胞膜表面Fas表达量使用流式细胞仪进行检测.Fas mRNA的检测采用逆转录RT-PCR法.细胞培养上清液的可溶性Fas配体(sFasL)水平采用ELISA法检测.结果 不同浓度VK3(2、5、10、20、25umol/L)作用SMMC-7721细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为33.8%,50.1%,63.9%,78.5%和84.7%;细胞周期研究发现G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;细胞的早期凋亡率分别为18.75%,25.80%,38.80%,29.92%和26.18%;Hoechst33342荧光染色法发现凋亡细胞核呈致密浓染;在VK3浓度低于10 umol/L,SMMC-7721细胞膜表面Fas平均荧光强度和细胞内Fas mRNA表达及培养上清液sFasL水平均逐渐升高,而在高浓度组其结果均又下降.结论 VK3能抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其发生凋亡,而Fas及sFasL的表达水平与VK3诱导SMMC-7721细胞的凋亡密切相关.     

诊断超声照射后人早孕绒毛Fas/FasL蛋白表达的研究

目的 :检测诊断超声辐照与人早孕绒毛 Fas/ Fas L蛋白表达的关系。方法 :对拟进行人工流产的 2 4例早孕 (4 5～ 6 0 d)妇女随机分为 4组 :对照组为空白照射组、10 min组、2 0 min组和 30 min组。应用 Hp85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,经腹对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用免疫组织化学技术检测上述各组绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L 蛋白表达情况。结果 :超声照射后 10 min组绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L蛋白表达率与对照组无差别 (P>0 .0 5 ) ;2 0 min组和 30 min组滋养层细胞表达率明显增加 ,显著大于对照组和 10 min组 (P<0 .0 0 1)。结论 :诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10 min可引起绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L 蛋白表达率增加 ,从而诱导滋养层细胞凋亡增加     

自然杀伤细胞对舌鳞状细胞癌裸鼠Fas蛋白表达的影响

目的探讨自然杀伤(natural killer,NK)细胞对舌鳞状细胞癌(鳞癌)裸鼠Fas蛋白表达的影响。方法 63只裸鼠随机分为对照组、非黏附NK(non-adherent NK,NA-NK)细胞组和黏附NK(adherent NK,A-NK)细胞组各21只,皮下接种人舌鳞癌Tca8113-Tb细胞株制备鳞癌裸鼠模型。接种后第3天,对照组皮下注射生理盐水0.1mL,NA-NK细胞组皮下注射NA-NK细胞0.1mL,A-NK细胞组皮下注射A-NK细胞0.1mL,均2d注射1次,共注射3次。3组分别于注射后第1、10、15、18、21、24、27天各处死3只裸鼠,取肿瘤组织,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Fas表达,Tunel法观察注射后第27天细胞凋亡情况。结果注射后第27天,A-NK细胞组凋亡指数[(1.76±0.83)%]高于NA-NK细胞组[(0.71±0.66)%]和对照组[(0.34±0.26)%](P0.05),NA-NK细胞组高于对照组(P0.05);Western blot检测结果显示,A-NK细胞组注射后第18、21、24、27天Fas蛋白(46.55±6.59、38.71±7.39、35.27±5.23、37.64±6.76)表达高于对照组(13.19±4.28、14.97±2.86、15.04±5.69、15.48±4.55)(P0.05),注射后第18、21、27天Fas蛋白表达高于NA-NK细胞组(20.67±6.74、24.49±5.22、20.92±8.06)(P0.05);NA-NK细胞组注射后第24天Fas蛋白(25.59±4.93)表达高于对照组(P0.05)。结论 NK细胞可能通过提高人舌鳞癌细胞Fas蛋白表达来诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用,且A-NK细胞诱导细胞凋亡的能力强于NA-NK细胞。     

靶向血管内皮生长因子siRNA对K562细胞凋亡及survivin表达的影响

目的 应用腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF) siRNA沉默K562细胞中VEGF的表达,观察其对K562细胞凋亡及凋亡抑制基因survivin表达的影响.方法 应用成功构建的携带特异性VEGF siRNA的重组腺病毒(Ad5-VEGF siRNA)感染K562细胞,实验分为3组:实验组(K562/Ad5-VEGF siRNA组)、空载体组(K562/Ad5组)、对照组(K562组).通过RT-PCR法检测细胞内VEGF及survivin mRNA的表达,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF蛋白表达,Western blot法检测细胞survivin蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 实验组细胞VEGF及survivin mRNA表达水平较对照组均有明显降低(P＜0.01),且细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平[(1121±15)pg/ml]低于空载体组[(1290±28)pg/ml]和对照组[(1303±28)pg/ml](P＜0.01).Western blot法检测结果显示,实验组survivin蛋白表达水平(0.26 ± 0.11)较对照组(0.74±0.10)也显著降低(P＜0.01).实验组细胞凋亡率与对照组比较明显增加(P＜0.01).结论 应用RNA干扰沉默K562细胞中VEGF基因表达后,survivin的表达也随之降低,同时细胞凋亡率相应增加.VEGF可诱导K562细胞中survivin基因表达,可能是survivin基因表达的上游调控因子.     

内源性TGF-β_1、TNF-α在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡中作用的研究

目的　探讨内源性TGF β1、TNF α在三氧化二砷 (As2 O3)诱导HL 6 0细胞凋亡过程中的作用。方法　建立As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡模型 ,应用RT PCR、定量PCR、ELISA、缺口末端标记(TUNEL)法、片段化DNA分析等方法研究As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡过程中内源性TGF β1、TNF α及其受体基因以及TGF β1蛋白表达的变化 ;进而研究TGF β1、TNF α反义磷酸硫代脱氧寡核苷酸 (PSODN)对细胞凋亡的干预作用。结果　①As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡过程中伴有TGF β1、TNF α表达上调 (处理前后mRNA拷贝数分别为 135 46± 12 4,4972 16± 187和 2 32 73± 2 2 9,6 742 17± 189) ,bcl 2表达下调 (处理前、后分别为 10 42 4± 2 74和 336 1± 89) ,细胞培养 2 4h上清中TGF β1蛋白水平明显提高 ,上升为对照组的 2 .0倍。②TGF β1、TNF α反义PSODN能够明显抑制As2 O3 诱导细胞凋亡的发生 ,并使细胞bcl 2mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论　内源性TGF β1、TNF α在As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡中起重要作用 ,两者均可通过下调bcl 2表达促进细胞凋亡。     

尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞凋亡与Fas、FasL表达的研究

目的 :研究尖锐湿疣 (CA)患者外周血淋巴细胞 (PBLC)凋亡及Fas、FasL的表达情况 ,探讨CA免疫发病机制。方法 :采用流式细胞仪 (FCM)的直接免疫荧光标记法检测CA患者PBLC表面Fas、FasL的表达与细胞凋亡率。结果 :CA患者PBLC凋亡率及Fas、FasL表达水平均明显高于对照组 (P <0 0 1 ) ,PBLC凋亡率与Fas、FasL表达水平呈正相关 (r =0 6781 ,P <0 0 1 ;r <0 72 82 ,P <0 0 1 )。结论 :CA患者体内免疫功能异常与淋巴细胞凋亡过度有关 ,Fas/FasL在介导凋亡中可能起重要作用     

miR-29a靶向调控IFITM3表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

目的探究微小RNA-29a(miR-29a)靶向调控干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞株LO2中miR-29a的表达水平;采用脂质体法将miR-29a minmic及阴性对照转染至HepG2细胞,并分为过表达组和对照组,转染48 h后用QRCR法检测两组miR-29a水平;采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖及凋亡情况; Western blotting检测各组Bax、caspase-3凋亡相关基因及IFITM3的表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a对IFITM3的靶向调控作用。结果肝癌HepG2细胞miR-29a水平低于正常LO2细胞(P 0. 05);过表达组HepG2细胞miR-29a表达低于对照组(P 0. 05);过表达组HepG2细胞增殖率低于对照组(P 0. 05),凋亡率及Bax、caspase-3、IFITM3表达高于对照组(P 0. 05); miR-29a可显著抑制野生型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P 0. 05),但其对突变型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性无显著影响(P 0. 05)。结论 miR-29a在肝癌中表达降低,可靶向调控IFITM3表达,抑制肝癌细胞生长、增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌的潜在治疗靶点。     

慢性心力衰竭患者血清细胞凋亡抑制物可溶性Fas和可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ水平的研究

目的　探讨慢性心力衰竭患者血清细胞凋亡抑制物可溶性Fas(sFas)及可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ (sTNFR Ⅰ )的水平。方法　 6 2例慢性心力衰竭患者 ,按心功能分级 (NYHA)分为 3组 :Ⅱ级组 2 0例 ,Ⅲ级组 2 0例 ,Ⅳ级组 2 2例 ;另设 15例健康人作对照。血清sFas、及sTNFR Ⅰ含量测定采用酶联免疫吸附法。结果　慢性心力衰竭患者血清sFas及sTNFR Ⅰ显著高于健康对照组 (P <0 .0 1) ,慢性心力衰竭患者心功能分级组间血清sFas及sTNFR Ⅰ含量也有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　慢性心力衰竭患者血清sFas及sTNFR Ⅰ含量的变化可能参与慢性心力衰竭的致病机制 ,它们的含量变化对慢性心力衰竭时心肌细胞凋亡的影响可能是其机制之一。     

同种异体肾移植排斥患者血清sFas和sFasL水平的临床观察

目的观察肾同种移植急性排斥患者血清可溶性Fas(sFas)和sFas配体(sFasL)的水平及临床意义.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对健康对照组及实验组透析前后sFas、sFasL进行检测.结果对照组sFas为(256.8±72.0)ng/L,sFasL为(227.9±65.9)ng/L;实验组透析前后sFas分别为(1 225.7±467.6)ng/L、(1 225.8±464.0)ng/L,sFasL分别为(227.9±147.2)ng/L、(226.9±109.6)ng/L.实验组与对照组的sFas比较差异有显著性(P＜0.01),而sFasL比较差异无显著性(P＞0.05).结论 sFas在排异的病理反应过程中参与了细胞凋亡的抑制,透析并不能改善Fas-FasL介导的细胞凋亡.     

TAM诱导MA782细胞凋亡与p21/CIPI的关系

目的 :探讨Tamoxifen(TAM )诱导ET( -)小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 :TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,免疫组化检测p2 1/CIPI(以下简称p2 1)蛋白表达 ,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果 :6、10 μmol/LTAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,作用 2 4h细胞凋亡率分别为 7 0 4%、19 0 4% ,10 μmol/LTAM作用48h后细胞凋亡率从 19 0 4%上升到 5 1 2 7% ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。 2 μmol/LTAM作用于细胞72h后p2 1蛋白开始显著上升 ,而 6、10 μmol/LTAM作用不同时间后 ,p2 1蛋白表达有不同程度的上升 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与上调p2 1蛋白表达有关。     

淋巴细胞亚群不同凋亡在狼疮性肾炎患者发病中的意义

目的探讨狼疮性肾炎（LN）患者不同时期外周血单个核细胞凋亡率及CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CU4^＋Fas、CD3^＋CD8^＋Fas、sFas表达的意义。方法56例经肾活检证实的LN患者中，活动期38例，静止期18例，均采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测sFas和流式细胞仪检测PBMC凋亡率及CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD4^＋Fas、CD3^＋CD8^＋Fas等指标。结果LN静止期sFas较健康对照组增高，活动期PBMC凋亡率、sFas明显升高（P〈0．01），CD3^＋CD4^＋细胞较健康对照组明显减少（P〈0．01）、CD3^＋CD3^＋细胞比健康对照组增多（P〈0．01）；PBMC凋亡率与sFas呈正相关。结论LN患者外周血T淋巴细胞的不同凋亡，特别是CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋比例失调，是导致LN病情发展的重要机制之一。sFas可能抑制肾小球系膜细胞凋亡，而且可能是LN进展中的一个因素。     

可溶性Fas及其配体在小儿病毒性心肌炎中临床意义研究

目的　探讨可溶性Fas及其配体在小儿病毒性心肌炎中的表达以及与细胞凋亡和免疫反应的关系 ,旨在为病毒性心肌炎的诊断和治疗提供新的线索和依据。方法　采用ELISA法测定了 4 4例病毒性心肌炎患儿和 2 0例健康儿童血清中sFas和sFasL的表达水平 ,并进行前瞻性对比研究。结果　病毒性心肌炎患儿血清sFas和sFasL表达水平较健康儿童明显增高 (P <0 .0 1)。病毒性心肌炎患儿血清sFas与sFasL表达水平呈正相关性 (r=0 .6 5 0 9,P <0 .0 1)。儿童血清sFas和sFasL表达水平无性别差异 (P >0 .0 5 )。结论　①血清sFas及sFasL表达增高与病毒性心肌炎疾病过程有关。②sFas表达增高可进一步证实病毒性心肌炎发病与免疫因素有关。③血清sFas表达增高可望作为T淋巴细胞激活的标志以及病毒性心肌炎诊断和治疗的重要依据。     

人参皂甙Rb1与Re抗大鼠实验性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达

目的　观察人参皂甙Rb1和Re对缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因蛋白表达的影响 ,探讨人参皂甙Rb1和Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支(LAD) ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组织化学检测Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因蛋白表达 ,并利用图象分析系统测量平均光密度值进行定量分析。结果　①假手术组未发现心肌凋亡细胞 ;缺血再灌注组心肌凋亡细胞数为 13 4.45± 45 .61个 /视野 ,Rb1治疗组为 5 1.65± 13 .71个 /视野 ,Re治疗组为 90 .66± 19.2 2个 /视野 ,3组间有显著差异 (P <0 .0 1) ;②缺血再灌注组、Rb1治疗组及Re治疗组Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因的表达均较假手术组明显增加 (P <0 .0 5 ) ,Rb1治疗组和Re治疗组Bcl 2的表达与缺血再灌注组比较无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,而Bax、Bad、Fas的表达明显下降 (P <0 .0 5 ) ,Rb1抑制Bax基因蛋白表达的效应较Re更为明显 (P <0 .0 5 )。Rb1治疗组和Re治疗组Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Bad以及Bcl 2 /Fas比值均较假手术组及缺血再灌注组明显增加 ,Rb1治疗组Bcl 2 /Bax比值较Re治疗组增大。结论　心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡 ,人参     

同种异体肾移植排斥患者血清sFas和sFasL水平的临床观察

目的　观察肾同种移植急性排斥患者血清可溶性Fas(sFas)和sFas配体(sFasL)的水平及临床意义。 方法　采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对健康对照组及实验组透析前后sFas、sFasL进行检测。结果　对 照组sFas为(256.8±72.0)ng/L,sFasL为(227.9±65.9)ng/L;实验组透析前后sFas分别为(1225.7±467.6) ng/L、(1225.8±464.0)ng/L,sFasL分别为(227.9±147.2)ng/L、(226.9±109.6)ng/L。实验组与对照组的 sFas比较差异有显著性(P<0.01),而sFasL比较差异无显著性(P>0.05)。结论　sFas在排异的病理反应过 程中参与了细胞凋亡的抑制,透析并不能改善Fas FasL介导的细胞凋亡。     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

反转录病毒载体介导可溶性Fas的体外表达

将含全长FascDNA的质粒利用PCR技术进行特定片段删除 ,获得sFascDNA。通过DNA重组技术 ,将sFascDNA插入到反转录病毒载体 pLXIN ,构建了重组表达载体pLXIN sFas。经酶切鉴定及测序 ,表明成功地构建了重组表达载体 pLXIN sFas。该载体经PA317细胞包装后 ,感染靶细胞COS 7,分别采用ELISA及凋亡抑制实验检测其蛋白表达量为 (2 .2± 0 .7) μg/ml,且具有良好的生物学活性 ,能明显抑制抗 Fas(CH 11)介导的T淋巴瘤细胞株Jurkat的凋亡。这一结果为探讨Fas和FasL途径在白血病发生中的作用奠定了基础