PM_(2.5)对人脐静脉血管内皮细胞的损伤及黄芩苷的干预作用

目的探讨PM_(2.5)对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的影响及黄芩苷的保护作用及机制。方法于2015年3月采集广州城区雾霾天气时的大气PM_(2.5),以不同质量浓度(0、50、200、400μg/ml)染毒EA.hy926细胞24 h,检测细胞存活率、凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞内p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达。另外分别以黄芩苷(15、30、60μg/ml)和p38 MAPK通路特异性阻滞剂SB203580 20μmol/L预处理细胞,再加入200μg/ml PM_(2.5)染毒24 h,检测上述指标,探讨黄芩苷的干预作用及机制。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒后可降低EA.hy926细胞存活率和SOD活力,增加MDA含量及LDH活力,上调p-p38 MAPK蛋白表达及Bax/Bcl-2蛋白,差异均有统计学意义(P0.05);黄芩苷干预可增加EA.hy926细胞存活率和SOD活力,降低MDA含量及LDH活力,下调p-p38 MAPK蛋白表达及Bax/Bcl-2蛋白,差异均有统计学意义(P0.05)。结论黄芩苷可通过抑制p38 MAPK通路,减轻PM_(2.5)对EA.hy926细胞的损伤。     

p38MAPK信号通路抑制剂对TNF-α诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响。方法 TNF-α处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,Western blot检测细胞中p38MAPK信号通路激活情况。p38MAPK信号通路阻断剂SB203580和TNF-α同时处理MDA-MB-231细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、Bid、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果 TNF-α作用后的MDA-MB-231细胞中p-p38MAPK/p38MAPK蛋白水平由(0. 25±0. 03)升高至(0. 80±0. 07),两者比较差异有统计学意义(P<0. 05)。TNF-α处理后MDA-MB-231细胞凋亡率由(2. 28±0. 47)%升高至(19. 56±1. 33)%,SB203580处理后细胞凋亡率降低至(12. 14±1. 12)%。TNF-α处理后细胞中Bax和Bid水平明显升高,ROS水平升高,而SB203580处理后细胞中Bax、Bid水平和ROS水平有所降低,与对照MDA-MB-231细胞相比差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 TNF-α诱导Bid、Bax介导的乳腺癌细胞凋亡,提高细胞中ROS水平,p38MAPK信号通路抑制剂可以减弱TNF-α的上述作用。     

左卡尼汀对过氧化氢诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的影响

目的研究左卡尼汀(L-Ca)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人脐静脉内皮(EA.hy926)细胞氧化应激损伤的影响,为探讨L-Ca的心血管保护作用提供理论和实验依据。方法采用750μmol/L H_2O_2作用12 h建立血管内皮细胞氧化应激损伤模型。实验共分为5组:对照组、模型组(H_2O_2组)及L-Ca低、中、高剂量(0.5、1、2 mmol/L)干预组。采用CCK-8法检测细胞活力,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况,运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡水平,qRT-PCR法分析Caspase-9、Caspase-3 mRNA转录水平;用Western blot法对Bcl-2、Bax及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平进行分析。采用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析和LSD-t检验。结果与对照组相比,模型组细胞活力较低,上清液LDH含量、细胞凋亡率较高,Caspase-9、Caspase-3 mRNA及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平较高,Bcl-2/Bax蛋白比值较低;与模型组相比,L-Ca低、中、高剂量组细胞活力均明显升高,上清液LDH含量、细胞凋亡率均显著降低,Caspase-9、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显下降,Bcl-2/Bax比值均升高,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平均降低,且均有剂量依赖关系,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 L-Ca能够减轻H_2O_2对血管内皮细胞损伤,提高细胞活力,减少细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-9和Caspase-3级联反应,上调Bcl-2/Bax蛋白比值有关。     

纳米氧化锌对小胶质瘤BV2细胞炎症因子及p38MAPK蛋白磷酸化的影响

[目的]探讨纳米氧化锌(zinc oxide nanoparticle,nano-Zn O)对小胶质瘤BV2细胞炎症因子及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化的影响。[方法]不同质量浓度nano-Zn O(0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0、50.0、75.0 mg/L)染毒小胶质瘤BV2细胞24 h,用MTT法测定细胞存活率后确定染毒剂量。以nano-Zn O(0、5.0、10.0、15.0、20.0 mg/L)染毒BV2细胞24 h,采用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞培养液上清液中LDH活性,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌水平,Western blot法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平并用Image J软件对蛋白条带灰度值进行分析。应用Spearman相关分析炎症因子分泌与p38MAPK蛋白磷酸化水平的相关性。[结果]随nano-Zn O染毒剂量的增加,BV2细胞存活率降低(r=-0.994,P0.001),细胞培养液上清液中LDH活性增加(r=0.749,P0.001)。与对照组相比,10.0、15.0、20.0 mg/L nano-Zn O染毒组TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平增加(均Ps0.05)。Western blot检测结果发现各染毒组p-p38MAPK蛋白表达水平增高,且与炎症因子分泌水平的变化趋势一致(r TNF-α=0.836,P0.001;r IL-6=0.539,P0.001;r IL-1β=0.659,P=0.008);20.0 mg/L nano-Zn O染毒组p-p38MAPK与p38MAPK灰度值的比值较对照组高,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]nano-Zn O可诱导BV2细胞炎症因子分泌水平和p38MAPK蛋白磷酸化水平增高。     

PM2.5致大鼠肾脏氧化损伤效应研究

目的通过建立大鼠PM_(2.5)经呼吸道亚慢性染毒模型,探讨PM_(2.5)对大鼠肾脏的氧化损伤效应。方法将SPF级雄性大鼠20只随机分为对照组(生理盐水)和PM_(2.5)染毒组(染毒剂量10 mg/kg),每组10只。采用气管注入法染毒,每周1次,连续染毒24周。采用试剂盒测定肾脏丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用免疫组织化学方法检测肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达水平,采用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,采用HE染色对肾组织进行病理形态学检测。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏SOD及GSH-Px活力均降低,MDA含量升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。TUNEL检测结果显示,PM_(2.5)染毒组肾脏细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);PM_(2.5)染毒组肾脏出现明显的病理形态学改变。结论 PM_(2.5)可致大鼠肾脏发生明显的氧化损伤效应。     

石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

草苁蓉环烯醚萜苷对肝癌抑制作用

目的探讨草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法 Wistar雄性大鼠随机分为对照组和模型组、5–氟尿嘧啶(5-FU)组、IGBR组,除对照组外,其余大鼠第1天给予腹腔注射DEN 200 mg/kg 1次,自由饮用0.05%的DEN水溶液;5-FU组大鼠腹腔注射25 mg/kg 5-FU,每周3次;IGBR组大鼠灌胃500 mg/kg IGBR每日1次。实验第12、20、28周末分批处死动物,TUNEL法检测肝细胞凋亡,Western blot法检测肝组织中Bax、Bcl-2和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肝细胞凋亡指数[(12.3±0.4)%]明显升高;与模型组比较,5-FU组与IGBR组大鼠肝细胞凋亡指数[分别为(22.3±0.2)%、(22.2±0.1)%]明显升高(P0.05),5-FU组与IGBR组之间差异无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,模型组大鼠肝组织中p-ERK、p-Akt表达水平下降、p-JNK、p-p38表达水平升高,ERK、p38、JNK、Akt表达无显明变化;与模型组比较,5-FU组与IGBR组大鼠肝组织中Bcl-2和p-ERK、p-Akt表达水平下降,Bax和p-JNK、p-p38表达水平升高。结论 IGBR可通过MAPK、PI3K/Akt信号通路,调节Bax和Bcl-2表达,诱发DEN大鼠肝癌细胞凋亡。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

PM_(2.5)对支气管上皮细胞凋亡基因表达水平的影响

目的探讨PM_(2.5)对支气管上皮(HBE)细胞凋亡基因表达的影响。方法用PM_(2.5)低剂量10μg/m L和高剂量50μg/mL对HBE细胞染毒,用未染毒的细胞作为对照组,10μg/mL的Cr~(6+)为阳性对照组,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)检测凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平变化情况,Western blot检测凋亡基因的蛋白质表达变化情况。结果 qRT-PCR结果显示,与对照组比较,PM_(2.5)10μg/mL和50μg/mL染毒以及阳性对照组染毒后,Caspase-3基因表达量分别升高193.0%、340.0%、214.0%,Caspase-8基因表达分别升高50.0%、84.0%、71.0%,Caspase-9基因表达分别升高94.0%、177.0%、117.0%,Bax基因表达分别升高8.0%、38.0%、57.0%,Bcl-2基因表达水平分别下降26.0%、46.0%、57.0%。Western blot结果显示,与对照组比较,Caspase-3蛋白在PM_(2.5)10μg/mL和50μg/mL染毒和Cr6+染毒后表达水平分别升高22.4%、48.6%、21.8%,Caspase-8蛋白表达水平分别升高54.7%、77.8%、64.3%,Caspase-9蛋白表达水平分别升高16.1%、82.7%、25.1%,Bax蛋白表达水平分别升高54.7%、90.4%、42.8%,Bcl-2蛋白表达量分别下降20.5%、41.8%、27.6%。结论 PM_(2.5)染毒引起HBE细胞中凋亡基因表达升高,抑凋亡基因表达下降,提示雾霾对凋亡基因表达水平具有明显影响。     

原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨原花青素在拮抗镍诱导肝细胞凋亡中发挥的作用及可能的调控机制。方法选择健康Wistar雄性大鼠40只,每组8只,硫酸镍模型组给予硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒及生理盐水灌胃处理,原花青素干预组在用硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒的同时,给予原花青素水溶液1.25、2.50、5.00mg/kg等容积灌胃处理,1次/d,连续30d。采用Western Blot技术检测各组大鼠肝脏细胞中Caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果原花青素可拮抗硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞中Caspase-3的活化,并引起Bcl-2蛋白表达量的增强及Bax蛋白表达量的减弱,且Bax/Bcl-2比值随着原花青素干预剂量的增加呈下降趋势,其中原花青素1.25mg/kg剂量组Pro-Caspase-3活性、5.00mg/kg剂量组Cleaved-Caspase-3活性与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);原花青素1.25mg/kg剂量组Bcl-2蛋白表达量、1.25和5.00mg/kg剂量组Bax/Bcl-2比值与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原花青素可拮抗硫酸镍诱导的大鼠肝脏细胞凋亡,其机制可能与拮抗Caspase-3蛋白活化、并抑制Bcl-2蛋白表达的下调和Bax蛋白表达上调有关。     

芒柄花黄素诱导膀胱癌细胞凋亡作用

目的探讨芒柄花黄素诱导膀胱癌细胞凋亡的作用及机制。方法采用不同浓度(20、40、80μmol/L)芒柄花黄素处理膀胱癌细胞,采用噻唑蓝法观察芒柄花黄素对膀胱癌T-24和BIU-87细胞的增殖的抑制作用,使用流式细胞术及Hoechst 33258染色检测T-24和BIU-87细胞凋亡率,采用RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2 mRNA表达;western blot检测T-24细胞p-p38蛋白激酶、Bcl-2蛋白含量变化。结果与对照组比较,40、80μmol/L芒柄花黄素组T-24和BIU-87细胞增殖率下降、细胞凋亡率明显升高,Hoechst33258染色显示T-24细胞呈凋亡状态;40、80μmol/L芒柄花黄素组T-24细胞Bcl-2 mRNA表达水平[(0.701±0.029)、(0.408±0.036)]均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,20、40、80μmol/L芒柄花黄素组T-24细胞p-p38蛋白激酶活性水平[(0.483±0.026)、(0.569±0.031)、(0.935±0.037)]均升高,Bcl-2蛋白含量[(0.998±0.034)、(0.591±0.030)、(0.426±0.027)]均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论芒柄花黄素可诱导膀胱癌T-24和BIU-87细胞凋亡、抑制细胞生长,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达并活化p38蛋白激酶有关。     

铝致大鼠海马神经细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

[目的]探讨铝对大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。[方法]健康雄性SD大鼠40只,按体重随机分为4组:生理盐水组(对照组)、Al3+2.5mg/kg组、Al3+5mg/kg组、Al3+10mg/kg组。AlCl3溶液腹腔注射染毒,60d后处死,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法测Bcl-2、Bax的表达,并用图像分析系统进行结果分析。[结果]随着染铝剂量的增高,大鼠海马神经细胞凋亡指数升高,存在剂量-效应关系(P<0.05)。各染铝组Bcl-2表达下降,Bax表达显著升高,Bcl-2/Bax逐渐下降,存在剂量-效应关系(P<0.05);海马神经细胞凋亡指数与Bcl-2呈负相关(r=一0.924,P<0.01),与Bax呈正相关(r=0.804,P<0.01),与Bcl-2/Bax表达比值呈负相关(r=-0.872,P<0.01)。[结论]铝可以诱导大鼠海马神经细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调,Bax表达上调以及Bcl-2/Bax表达比值下降有关。     

亚砷酸钠对人正常肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人正常肝(L-02)细胞凋亡及Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达的影响。方法将L-02肝细胞分别暴露于含0(对照)、50、100、150μmol/L亚砷酸钠的培养基中暴露24 h。采用MTT法检测L-02肝细胞的存活率,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率,采用RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2 m RNA相对表达情况,采用Westernblotting方法检测L-02肝细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均较低,凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率上升趋势。与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞中Bcl-2、Bax m RNA和蛋白的表达水平均较高,100μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值也较高,而150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值及50、150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2蛋白/Bax蛋白值均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可抑制L-02肝细胞的生长,诱导细胞凋亡的发生;其机制可能与Bcl-2家族的激活有关。     

姜黄素对高糖诱导的INS-1细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对高糖诱导的INS-1胰岛β细胞凋亡的作用,探讨其抗糖尿病作用的可能机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电子显微镜观察INS-1细胞的形态学变化;采用激光共聚焦和流式细胞术检测INS-1细胞线粒体膜电位的变化;用Western blotting法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量。结果姜黄素浓度为10μmol/L抗凋亡作用效果最为明显(P0.05)。与正常组相比,模型组INS-1细胞凋亡率明显升高(P0.05),形态发生改变,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05),Bax蛋白表达明显升高(P0.05),Bcl-2/Bax比值降低。与模型组比较,姜黄素改善凋亡的INS-1细胞的形态,提高线粒体膜电位,降低Bax蛋白表达(P0.05),增加Bcl-2蛋白表达(P0.05),Bcl-2/Bax比值升高。结论姜黄素改善高糖诱导的INS-1细胞凋亡状态,其抗凋亡机制与线粒体途径有关。     

黄芩苷对呼吸道合胞病毒感染的Hep-2细胞凋亡和炎性因子表达的影响

目的 探讨黄芩苷对呼吸道合胞病毒感染的Hep-2细胞凋亡和炎性因子表达的影响。方法 使用呼吸道合胞病毒处理Hep-2细胞，记为感染组，以未经呼吸道合胞病毒处理Hep-2细胞作为对照组。采用黄芩苷浓度为12.5、25、50μmol/L处理感染的Hep-2细胞，记为低剂量组、中剂量组、高剂量组。检测细胞增殖和细胞凋亡；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-cas-3)、磷酸化的核因子-κB(p-NF-κB)、核因子-κB(NF-κB)、p-p38、p38蛋白表达；酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β表达。结果 与对照组相比，感染组细胞活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Cleaved-cas-3、Bax、p-NFκB、p-p38蛋白表达增加(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β表达增加(P<0.05)。与感染组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞活性、Bc...     

流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的:运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的凋亡作用.方法:运用流式细胞术检测细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:苦参素1mg/ml、2mg/ml作用24h后,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。     

维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响

目的探讨维生素 C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量 VC 预处理后,DON 对 HPBMC 凋亡及相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察 VC 预处理对 DON 引起的增殖抑制作用的影响。结果FCM 检测结果表明,终浓度为2000μg/L 的 DON 可诱导体外培养的 HPBMC 凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25μmol/L VC 预处理可明显抑制 DON 诱导的体外培养 HPBMC 凋亡(22.39±1.05)%,P<0.05,而100μmol/L VC 预处理则可明显增高 DON 诱导的 HPBMC 凋亡(36.07±2.92)%,P<0.05。Western blotting 分析结果表明,25μmol/L VC 预处理可明显降低 DON 诱导的HPBMC Bax 和 caspase-3蛋白高表达,同时使 DON 抑制的 Bcl-2蛋白表达明显升高。100μmol/L VC预处理可明显促进 DON 诱导的 Bax 和 Caspase-3蛋白的高表达,但对 DON 抑制的 Bcl-2表达无明显影响。不同剂量 VC(25μmol/L 和100μmol/L)预处理均可降低 DON 对 HPBMC 增殖的抑制作用(P<0.05),但不同剂量 VC 之间没有显著差异。结论 25μmol/L VC 预处理可一定程度地抑制DON 诱导的 HPBMC 亡及凋亡相关基因的异常表达,而100μmol/L VC 则促进 DON 诱导的HPBMC 凋亡。不同剂量 VC 预处理可以明显降低 DON 对 HPBMC 的增殖抑制作用。     

黄芪多糖通过PI3K/Akt途径抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡的机制研究

目的探讨黄芪多糖对小鼠胰岛βTC-6细胞中PI3K/Akt信号通路和棕榈酸诱导的细胞凋亡的影响及其机制。方法Western blotting检测黄芪多糖对βTC-6细胞中Akt磷酸化的影响;将βTC-6细胞随机分为对照组(不做任何处理)、PA组(给予0.5 mmol/L棕榈酸处理24 h)、PA+APS组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸和0.1 g/L黄芪多糖作用24 h)和PA+APS+LY组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸、0.1 g/L黄芪多糖和50μmol/L LY294002作用24 h),MTT法检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果黄芪多糖能够呈剂量-时间依赖性诱导βTC-6细胞中Akt磷酸化。与对照组相比,PA组、PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05);与PA组相比,PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05);且PA+APS+LY组的变化幅度明显低于PA+APS组。结论黄芪多糖可通过激活PI3K/Akt信号通路,上调GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和下调Bax表达,进而抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡。[营养学报,2019,41(3):265-269]     

PM2.5对小鼠肺成纤维细胞的毒性研究

目的研究空气细颗粒物(PM2.5)对小鼠肺成纤维细胞(L929)的毒性作用。方法采用CCK-8法检测PM2.5暴露对细胞活性的影响,将L929细胞分别用0、10、20、50、100μg/ml浓度的PM2.5染毒24小时后进行CCK-8法分析;分别使用微量丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒检测细胞氧化损伤的生物学指标;采用流式细胞仪和Western Blot分析经PM2.5染毒后L929细胞的凋亡程度。结果经实验发现,与对照组相比,PM2.5染毒组细胞存活率明显下降,MDA含量升高、LDH活性增加,SOD和GSH-PX酶活性下降(P0.05),并且Caspase-3和CHOP蛋白的表达上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高,细胞凋亡率增加。结论 PM2.5可导致L929细胞活性下降,引起细胞氧化损伤,并且诱导细胞凋亡。