淋球菌mtr系统的IR区基因突变与其多重耐药性的关系

目的 探索多传递耐药(mtr)系统反向重复序列(IR)区基因突变与淋球菌染色体介导多重耐药性的关系。方法 琼脂稀释法做淋球菌药敏试验,选择耐不同药物的菌株,聚合酶链反应扩增包含IR区的目的基因,然后对扩增产物测序。结果 2株敏感株及5株仅耐青霉素菌株无IR区基因突变,17株多重耐药菌株中,1株同时耐青霉素和阿奇霉素的淋球菌有IR区碱基T/A,T/A插入,其余耐药株IR区均有碱基A/T缺失。结论 淋球菌染色体mtrR启动子区域的IR区基因突变会引起淋球菌多重耐药株的产生,增加淋球菌对抗生素的抗性。     

淋球菌对阿奇霉素耐药性与mtrR/mtrC基因变异的关联分析

目的探讨mtr系统若干基因变异与淋球菌对阿奇霉素耐药性的相关性。方法对临床分离的淋球菌阿奇霉素耐药性代表株mtrR基因序列及mtrR启动子区域回文结构序列的突变进行分析,使用荧光定量PCR技术对结构基因mtrC的表达水平进行测定。结果所有中等以上耐药菌株均发生mtrR基因H105Y的变异,伴随mtrR启动子区域回文结构的缺失突变;敏感株有一株出现G45D的突变,mtrR启动子区域回文结构未检测出突变;中等以上耐药菌株与敏感菌株相比mtrC基因表达有显著差异(P<0.05)。结论mtrR基因的H105Y变异和回文序列碱基缺失与mtrC表达有负向相关关系,与淋球菌阿奇霉素耐药性显著相关。     

淋球菌mtr外排系统研究进展

淋球菌多重耐药(mtr)外排系统控制着淋球菌对脂溶性因子(HAs)的耐受性。淋球菌的mtr基因系统包括mtr调控基因mtrR和mtrCDE基因复合物。mtrR基因编码的是一个转录抑制蛋白MtrR,调节mtrCDE基因的转录。mtrCDE基因复合物则分别编码淋球菌膜蛋白MtrC,MtrD,MtrE,组成的一个能量依赖型外排泵,能把HAs有效地排出细胞外。mtr基因系统中任何基因的突变、丢失、缺失或其编码蛋白结构的改变,都会影响淋球菌对HAs的耐受性。在转录水平上mtr系统对淋球菌的多重耐药性的调节分为两种机制,一种是mtrR依赖调节,另一种是非mtrR依赖调节,另外还存在有mtrA基因对其进行正向调控。     

淋球菌耐药性与耐药质粒的相关性研究

目的 探讨质粒在介导淋球菌耐药中的作用。方法 通过耐药质粒的接合、转化及消除试验,比较试验前后各菌株药物敏感性的改变。结果 耐药性淋球菌菌株通过耐药质粒的接合和转化,可将其耐药性传递给敏感的淋球菌菌株,而耐药质粒的消除可使耐药性淋球菌恢复对某些药物的敏感性。结论 质粒的介导在淋球菌耐药性的形成中起着重要作用。     

耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建及初步筛选

目的 克隆和研究耐药性淋球菌相关基因。方法 从耐药淋球菌株RSM292C4和淋球菌标准参考菌株WHO-A细胞中提取DNA,经RsaⅠ酶切后,应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌差异DNA消减文库并进行初步筛选。结果 耐药淋球菌差异DNA消减文库经扩增获得约2500个白色克隆,随机挑取96个白色克隆,进行PCR扩增鉴定,发现克隆中插有100~600bp大小的片段。分别以RsaI酶切样本和参照DNA为探针,与随机挑取的96个白色菌落质粒作点杂交,有5个克隆仅能与样本DNA探针杂交,而不能与参照DNA探针杂交,表明它们为RSM292C4基因组DNA所特有,可能代表某些淋球菌新基因。对这5个克隆插入的DNA片段进行测序,经送基因库和淋球菌基因组部分测序基因库检索分析,发现5个片段均为未知新序列。结论 淋球菌耐药菌株DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆淋球菌耐药的新基因奠定了基础。     

DNA芯片快速检测淋球菌gyrA基因突变

目的 研制一种新型DNA芯片,用于快速检测淋球菌gyrA基因突变。方法 根据淋球菌gyrA基因的序列信息设计探针并制作DNA芯片,PCR扩增并荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段,与芯片杂交,同时以测序法为对照。结果 50份泌尿生殖道拭子全部可用DNA芯片检测出来,芯片检测结果与药敏结果符合率为100%,与测序结果二者符合率为98%。结论 DNA芯片检测淋球菌gyrA基因突变具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床耐药性检测。     

1999-2002年南京地区淋球菌分离株抗生素敏感性监测

目的 监测南京地区淋球菌对抗生素的耐药性,报告1999-2002年的结果。方法 采用纸片酸度定量法测定菌株是否产β-内酰胺酶。采用琼脂稀释法测定青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素和头孢曲松对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果 共对417株淋球菌进行了检测,产青霉素酶淋球菌(PPNG)的阳性率由1999年的8.0%上升到2002年的31.31%(P<0.001),质粒介导的耐四环素淋球菌(TRNG)的阳性率由1999年的1.8%上升到2002年的22.2%(P<0.001)。在非PPNG中,染色体介导的青霉素耐药菌株的阳性率介于64.08%~87.80%。耐环丙沙星淋球菌的阳性率介于83.93%~97.17%。未检出对头孢曲松耐药的淋球菌,但低敏菌株的比例从1999年的17.9%上升到2002年的50.5%(P<0.005)。在2001与2002年各检测出1株对大观霉素耐药的淋球菌。结论 南京地区分离的淋球菌中,质粒介导的耐药性(包括PPNG和TRNG)增长速度较快,染色体介导的对青霉素和环丙沙星耐药的淋球菌比例很高,大观霉素耐药性淋球菌偶见。头孢曲松和大观霉素为治疗淋病的有效药物。     

不同耐药淋球菌菌株IR基因突变与mtrC基因转录水平的差异性比较

目的：研究不同耐药淋球菌菌株多传递耐药（mtr）系统反向重复序列（IR）区基因突变与mtrC基因转录水平的差异性，进一步探索mtr系统介导耐药的机制。方法：采用琼脂稀释法测定抗生素对菌株的最小抑菌浓度（MIC），PCR扩增含IR区的目的基因并对扩增产物测序，同时采用反转录（RT）-PCR检测mtrC基因mRNA表达水平的变化。结果：5株敏感株及5株仅耐青霉素菌株无IR区基因突变，16株多重耐药菌株中IR区均有碱基A／T缺失。敏感株mtrC转录水平显著低于耐药株（P〈0．05），而耐药菌株组中IR区碱基突变组mtrC转录水平显著高于无突变组（JP〈0．05）。结论：淋球菌染色体mtrR启动子区域的IR区基因突变会引起mtrC基因转录增加，进而提高奈瑟淋球菌的耐药性。     

南京地区1999-2004年四环素高度耐药淋球菌tetM基因分型及流行研究

目的 了解南京地区四环素高度耐药淋球菌(TRNG)tetM基因的分子流行病学情况.方法 采用琼脂稀释法检测菌株是否为TRNG,采用纸片酸度定量法测定菌株是否产β-内酰胺酶.采用单管PCR方法对TRNG阳性菌株作tetM基因分型.结果 1999-2004年间南京地区804株淋球菌中共检出136株(16.92%)TRNG,β-内酰胺酶阳性的淋球菌(PPNG)为290株,所有TRNG中69.85%(95/136)为PPNG/TRNG,TRNG的阳性率逐年增高.tetM基因分型结果显示,荷兰变型为135株,美国变型仅1株.结论 南京地区流行的TRNG以荷兰型tetM基因为主(99.26%),美国型仅为偶发.     

淋球菌营养型与耐药性及质粒的关系

目的 为了解淋球菌的营养型、耐药性及质粒之间的关系.方法 对重庆市收集的83株淋球菌进行营养型、抗生素敏感性和质粒检测.结果 83株菌共分为8个营养型,以Pro-型(51-8%)和Proto型(18-1%)为主.利用琼脂稀释法检测菌株对青霉素、四环素和壮观霉素的敏感性.青霉素耐药株占15.6%,四环素耐药株占70%,壮观霉素耐药株占1-2%.通过快速碱裂解法对其中的44株菌进行质粒检测,70%菌株含24-5Md质粒,80%含2.6Md质粒,66%同时含24-5Md和2.6Md质粒,16%未查到质粒.并发现Pro^-型菌株中青霉素耐药株高于其它营养型(P<0.05),且含24-5Md质粒菌也显著高于其它营养型(P<0.05).含24-5Md+2.6Md质粒菌株中四环素耐药株更常见(P<0.05).检测到1株产青霉素酶淋球菌(PPNG),经质粒消除试验证实其耐药性由4-4Md质粒介导.结论 本研究不仅表明了重庆地区淋球菌营养型、耐药性及质粒的分布状况,而且揭示了它们之间存在一定关系.这将对该地区淋球菌的流行病学调查和淋病防治提供帮助.     

淋病奈瑟菌mtrR基因启动子区的IR区碱基缺失与其耐药性关系的研究

目的探索淋病奈瑟菌(NG,简称淋球菌)多传递耐药系统R基因(m trR)启动子区反向重复序列(IR)区基因缺失与淋病奈瑟菌染色体所介导的耐药性的关系。方法以琼脂稀释法做药物敏感试验,选择临床敏感株采用自身配对法以次抑菌浓度法诱导筛选出对不同抗生素耐药的淋球菌株,以聚合酶链反应(PCR)扩增包含IR区在内的目的基因后,对扩增产物测序,并将其IR区基因突变与临床分离自然耐药株比较。结果8株敏感株及24株单独耐1种药物菌株及1株诱导的多重耐药株无IR区基因突变,7株诱导多重耐药菌株IR区有碱基A/T缺失,与自然多重耐药株两者相比较碱基缺失无差异。结论淋球菌染色体IR区基因缺失与单独耐一种药物菌株产生无关,IR区基因缺失参与了淋球菌多重耐药株的产生,人工诱导的多重耐药株与自然多重耐药株IR区碱基突变无差异。     

淋球菌IR区基因突变及mtrF表达水平与多重耐药的相关性研究

目的探讨淋球菌多传递耐药系统回文序列(IR)区基因突变及mtrF表达水平与多重耐药的相关性。方法采用纸片扩散法测定菌株的耐药性,琼脂稀释法检测菌株的耐药水平,PCR法扩增mtrR编码基因和IR区基因并进行测序分析,同时用RT-PCR测定mtrF基因的表达。结果5株敏感菌及6株仅耐红霉素的菌株mtrR和IR区基因均未发生突变,21株多重耐药菌均发生了突变(8株低～中等水平耐药株发生mtrR编码基因突变,13株高度多重耐药株IR区发生基因突变或同时存在mtrR单位点突变)。高度多重耐药株mtrF基因表达量(1.019±0.161)显著高于敏感组(0.595±0.064)(P<0.01)和低～中等水平多重耐药组(0.671±0.073)(P<0.01),而后两者间mtrF基因表达量无明显差异。结论在介导产生多重耐药过程中,淋球菌IR区基因突变及mtrF基因的高表达可能发挥着十分重要的作用。     

解脲脲原体对红霉素耐药机制的初步研究

目的 探讨解脲脲原体对红霉素的耐药机制。方法 对73株从泌尿生殖道分离的解脲脲原体进行体外药物敏感试验筛选耐药菌株,并设立临床敏感菌株组以及标准菌株对照组,用PCR测序法检测23SrRNA的V区热点突变以及特异性引物PCR检测甲基化酶（ermA、ermB、ermC）、主动外排泵（mefA/E、msrA/B、mreA）等可转移耐药基因。结果 73株临床菌株中,耐药菌株35株（47.95%）,耐药菌株MIC范围为8 ~ 32 mg/L。在耐药菌株组发现ermB耐药基因（19株,占54.29%）和msrA/B耐药基因（9株,占25.71%）的阳性扩增,其中有2株（占5.71%）同时存在ermB基因和msrA/B基因阳性扩增,ermB基因和msrA/B基因的阳性扩增比率差异有统计学意义（P < 0.05）。临床敏感菌株组及标准菌株组均未发现23SrRNA的V区点突变及可转移耐药基因的阳性扩增。结论 ermB甲基化酶基因和msrA/B外派泵基因可能是导致解脲脲原体对红霉素耐药原因之一。     

Antimicrobial susceptibility and genetic characteristics of Propionibacterium acnes isolated from patients with acne

Background Propionibacterium acnes is an important target in acne management. Antibiotic resistance has increased, reducing its clinical efficiency. Objective To study the prevalence, antimicrobial susceptibility patterns, and resistance mechanisms of P. acnes isolated from patients with acne. Methods Skin swabs were collected from 83 patients. Agar dilution determined the minimum inhibitory concentrations of five antibiotics. Polymerase chain reaction and DNA sequencing were used to identify mutations. Results P. acnes was isolated in 80 of 83 patients (96%), and 27 patients had resistance to antibiotics (33.7%). The mean age was older in the antibiotic‐resistant group (20.8 ± 5.8 vs. 18.3 ± 3.7, P = 0.02). Resistance to trimethoprim–sulfamethoxazole was 26.3%, erythromycin 12.5%, and clindamycin 7.5%. All clindamycin‐resistant strains had cross‐resistance to erythromycin, and 40% erythromycin‐resistant strains had cross‐resistance to trimethoprim–sulfamethoxazole. All strains were sensitive to tetracycline and doxycycline. The use of topical erythromycin or clindamycin was a risk factor to carry resistant strains (P = 0.02, P = 0.04, respectively). Resistance to trimethoprim–sulfamethoxazole was associated with acne severity (P = 0.02). Six of the 10 erythromycin‐resistant strains had a mutation in the peptidyl transferase region of the 23S rRNA gene: one A2058G and five A2059G. No strain carrying mutation G2057A was found. Conclusions Resistance to trimethoprim–sulfamethoxazole was the most common pattern found, and further studies are required to clarify its resistance mechanism. A certain tetracycline resistance was expected, but interestingly all strains remained sensitive. Resistance to erythromycin and clindamycin were influenced using topical formulations. Mutation A2059G was related to high resistance to erythromycin. Antibiotic resistance is increasing, and new strategies are needed.     

Antibiotic‐resistant Propionibacterium acnes among acne patients in a regional skin centre in Hong Kong

Background There has been no study on antibiotic‐resistant Propionibacterium acnes in Hong Kong. Objective We investigated the prevalence and pattern of antibiotic‐resistant P. acnes and to identify any associated factors for harbouring the resistant strains. Methods Culture and sensitivity testing of P. acnes to commonly used antibiotics were performed. Resistance to tetracycline was defined at a minimal inhibitory concentration (MIC) of 2 μg/mL or more; erythromycin at an MIC of 0.5 μg/mL or more; clindamycin at an MIC of 0.25 μg/mL or more according to EUCAST. For breakpoints of doxycycline and minocycline, those with an MIC of 1 μg/mL or more were defined as resistant strains. Results Among the 111 specimens collected from 111 patients, 86 strains of P. acnes were recovered, one from each specimen. Twenty‐five specimens had no growth. Forty‐seven (54.8%) strains were found to be resistant to one or more antibiotics. Forty‐six (53.5%), 18 (20.9%), 14 (16.3%), 14(16.3%) and 14 (16.3%) strains were resistant to clindamycin (CL), erythromycin (EM), tetracycline (TET), doxycycline (DOX) and minocycline (MR) respectively. Ten strains (11.6%) had cross resistance between the MLS antibiotics (erythromycin or clindamycin), one strain (1.2%) had cross resistance among the cyclines and 14 strains (16.4%) had cross resistance between the MLS and cycline antibiotics. Binary logistic regression showed an association between MLS antibiotic resistance with an increased age whereas cycline resistance was associated with the duration of treatment. Conclusions Antibiotic‐resistant P. acnes is prevalent in Hong Kong. Dermatologists should be more vigilant in prescribing antibiotics for acne patients.