淫羊藿苷-透明质酸对兔肩袖腱骨愈合的影响及机制研究

目的 探讨淫羊藿苷-透明质酸结合物对兔肩袖损伤术后腱骨界面愈合的影响及其作用机制。方法 选取30只新西兰雄性大白兔，随机分为假手术组、模型组、淫羊藿苷组、透明质酸钠组、淫羊藿苷-透明质酸组，每组6只。假手术组只进行肩部皮肤切开缝合，其余组兔建立右侧肩袖损伤模型，并在造模1周后进行肩袖重建手术，术后进行关节内注射。假手术组、模型组注射生理盐水，淫羊藿苷组注射生理盐水溶解的淫羊藿苷含药血清冻干粉溶液，透明质酸钠组注射透明质酸钠注射液，淫羊藿苷-透明质酸组注射淫羊藿苷-透明质酸结合物，每周1次，连续注射5周。注射5周后处死各组兔，采用ELISA法检测肩关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，HE染色进行腱骨界面组织病理观察，免疫组化检测腱骨界面组织中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)阳性表达情况。结果 淫羊藿苷组、透明质酸钠组、淫羊藿苷-透明质酸组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显低于模型组(P均<0.05),且淫羊藿苷-透明质酸组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显低于淫羊藿苷...     

淫羊藿苷对氧糖剥夺所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究淫羊藿苷对氧糖剥夺PC12细胞所致炎症损伤的保护作用。方法采用PC12细胞复制氧糖剥夺2 h细胞损伤模型。实验分成6组,即正常组,模型组,尼莫地平组(10-5mol·L-1),淫羊藿苷高、中、低剂量组(10-5,10-6,10-7mol·L-1)。将淫羊藿苷各剂量组预给药1 h加氧糖剥夺期间给药2 h后,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-lβ(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果淫羊藿苷各剂量组均能显著降低氧糖剥夺PC12细胞上清液的TNF-α、IL-1β、IL-6含量,提高细胞的活力,与模型组比较,差异均有显著性意义(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷能减轻氧糖剥夺PC12细胞所致的炎症损伤,具有细胞保护作用。     

淫羊藿总黄酮对骨水泥微粒刺激单核细胞分泌肿瘤坏死因子的影响

目的:探讨淫羊藿总黄酮对人工关节无菌性松动的防治作用。方法:分离人外周血单核细胞体外培养,加入骨水泥微粒及不同浓度的淫羊藿总黄酮培养后,放免法测定各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:骨水泥微粒组的TNF-α含量明显高于对照组(P<0.01);淫羊藿总黄酮组的TNF-α含量明显低于骨水泥微粒组(P<0.01),而不同浓度组淫羊藿总黄酮之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:骨水泥微粒可刺激单核细胞分泌TNF-α,而淫羊藿总黄酮能有效地抑制单核细胞的这种分泌,对人工关节的松动可能起到防治作用。     

补肾活血方中5种黄酮类成分的体外抗炎活性

目的:观察补肾活血方中槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷II、金丝桃苷、淫羊藿苷等5种黄酮类成分对肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及一氧化氮(NO)等炎症介质释放浓度的影响作用,探讨复方治疗骨关节炎的初步机制。方法:采取LC-MS技术进行定性分析,选取补肾活血方水提液中存在的具有潜在治疗骨关节炎活性的槲皮素等5种黄酮类化合物(槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷Ⅱ、金丝桃苷、淫羊霍苷),采用体外脂多糖(LPS)刺激的RAW 264.74小鼠巨噬细胞为模型,随机分为空白组,模型组,槲皮素低、高剂量组(20,100 mg·L-1),儿茶素低、高剂量组(20,100 mg·L-1),淫羊藿次苷Ⅱ低、高剂量组(20,100 mg·L-1),金丝桃苷低、高剂量组(20,100 mg·L-1),淫羊藿苷低、高剂量组(20,100 mg·L-1),利用酶联免疫法(ELISA)测定细胞释放TNF-α,IL-6及NO的抑制作用。结果:结合LC-MS分析,确定补肾活血方水提液中确实存在槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷Ⅱ、金丝桃苷以及淫羊藿苷等黄酮类化合物。与空白组比较,模型组TNF-α,IL-6,NO含量明显升高(P0.01);与模型组比较,槲皮素与淫羊藿苷在100 mg·L-1,以及淫羊藿次苷II在20,100 mg·L-1对TNF-α的释放具有显著的抑制作用(P0.01),儿茶素与淫羊藿次苷II在100 mg·L-1,槲皮素与淫羊藿苷在20,100 mg·L-1均对IL-6水平具有显著的抑制(P0.01),金丝桃苷在100 mg·L-1,槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷II以及淫羊藿苷在20,100 mg·L-1均对NO的释放具有显著抑制(P0.01)。结论:补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α,IL-6,NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。     

淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠NLRP3炎性小体信号通路的影响

目的探讨淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠的干预作用及NLRP3炎性小体信号通路的影响。方法将50只雄性DBA/1小鼠随机分为对照组、模型组、淫羊藿苷10 mg/kg组、淫羊藿苷20 mg/kg组、淫羊藿苷40 mg/kg组,每组10只。模型组和淫羊藿苷各组尾巴根部皮下注射含Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型,在第21天二次免疫造模后,淫羊藿苷各组开始给予相应剂量淫羊藿苷灌胃,对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均每天1次,连续3周。观察各组小鼠关节炎评分和关节肿胀度;眼球取血,采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;分离关节滑膜组织,采用HE和番红O染色观察各组小鼠关节滑膜的病理变化;采用RT-PCR检测各组小鼠滑膜组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组小鼠滑膜组织中NLRP3炎性小体信号通路分子(IL-1β、Caspase-1及NLRP3)表达水平。结果首次免疫21 d后,模型组及淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分开始增加,模型组小鼠的关节炎评分持续增加至实验结束;从第27天开始,淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分与模型组比较呈剂量依赖性降低(P均0.05)。淫羊藿苷各组关节肿胀度均明显低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。模型组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著高于对照组(P均0.05);淫羊藿苷各组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。病理结果显示模型组小鼠滑膜组织中出现严重的炎性细胞浸润、基质破坏及钙含量显著减少,淫羊藿苷各组炎性症状及基质破坏减轻,钙含量显著增加。结论淫羊藿苷可通过抑制NLRP3炎性小体介导的炎症反应来缓解类风湿关节炎,对类风湿关节炎的治疗具有潜在价值。     

淫羊藿苷联合冰片对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠抗氧化活性、炎症反应和血脑屏障通透性影响

目的:探索淫羊藿苷配伍冰片对大鼠脑缺血-再灌注损伤抗氧化活性、炎症反应和血脑屏障通透性作用及其机制。方法:SD大鼠50只,随机分成假手术组、模型对照组、淫羊藿苷组、冰片组和淫羊藿苷配伍冰片组,每组10只,采用颈总动脉夹闭法制备脑缺血-再灌注损伤模型。缺血0.5h后,再灌注24h分别检测缺血脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓过氧化物酶(MPO)的活性和伊文思蓝(EB)的含量。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:淫羊藿苷组、冰片组和淫羊藿苷配伍冰片组大鼠脑组织SOD活性分别为(259.15±1.129)U/mg,(270.96±1.875)U/mg,(301.14±0.248)U/mg;MPO值分别为(0.741±0.229)U/g,(0.692±0.115)U/g,(0.457±0.046)U/g;EB含量分别为(6.375±0.842)μg/g,(5.419±0.160)μg/g,(4.278±0.175)μg/g,与模型对照组比较,淫羊藿苷组、冰片组和淫羊藿苷配伍冰片组差异均有统计学意义,其中以淫羊藿苷配伍冰片组作用最明显(P0.01)。淫羊藿苷组、冰片组和淫羊藿苷配伍冰片组大鼠脑组织TNF-α含量分别为(0.516±0.134)U/g,(0.712±0.039)U/g,(0.325±0.092)U/g,与模型对照组比较,淫羊藿苷组、冰片组和淫羊藿苷配伍冰片组差异均有统计学意义,其中以淫羊藿苷配伍冰片组作用最明显(P0.01)。结论:淫羊藿苷配伍冰片对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠的脑组织具有神经保护作用。     

淫羊藿对颈椎病模型大鼠退变颈椎骨组织钙磷代谢及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量变化的实验研究

目的:研究淫羊藿对颈椎病模型大鼠退变颈椎骨组织中Ca、P代谢及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响,探讨淫羊藿防治颈椎病的机制.方法:30只SD大鼠,随机分为模型组20只和假手术对照组10只,采用切除动物C2～C7棘上韧带、棘间韧带和分离椎旁两侧肌肉,建立颈椎退变动物模型.在1月、3月两个时间点拍摄颈椎X线片,证实模型成立后,将模型组分为淫羊藿模型组(A组)和生理盐水模型组(B组)各10只,分别喂服淫羊藿水提液和生理盐水,假手术对照组(C组)喂服生理盐水,喂服2个月取大鼠的颈椎骨组织和血清,用全自动生化分析仪测定各组颈椎骨组织中Ca、P、ALP含量和发射免疫法测定血清样本中IL-1β、IL-6、TNF-α指标.结果:①B组颈椎骨组织中Ca、P的水平低于其他两组(P＜0.01).A组Ca、ALP的水平高于其他两组(P＜0.01),P的水平高于B组(P＜0.01).②B组血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量高于C组(P＜0.05、P＜0.01),A组血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量显著的低于B组(P＜0.01).结论:①颈椎Ca、P含量的减低,是颈椎退变的病理结果.淫羊藿可提高退变颈椎骨组织Ca、P含量,抑制颈椎退变.②淫羊藿能下调退变颈椎血清中IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子的含量,具有阻止炎性反应和抑制颈椎退变的作用.     

淫羊藿对慢性再障模型大鼠造血调控因子影响的实验研究

目的:观察淫羊藿对再障模型大鼠造血调控因子TNF-α及IL-2、IL-3、IL-6的影响.方法:将84只SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,康力龙组,淫羊藿低、中、高剂量组6组.建立白消安诱发造血功能障碍大鼠模型,分别胃饲康力龙和淫羊藿,观察细胞因子TNF-α及IL-2、IL-3、IL-6水平的变化.结果:与正常对照组对比,模型对照组TNF-α、IL-2、IL-6含量增高,1L-3含量下降,差别有统计学意义(P＜0.05).与模型对照组对比,各药物组的TNF-α、IL-2、IL-6下降,IL-3含量增加,差别有统计学意义(P＜0.05).与康力龙组对比,淫羊藿低剂量组TNF-α、IL-2、IL-6含量差别有统计学意义(P＜0.05),而中、高剂量组较之差别无统计学意义(P＞0.05).淫羊藿中、高剂量组的TNF-α、IL-2、IL-6及IL-3含量与低剂量组对比,差别均有统计学意义(P＜0.05).结论:淫羊藿可通过改善造血调控因子分泌的异常来促进骨髓造血功能的恢复;同时其作用有一定的量效关系,即中、高剂量淫羊藿的作用较低剂量强.     

姜黄素对LPS诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响

目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响。方法 0、5、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素作用小鼠滑膜成纤维细胞24 h, MTT法检测细胞增殖情况,筛选最佳作用浓度。将细胞分为对照组、模型组(10μg/mL LPS)、姜黄素组(20μmol/L)、SB-431542组(100μmol/L)和姜黄素+SB-431542组(20μmol/L+100μmol/L)。ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-6水平,Western blot法检测COL1A1、TIMP1、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组和SB-431542组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Sm...     

化痰通络方对IL-1β刺激的RA滑膜成纤维细胞增殖及TNF-α和aFGF的影响

目的探讨化痰通络方对IL-1β刺激的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblast,RASFB)增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,a FGF)分泌的影响。方法体外培养RASFB细胞株,加入终浓度为1、5、10、20μg/L的IL-1β24、48 h以WST-1法检测RASFB增殖率;然后选择20μg/L的IL-1β为诱导剂量为IL-1β组。在此基础上加入终浓度(V/V)为5%、2%、1%的高、中、低浓度化痰通络方水煎液为高、中、低浓度化痰通络方组,培养24、48 h,并设空白对照组。比较RASFB的增长率。ELISA法检测各组TNF-α和a FGF含量,RT-PCR检测TNF-α和a FGF mRNA表达。结果24、48 h时,与IL-1β1μg/L比较,IL-1β5、10、20μg/L RASFB增殖率升高(P0.01);与IL-1β5μg/L比较,IL-1β10、20μg/L RASFB增值率升高(P0.01),且IL-1β20μg/L RASFB增值率高于IL-1β10μg/L(P0.01)。48 h时各浓度的RASFB增值率高于24 h(P0.01)。与高浓度化痰通络方组比较,中、低浓度化痰通络方组RASFB增殖率降低,且中浓度化痰通络方组对IL-1β刺激的RASFB增殖率明显降低(P0.01)。与空白对照组比较,IL-1β组24、48 h时TNF-α、a FGF mRNA表达及含量均升高(P0.05);与IL-1β组比较,除24 h低浓度化痰通络方组TNF-αmRNA表达外,24、48 h高、中、低浓度化痰通络方TNF-α、a FGF mRNA表达及含量均降低(P0.05);与高浓度化痰通络方组比较,24、48 h时中、低浓度化痰通络方TNF-α、a FGF mRNA表达升高,24 h低浓度化痰通络方TNF-α含量以及24、48 h中、低浓度化痰通络方TNF-α、a FGF含量升高(P0.05)。结论化痰通络方治疗RA的机理可能涉及抑制RASFB的增殖,降低TNF-α和a FGF mRNA的表达及其蛋白的分泌。     

淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体(ER)与其作用机制的关系.方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达.结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10-9～1×10-6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780(1×10-6 mol/L)所拮抗.与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制.淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达(P＜0.01).结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的.     

补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清IL-10、TNF-α水平的影响

目的:观察补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清中IL-10、TNF-α水平的影响,探讨补骨脂-淫羊藿药对防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:3月龄SD雌性大鼠40只,分为假手术组、模型组、壮骨止痛胶囊组、阳性对照组、补骨脂-淫羊藿药对组,采用去卵巢3个月制备绝经后骨质疏松大鼠模型,连续灌胃13周后检测比较各组大鼠血清IL-10、TNF-α水平。结果:与模型组比较,补骨脂-淫羊藿药对组能提高骨质疏松模型大鼠血清IL-10水平,但差异无统计学意义(P0.05);补骨脂-淫羊藿药对组能显著降低模型大鼠血清TNF-α水平,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补骨脂-淫羊藿药对可以抑制骨吸收,调节成骨细胞与破骨细胞的功能活动,使成骨细胞活动加剧,破骨细胞活动减弱,从而使骨吸收/骨形成代谢保持动态平衡。     

淫羊藿苷调控NLRP3缓解小鼠类风湿关节炎的研究

目的：探讨淫羊藿苷是否通过上调miR-223-3p表达抑制NLRP3缓解小鼠类风湿关节炎。方法：采用骨胶原诱导法建立关节炎小鼠模型，分别为对照组、模型组、淫羊藿苷组（10 mg/kg与40 mg/kg组）。监测小鼠关节炎发生情况并进行评分，收集小鼠血清和滑膜组织。CCK-8检测滑膜成纤维样细胞活性；ELISA检测TNF-α与IL-6、IL-1β炎症因子；q RT-PCR检测miR-223-3p的表达；Western bolt检测NLRP3炎性体、抗凋亡蛋白Bcl-2与凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达；免疫组化检测滑膜组织中NLRP3表达。结果：淫羊藿苷以剂量依赖的方式抑制滑膜成纤维样细胞活性。淫羊藿苷组小鼠关节病变显著低于模型组（P<0.05），与剂量呈负相关。模型组中3种炎症因子水平显著高于其他组（P<0.05）。淫羊藿苷组Bcl-2显著低于模型组（P<0.05），凋亡蛋白及miR-223-3p表达显著高于模型组（P<0.05）；免疫组化显示NLRP3表达在模型组显著增多。结论：淫羊藿苷可通过上调miR...     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的考查淫羊藿苷(Icariin)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖以及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响。方法采用体外培养HK-2细胞,分为空白对照组、模型组(5 ng·mL~(-1)TGF-β1)、淫羊藿苷不同浓度给药组(5 ng·mL~(-1)TGF-β1+25、50、100、200μg·mL~(-1)淫羊藿苷),培养24 h后给药处理。药物作用72 h后,观察细胞形态变化,并采用MTT法检测细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR法检测细胞FN mRNA的表达;采用ELISA法检测细胞上清液中FN蛋白的含量。结果与空白对照组比较,模型组的细胞增殖受到明显抑制(P0.01),HK-2细胞的FN mRNA表达显著增加(P0.01),细胞培养液中FN蛋白含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,25μg·mL~(-1)淫羊藿苷可以促进HK-2细胞的增殖(P0.01),并使细胞形态逐渐趋向正常;不同浓度组的淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞FN mRNA表达以及细胞培养液中的FN蛋白含量均有下调作用,50、100、200μg·mL~(-1)浓度组作用明显(P0.01)。结论淫羊藿苷可能通过促进HK-2细胞增殖与抑制其FN mRNA及蛋白表达,发挥抗TGF-β1诱导的HK-2细胞向成纤维细胞转化的作用。     

淫羊藿苷基于ERα-Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠成骨分化的影响及机制研究

目的:探讨淫羊藿苷基于ERα-Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠体内成骨分化的影响及作用机制。方法:80只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术+生理盐水组(Sham-Veh)20只,假手术+淫羊藿苷组(Sham-Icariin)20只,去势+生理盐水组(Ovx-Veh)20只,去势+淫羊藿组(Ovx-Icariin)20只。分别在术后4周、8周进行Micro-CT相关参数(Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp、BV、BV/TV及BMD)、RT-PCR相关指标(ALP、COL-1、OPG/RANKL、OCN、Run X2、ERα和GAPDH)及染色(β-catenin免疫荧光染色、HE染色及TRAP染色)评价。结果:骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积(BV)、骨与组织体积比(BV/TV)及骨密度(BMD)在术后4周和8周时,淫羊藿苷组均高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05);而骨小梁间距(Tb.Sp)在术后4周和8周时,淫羊藿苷组均低于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05)。淫羊藿苷组在ALP、COL-1、OCN、Run X2和ERα方面均高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05);而淫羊藿苷组在OPG/RANKL方面低于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05)。淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的β-catenin免疫荧光染色明显多于生理盐水组(Sham+Ovx);在HE染色方面,淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的骨组织明显多于生理盐水组(Sham+Ovx);而在TRAP染色方面,淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的破骨细胞明显少于生理盐水组(Sham+Ovx)。结论:淫羊藿苷在大鼠体内可以通过ERα-Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs的成骨分化,促进骨生成,并可通过ERα相关的OPG/RANKL/RANK系统抑制破骨细胞的生成,抑制骨吸收。     

人参皂苷可下调滑膜成纤维细胞／的表达

目的：探讨人参皂苷 Rg1对 RA 滑膜成纤维细胞 RANKL/OPG 表达的影响。方法：通过Real-time PCR 及 Western Blot 方法检测 RNAKL/OPG mRNA 及 RANKL 蛋白表达水平。结果：Rg1可促进 RASFs 细胞 OPG mRNA 的表达,下调 RANKL mRNA 的表达;Rg1可抑制 RANKL 蛋白的表达。结论：Rg1可下调 RA 滑膜成纤维细胞 RANKL/OPG的表达,从而发挥骨保护作用。     

人参皂苷Rg_1可下调RA滑膜成纤维细胞RANKL/OPG的表达

目的:探讨人参皂苷Rg1对RA滑膜成纤维细胞RANKL/OPG表达的影响。方法:通过Real-time PCR及Western Blot方法检测RNAKL/OPG mRNA及RANKL蛋白表达水平。结果:Rg1可促进RASFs细胞OPG mRNA的表达,下调RANKL mRNA的表达;Rg1可抑制RANKL蛋白的表达。结论:Rg1可下调RA滑膜成纤维细胞RANKL/OPG的表达,从而发挥骨保护作用。     

淫羊藿苷对细胞因子诱导下的强直性脊柱炎成纤维细胞成骨型表达及其分子机制的影响

目的:探讨淫羊藿苷对细胞因子诱导下的强直性脊柱炎成纤维细胞成骨型表达及其分子机制的影响。方法:以体外培养的AS髋关节囊组织的成纤维细胞为实验对象,在细胞因子BMP与TGF-β的诱导刺激下,观察BMP-2与TGF-β1作用下,AS成纤维细胞成骨型表达状况,以及淫羊藿苷对细胞因子诱导后的成纤维细胞成骨型表达及其分子机制的影响。结果:细胞因子作用后,AS成纤维细胞的ALP活性、胶原含量、骨钙素含量较正常对照组与AS对照组明显提高(P<0.01)。药物作用后,淫羊藿苷含药血清对细胞因子诱导下的AS成纤维细胞ALP、胶原含量、骨钙素含量活性有明显的抑制作用(P<0.01);而兔空白血清组SASP含药血清组则作用不明显(P>0.05)。结论:淫羊藿苷可以通过抑制细胞因子对成纤维细胞成骨型标志物的影响而达到抑制成纤维细胞进一步向成骨型的分化。     

淫羊藿苷对强直性脊柱炎成纤维细胞向成骨型分化的影响

目的异位成骨是强直性脊柱炎病理过程的核心环节。成纤维细胞是AS异位成骨的靶细胞,BMP/Smad信号传导通路是骨形成过程中的一条重要通路。该研究通过观察淫羊藿苷对体外培养强直性脊柱炎成纤维细胞增殖和凋亡的作用,同期观察淫羊藿苷对体外培养AS成纤维细胞成骨表型表达及BMP/Smad信号通路蛋白表达的影响,初步探讨淫羊藿苷干预强直性脊柱炎异位成骨的分子机制。方法采用组织学原代培养法,建立人髋关节囊成纤维细胞系,应用免疫组化法鉴定细胞来源。以第3代对数生长期的AS成纤维细胞为研究对象,将实验分为AS空白对照组与淫羊藿苷小剂量组(25μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)与大剂量组(100μg/mL)。MTT法检测淫羊藿苷干预下AS成纤维细胞的增殖情况;Annexin V法流式细胞术检测淫羊霍苷对AS成纤维细胞凋亡的影响。检测淫羊藿苷作用下AS成纤维细胞成骨表型的表达状况,观察其ALP活性、胶原合成及OC分泌量。Western blotting技术检测在不同剂量淫羊藿苷干预下,AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路中Smad1、Smad5、Smad4及成骨标志基因Cbfa-1蛋白的表达情况。结果淫羊藿苷100μg/mL可明显抑制AS成纤维细胞增殖(P0.05),且无细胞毒产生,各组细胞不同时间点增殖情况无显著差异;淫羊藿苷各剂量组对AS成纤维细胞凋亡均无明显作用。大剂量淫羊藿苷对AS成纤维细胞ALP活性、胶原合成及OC分泌均有明显抑制作用。与AS对照组相比,淫羊藿苷作用后AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路Smad1、Smad4、pSmad1以及Cbfa-1蛋白表达受明显抑制(P0.05)。结论淫羊藿苷能有效抑制AS成纤维细胞增殖,且抑制AS成纤维细胞成骨表型的表达,其分子机制可能是淫羊藿苷通过干预BMP/Smad信号通路活化,从而调节成骨标志基因Cbfa-1表达,抑制AS成纤维细胞向成骨型分化,可能是淫羊藿苷干预AS异位成骨的机制之一。     

复方别敏中黄芩苷、淫羊藿苷和黄芪甲苷配伍比例的优化

目的:探讨复方"别敏"中黄芩苷、淫羊藿苷与黄芪甲苷3种成分合用的优化配伍比例。方法:采用卵清蛋白腹腔注射建立变应性鼻炎小鼠模型,以脾淋巴细胞增殖反应为指标,利用四唑氮氢氧化物法确定黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷各成分的有效剂量范围;选用U1*0(108)表组方设计所得的3种成分的10种组合进行干预,考察其对脾淋巴细胞增殖的抑制效应,经逐步回归统计分析,获得3种成分合用的最佳配比;通过淋巴细胞增殖反应和对淋巴细胞培养上清液中细胞因子含量检测,验证3种成分的最佳配伍效应是否优于各单一成分。结果:2～10μmol/L黄芩苷、2～10μmol/L淫羊藿苷和1～10μmol/L黄芪甲苷明显抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖;当黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷以1:2.14:2.65比例配伍时,抑制细胞增殖的效应最明显;进一步的验证研究证实,该配伍对ConA刺激的淋巴细胞增殖的抑制效果及对淋巴细胞上清液中白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、IL-5和γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的调节作用明显优于黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷单用的效果(P0.05,P0.01)。结论:复方"别敏"中主要有效成分黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷按优化比例合用可最有效地抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,调节因变态反应引起的Th1、Th2型细胞因子失衡。