p38丝裂原活化蛋白激酶对HBZY-1系膜细胞株表达NF-κB和MCP-1的调控

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)与NF-κB、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)之间的关系,从而研究p38MAPK和NF-κB、MCP-1在糖尿病肾病中的作用机制.方法 分别以高葡萄糖、高胰岛素、H2O2和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1;先以p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞株HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞株HBZY-1,观察其p38MAPK和NF-κB、MCP-1的表达.结果 高葡萄糖、高胰岛素、H2O2和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,NF-κB、MCP-1表达也明显增加;SB203580预处理后,NF-κB、MCP-1表达被显著抑制.结论 p38MAPK可能通过激活NF-κB、MCP-1而诱导糖尿病时肾脏的损害,p38MAPK和NF-κB、MCP-1在糖尿病肾病的发生发展过程中可能起重要作用.     

p38 MAPK信号转导通路参与NO诱导兔关节软骨细胞凋亡

目的探讨p38 MAPK信号转导通路在软骨细胞凋亡中的作用。方法体外培养兔关节软骨细胞,一氧化氮(NO)供体NOC-18和p38 MAPK抑制剂SB203580作用于细胞24 h,用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测软骨细胞凋亡率,W estern b lot测定p38、磷酸化p38蛋白的表达水平。结果与对照组比较,SB203580显著降低了NOC-18诱导的软骨细胞凋亡率(P<0.05);NOC-18以浓度依赖的方式促进p38 MAPK的磷酸化,而SB203580能抑制其磷酸化(P<0.05)。结论p38 MAPK通路参与了NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的信号转导。     

FKN影响动脉粥样硬化信号传导机制及G-蛋白在其中作用的研究

目的探讨鸟苷酸结合蛋白(G-蛋白)对fractalkine(FKN)诱导单个核细胞合成NF-κB、TNF-α的影响及FKN-CX3CR1可能存在的一条信号传导机制,并研究G-蛋白在其中的作用。方法抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。将每份提取的单个核细胞分为空白对照组、FKN组及百日咳毒素(PTX)组。应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平。结果(1)FKN诱导组较空白组NF-κB、TNF-α表达明显增多,G-蛋白阻断剂PTX组较FKN组NF-κB、TNF-α表达明显减少。结论(1)FKN-CX3CR1有促进动脉粥样硬化形成的作用,CX3CR1为G-蛋白偶联受体,FKN与CX3CR1结合以后,可以通过与G-蛋白偶联,启动细胞内信号传导机制。     

p38MAPK信号通路的抑制减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法心肌细胞H9C2分为对照组(Con组)、缺氧复氧组(H/R组)、p38MAPK信号通路抑制剂SB203580组(SB203580组),Con组细胞正常培养,H/R组、SB203580组进行缺氧复氧处理,SB203580组细胞在缺氧前用p38MAPK信号通路抑制剂SB203580预处理24 h。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用硫代巴比妥酸比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot检测细胞中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 H/R组、SB203580组细胞存活率低于Con组,凋亡率高于Con组,细胞中MDA、ROS含量高于Con组,培养液上清中LDH高于Con组,细胞中SOD含量低于Con组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平高于Con组。SB203580组细胞存活率高于H/R组,凋亡率低于H/R组,细胞中MDA、ROS含量低于H/R组,培养液上清中LDH低于H/R组,细胞中SOD含量高于H/R组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平低于H/R组。结论 p38MAPK信号通路抑制剂能够减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡和氧化损伤。     

地塞米松调节claudin-4减轻海水淹溺性肺水肿的机制研究

目的探讨地塞米松对海水淹溺性肺水肿的保护作用及其分子机制。方法采用气管内滴注海水的方法复制海水淹溺性肺损伤的大鼠模型,测定肺水肿的指标及肺组织中claudin-4、核转录因子-κB(NF-κB)、p38蛋白水平的表达;培养A549细胞,分别应用NF-κB抑制剂、p38抑制剂、糖皮质激素受体(GR)阻断剂(RU486)研究地塞米松改善海水淹溺性肺水肿的分子机制。结果吸入海水后肺水肿形成,海水可活化NF-κB及p38,同时下调claudin-4,地塞米松可缓解上述改变;应用PDC抑制NF-κB活化,并采用SB203580抑制p38活化可缓解海水诱导的claudin-4下调和单层细胞通透性的增高,应用RU486阻断GR后,地塞米松上调claudin-4的作用则大大降低。结论地塞米松可抑制海水诱导的NF-κB活化,缓解NF-κB活化介导的claudin-4表达下调及肺通透性增高,从而减轻海水淹溺性肺水肿。     

p38MAPK信号转导通路在EGF诱导食管腺癌SEG-1细胞表达u-PA中的作用

目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人食管腺癌SEG-1细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)mRNA和蛋白表达的影响及p38MAPK信号转导通路在其中的作用.方法:以相同浓度的EGF(100g/L)按时间梯度刺激SEG-1细胞,应用Western blot法测定各时间点总p38MAPK蛋白、磷酸化p38MAPK蛋白、u-PA蛋白表达,并应用RT-PCR方法检测各时间点u-PAmRNA表达.用p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞后,观察上述指标变化.结果:EGF可明显增强SEG-1细胞(u-PA)mRNA和蛋白的表达,并可激活p38MAPK蛋白的磷酸化,具有时间依赖性.SB203580能明显抑制EGF诱导的p38MAPK蛋白的磷酸化,用其阻断p38MAPK信号转导通路后,EGF对u-PAmRNA和蛋白表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性.结论:EGF可通过p38MAPK信号转导通路诱导SEG-1细胞表达u-PA.     

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法: 将p38特异性抑制剂SB203580(25 μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果: SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降（P<0.01）。结论: 阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。     

FKN、PI3K及NF-κB对单个核细胞TNF-α表达的影响

目的探讨不规则趋化因子Fractalkine（FKN）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、核因子κB（NF-κB）对单个核细胞（PBMC）TNF-α表达的影响,研究FKN促使TNF-α表达的信号转导机制。方法将用Ficoll密度梯度离心法分离的人外周血PBMC分为空白对照组、FKN组、FKN＋LY294002（PI3K抑制剂）组、FKN＋PDTC（NF-κB抑制剂）组和FKN＋卡托普利组,后三组在FKN诱导PBMC细胞前分别由LY294002、PDTC和卡托普利预处理。FKN诱导各组PBMC 24 h后,用ELISA法检测各组细胞培养液中的TNF-α表达。结果与对照组比较,FKN组TNF-α明显升高（P〈0.05）;与FKN组比较,FKN＋LY294002组、FKN＋PDTC组、FKN＋卡托普利组TNF-α明显降低（P均〈0.05）。结论FKN可刺激人外周血PBMC表达TNF-α,PI3K和NF-κB可能参与该过程中TNF-α表达,卡托普利可抑制FKN诱导的TNF-α表达。     

肿瘤坏死因子α调节人肝癌MHCC-97H细胞中白细胞介素8的分泌

目的 研究肿瘤坏死因子(TNF)α诱导人肝癌细胞系MHCC-97H分泌白细胞介素8(IL-8)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB (NF-κ B)信号通路对其的调节作用.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度的TNF α(0、1、5 ng/ml)干预人肝癌细胞MHCC-97H 24 h和相同浓度的TNFα(1 ng/ml)干预不同时间后,细胞上清液中IL-8的浓度; Western blot和免疫荧光方法检测TNFα(1 ng/ml)刺激MHCC-97H细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白的表达及其分布;非放射性NF-κ B p50/p65转录因子活性试剂盒检测TNFα干预MHCC-97H细胞后核蛋白中活性NF-κB p65蛋白的含量.多组均数比较采用单因素方差分析,多个样本均数间两两比较用q检验.结果 TNFα明显促进肝癌细胞分泌IL-8,具有显著的时间和浓度依赖性:TNFα干预0、6、12、18、24h,IL-8的浓度分别为(47.45±9.78)pg/ml、(497.41±52.83)pg/ml、(694.14±44.43)pg/ml、(909.35±97.22) pg/ml、(1093.59±75.72) pg/ml (F=144.04,P＜0.01);TNFα0、1、5、10 ng/ml干预24h,IL-8浓度分别为(47.45±9.12) pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml、(1372.77±85.10) pg/ml和(1614.55±153.52) pg/ml(F=364.14,P＜0.01).TNFα刺激肝癌细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白表达明显上调,给予p38 MAPK通路特异性抑制剂(SB203580)可以显著抑制TNFα诱导的IL-8的分泌(P值均＜0.01)且呈浓度依赖性(F=165.92,P＜0.01).免疫荧光结果显示TNFα促进肝癌细胞NF-κ B p65的核转位,且呈浓度依赖性(TNF α0、1、5、10 ng/ml处理肝癌细胞1h后细胞核蛋白表达NF-κ B p65对应吸光度值分别为0.52±0.04、2.75±0.15、3.13±0.18、3.81±0.14 (F=1266.42,P＜0.05),而SB203580则可以部分抑制NF-κB p65的核转位(F=141.20,P＜0.05).结论 TNFα通过p38 MAPK-NF-κB信号途径调节人肝癌细胞系MHCC-97分泌IL-8.     

软脂酸通过丝裂原活化蛋白激酶通路促进血管内皮细胞凋亡

目的探讨软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分对照组、PA组、MAPK通路干预组[分别先用p38抑制剂SB203580、氨基末端激酶(JNK)抑制剂PD98059、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂SP600125干预]再分为PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测caspase-3、磷酸化p38、JNK和ERK1/2表达水平;分光光度法检测caspase-3的活性。结果与对照组比较,PA组、PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组HUVEC凋亡及caspase-3表达和活性明显增加,PA组磷酸化p38MAPK表达明显增加(P<0.05)。与PA组比较,PA+SB组HUVEC细胞凋亡率、caspase-3表达和活性明显降低(P<0.05);而PA+PD组和PA+SP组HUVEC凋亡率、caspase-3表达和活性无明显变化(P>0.05)。结论 PA通过p38MAPK通路促进内皮细胞凋亡。     

联合应用p38MAPK抑制剂对降低结肠癌阿霉素耐药性的影响

目的:探讨p38 MAPK抑制剂通过Akt(蛋白激酶B)有关的信号途径对结肠癌细胞阿霉素(Doxorubicin)化疗敏感性的影响.方法:应用阿霉素(Dox)和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580及两者联合应用去处理结肠癌HCT-116细胞株.采用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测化疗药物对肿瘤细胞的生存抑制率,Western blot蛋白免疫印迹技术检测化疗药物处理后癌细胞Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果:MTT显示阿霉素和抑制剂SB203580对结肠癌细胞均有抑制作用(26.60%,33.87%),后者大于前者,两者相同用量联合后癌细胞抑制率更明显(56.04%).Western blot显带说明阿霉素处理组较联合组的Akt表达水平并无明显差异,而磷酸化的Akt水平较SB203580组和联合组显著升高.亦即抑制剂组和联合组方案可降低结肠癌细胞磷酸化Akt的表达水平.结论:p38 MAPK抑制剂SB203580可能通过阻断P13K/Akt信号途径或其他有关Akt的通路以提高结肠癌细胞阿霉素化疗的敏感性.     

p38MAPK抑制剂增强人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨p38 MAPK抑制剂通过蛋白激酶B(Akt)有关的信号途径对人宫颈癌细胞顺铂(CDDP)化疗敏感性的影响.方法 应用CDDP和p38MAPK特异性抑制剂SB203580及两者联合应用处理人宫颈癌Hela细胞株.采用MTT法检测化疗药物对肿瘤细胞的生存抑制率,Western印迹技术检测化疗药物处理后Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果 MTT显示CDDP和SB203580对人宫颈癌细胞均有抑制作用(24.34％,36.58％),两者相同用量联合后癌细胞抑制率更明显(58.76％).Western印迹结果说明CDDP处理组与联合处理组Akt表达水平无明显差异,而pAkt水平较SB203580组和联合组显著升高.结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可能通过阻断PI3K/Akt途径或其他有关Akt的通路提高人剧颈癌细胞CDDP化疗的敏感性.     

P38 MAPK信号通路在金黄色葡萄球菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡模型,探讨p38 MAPK信号转导通路在此凋亡过程中的作用。方法采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测金黄色葡萄球菌感染不同时间时U937细胞的凋亡率;利用Western blotting检测p38MAPK的磷酸化水平;预先用不同浓度的SB203580(p38 MAPK途径抑制剂)处理U937细胞,采用Annexin V FITC/PI双染分析感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果金黄色葡萄球菌可以诱导U937细胞凋亡,并且随着感染时间的延长,细胞凋亡率也逐渐增高。p38 MAPK在加入金黄色葡萄球菌15min后表达明显增高,30min时达高峰,随后,逐渐降低。总的p38 MAPK水平在整个实验期间内几乎无变化。用SB203580抑制p38 MAPK通路,引起抑制剂浓度依赖性的细胞凋亡率降低。结论金黄色葡萄球菌呈时间依赖性诱导U937细胞凋亡,p38 MAPK信号转导通路的激活在金黄色葡萄球菌诱导的U937细胞凋亡过程中起到了重要的作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶对急性坏死性胰腺炎大鼠低钙血症的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠低钙血症和甲状旁腺激素受体1(PTHR1)表达的影响.方法 将雄性SD大鼠72只按完全随机法分为ANP组、SB203580干预(SB)组和假手术(SO)组,每组分3、6、12 h 3个时间点,每个时间点8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型,SB组在造模前30 min腹腔注射p38MAPK特异抑制剂SB203580 10 mg/kg体重.观察各组血清钙浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)分析骨组织磷酸化p38MAPK(P-p38 MAPK)和TNF-α变化,实时RT-PCR检测骨组织PTHR1 mRNA表达.结果 制模后6 h,SO组、ANP组和SB组血清钙浓度分别为(2.50±0.08)mmoL/L、(2.11±0.06)mmol/L和(2.35±0.10)mmol/L;骨组织P-p38 MAPK表达量分别为0.14±0.04、0.80±0.06和0.33±0.05;骨组织TNF-α表达量分别为0、0.91±0.04和0.44±0.03;骨组织PTHR1 mRNA表达量分别为1.00±0.12、0.23±0.04和0.44±0.06.SB组骨组织P-p38 MAPK及TNF-α表达较ANP组显著降低(P＜0.01);骨组织PTHR1 mRNA表达量及血清钙浓度较ANP组显著增加(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路可介导ANP低钙血症的发生,抑制该通路可改善ANP低钙血症.     

安罗替尼通过NF-κB信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨安罗替尼通过核因子κB(NF-κB)信号通路对人脑胶质瘤细胞（T98G细胞）增殖、凋亡的影响。方法 体外培养T98G细胞,并将其随机分为对照组、5μmol/L安罗替尼组、10μmol/L安罗替尼组、20μmol/L安罗替尼组、阳性药物组、抑制剂组。对照组不予干预,5μmol/L安罗替尼组、10μmol/L安罗替尼组、20μmol/L安罗替尼组分别以5、10、20μmol/L安罗替尼进行干预,阳性药物组以50 mg/L的5-氟尿嘧啶进行干预,抑制剂组加入10μmol/L安罗替尼+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082进行干预。用CCK-8法检测细胞活力,用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷法测算细胞增殖率,用Hoechst33258染色法测算细胞凋亡率,用Western blotting法检测细胞增殖、凋亡相关蛋白与NF-κB信号通路相关蛋白[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(NF-κB p65)]表达。结果 与对照组比较,5μmol/L安罗替尼组细胞活力差异...     

FKN对外周血单个核细胞ERK1/2活化和TNF-α表达的影响及ERK1/2的临床作用

目的 探讨趋化因子(FKN)对单个核细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响及ERK1/2在其中的作用.方法 抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.将每份提取的单个核细胞分为3组:空白对照组、FKN组、FKN+PD98059(ERK特异性阻断剂)组;分别应用Western印迹法和酶联免疫法检测各组单个核细胞中磷酸化ERK1/2及TNF-α的表达水平.结果 FKN诱导组磷酸化的ERK1/2和TNF-α表达较空白组显著增多(P<0.05);PD98059组磷酸化的ERK1/2和TNF-α表达较FKN组显著减少(P<0.05).结论 FKN-CX3CR1可能通过增加单个核细胞磷酸化ERK1/2和TNF-α的表达而促进动脉粥样硬化的进展,FKN可能是通过ERK1/2途径诱导单个核细胞TNF-α的表达.     

蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞活力的影响及其机制

目的 研究蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂对胰腺癌细胞系PANC-1活力的影响及其机制.方法 用PP2A抑制剂斑蝥素和冈田酸处理PANC-1细胞.通过Western印迹检测核因子(NF) -κB通路的激活程度.通过转染PP2A活性亚基cα(PP2A cα)表达质粒、NF-κB抑制蛋白激酶(IKK)α和NF-κB抑制蛋白(IκB)α的显性负性突变体、p65干扰质粒,分别从各环节阻断NF-κB通路,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力.结果 PP2A抑制剂可使IKKa磷酸化,进一步使IκBa磷酸化并降解,继而释放p65入核.过表达PP2Acα、IKKα显性负性突变体、IκBα显性负性突变体或干扰p65可分别使斑蝥素对细胞活力的抑制率下降(31.85±13.37)％、(23.48±8.98)％、(22.63±5.81)％、(20.88±3.24)％,使冈田酸对细胞活力的抑制率下降(40.17±11.65)％、(27.34±14.28)％、(24.85±3.39)％、(27.08±3.81)％.结论 PP2A抑制剂通过PP2A/IKKα/IκBα/p65依赖性通路发挥抗胰腺癌作用.     

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。     

p38MAPK信号通路介导右美托咪定对缺氧/复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定(Dex)是否通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的保护作用。方法培养大鼠心肌细胞H9c2,随机分为空白对照组、H/R组、Dex预处理(Dex+H/R)组、抑制剂SB203580(H/R+SB)组和Dex预处理+SB203580(Dex+H/R+SB)组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量,分光光度计检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western印迹检测细胞中磷酸化(p)-p38MAPK、细胞色素(Cyt)C和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白水平。结果与H/R组比,Dex预处理可提高H9c2细胞活力,降低细胞凋亡率,下调LDH和CK的漏出量,减少MDA含量,上调SOD和GSH-Px活性,抑制p-p38MAPK、CytC和酶切Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580可明显增强Dex对H/R心肌细胞损伤的保护作用。结论 Dex可能通过p38MAPK信号通路抑制细胞中的氧化应激,下调CytC和酶切Caspase-3蛋白的表达,抑制H9c2细胞凋亡对H/R心肌细胞损伤的保护作用。     

慢性心力衰竭患者外周血单个核细胞核转录因子κB/p65的表达及白细胞介素-10的影响

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核转录因子κappaB(NF-κB)/p65的表达及白细胞介素-10(IL-10)的干预作用.方法对15例心力衰竭患者和15例健康对照者分离出的外周血单个核细胞进行培养,并将心力衰竭患者和健康对照者培养的外周血单个核细胞分成3组空白对照组、脂多糖(LPS)组和白细胞介素-10组,共培养24小时,对3组培养后的外周血单个核细胞NF-κB/p65的表达进行免疫组化染色检测和半定量分析.结果心力衰竭患者外周血单个核细胞NF-κB/p65胞核染色阳性率非常明显高于健康对照者[(22±8)%vs(9±2)%,P＜0.01].脂多糖组,心力衰竭患者和健康对照者外周血单个核细胞NF-κB/p65胞核染色阳性率与空白对照组比较均极显著增加(P＜0.01);而在白细胞介素-10组,心力衰竭患者和健康对照者外周血单个核细胞NF-κB/p65胞核染色阳性率与脂多糖组比较则极显著下降(P＜0.01).结论心力衰竭患者NF-κB/p65表达增高,而白细胞介素-10可下调脂多糖刺激下NF-κB/p65表达增高.