卡维地洛、缬沙坦及其合用对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡、P53及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨卡维地洛(Carvedilol,Car)、缬沙坦(Valsartan,Val)及其合用对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡、心肌Bcl-2、P53蛋白表达的影响。方法6周龄雄性SHR24只,随机分为4组(n=6):一组为对照组,其他3组为干预组,分别予NS5ml、Cal(20mg·kg-1·d-1)、Val(40mg·kg-1·d-1)和Car+Val合用(剂量同上)干预8周后,予2%戊巴比妥钠40mg/kgIP麻醉、开胸取心脏,取左心室游离壁心肌于10%中性福尔马林中固定24小时,继之脱水,石蜡包埋及切片,采用TUNEL法、免疫组化法分别检测心肌细胞凋亡率(cardiacmyocyteapoptosisrate,CMAR),Bcl-2及P53蛋白表达率。结果与对照组比较,各干预组CMAR及P53蛋白表达率均明显降低,而Bcl-2蛋白表达率却明显增高,尤以合用组更明显(P<0.01)。与Car组、Val组比较,合用组CMAR及P53蛋白表达率均降低,而Bcl-2蛋白表达率均增高(P<0.01)。与Car组比较,Val组CMAR、Bcl-2及P53蛋白表达率,差异无显著性意义(P>0.05)。各组中P53蛋白表达率与CMAR呈正相关;而Bcl-2与CMAR呈负相关((P<0.05)。结论CarVal均可抑制SHR心肌细胞凋亡,二者合用效应更明显,可能与两药均能上调BCL-2蛋白表达和下调P53蛋白表达有关。     

蕨麻多酚抗缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡作用研究

摘要：目的:探究蕨麻多酚在缺氧条件下对心肌细胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌细胞进行原代培养,随机分成5组:正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml-1)、中(0.22 mg·ml-1)、高(0.44 mg·ml-1)浓度组。细胞在5%CO2-95%N2环境下37℃培养6 h,建立缺氧损伤模型;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst-PI荧光染色法观察缺氧损伤后心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞p53、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax） mRNA的表达水平;蛋白质印迹法（Western Blotting）检测各组细胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧损伤模型组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可见呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及大量亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞; p53、Bax mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）;蕨麻多酚干预后细胞较缺氧损伤模型组凋亡率显著降低（P<0.01）,Hoechst-PI染色亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞数量减少。蕨麻多酚各浓度组p53、Bax mRNA及蛋白表达均显著降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著升高（P<0.01）。结论:缺氧时蕨麻多酚能够通过下调心肌细胞p53和Bax水平,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻缺氧导致的心肌损伤。     

老年患者胃癌组织的体外化疗药敏性与凋亡抑制蛋白p53、生存素、Bcl-2表达的关系

目的探讨老年患者胃癌肿瘤组织的体外化疗药物敏感性与凋亡抑制蛋白表达的关系。方法 MTT法检测65例老年胃癌患者(≥65岁)及58例对照组患者(<65岁)肿瘤细胞原代培养药物敏感性。应用免疫组化法检测肿瘤组织凋亡抑制蛋白p53、生存素和Bcl-2的表达。结果10种化疗药物中,氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、奥沙利铂(L-OHP)、表阿霉素(eADM)、丝裂霉素(MMC)对老年患者肿瘤细胞的抑制率低于对照组(P<0.05)。老年组生存素、Bcl-2表达高于对照组(P<0.01),且两者表达存在正相关性(P<0.05);对照组p53的表达与Bcl-2存在正相关(P<0.01)。老年胃癌患者p53的表达与紫杉醇(PTX)、顺铂(CDDP)对肿瘤细胞的抑制率呈负相关(P<0.01),生存素与5-FU、PTX、L-OHP、CDDP、eADM的抑制率呈负相关(P<0.05),Bcl-2表达则与VCR、足叶乙甙(VP-16)、羟基喜树碱(HCPT)、PTX、吡喃阿霉素(THP)呈负相关(P<0.05);对照组p53与CDDP的抑制率呈负相关(P<0.05),生存素表达则与5-FU、VCR、HCPT呈负相(P<0.01),Bcl-2表达与VP-16、CDDP对肿瘤细胞的抑制率呈负相关(P<0.05),但与L-OHP的抑制率正相关(P<0.05)。结论老年胃癌患者与对照组存在不同的多药耐药表型,凋亡抑制蛋白在老年胃癌多药耐药中起重要作用。     

复方α-酮酸补充的极低蛋白膳食对慢性肾脏疾病患者血压的影响

目的观察复方α-酮酸补充的极低蛋白膳食(sVLPD)对慢性肾病患者血压的影响。方法53例慢性肾病患者接受标准的低蛋白膳食(LPD,0.6g·kg-1·d-1)3mo后分为2组,对照组28例继续给予LPD,试验组25例给予复方α-酮酸补充的sVLPD(0.3g·kg·d-1),均3mo。比较治疗后2组患者体重、血压、实际蛋白和钠摄入量、血生化指标等。结果治疗6mo后,试验组血压下降(13±s9)/(6±7)mmHg(P<0.05),有7例达到靶血压水平;而对照组血压无明显改变,无一例达到靶值。试验组蛋白摄入量减少(0.25±0.10)g·kg-1·d-1,钠减少(35±6)mmol·d-1,对照组没有蛋白摄入和钠摄入的改变,2组差异显著(P<0.05)。2组患者体重、血清清蛋白、血红蛋白浓度在治疗前后均无显著变化。结论复方α-酮酸补充的sVLPD有益于慢性肾病患者的降压治疗,且不影响患者的营养状态,这可能与盐摄入的减少和复方α-酮酸的补充有关。     

丹参对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡及基因蛋白表达的影响

目的探讨丹参对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡及基因蛋白表达的影响。方法18只引种繁殖的雄性SHR随机分为3组,每组6只:⑴基础组:育至第8周处死;⑵丹参组:从第8周给药,丹参粉针剂1g/kg.d,腹腔注射,第18周处死;⑶对照组:用相同容量蒸馏水腹腔注射,余同丹参组。心肌细胞凋亡的检测采用TdT介导的原位末端缺口标记法(TUNEL),Bcl-2基因的蛋白表达检测采用S-P免疫组化法。比较3组间心肌细胞凋亡指数、Bcl-2蛋白阳性表达指数的差异,分析两指标间的相关性。结果与基础组比较,对照组心肌凋亡细胞明显增多(P<0.05),而Bcl-2蛋白阳性表达指数显著降低(P<0.05);丹参组较对照组心肌凋亡细胞明显减少(P<0.05),Bcl-2蛋白阳性表达指数显著升高(P<0.05),与基础组无差异。心肌细胞凋亡指数与Bcl-2蛋白阳性表达指数呈明显的负相关性(P<0.01)。结论SHR心肌细胞凋亡具有周龄的依赖性,中药丹参能显著减少SHR心肌细胞凋亡,具有明显上调Bcl-2基因蛋白表达的作用。     

辛伐他汀对慢性心力衰竭兔心肌PPARγ mRNA、蛋白表达及核因子κB表达、活性的影响

目的观察辛伐他汀对兔慢性心力衰竭模型心肌肥厚、心功能的影响,探讨辛伐他汀抑制心肌肥厚、改善心功能的机制。方法24只新西兰白兔分为4组,1组为假手术组。2、3、4组给予主动脉瓣返流及腹主动脉缩窄术,其中2组为心衰对照组;3组:早干预组,术后给予辛伐他汀5mg·kg-1·d-1灌胃连续8wk;4组:晚干预组,术后4wk给予辛伐他汀5mg·kg-1·d-1灌胃连续4wk。观察开始及结束时左室舒张末压(LVEDP)。实验结束时,观察左心室重量(LVW)、心脏重量(HW),计算左心室重量指数(LVW/BW)、心脏重量指数(HW/BW)。RT-PCR分析各组PPARγmRNA表达。Western blot分析心肌细胞核PPARγ和p65蛋白表达,电泳迁移率变动试验分析p65活性。结果早、晚干预组LVW、HW、HW/BW均低于心衰对照组(P<0.05,P<0.01),早干预组(LVW/BW)低于心衰对照组(P<0.01)。早、晚干预组左室舒张末压低于心力衰竭组(P<0.01)。心衰对照组心肌组织PPARγ蛋白和mRNA表达低于假手术组(P<0.01),p65蛋白表达及活性高于假手术组(P<0.01)。辛伐他汀干预后,早干预组、晚干预组PPARγ蛋白和mRNA表达增加(P<0.01),p65蛋白表达及活性降低(P<0.01)。结论辛伐他汀抑制心肌肥厚、改善心功能,其机制与增加PPARγ表达、降低p65蛋白表达及活性有关。     

Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的探讨6价铬(Cr(Ⅵ))在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr(Ⅵ)24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;化学比色法检测SOD,CAT活性与GSH含量;RT-PCR检测p53,caspase3mRNA表达水平;免疫组化检测p53蛋白含量。结果Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加(r=0.997),6~12μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组与对照组比差异有显著性(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带;SOD与CAT活性和GSH含量均下降,Cr(Ⅵ)处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组(P<0.05);3~9μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组细胞p53mRNA,caspase3mRNA,p53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关(r分别为-0.952和-0.885);p53mRNA表达与caspase3mRNA表达正相关(r=0.890);p53蛋白表达与GSH含量呈负相关(r=-0.929)。结论氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡中具有重要作用;在低浓度水平Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡具有p53和caspase3依赖性,但在较高Cr(Ⅵ)处理水平,不排除非p53及caspase3途径的存在。     

柴胡对肝损伤模型小鼠肝细胞Bax、Bcl-2表达的影响研究

目的:探讨柴胡对肝损伤模型小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制。方法:将24只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、柴胡低剂量干预组和柴胡高剂量干预组,给予相应药物后处死,采用免疫组织化学法检测小鼠肝组织中Bax、Bcl-2表达情况。结果:柴胡干预组Bax蛋白表达强于模型对照组(P<0·05),Bcl-2蛋白表达弱于模型对照组(P<0·05)。结论:柴胡可能通过上调Bax、下调Bcl-2表达来诱导肝细胞凋亡。     

去卵巢大鼠脑内凋亡基因蛋白表达及半枝莲黄酮的干预作用

目的:探讨去卵巢大鼠脑内凋亡基因Bcl-2,Bax和p53的蛋白表达及半枝莲黄酮（Scutellaria barbata flavonoid, SBF）的干预作用。方法:摘除3月龄雌性Sprague-dawley(SD)大鼠卵巢10个月,模拟老年性痴呆（Alzheimer’s disease,AD）模型,采用免疫组化法检测脑内凋亡基因Bcl-2,Bax和p53的蛋白表达,评价SBF对摘除卵巢诱导大鼠神经细胞凋亡的抑制作用。结果:摘除大鼠双侧卵巢可使大脑皮质中Bcl-2,Bax和p53的表达异常改变,Bcl-2阳性表达神经元数量明显减少,Bax和p53阳性表达神经元数量明显增多。去卵巢大鼠连续36 d灌胃（ig）SBF 17.5,35和70 mg?kg-1可不同程度地改善去卵巢大鼠大脑皮层凋亡基因的异常表达。结论:摘除大鼠卵巢10个月可以诱导神经细胞凋亡,SBF对神经细胞凋亡有对抗作用,提示SBF可能有利于对AD的治疗。     

福辛普利、替米沙坦单用或联用对糖尿病模型大鼠颈动脉内膜球囊损伤后血管紧张素转换酶2的影响研究

目的:考察福辛普利、替米沙坦单用或联用对糖尿病模型大鼠颈动脉内膜球囊损伤后血管紧张素转换酶2(ACE2)的影响及其作用机制。方法:取大鼠36只,均分为正常对照组、糖尿病模型组(蒸馏水)、球囊损伤组(蒸馏水)、福辛普利组(10mg·kg-1·d-1)、替米沙坦组(0.8mg·kg-1·d-1)和联用组(福辛普利10mg·kg-1·d-1、替米沙坦0.8mg·kg-1·d-1),每组6只,除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(35mg·kg-1)建立2型糖尿病模型。建模成功后,除糖尿病模型组外,其余各组大鼠行颈动脉内膜球囊损伤手术,手术前、后分别灌服给予相应药物1、2周,正常对照组相同时间给予蒸馏水,检测各组大鼠颈动脉中ACE2mRNA及其蛋白表达。结果:与正常对照组比较,球囊损伤组大鼠ACE2 mRNA及其蛋白表达均明显降低(P<0.05);与球囊损伤组比较,福辛普利组大鼠ACE2 mRNA及其蛋白表达没有明显差异(P>0.05),替米沙坦组和联用组大鼠ACE2mRNA及其蛋白表达明显增加(P<0.05),但2组间无显著差异(P>0.05)。结论:福辛普利并不能促进替米沙坦增强ACE2的表达;替米沙坦可能是通过增加动脉内膜局部ACE2的表达来发挥血管保护作用。     

The importance of interfaces in protein drug delivery – why is protein adsorption of interest in pharmaceutical formulations?

Introduction: In the area of peptide and protein drug products, interfaces are present as part of the basic liquid formulation, when freeze-dried formulations are reconstituted and when particulate delivery systems are prepared. Proteins are known to interact with these interfaces, and the effects seen are often irreversible adsorption and structural changes.

Areas covered: This review focuses on the ways in which peptides and proteins interact with surfaces and interfaces, and the effect these interactions have on the stability and safety of the active protein in pharmaceutical formulations. It illustrates, through examples, what can be determined by an adsorption study, and what can change when either the protein or the interfaces are modified. Last but not least, it addresses the value of these studies. The reader will gain an update on the basics of protein adsorption, with a focus on pharmaceutically relevant interfaces and recent advances in the field.

Expert opinion: Protein adsorption is widely studied; however, a more unified approach is still needed, especially on the adsorption of pharmaceutically relevant proteins, modified proteins and surfaces.     

胎盘组织中RhoB/Rock蛋白分子的表达

目的 研究Rho亚家族蛋白B(RhoB)/相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rockl)、相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rock2)在子痫前期(preeclampsia,PE)患者的胎盘组织中的表达及意义.方法 收集30例子痫前期患者的胎盘组织及20例正常晚期妊娠患者的胎盘组织,采用免疫组织化学法检测两组胎盘组织中的RhoB/Rockl、Rock2蛋白分子的表达定位及差异.结果 RhoB、Rock1、Rock2蛋白分子在子痫前期组中的表达显著高于在正常晚期妊娠组中的表达(P＜0.05).结论 RhoB、Rockl、Rock2蛋白分子,可能通过引起滋养细胞的凋亡、抑制滋养细胞的增殖、迁徙,降低了滋养细胞的功能等,参与子痫前期发病.     

Docking and scoring: applications to drug discovery in the interactomics era

Background: Computational approaches such as docking and scoring are becoming routine in drug discovery as a complement to other more traditional techniques. However, so far, computer drug design methods have been applied to inhibit the function of individual proteins, and there is little available data on the use of these computational techniques to target protein–protein interactions. Objective: To establish a strategy for the use of current computational tools in drug discovery targeting protein–protein interactions. Method: Individual techniques applied to specific cases could be studied to derive a general strategy for targeting protein–protein interactions. Conclusion: Protein docking, interface prediction and hot-spot identification can contribute to the discovery of small molecule inhibitors targeting protein interactions of therapeutic interest, especially when little structural information is available.     

甲状腺癌中p16和Rb蛋白表达及其意义

目的 探讨甲状腺癌中p16和Rb蛋白的表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测80例甲状腺癌患者组织中p16和Rb蛋白的表达情况。结果 p16和Rb总异常表达率，甲状腺腺瘤为12．5％；80例甲状腺癌中，低度恶性组为66．7％，高度恶性组为87．O％。p16阳性率，低度恶性组为64．9％(37／57)；高度恶性组为34．8％(8／23)。Rb阳性率，低度恶性组为68．4％(39／57)；高度恶性组39．1％(9／23)；癌组织分化越差，p16及Rb阳性率越低。P16和Rb蛋白均阳性的肿瘤术后复发转移率低。结论 甲状腺癌的发生发展与p16和Rb蛋白缺失有关：瘤组织分化程度越差，p16和Rb蛋白丢失越多；p16和Rb蛋白均阳性的肿瘤术后复发率转移率低p16和Rb蛋白的表达具有负相关关系，二者共同作用才能阻止瘤细胞的增殖。     

Influence of retinoic acid on TBX1 expression in myocardial cells induced by Shh and Fgf8

The aim of this study was to explore the regulatory mechanism of retinoic acid (RA) on the TBX1 gene expression in myocardial cells. Ventricular cardiocytes were isolated from neonatal rats and cultured, and then treated with different concentrations of retinoic acid. The expression of Shh and Fgf8 at mRNA and protein levels in neonatal rat myocardial cells were measured by using RT-PCR and Western blot technique, respectively. There was basal expression of Shh and Fgf8 in the control group. When treated with 3 × 10⁻⁷ mol/L RA, we observed that the expression of Shh mRNA and protein in neonatal rat myocardial cells were up-regulated by 1.51 (P < 0.05) and 1.10 times (P < 0.05), respectively. In comparison with the control group, under the concentration of 5 × 10⁻⁷ mol/L RA, they were up-regulated by 2.21 (P < 0.05) and 2.38 times (P < 0.05) individually. Meanwhile, we could detect that the expression of Fgf8 mRNA and protein were up-regulated by 2.50 times (P < 0.05) and 80% (P < 0.05) separately compared with the control group after stimulation of 3 × 10⁻⁷ mol/L RA, and they were up-regulated by 3.48 (P < 0.05) and 2.04 times (P < 0.05) individually after stimulation of 5 × 10⁻⁷ mol/L RA. The results indicated that RA could induce the expression of Shh and Fgf8 in neonatal rat myocardial cells. At the same time, it has shown that Shh and Fgf8 were involved in the regulation process of RA on TBX1 expression.     

Stabilization of Proteins in Dry Powder Formulations Using Supercritical Fluid Technology

Therapeutic proteins have become essential in the treatment of many diseases. Their formulation in dry form is often required to improve their stability. Traditional freeze-drying or spray-drying processes are often harmful to labile proteins and could be replaced by supercritical fluid (SCF) drying to produce particles with defined physicochemical characteristics in a mild single step. A survey of the current SCF drying processes for proteins is presented to give insight into the effect of SCF drying on protein stability and to identify issues that need further investigation. Methods used for drying aqueous and organic protein solutions are described. In particular, effects of process and formulation parameters on particle formation and protein stability are discussed. Although SCF methodology for drying proteins is still in its infancy, it can provide a serious alternative to existing drying methods for stabilizing proteins.     

儿童非霍奇金淋巴瘤EB病毒LMP-1和P53、bcl-2表达的关系

目的探讨儿童NHL EB病毒LMP-1和P53、bcl-2蛋白的表达及关系.方法采用免疫组化Envision法检测64例儿童NHL中LMP-1和P53、bcl-2蛋白.结果 (1)P53蛋白阳性表达39例(60.9%),表达强度与淋巴瘤恶性程度呈正相关;阳性表达率在低恶组与中、高恶性组间有显著性意义,P＜0.01.bcl-2蛋白阳性表达37例(53.8%),bcl高于TCL,低恶性高于高恶性.(2)LMP-1蛋白阳性表达45例(70.3%),阳性表达率与肿瘤恶性程度和年龄有统计学意义,P＜0.01;而与淋巴瘤免疫表型、性别和发病部位无关.LMP-1表达与P53及bcl-2的表达呈正相关.结论 EBV感染是儿童NHL发生发展不可忽视的病毒致病因素,其致病作用可能是通过上调P53、bcl-2蛋白实现的.     

PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达

目的 探讨PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达及意义.方法 以51例膀胱癌石蜡包埋组织为研究对象,采用免疫组织化学S-P法观察PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达.结果 51例膀胱癌组织中PTEN蛋白阳性率为80.39%（41/51）,PTEN蛋白在膀胱癌组织与正常膀胱组织之间阳性率表达差异无显著性（P＞0.05）;膀胱癌组织中PTEN蛋白与肿瘤的分期、分级、淋巴结转移以及复发无关（P＞0.05）.结论 PTEN蛋白在膀胱癌组织与正常膀胱组织之间的阳性率表达差异无显著性;膀胱癌组织中PTEN蛋白与肿瘤的分期、分级、淋巴结转移以及复发无关.提示PTEN蛋白可能未参与膀胱癌的发生     

何首乌对老龄大鼠大脑皮层蛋白质含量的影响

衰老的交联学说认为:随着年龄的增长,体内生物大分子通过共价键不断连接形成难以分解的聚合物。这些聚合物失去了原有分子的生物活性,从而使机体老化。随龄增加的自由基反应是交联形成的重要原因。中药何首乌是传统的抗衰老药物。最近的研究发现其能提高老龄机体的抗氧化能力。因此,何首乌有可能影响体内大分子的交联。本实验通过对大鼠大脑皮层总蛋白、水溶性蛋白及非水溶性蛋白含量的测定,观察何首乌是否能影响大脑皮层蛋白质的交联作用,从而进一     

P53、BCL-2蛋白在肺癌中的表达及临床病理研究

目的探讨P53、BCL-2基因在肺癌发生、分化中的作用机制及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测P53、BCL-2蛋白在55例肺癌的不同病理类型中的表达情况。结果P53在肺鳞状细胞癌中的表达率为51.7%,在肺小细胞癌中的表达率为60.0%,在腺癌中的表达率为61.5%,经统计学分析,无明显相关性(P>0.05):BCL-2在肺小细胞癌(SCLC)中的表达率为80.0%,在肺非小细胞癌(NSCLC)中的表达率为36.0%,经统计学分析,有相关性(P<0.05)。结论P53蛋白与肺癌有密切关系,但与组织学类型无关:BCL-2蛋白与肺癌的组织学类型有密切关系(P<0.05)。