真性红细胞增多症与原发性血小板增多症的实验室检查特征

摘要：目的：根据2008年WHO诊断标准,分析真性红细胞增多症（PV）与原发性血小板增多症（ET）患者的实验室检查特征。 方法：回顾性分析114例PV、ET初诊患者血液、骨髓涂片、骨髓病理组织学及JAK2V617F基因检测结果。 结果：与ET患者相比,PV患者WBC和Hb水平增高（P<0.05）,PLT下降（P<0.05）,红细胞系百分数增高（P<0.05）。与JAK2V617F基因阴性PV患者相比,JAK2V617F基因阳性PV患者WBC、PLT明显增高（P<0.05）,粒细胞系、粒/红比值、巨核细胞计数增高（P<0.05）。JAK2V617F基因阳性ET患者骨髓活检多见三系增生,未见骨髓纤维化。 结论：PV、ET患者及JAK2V617F基因阳性或阴性的PV、ET患者实验室检查特征不同,对指导临床诊断具有一定意义。     

真性红细胞增多症和原发性血小板增多症患者中JAK2V617F突变负荷与临床特征相关性

为分析真性红细胞增多症（polycythemiavera,PV）和原发性血小板增多症（essentialthrombocythemia,ET）患者JAK2V617F突变负荷和患者临床特征的相关性,利用荧光实时定量PCR方法检测90例初诊骨髓增殖性疾病（myeloproliferativedisorder,MPD）患者（包括47例PV和43例ET）外周血标本中JAK2V617F突变基因负荷,统计分析JAK2V617F负荷和患者外周血中血红蛋白、红细胞压积、白细胞计数和血小板计数的相关性。结果表明：突变阳性的ET患者中JAK2V617F负荷（0．209±0．192）较PV患者中（0．441±0．270）低（P=0．028）。在PV和ET患者中JAK2V617F负荷和患者外周血中血红蛋白（PV：R=0．518,P〈0．001;ET：R：0．528,P=0．005）、红细胞压积（PV：R：0．510,P〈0．001;ET：R=0．524,P=0．005）和白细胞计数（PV：R=0．584,P=〈0．001;ET：R：0．471,P=0．013）都呈正相关。在PV患者中,JAK2V617F突变负荷和血小板计数呈负相关（R=-0．354,P=0．020）;但在ET患者中,JAK2V617F负荷和血小板计数无明显相关性（R=0．233,P=0．242）。结论：在PV患者和ET患者中,JAK2V617F突变负荷和患者外周血中血红蛋白、红细胞压积和白细胞计数都呈正相关。在PV患者中,JAK2V617F负荷和血小板计数呈负相关,而在ET患者中JAK2V617F负荷和血小板计数无明显相关性。     

JAK2 V617F突变与慢性骨髓增殖性疾病关系的临床研究

目的 探讨JAK2 V617F与慢性骨髓增殖性疾病(cMPD)的关系.方法 对523例cMPD患者按WHO标准进行回顾性诊断.应用等位基因特异性聚合酶链反应(ASP-PCR)检测JAK2 V617F突变情况,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)检测JAK2 V617F(+)者突变状态,根据PCR联合测序分析结果按突变位点T/G比值分析JAK2 V617F突变负荷.比较JAK2 V617F不同负荷与患者临床及实验室特征的关系.对JAK2 V617F(-)者,通过PCR联合测序检测MPL W515L突变.结果 523例cMPD患者共检出JAK2 V617F(+)者346例(66%),其中116例真性红细胞增多症(PV)患者检出109例(94%),153例原发性血小板增多症(ET)患者检出122例(80%),142例原发性骨髓纤维化(PMF)患者检出111例(78%),4例cMPD不能分类(cMPD-U)患者检出3例(75%),7例高嗜酸粒细胞增多症(HES)患者检出1例(14%),慢性粒细胞白血病(CML)和慢性嗜酸粒细胞白血病(CEL)未发现存在突变.346例JAK2 V617F(+)患者中5例为纯合子突变(PV4例,ET 1例).JAK2 V617F突变以低负荷为主(71.5%),突变负荷以PV组最大,ET其次,PMF负荷最小(P=0.003).PV患者血红蛋白水平与V617F突变负荷呈明显正相关(r=0.203,P=0.033).ET患者骨髓巨核细胞数与JAK2 V617F突变负荷呈正相关(r=0.205,P=0.024);PMF高突变负荷组患者肝肿大发生率以及肝肿大程度均明显高于低负荷组(P值分别为0.003,0.001),并且肝肿大程度与突变负荷呈明显正相关(r=0.315,P=0.001).JAK2 V617F突变及其突变负荷与cMPD患者年龄、性别、血栓形成、高血压、脾肿大、白细胞计数、血小板计数、骨髓增生程度、骨髓纤维化及骨髓原始细胞比例均无明显相关性.结论 ①cMPD患者存在JAK2 V617F突变,突变检出率从高到低分别为PV、ET、MF、cMPD-U、HES,CML、CEL中未发现此突变;②JAK2 V617F突变状态显示98%为杂合子突变,纯合子突变多见于PV;③PV、ET、PMF三组疾病中PV患者突变负荷最大,ET次之,PMF最小;④JAK2 V617F突变负荷与PV患者血红蛋白水平、ET患者骨髓巨核细胞数量以及PMF患者肝肿大程度呈明显正相关.     

骨髓增殖性疾病患者JAK2基因V617F突变频率、磷酸化JAK/STAT蛋白表达水平及临床意义

目的 探讨145例骨髓增殖件疾病患者JAK2基因V617F突变率;并分析JAK2基因V617F突变阳性患者的临床特点及意义.方法 应用PCR产物直接测序和等位基因特异性PCR技术检测145例骨髓增殖性疾病患者JAK2基因V617F突变.并应用Western blot方法测定JAK2基因V617F突变阳性患者JAK2蛋白、磷酸化JAK2蛋白及磷酸化STAT5蛋白表达;对JAK2基因V617F突变阳性与突变阴性的骨髓增殖性疾病患者临床资料进行比较,评价JAK2基因V617F突变阳性的临床意义.结果 ①本组病例真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(ET)、原发性血小板增多症(IMF)患者JAK2基因V617F突变率分别为92%(64例中59例)、58%(43例中25例)和50%(38例中19例),等位基因特异性PCR检测较PCR产物直接测序有更高的JAK2基因V617F检出率[PV84%(64例中53例)、MIF 44%(43例中19例)、ET 39%(38例中15例)].②JAK2基因V617F突变阳性患者外周血单个核细胞磷酸化JAK2及磷酸化STAT5蛋白表达较突变阴性者明显增高(P<0.05).③JAK2基因V617F突变阳性骨髓增殖性疾病患者发病平均年龄偏大;平均白细胞计数高于突变阴性患者;血小板计数小于突变阴性患者;脾脏较突变阴性患者小;JAK2基因V617F突变阳性PV、ET和IMF患者血栓性事什发生率分别为17%、32%和16%;而突变阴性PV、ET和IMF患者血栓性事件发生率分别为0、16%和5%.结论 骨髓增殖性疾病患者有较高的JAK2基因V617F突变发生率,且JAK2基因V617F突变阳性患者易发生血栓事件.     

特发性骨髓纤维化患者JAK2V617F突变研究

为了探讨特发性骨髓纤维化（IMF）JAK2V617F点突变发生率及其临床意义,运用等位基因特异性聚合酶链式反应（AS-PCR）检测12例IMF患者的JAK2V617F点突变,并探讨JAK2V617F变化与临床、血液学特征的相关性。结果显示：随访期2-15个月,12例患者JAK2V617F点突变检测阳性率为50%,而半数患有血栓史,其血小板数目及骨髓巨核细胞数目相对增多。另6例JAK2V617F点突变阴性患者仅1例有血栓史,血小板数目及骨髓巨核细胞数目相对较低。结论：JAK2V617F点突变阳性IMF患者多数具有典型的临床表现及血液学特点,其血小板数目及骨髓巨核细胞数目相对增多。     

JAK2V617F基因突变的定量测定及在慢性骨髓增殖性疾病中的应用

目的 探讨荧光定量PCR的方法检测JAK2V617F基因突变并分析其在慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)中的诊断价值。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测68例确诊CMPD患者骨髓标本中JAK2V617F基因突变的阳性率和相对定量,分析其在CMPD中的诊断价值以及和临床资料之间的联系。结果 68例确诊患者的骨髓标本均成功扩增JAK2V617F野生型和突变型。JAK2V617F基因突变的总阳性率为66.2%(45/68),其中真性红细胞增多症(PV)患者阳性率75.0%(21/28),原发性血小板增多症(ET)阳性率60.6%(20/33),特发性骨髓纤维化(IMF)阳性率57.1%(4/7)。PV患者JAK2V617F突变阳性率明显高于ET和IMF患者。PV患者JAK2V617F的相对定量和血红蛋白数和白细胞数呈正相关。ET患者中JAK2V617F的相对定量和患者的血小板计数呈正相关。结论 荧光定量PCR的方法能够快速准确的检测JAK2V617F基因突变及其突变比例,为临床诊断CMPD提供有效的实验室指标,JAK2V617F的相对定量和患者的临床血液学指标存在一定关系。     

骨髓增殖性疾病MPLW515L点突变研究

为了探讨MPLW515L和JAK2V617F点突变在南京地区骨髓增殖性疾病（MPD）中的突变情况，采用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）及基因测序方法检测190例MPD患者的MPLW515L和JAK2V617F点突变。结果表明：102例原发性血小板增多症（ET）患者有1例存在MPLW515L点突变，突变率为1．0％；43例存在JAK2V617F点突变，突变率为42．2％。13例特发性骨髓纤维化（IMF）患者未检测到MPLW515L点突变；5例存在JAK2V617F点突变，突变率为38．5％。32例真性红细胞增多症（PV）患者未检测到MPLW515L点突变；20例存在JAK2V617F点突变，突变率为62．5％。43例慢性髓系白血病（CML）患者未检测到MPLW515L和JAK2V617F点突变。结论：AS—PCR检测MPLW515L和JAK2V617F点突变简便可靠。ET患者中可存在MPLW515L点突变，JAK2V617F点突变存在于PV、ET、IMF中，而CML患者不存在JAK2V617F点突变。     

JAK2V617F 基因突变的定量测定及在慢性骨髓增殖性疾病中的应用

目的：探讨荧光定量 PCR 的方法检测 JAK2V617F 基因突变并分析其在慢性骨髓增殖性疾病（CMPD）中的诊断价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测68例确诊 CMPD 患者骨髓标本中 JAK2V617F 基因突变的阳性率和相对定量,分析其在 CMPD 中的诊断价值以及和临床资料之间的联系。结果68例确诊患者的骨髓标本均成功扩增 JAK2V617F 野生型和突变型。JAK2V617F 基因突变的总阳性率为66．2％（45/68）,其中真性红细胞增多症（PV）患者阳性率75．0％（21/28）,原发性血小板增多症（ET）阳性率60．6％（20/33）,特发性骨髓纤维化（IMF）阳性率57．1％（4/7）。PV 患者 JAK2V617F 突变阳性率明显高于 ET 和 IMF 患者。PV 患者 JAK2V617F 的相对定量和血红蛋白数和白细胞数呈正相关。ET 患者中 JAK2V617F 的相对定量和患者的血小板计数呈正相关。结论荧光定量 PCR 的方法能够快速准确的检测 JAK2V617F 基因突变及其突变比例,为临床诊断 CMPD 提供有效的实验室指标,JAK2V617F 的相对定量和患者的临床血液学指标存在一定关系。     

原发性血小板增多症及原发性骨髓纤维化患者MPL515突变的筛查

目的 建立一种能够简便、灵敏地检测原发性血小板增多症(ET)及原发性骨髓纤维化(PMF)患者外周血MPL515突变的方法,探讨我国ET和PMF患者的MPL5I5突变频率及JAK2V617F突变情况.方法 选取2008至2010年复旦大学附属华山医院ET患者261例和PMF患者25例,提取患者外周血DNA.使用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测标本的JAK2V617F突变.分别采用针对MPL515wt、MPIW515L和MPLW515K这3种基因型设计的Taqman探针,使用荧光定量PCR法检测MPL515突变,并通过T-A克隆挑取纯克隆测序确认.结果 在261例ET患者中,检测到JAK2V617F突变119例(45.6％),MPL515突变7例(2.7％),包括5例MPLW515L突变、1例MPLW515K突变和1例MPLW515L+K突变.25例PMF患者中,JAK2V617F突变为10例(40.0％),M PL515突变为3例(12.0％),包括1例MPLW515L突变和2例MPLW515L+K突变.1例M PLW515K突变的ET患者同时伴有JAK2V617F突变.结论 JAK2V617F是ET和PMF的分子标志物,而在JAK2V617F阴性的病例中,MPL515突变则是一个重要、有益的补充.     

135例骨髓增殖性肿瘤患者JAK2基因突变的定量研究

目的 研究JAK2基因突变在骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的发生率和突变类型.并对突变转录本水平进行定量分析,初步探讨其临床意义.方法 采用突变序列扩增系统PCR(ARMS-PCR)法检测JAK2突变的发生率及其突变类型;采用毛细管电泳法定量分析JAK2突变转录本水平.结果 135例MPN患者共检出95例JAK2V617F阳性,总阳性率为70.4%;真性红细胞增多症(PV)患者JAK2V617F突变发生率为97.4%,原发性血小板增多症(ET)为59.6%,3例特发性骨髓纤维化(IMF)中2例阳性;95例突变患者中纯合突变36例,杂合突变59例,其中PV患者纯合突变发生率为47.3%,高于ET患者的18.1%(P<0.05).纯合突变者其JAK2V617F突变转录本水平高于杂合突变者(P<0.05),杂合型PV患者的JAK2V617F突变转录本水平高于杂合型ET患者(P<0.05);JAK2V617F突变高表达组(转录本水平为70%～100%)的平均年龄高于低表达组(转录本水平为47.3%～70.0%),且两者年龄均较JAK2V617F阴性组为高(P<0.05);年龄<60岁者其JAK2V617F转录本水平低于≥60岁者(P<0.001);PV患者中,JAK2V617F高表达组其白细胞计数高于低表达组(P<0.001),ET患者中,JAK2V617F高表达组其白细胞计数高于低表达组(P<0.05),且二者均较阴性组为高(P<0.05),血红蛋白水平在高表达组与低表达组间差异无统计学意义(P>0.05),但二者均较阴性组为高(P<0.05).101例患者进行了染色体检查,未发现核型异常与JAK2V617F突变之间存在相关性.结论 ARMS-PCR可作为检测JAK2V617F突变较灵敏的方法 ,结合毛细管电泳可用于此突变的定量分析以及临床MPN的诊断和微量残留病的检测.     

Sensitized immunochemical method for the specific detection of human haemoglobin in dried biological samples.

The authors describe a modified version of counterimmunoelectrophoresis of easy performance and high sensitivity. With this method human haemoglobin can easily and specifically be determined either in fresh or dried biological samples. Glutaraldehyde pretreatment of the samples results in the development of complexes with highly favourable electrophoretic mobility and precipitating capacity. By this chemical modification and use of a double set of samples with varying antigen-antibody proportion, the sensitivity of haemoglobin detection in erythrocyte-containing haemolysate and native blood was 300 ng/ml. The examination is easily performed, and without considerable outlay, even with conventional laboratory facilities. It is equally suitable for the detection of occult colorectal bleeding and for species-specific study of blood stains of unknown origin. The authors succeeded in identifying human haemoglobin even in a 42-month dried blood stain.     

3种不同性质脑膜炎患者脑脊液细胞学及特殊染色的动态观察

目的 探讨脑脊液细胞学及特殊染色方法诊断结核性脑膜炎(结脑)、化脓性脑膜炎(化脑)和隐球菌性脑膜炎(隐脑)的临床价值.方法 对三种疾病共179例患者脑脊液细胞学资料进行回顾性分析.所有病例均进行脑脊液细胞学MGG染色、阿立新兰染色和墨汁染色的动态观察,70例结脑同时应用免疫荧光和免疫细胞化学方法进行结核抗原的检测.结果 ①结脑特征性的细胞学表现为混合细胞反应.早期嗜中性粒细胞比例可达80%以上,随治疗逐渐下降,1～2个月后以淋巴样细胞反应为主.免疫荧光法和免疫细胞化学法检测脑脊液单核细胞内结核抗原,敏感性分别为82.9%和85.7%.②化脑急性期脑脊液中以嗜中性粒细胞为主,抗生素治疗后迅速下降.③MGG染色、阿立新兰染色和涂片墨汁染色诊断隐脑的阳性率分别为83.3%、81.8%和76.5%.结论 脑脊液细胞学的动态观察联合应用特殊染色方法,可大大提高颅内感染性疾病的诊断和鉴别诊断,并对治疗及预后判断有指导意义.     

强脉冲光治疗鲜红斑痣临床观察

目的 观察强脉冲光治疗鲜红斑痣的疗效.方法 190例鲜红斑痣患者,随机分为治疗组和对照组,治疗组用585 nm强脉冲光治疗,每4周治疗1次,5次为1个疗程;对照组采用波长为595 nm脉冲染料激光治疗,每4周治疗1次,5次为1个疗程.观察两组皮损的治愈率、并发症等情况,并行统计学处理.结果 治疗组炎症性色素沉着发生率明显低于对照组(P<0.05).结论 强脉冲光是一种安全、有效的治疗鲜红斑痣的方法.     

肥大细胞增生症临床病理学观察

目的 探讨肥大细胞增生症的临床病理学特点及诊断.方法 对2例肥大细胞增生症进行临床资料分析、病理形态学观察、免疫表型和特殊染色检测.结果 例1女婴,出生3个小时,出生时全身弥漫性皮疹,临床取腹部皮肤皮疹活检.例2男性,47岁,间断性腹泻7年,体检发现肝脾肿大,临床先后行结肠镜活检、骨髓穿刺活检和肝穿刺活检.组织形态学表现:例1皮肤真皮内有片状单核样细胞浸润.例2结肠黏膜内、骨髓内、肝窦及汇管区内见片状形态较一致的单核样细胞浸润,胞质较丰富,呈细颗粒状.免疫组化显示CD117和CD68(+),CD3、CD20、CD25、CD30、S-100和MPO(-).甲苯胺蓝染色细胞胞质内见紫蓝色颗粒.结论 肥大细胞增生症易误诊为其他白血病/淋巴瘤,以消化道症状为首发时常被误诊为炎症性肠病.利用特殊染色和免疫表型来证实肥大细胞对确定诊断十分重要.     

不同清洗方法对血渍干涸器械清洗质量的对比

目的 探讨医院血渍干涸器械有效的清洗方法,以提高清洗质量,保证灭菌效果。方法 选择人工血液污染的金属器械1 800件,分为三组,每组齿牙器械500件,管腔类器械100件,分别接受直接机洗（常规组）、酶泡加机洗（试验A组）、酶液超声加机洗（试验B组）进行清洗,评价清洁合格率并进行对比。结果 目测显示：常规组、试验A组、试验B组的合格率分别为66.17%、86.83%、100.00%;放大镜检测：常规组、试验A组、试验B组的合格率分别为60.17%、82.33%、100.00%;潜血检测：常规组、试验A组、试验B组的合格率分别为60.00%、81.67%、100.00%,三组两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 酶液超声加机洗的器械清洗方法的清洁效果明显优于其他两种方法。     

中药溻渍应用于恢复期脑卒中上肢痉挛偏瘫患者中的效果观察

目的 恢复期脑卒中上肢痉挛偏瘫患者应用中药溻渍对上肢肌张力及血清神经递质水平的影响.方法 选取开封市中医院2018年9月至2021年2月收治的107例恢复期脑卒中上肢痉挛偏瘫患者,以掷币法分组.对照组53例给予常规干预,观察组54例增加中药溻渍干预.对比两组患者上肢痉挛缓解程度、上肢运动功能、血清神经递质.结果 研究组...     

中药塌渍防渗包的设计与应用

正中药塌渍是一种传统的中药外治方法,多用于治疗腰椎间盘突出症、颈椎病、风湿病、类风湿性关节炎等~([1])。中药塌渍治疗时,将药垫浸透药液,湿敷在治疗部位,通过红外灯照射,利用热力经皮透入吸收,达到治疗的效果。目前,临床上的药垫多采用柔绵材料(如:纱布等)制作,虽具有柔韧、亲肤、吸水量大等优点,但在塌渍治疗过程中,一方面药液会从药垫四周渗     

染色体检查在恶性胸腔积液诊断中的价值

目的探讨染色体检查在胸腔积液鉴别诊断中的价值。方法采用常规染色体定性检查和流式细胞术(FCM)DNA定量分析两种方法检查胸腔积液中的染色体，并进行比较。结果常规染色体检查对恶性胸腔积液诊断的特异性为98．2％，敏感性为88．9％；FCM法特异性为100％，敏感性为93．8％；二者联合的特异性为100％，敏感性为86．4％。结论常规染色体检查和FCM DNA定量分析两种方法联合检查对胸腔积液的鉴别诊断提供了可靠的诊断依据。