利什曼原虫核酸疫苗的研究现状

核酸疫苗(ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＶａｃｃｉｎｅｓ)包括ＤＮＡ疫苗和ＲＮＡ疫苗,但目前研究最多的是ＤＮＡ疫苗(ＤＮＡｖａｃｃｉｎｅ)。ＤＮＡ疫苗是指将编码某种抗原蛋白的外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组的质粒ＤＮＡ直接注射到动物体内,从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答。核酸疫苗又称为基因疫苗或裸ＤＮＡ疫苗,这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、ＤＮＡ介导的免疫及遗传免疫等。1　核酸疫苗的作用机理核酸疫苗的免疫学机理尚不完全清楚,目前初步研究认为编码目的基因的质粒Ｄ…     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的特异性检测

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)是一种具有独特结构的嗜肝病毒。ＨＢＶ感染发生后 ,病毒被转运到肝细胞核 ,并在核内从松弛环状ＤＮＡ(ＲＣＤＮＡ)转化为共价闭合环状ＤＮＡ(ｃｃｃＤＮＡ) ,并以ｃｃｃＤＮＡ为模板开始一系列的病毒复制过程 ,因此ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ的存在是ＨＢＶ复制的一个重要指标。ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ的检测为了解病毒复制状态 ,特别是评价抗病毒药物的效果 ,具有重要的意义。本文介绍应用ＰＣＲ方法 ,特异性检测ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ的技术。材料与方法一、引物设计与合成在血循环中 ,ＨＢＶ基因组为松弛型、环状和不完全双链的…     

错配修复基因hMSH2与突变p53在散发性消化道肿瘤中的表达

人类ＤＮＡ错配修复系统 (ｍｉｓｍａｔｃｈｒｅｐａｉｒｓｙｓｔｅｍ ,ＭＭＲ )是由一系列特异性修复ＤＮＡ碱基错配的酶分子组成 ,此系统的存在 ,能避免遗传物质产生突变 ,保证ＤＮＡ复制的高保真度[1] 。ｈＭＳＨ2是目前研究较广泛的ＤＮＡ错配修复基因 ,它的失活可导致ＤＮＡ错配修复能力的降低 ,引起微卫星不稳定性 (ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ ,ＭＳＩ) ,可使癌基因激活或抑癌基因失活 ,诱发细胞癌变[2 ] 。我们对 30例散发性消化道肿瘤ＤＮＡ上ｈＭＳＨ2基因与肿瘤组织中突变ｐ5 3的表达进行研究 ,以探讨ｈ…     

慢性乙型肝炎的治疗

慢性ＨＢＶ感染的治疗策略主要是在出现不可逆性肝损害前抑制ＨＢＶ复制。近 5年已有许多新的抗病毒药和免疫调节疗法进入临床试验 ,其中拉米夫定已被许多国家批准使用。一、抗病毒药和ｃｃｃＤＮＡ在ＨＢＶ持续感染中的作用许多新的抗病毒药可迅速降低血清ＨＢＶＤＮＡ水平 ,但短期 (3～ 6个月 )治疗后的ＨＢｅＡｇ清除率很低 ,其原因是肝细胞核中存在共价闭合环状ＨＢＶＤＮＡ(ｃｃｃＤＮＡ) ,它是前基因ＲＮＡ和ＨＢＶｍＲＮＡ的转录模板 ,由于大多数抗病毒药对ｃｃｃＤＮＡ不起作用 ,所以停药后血清ＨＢＶＤＮＡ很快复现。理论上 ,药物…     

慢性乙型肝炎的中西医结合治疗

多年来 ,对慢性乙型肝炎的治疗研究 ,虽然至今尚无特效药物 ,但还是取得了很大进展 ,尤其是中西医结合治疗 ,很具有特色和优势。1　西医治疗目前对慢性乙型肝炎的治疗 ,主要是抗病毒、调节免疫、改善肝功能和抗肝纤维化等。由于其发病机制是ＨＢＶ的感染在肝细胞内持续复制和表达 ,诱发机体免疫应答造成肝的炎症损伤 ,所以此病的根本治疗 ,在于抗病毒和调节免疫功能以达到清除ＨＢＶ。从ＨＢＶ复制和表达的过程来看 ,ＨＢＶＤＮＡ进入细胞核内变为共价闭合环状ＤＮＡ(ｃｃｃＤＮＡ) ,是ＨＢＶ复制的原始模板 ,所以清除ｃｃｃＤＮＡ最为重要 …     

乙型肝炎病毒cccDNA研究现状

目前 ,将嗜肝ＤＮＡ病毒科分为两个属 :正嗜肝ＤＮＡ病毒属 (人乙型肝炎病毒、土拨鼠肝炎病毒、地松鼠肝炎病毒 )、禽嗜肝ＤＮＡ病毒属 (鸭乙型肝炎病毒 )。以人乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)为例 ,其基因组ＤＮＡ是双链松弛环状分子 (ｒｅｌａｘｅｄｃｉｒｃｕｌａｒＤＮＡ ,ｒｃＤＮＡ) ,其相对分子质量为 ( 1 .6～ 2 .0 )×1 0 9,相当于 32 0 0ｂｐ。其双链ＤＮＡ是不对称的 ,一条为长链 ,另一条为短链。长链为负链 ,具有固定长度 ,约 3.2ｋｂ。短链为正链 ,具有可变的长度 ,为 5 0 %～ 99%长链的长度。两链ＤＮＡ通过 5′端2 5 0～ 30 0个互补…     

小鼠HCV皮下移植瘤的建立及使用DNA疫苗的治疗作用

建立小鼠丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)皮下移植瘤 ,并以其为ＨＣＶ感染动物模型 ,观察ＨＣＶ核心 (Ｃ)基因ＤＮＡ疫苗 ( ｐｃＤＮＡ ＨＣＶ Ｃ)在体内对ＨＣＶ感染的治疗作用。将 ｐｃＤＮＡ ＨＣＶ Ｃ用脂质体 (Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ)法转染ＢＡＬＢ/ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ2 /0 (Ｈ 2 ｄ)细胞 ,经Ｇ4 18筛选获稳定表达ＨＣＶＣ抗原之后 ,以 5× 10 5个细胞 /10 0 μｌ注射ＢＡＬＢ/ｃ小鼠右肋皮下 ,3ｄ后 30只试验小鼠分成 3组 ,即 :生理盐水对照组、ｐｃＤＮＡ3对照组和 ｐｃＤＮＡ ＨＣＶ Ｃ治疗组。观察并记录成瘤时间、肿瘤大小及小鼠存活时…     

热处理对人肝癌细胞HepG2基因表达谱的影响

肿瘤的热疗已成为近年来肿瘤治疗学的一个热点[1] 。为了从基因水平上深入研究热杀灭细胞机制 ,本文应用基因点数为 12 5 5 0的人类基因表达谱芯片 ,筛查经热处理的人肝癌细胞ＨｅｐＧ2 出现表达变化的基因 ,探索这些基因的变化与热杀伤肿瘤细胞的内在联系与规律 ,为肿瘤的热疗提供分子生物学依据。一、材料与方法1.主要试剂及设备 :Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒、Ｔ7 (Ｔ) 2 4引物、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔⅡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ、ＤＮＡｌｉｇａｓｅ、ＤＮＡ多聚酶Ⅰ、ＲＮＡ酶Ｈ(Ｇｉｂｃｏ) ;ＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔＴ7ＩｎＶ…     

HBsAg阴性/抗-HBc阳性供血员抗-HBc IgM和HBV DNA血清流行病学调查

了解ＨＢｓＡｇ阴性、抗 ＨＢｃ阳性供血员ＨＢＶ感染状况 ,探讨改进供血员ＨＢＶ筛检标志。ＥＬＩＳＡ法检测 4 31名ＨＢｓＡｇ阴性供血员抗 ＨＢｃ ,阳性者检测抗 ＨＢｃＩｇＭ (ＥＬＩＳＡ法 ,Ｓ/Ｎ≥ 2 .1为阳性 )和ＨＢＶＤＮＡ(ＰＣＲ法 )。结果表明 ,196名 ( 4 5.5% )供血员抗 ＨＢｃ阳性 ,抗 ＨＢｃＩｇＭ和ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别为 32 .1% ( 63/ 196)和 14.8% ( 2 9/ 196) ,抗 ＨＢｃＩｇＭ阳性和阴性者ＨＢＶＤＮＡ检出率分别为 39.7% ( 2 5/ 63)和3.0 % ( 4 / 133) (Ｐ <0 .0 0 1) ,抗 ＨＢｃＩｇＭ和ＨＢＶＤＮＡ的阴阳…     

三大洲家蝇体内检出幽门螺杆菌DNA

大部分人幽门螺杆菌(Ｈｐ)感染的来源不明,一般认为是粪口和口口传播。本文作者研究显示在实验室条件控制下可使Ｈｐ在苍蝇体内移生,表明摄入被苍蝇排泄物污染的食物或由苍蝇直接污染粘膜表面均可导致Ｈｐ感染。本文作者研究出一种特异且敏感的ＰＣＲ方法,用以检出野生家蝇(Ｍｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａ)体内的Ｈｐ异柠檬酸盐脱氢酶(ｉｃｄ)ＤＮＡ。结果从乡村、农业区和都市区捕获的野生家蝇可检出ｉｃｄ基因,在北美、波兰和埃及的检出率分别为10/97组(每组5只家蝇)、8/14组和3/9组。家蝇可以从环境中获得Ｈｐ感染,因此该菌ＤＮＡ在家蝇消…     

荧光定量PCR检测血清HBV DNA910例临床分析

探讨ＨＢＶ标志与ＨＢＶ复制及ＨＢＶＤＮＡ的关系。选择单一ＨＢＶ感染者 867例及ＨＢＶ标志阴性者 4 3例为研究对象 ,采用荧光定量ＰＣＲ法检测患者血清中ＨＢＶＤＮＡ ,并比较ＨＢＶ标志不同模式与ＨＢＶＤＮＡ定量值之间的关系。结果表明 ,ＨＢＶＤＮＡ定量阳性者只出现于以下 3种ＨＢＶ标志模式中 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗 ＨＢｃ阳性 ,ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｅ阳性及抗 ＨＢｃ阳性和ＨＢｓＡｇ及抗 ＨＢｃ阳性 ,3种ＨＢＶ标志模式中ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别是 98.8% ( 32 3/ 32 7) ,16.2 % ( 57/ 351)和 39% ( 4 1/10 5) ,且这 3种…     

日本血吸虫（中国大陆株）磷酸丙糖异构酶DNA疫苗的研制及其保护性免疫的研

目的 研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶ＤＮＡ疫苗诱导Ｃ５７ＢＬ／６小 保护性免疫作用。方法 分别以ｐＵＣ１９－ＳｊＣＴＰＩ和ｐｃＤＮＡ１．１－ＩＬ－１２为模板设计引物。将ＰＣＲ扩增到的ＳｊＣＴＰＩ基因以及ＩＬ－１２的亚单位Ｐ３５和Ｐ４０基因克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ．３．１中大量制备ｐｃＤ－ＮＡ３．１－ＳｊＣＴＰＩ和ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ３５、ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ４０的质粒ＤＮＡ,把４５只５～６周龄Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分成３组。对照组（ｐｃＤＮＡ组）肌肉注射１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１;实验组（ＴＰＩ组）肌肉注射１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１－ＳｊＣＴＰＩ;加强组（ＴＰＩ＋ＩＬ－１２组）肌肉注射１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１－ＳｊＣＴＰＩ及１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ３５和ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ４０的混合物     

结核分支杆菌Hsp70和Hsp 65 DNA疫苗免疫原性比较研究

分支杆菌热休克蛋白 (Ｈｓｐ)既有增强免疫应答的作用 ,又保持了分支杆菌本身的抗原特性。我们采用分子生物学技术 ,将结核分支杆菌Ｈｓｐ70基因克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ3中 ,构成裸露ＤＮＡ疫苗 (ＤＮＡ70 )。采用英国Ｌｏｗｒｉｅ教授赠送的Ｈｓｐ65ＤＮＡ疫苗和本室构建的Ｈｓｐ70ＤＮＡ疫苗免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,然后观察其对小鼠免疫应答的影响 ,探讨两种疫苗的抗感染机制及比较两种疫苗的免疫原性。材料与方法　雄性ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,购自本校实验动物学部 ;ＲＰＭＩ 164 0购于美国Ｓｉｇｍａ公司 ;白细胞介素 2 (ＩＬ 2 )和γ干…     

单项抗-HBc阳性无症状HBV携带者的肝组织损伤研究

为了探讨单项抗 ＨＢｃ阳性无症状ＨＢＶ携带者的肝组织病理改变 ,对 4 6例单项抗 ＨＢｃ阳性、ＨＢＶＤＮＡ阳性和肝功能正常的患者做了肝组织学检查 ,并且用免疫组织化学方法检测了肝组织中的ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ。结果显示 ,肝组织正常者 8例 ( 17.4 % ) ,轻度慢性肝炎 35例 ( 76.1% ) ,中度慢性肝炎 3例 ( 6.5% ) ;肝组织中ＨＢｓＡｇ阳性 19例 ( 4 1.3% ) ,ＨＢｃＡｇ阳性 11例 ( 2 3.9% ) ,提示单项抗 ＨＢｃ阳性、ＨＢＶＤＮＡ阳性患者存在不同程度的肝组织学损伤 ,给予动态的医学观察是必要的。单项抗-HBc阳性无症状HBV携带…     

心肌缺血预适应诱导表达上调新基因MIP-1和HMIP-2的克隆和特性分析

热休克因子 1(ＨＳＦ 1)是调节热休克蛋白表达的主要转录因子 ,它和它所调控的热休克蛋白在细胞的内源性保护中发挥重要作用。本室和其他学者已观察到热休克因子能够抑制脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α和白细胞介素 1β等促炎基因的表达。本研究采用博星基因芯片公司生产的包含 80 0 0个基因的小鼠ｃＤＮＡ芯片 ,观察热休克 ( 41℃ 15ｍｉｎ)处理的热休克因子 1敲除小鼠内毒素血症时的基因表达谱的改变。结果发现有 2 2 0个基因在ＨＳＦ- - 小鼠表达上调 ,其中包括肿瘤坏死因子α、Ｓｃｙａ 7和单核细胞趋化蛋白 3等促炎基因 10个 ;有 160个基…     

幽门螺杆菌的分子生物学

幽门螺杆菌（Ｈｐ）及其相关疾病是近年来消化系疾病研究的一大缺点,其分子生物学研究日新月异,本对Ｈｐ基因组ＤＮＡ特征,ｖａｃＡ、ｃａｇＡ、ＰＡＩ、Ｕｒｅａｓｅ、ＩｃｅＡ等基因进行了系统综述,并介绍了Ｈｐ的基因分型方法及分子生物学研究在临床及流行病研究中的应用。     

巢式PCR证明肝癌细胞有HBV─DNA复制

目的研究肝癌细胞和癌旁组织ＨＢＶ＿ＤＮＡ复制状况。方法３２例手术肝癌标本作癌及癌旁组织巢式ＰＣＲ，用特制引物，目的基因为ＨＢＶ的ｃｃｃＤＮＡ。同时作ＨＢＡｇ免疫组化。结果５／３２（例）的肝癌组织，１０／３２的癌旁组织呈ｃｃｃＤＮＡ（＋）。阳性者其ＨＢＡｇ阳性率亦较高。结论首次证明肝癌细胞有ＨＢＶ复制模板－ｃｃｃＤＮＡ，是肝癌细胞有ＨＢＶ复制的可靠证据。     

朊毒体感染

人和动物的慢性中枢神经系统退行性疾病 ,如羊瘙痒症 (Ｓｃｒａｐｉｅ)、人克雅病 (Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ -ＪａｋｏｂＤｉｓｅａｓｅ ,ＣＪＤ)和库鲁病 (Ｋｕｒｕ)等的病因一直不明 ,曾有慢病毒、核蛋白复合物、膜结合ＤＮＡ等学说 ,但始终未能分离出病毒。美国加州大学旧金山医学院的ＳｔａｎｌｅｙＢ .Ｐｒｕｓｉｎｅｒ教授经过近 2 0年的研究 ,于 1982年提出ＣＪＤ的病原因子是一种蛋白质传染因子 (ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｐａｒｔｉｃｌｅ) ,并构建了Ｐｒｉｏｎ一词 ,指出这是一种不同于细菌、病毒、真菌和…     

415例HBV感染的不同血清学指标组合的HBVDNA的检测

了解ＨＢＶ感染的不同血清学指标组合的相应的ＨＢＶＤＮＡ阳性情况 ,以指导临床。对 4 15份不同肝病临床类型的血清同时行ＥＬＩＳＡ方法测定ＨＢＶ标志及普通ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果表明 ,ＨＢｓＡｇ阳性组ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 77.8% ( 2 70 /34 7) ,ＨＢｓＡｇ阴性组ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 19.1% ( 13/68) ,两者差异显著 (Ｐ <0 .0 0 1)。其中 153例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｃ阳性血清 ,ＨＢＶＤＮＡ全部阳性 ,阳性率为 10 0 %。ＨＢｓＡｇ阳性、抗 ＨＢｅ和抗 ＨＢｃ阳性组血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 66.9% ( 79/118)…     

乙型肝炎病毒S基因单独和联合白细胞介素-12诱导小鼠产生特异性免疫应答

核酸疫苗是用带有目的抗原基因的重组表达载体免疫动物,使目的抗原在体内持续表达,诱导机体产生特异性体液和细胞免疫应答[1]。我们用含乙型肝炎病毒表面抗原(ＨＢｓＡｇ)主蛋白编码基因的核酸疫苗单独或与白细胞介素12(ＩＬ12)联合免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠,检测小鼠的抗ＨＢｓ和ＨＢｓＡｇ特异性细胞毒活性。材料和方法一、核酸疫苗的制备和提纯将ＨＢＶ(ａｙｗ亚型)的Ｓ基因插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ3.1( )中,命名为ｐＳ,为本室构建并鉴定。将小鼠ＩＬ12基因插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ3.1( )中(Ｐ40和Ｐ35的编码序列以甘氨酸接头相连),命名…