复方二精灵多糖抗脑缺血缺氧损伤的分子机理

目的：研究复方二精灵多糖抗脑缺血损伤的分子机理。方法：采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的小鼠海马CA1区神经元电压门控性钠电流，观察复方二精灵多糖对钠电流的影响，拟从离子通道水平揭示复方二精灵的抗缺血缺氧脑损伤作用。结果：0．1％复方二精灵多糖显著抑制海马神经元电压门控性钠通道电流锋值，使钠电流的半激活电压向去极化方向偏移，不影响钠电流的稳态失活及复活曲线。结论：复方二精灵多糖对海马神经元电压门控性钠电流的抑制作用可能为复方二精灵抗缺血缺氧脑损伤的重要机理。     

龙血素B对三又神经节河豚毒素不敏感型钠通道电流的调制作用

目的研究血竭重要成分龙血素B对小鼠三叉神经节河豚毒素不敏感(TTX-R)钠电流的作用。方法采用酶解法分离小鼠三叉神经节细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察龙血素B对单个三叉神经节(trigem inal ganglion TG)细胞TTX-R钠电流幅值的影响。结果龙血素B对TTX-R钠电流呈浓度依赖性抑制,且抑制作用可逆;高浓度的龙血素B(0.2mmol/L)加速TTX-R钠通道电流的失活过程,延迟其复活过程,对激活过程无显著影响。结论龙血素B显著抑制TTX-R钠电流,且这种抑制作用发生在钠通道的失活过程而非激活过程,这种作用可能是其镇痛作用的机理之一。     

阻断内关穴细胞细胞膜上电压门控性Ca^2＋通道对针刺内关效应的影响

本文以针刺内关穴效应为指标,观察了Mn(NO_3)_2、硝苯吡啶阻断内关穴细胞细胞膜上电压门控性Ca~(2 )通道(VOCs)对针刺内关效应的影响。结果表明,用Mn~(2 )阻断内关穴细胞膜上电压门控性Ca~(2 )通道后。针刺内关的效应消失;用硝苯吡啶阻断Ca~(2 )通道后,针刺内关的效应部分消失。说明Ca~(2 )参与经络活动的过程中,通过细胞膜上VOCs可能是一个重要环节。     

六味地黄汤含药血清对大鼠海马神经元电压门控离子通道的影响

目的 :研究六味地黄汤益智作用的机理。方法 :应用血清药理学和电生理方法 ,观察六味地黄汤含药血清对原代培养大鼠海马神经元的电压门控离子通道的影响。结果 :六味地黄汤含药血清作用 48h可减小延迟整流K 通道电流 (IK)和高电压激活Ca 通道电流 (ICa) ,对电压激活Ca 通道电流 (INa)的阈值和幅度 ,及瞬时外向K 通道电流 (IA)则无明显影响。结论 :六味地黄汤对K 、Ca 电压门控离子通道的作用 ,可能是其调节海马神经元的兴奋性进而发挥益智作用的机制之一。     

人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞钠、钾离子通道的影响

目的：观察人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞电压依赖性的钠、钾离子通道的影响,揭示其抗心律失常的作用机制。方法：采用酶分法获得单个大鼠心室肌细胞,在全细胞膜片钳技术模式下,记录电压依赖性钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流,并观察不同浓度的人参皂苷Re对电流幅度的影响。结果：给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后钠通道电流幅度呈现减小的趋势,对通道电流幅度的抑制率分别为（25.5±5.7）%（n=3）和（46.2±18）%（n=4）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）对瞬时外向钾电流幅度略有抑制,洗脱后电流恢复,其中100μmol·L-1人参皂苷对电流的抑制率为（13±9）%（n=3）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后内向整流钾电流幅度呈现逐渐减小的趋势,药物洗脱后电流完全恢复,（10,100μmol·L-1）对通道电流幅度的抑制率分别为（16.3±8.7）%（n=5）和（35.4±11.2）%（n=5）。结论：人参皂苷Re能够抑制心室肌细胞电压依赖性的钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流发挥抗心律失常的作用。     

小针刀对肌张力增高大鼠背根神经节PN3和NaN表达的影响

目的观察小针刀疗法对肌张力增高大鼠背根神经节内PN3和NaN表达的影响。方法24只sD大鼠随机分为空白组、对照组和针刀组,采用类似股薄肌肌张力增高方法进行造模。对大鼠0～14天的机械痛阚进行连续测定,间断测量热痛阈。采用荧光定量PCR法对大鼠背根神经节PN3和NaN基因mRNA转录水平进行对比分析。结果针刀组第9天以后的机械痛阈与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）,小针刀疗法明显改善了肌张力增高大鼠的机械痛阈。与对照组比较,针刀组第10天热痛阈改善明显（P〈0．05）。与空白组比较,对照组PN3mRNA明显上调（P〈0．01）,小针刀针刺之后,PN3mRNA上调趋势得到阻止（P〈0．05）。结论小针刀疗法镇痛的分子通路与阻止电压门控钠通道PN3mRNA的上调相关。     

滇黄芩总黄酮对豚鼠心肌细胞电压依赖性钠通道电流的影响

目的:研究滇黄芩总黄酮(totla flavonoid)对豚鼠心肌组织电压门控性钠通道的影响。方法:成年豚鼠,肝素抗凝后,腹腔麻醉,断头处死,迅速取其心脏,进行Langendorff灌流,先用无钙台式液灌流10 min,再以Ⅰ型胶原酶溶液灌流心脏,待心脏基本变软后剪取心室部分,制备单个心室肌细胞。分离出的豚鼠心肌单细胞,用全细胞电压钳技术记录电压依赖性钠电流进行研究。结果:滇黄芩总黄酮能可逆性抑制钠电流,其半数抑制浓度(IC50)为106 mg.L-1(95%的可信限是92～112 mg.L-1)。滇黄芩总黄酮并不影响钠通道激活开放的刺激电位阈值、最大激活电位值和反转电位值,但能使可激活开放的钠通道明显减少,钠离子电流明显衰减,可引出的钠电流在-40 mV处较正常组减少45.6%。细胞外给予滇黄芩总黄酮不影响钠通道激活曲线:对照组与106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的半激活电压(V1/2)分别为(-50.4±1.7)mV和(-50.1±3.1)mV(n=6差异无统计学意义)。细胞外给予滇黄芩总黄酮可影响钠通道失活曲线,106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮对电压依赖性稳态失活钠电流会引起一个大约12 mV的负向漂移,延缓失活钠通道的恢复:对照组与106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的V1/2分别为(-69.4±1.6)mV和(-79.3±3.2)mV(n=7,P<0.05),两者间的差异有显著性意义,斜率分别为(-8.2±0.9)mV和(7.1±0.7)mV。细胞外给予滇黄芩总黄酮也可影响失活钠通道的恢复,使钠通道的复活时间常数显著延长:对照组和106mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的时间常数分别为(15.6±6.3),(29.8±14.8)ms(n=6,P<0.05),差异有显著性意义。结论:滇黄芩总黄酮可阻滞豚鼠心肌细胞钠通道,是稳定的豚鼠心肌组织钠通道阻断剂。     

氧化苦参碱镇痛作用与钙离子通道相关性的研究

目的研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)镇痛作用是否与电压门控钙离子通道(voltage-gated calcium channels,VGCCs)N-型有关。方法 45只小鼠按随机数字表法分为假手术组、部分坐骨神经结扎(partial sciatic nerve ligation,PSNL)疼痛模型组(模型组)和OMT给药组,每组15只。采用结扎部分坐骨神经的方法建立部分坐骨神经结扎疼痛模型。分离小鼠背根神经节(dorsal root ganalia,DRG),培养DRG神经元细胞。利用Fluo-3荧光探针检测各组DRG细胞内钙离子浓度的变化;采用Western blot免疫印迹技术检测小鼠大脑及DRG组织中电压门控钙离子通道的N-型(Cav2.2)和L-型(Cav1.3)蛋白水平表达的差异。结果与假手术组比较,模型组DRG神经元细胞内钙离子浓度升高(P0.05),大脑组织中Cav2.2蛋白表达量升高(P0.05),DRG组织中Cav2.2蛋白表达量降低(P0.01);与模型组比较,OMT给药组DRG神经元细胞内钙离子浓度降低(P0.05),大脑组织中Cav2.2蛋白表达量降低(P0.01),DRG组织中Cav2.2蛋白表达量升高(P0.01)。而各组间大脑和DRG组织中Cav1.3蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 OMT的镇痛机制可能与Cav2.2通道介导的钙离子流动有关。     

细辛含药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响

目的研究中药细辛舍药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响，在离子通道水平揭示细辛抗缓慢型心律失常作用的可能机制。方法用原代培养的方法获得单个心肌细胞，用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞钠通道电流加入含药血清前后的变化。结果25％细辛舍药血清对钠通道的激活曲线、1-V曲线均有影响。结论细辛含药血清对心肌细胞钠通道电流有增强作用。     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对钠通道的影响.结果 ①浓度为1,3,5,10,20,100 μg /g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制钠电流;②可使心肌细胞钠电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;③使激活曲线向正电位方向变化,V_(1/2)从(-43.65±0.98)mV右移至(-40.25±1.01)mV(n=6,P<0.05);④使失活曲线向负电位方向变化, V_(1/2)从(-100.92±0.68)mV左移至(-111.20±0.86)mV(n=6,P<0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜钠通道电流,在不同膜电位水平对钠通道电流具有均匀一致的抑制作用;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

钩藤总碱预处理对海马神经元急性缺氧的保护作用

目的:观察钩藤总碱预处理对急性缺氧后海马神经元电压门控性Na⁺电流的影响。方法:原代培养大鼠海马神经元,分为常氧、急性缺氧和钩藤总碱预处理进行实验。采用膜片钳全细胞记录技术,检测海马神经元钠电流(I_Na)的变化。结果:急性缺氧后,细胞I_Na幅度明显降低,I_Na阈值右移;而经钩藤总碱预处理的海马神经元I_Na的降低幅度明显减轻。结论:钩藤总碱预处理提高了海马神经元对急性缺氧的耐受性,对神经元有显著保护作用。     

延胡索乙素对大鼠慢性压迫背根节神经元自发放电的影响

目的观察延胡索乙素(l-THP)对大鼠慢性压迫背根节神经元A类纤维自发放电的影响。方法采用单纤维记录大鼠慢性压迫背根节神经元自发放电的方法,观察l-THP对自发放电的影响,以及浓度-效应关系。结果实验中记录到单纤维A类神经元自发放电84根。在A类神经元自发放电中有25根自发放电为周期节律,59根为非周期节律。l-THP(100μmol/L)分别引起16.0%(4/25)的周期节律放电神经元和67.8%(40/59)非周期节律放电神经元放电减少(P0.01,l-THP干预前后配对t检验)。l-THP对受损背根节(DRG)神经元自发放电的抑制作用具有剂量依赖关系,随着浓度的增大抑制神经元自发放电的时间越快,自发放电恢复所需的时间也越长。其中有57.1%(24/42)的DRG神经元自发放电在洗脱后20 min内可以恢复,42.8%(18/42)的DRG神经元自发放电在洗脱后经过3 h始终没有恢复。结论l-THP对大鼠慢性压迫背根节神经元A类纤维的自发放电有抑制作用。     

Inhibition on acid‐sensing ion channels and analgesic activities of flavonoids isolated from dragon's blood resin

Acid‐sensing ion channel (ASIC) serves important roles in the transmission of nociceptive information. To confirm the analgesic mechanism of dragon's blood resin, patch–clamp technique, in vivo animal experiments, and immunohistochemical staining were used to observe the effects of the three flavonoids (loureirin B, cochinchinemin A, and cochinchinemin B) isolated from dragon's blood resin on ASIC. Results showed that the three flavonoids exerted various inhibitory effects on ASIC currents in rat dorsal root ganglion (DRG) neurons. The combination of the three flavonoids with total concentration of 6.5 μM could decrease (53.8 ± 4.3%) of the peak amplitude and (45.8 ± 4.5%) of the sustained portion of ASIC currents. The combination of the three flavonoids was fully efficacious on complete Freud's adjuvant (CFA)–induced inflammatory thermal hyperalgesia at a dose of 6.5 mM similar with amiloride at 10 mM. The analgesic effects of the combination could be weakened by an ASIC activator 2‐guanidine‐4‐methylquinazoline. CFA‐induced hyperalgesia was accompanied by c‐Fos up‐regulation in DRG neurons, and the combination rescued thermal hyperalgesia through down‐regulation of c‐Fos and ASIC3 expression in CFA‐induced inflammation. These collective results suggested that the flavonoids isolated from dragon's blood resin could be considered as the chemical compounds that exert analgesic effects on inflammatory thermal pain due to action on ASIC.     

糖尿病神经痛大鼠背根神经节细胞动作电位特征变化

目的通过观察背根神经节细胞的动作电位特征在糖尿病大鼠周围神经病变中的变化,探讨糖尿病大鼠周围神经病变引起痛觉过敏的发生机制。方法运用全细胞电流钳技术对糖尿病周围神经痛觉过敏大鼠背根神经节细胞进行电生理记录,与正常大鼠比较静息电位水平、动作电位峰值、基强度、动作电位爆发阈值、动作电位时程变化。结果糖尿病神经痛大鼠与正常大鼠静息电位水平和动作电位峰值无显著性差异;糖尿病神经痛大鼠大、中、小直径神经元动作电位爆发阈值下降,动作电位时程变宽,中、小直径神经元基强度降低。结论糖尿病大鼠周围神经病变引起初级感觉神经元背根神经节细胞的兴奋性增强,这可能是引起糖尿病大鼠周围神经痛觉过敏原因之一。     

膀胱经臀段的神经解剖学特征──CB-HRP的逆行示踪研究

用成年大鼠，以低电阻及声音变化测定臀部一侧膀胱经线及对侧非经脉线，在经脉线及非经脉线上的臀中肌及皮肌内注射等量ＣＢ－ＨＲＰ，以ＴＭＢ法显示背根节（ＤＲＧ）及脊髓腹角中标记的神经元。结果：经脉线上臀中肌及皮肌的脊髓运动神经元和ＤＲＧ感觉神经元的标记数均明显高于非经脉线。本工作首次定量确证了臀部膀胱经处臀中肌及其皮肌的传出、传入神经分布较非经脉线处密集，并发现膀胱经臀肌运动神经元在腰髓内形成比非经络运动神经元远为广阔的树突野。     

糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的影响

目的:观察糖络宁(TLN)对糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素注射建立大鼠糖尿病模型,造模成功的大鼠分为模型和TLN组,另设正常对照组。TLN干预32周,检测背根神经节细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果:模型组与正常对照组相比细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.05)。TLN组与模型组相比细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:TLN能够下调caspase-3蛋白表达,抑制细胞凋亡,从而发挥其神经保护作用。     

Expression of galanin in rat primary sensory afferents after moxibustion to the skin.

We examined the effects of moxibustion on primary sensory neurons in the skin of rats using immunocytochemistry combined with a fluorescent retrograde tracer dye, fluoro gold (FG). Galanin-like immunoreactive (IR) fibers were often observed in the dermis of treated skin at 18 hours after moxibustion, while such fibers were rarely detected in untreated (control) skin. Moreover, most of galanin-IR fibers also displayed substance P (SP)-like immunoreactivity. About 20-30% of the dorsal root ganglion (DRG) neurons labeled when FG was injected intradermally into the moxibustion-treated skin showed galanin-like immunoreactivity, while the proportion of FG-labeled neurons with such immunoreactivity was less than 10% in control DRGs. These results show that moxibustion induced galanin expression by primary sensory neurons containing SP. The possible functions of this peptide are discussed in relation to the effects of moxibustion.     

腰腿理痛散对大鼠自体髓核移植硬膜外背根节中降钙素基因相关肽的影响

目的：观察腰腿理痛散对大鼠自体髓核移植硬膜外背根节（DRG）中降钙索基N相关肽（CGRP）的影响。方法：取健康Wistar大鼠50只，随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、对照组（C组、腰痛宁组）、高剂量组（D组、腰腿理痛散高剂量组）、低剂量组（E组、腰腿理痛散低剂量组），每组10只，将大鼠自身的尾椎髓核取出移植于左侧硬膜外腔L5、L6神经根背侧，造成非压迫性大鼠自体髓核移植硬膜外模型，通过免疫组化的方法测定大鼠2周时DRG中CGRP的变化。结果：B、C、D、E组DRG中CGRP阳性神经元的表达明显增加，B、C、D、E组CGRP阳性神经元的免疫反应强度与A组比较均增高（P〈0．05），其中B组与A组比较显著增高（P〈0．01），但C、D、E组与B组比较为低（P〈0.05），D、E组与C组比较为低（P〈0．05）。结论：腰腿理痛散可通过下调或者抑制非机械压迫性髓核对神经根损伤后DRG内的痛觉神经递质CGRP的释放而发挥镇痛作用。