蔓生百部蜜炙前后药效及毒性比较研究

目的:研究蔓生百部炮制前后止咳作用及其毒性差异。方法:采用小鼠氨水引咳法,对蔓生百部生品及蜜炙品水煎液、总生物碱部位的止咳作用进行比较;采用小鼠急性毒性实验,对生、炙蔓生百部水煎液、总生物碱及非碱部位进行毒性比较。结果:生品水煎液及非碱液给药后动物出现抽搐、进食不佳等中毒现象。生品总生物碱给药后动物表现出异常兴奋、互相撕咬等中毒现象。但蜜炙后水煎液、非碱液抽搐现象很弱,且很快恢复正常。蜜炙后总生物碱给药后兴奋度很低,且较快恢复正常。蜜炙百部水煎液及总生物碱止咳效果均强于生品。结论:蜜炙蔓生百部可达到增效减毒的作用。     

中国药典一部中百部基源的研究

目的:对中国药典一部收载的百部的基源进行研究。方法:通过本草考证、原植物形态、药材性状、显微鉴别、HPLC色谱鉴别对三种百部基源进行对比。结果:在对历代本草考证后认为古代百部来源应为天门冬属植物羊齿天门冬及现代药典中收载的蔓生百部;且药典中收载的三种百部在原植物形态上存在较大差异,如:蔓生百部、对叶百部为多年生缠绕草本、直立百部为多年生直立草本等;另外,显微鉴别中蔓生百部与直立百部的根被细胞壁表面有致密的细条纹,而对叶百部根被细胞壁上无致密的细条纹;在HPLC色谱中直立百部、蔓生百部含有原百部碱,对叶百部中不含原百部碱。结论:三种基源的百部无论是本草考证,还是从原植物形态、药材性状、显微鉴别、生物碱种类及含量等方面都存在较大的差异。     

对叶百部总生物碱止咳作用的谱效关系研究

目的:研究全国29个产地对叶百部总生物碱的HPLC图谱与止咳作用的相关性,建立各产地对叶百部总生物碱与止咳作用的谱效关系,阐明止咳作用的物质基础。方法:采用灰色关联度分析方法,对全国29个产地的对叶百部总生物碱的HPLC图谱的8个特征峰峰面积与止咳的2个评价指标(2 min内咳嗽次数、抑咳率)进行相关性分析,研究对叶百部总生物碱止咳作用的谱效关系。结果:对叶百部总生物碱对浓氨水致小鼠咳嗽有显著的抑制作用,与百部的止咳功效一致。在全国29个产地的对叶百部总生物碱HPLC图谱中,1号金刚大碱色谱峰峰面积大、关联度强;2～8号色谱峰对止咳作用也有较大的贡献,关联度差距较小,对止咳作用起协同作用。结论:全国29个产地的对叶百部总生物碱HPLC图谱与止咳作用具有相关性。通过谱效关系研究,可阐明对叶百部止咳作用的物质基础,为其质量控制与评价提供一定的理论依据。     

中国药典中3种不同基源百部鉴别方法研究

目的:改进中国药典一部收载的三种百部的鉴别方法。方法:利用性状鉴别、显微鉴别与HPLC色谱鉴别方法对直立百部、蔓生百部、对叶百部进行鉴别。结果:粉末显微鉴别中直立百部、蔓生百部的根被细胞壁木栓化及木化,具致密的细条纹,对叶百部根被细胞壁无细条纹;HPLC色谱中直立百部、蔓生百部含有原百部碱,对叶百部中不含原百部碱。结论:该研究结果为中国药典进一步修订,建立不同基源百部的专属性鉴别提供了实验依据。     

对叶百部生品及蜜炙品不同极性部位止咳化痰作用比较

目的: 比较对叶百部生、炙品不同极性部位止咳化痰作用差异性,为百部作为止咳类药物发挥传统功效时生熟用药提供实验支持,为进一步揭示百部蜜炙原理奠定基础。方法: 清洁级昆明种小鼠200 只, 随机分为20 组, 10 只/组, 雌雄各半。第1组为空白对照组,ig 给予生理盐水;第2 组为阳性对照组,ig 给予可待因6 mg ·kg^-1;其他组为给药组,给药容积为10 mL ·kg^-1。给药小鼠给药前禁食8 h,禁水2 h,连续给药2 d,末次给药后1 h,采用小鼠氨水引咳法,对对叶百部生品及蜜炙品的不同部位,包括水煎液、总生物碱提取物及非生物碱提取液(各设3个剂量,按生药量计均为20,10,5 g ·kg^-1)的止咳作用进行比较。取昆明种小鼠200 只, 随机分为20 组, 10只/组, 雌雄各半。第1组为空白对照组,ig 给予生理盐水;第2 组为阳性对照组,ig 给予氯化氨 40 mg ·kg^-1;其他组为给药组,给药剂量为10 mL ·kg^-1。给药小鼠给药前禁食8 h,禁水2 h,连续给药2 d,末次给药后0.5 h,采用气管酚红法,研究生、炙品不同极性部位化痰效果。结果: 与空白组对比,对叶百部生品不同部位均具有显著的止咳作用(P<0.05, P<0.01, 或P<0.001),而炙品的水煎液及总生物碱提取物有显著的止咳作用(P<0.05, P<0.01, 或P<0.001),但其非碱部分只有高剂量有显著的止咳作用(P<0.001)。对于对叶百部生、炙品相同极性部位比较,发现生、炙品水煎液中剂量及高剂量之间均有显著差异(P<0.05),而总碱提取物低剂量和中剂量有显著性差异(P<0.05),非生物碱提取液仅高剂量有显著性差异(P<0.05), 均显示炙品止咳活性强于生品。化痰实验仅生品水煎液高剂量和炙品水煎液高剂量有显著的效果(P<0.05),其他均和空白组之间无显著差异。结论: 对叶百部蜜炙后止咳作用增强的主要部位为总生物碱提取物部位及水煎液部位,而其化痰作用生、炙品均较弱, 说明百部不是通过化痰起到止咳功效。     

序贯法研究广西不同产地对叶百部总生物碱对小鼠的止咳作用

目的:采用序贯法研究广西不同产地对叶百部总生物碱止咳作用,为对叶百部品质评价以及临床用药提供理论依据。方法:采用序贯法先进行预实验确定止咳有效剂量,再取10个广西不同产地对叶百部总生物碱作用于不同组别的小鼠,求得各组的EDT50,依次定量判断其止咳活性。结果:不同组别的小鼠EDT50均较空白组有所延长,广西不同产地对叶百部总生物碱均能延长氨水引咳时间(R值100%),6.9g生药/kg为止咳有效剂量,平均R值为138.8%。结论:广西各产地对叶百部总生物碱均具有止咳作用,而恭城、凤山、靖西产地效果较好。     

百部生物碱的研究现状和思考

中国药典从1985版开始收载百部的来源为百部科植物直立百部Stemona sesilifolia（Miq.）Miq.、蔓生百部Stemona Japonica（BL．）Miq．或对叶百部Stemona tuberose Lour．的干燥块根。     

生、炙百部体内外抑制白色念珠菌作用比较

目的:比较生、炙对叶百部水提液体内外抑制白色念珠菌的能力强弱。方法:制备百部生、炙品水提取液,采用纸片扩散法(K-B法)进行体外抑菌实验,以白色念珠菌感染的霉菌性阴道炎小鼠模型比较其体内抑菌实验。结果:体外抑菌实验中,生百部水提液在所测试的浓度0.0019g/mL范围内均显示一定的抑菌作用,当浓度为0.0625及0.125g/mL时,其抑菌率最高,基本未见菌斑生长;炙品则仅在浓度为0.0625g/mL及0.125g/mL时具有抑菌作用,其抑菌直径为3.4mm、0.27mm及3.2mm、0.51mm,但各浓度生品与炙品比较,生品抑菌作用均显著强于制品。百部水煎液治疗霉菌性阴道炎实验中,生品及炙品高、中、低剂量均具有显著的抑菌作用,生品高剂量组抑菌作用显著强于炙品。结论:对叶百部水煎液具有显著的抑菌作用,体内外实验均显示生品抑菌作用强于炙品,因此临床应用百部治疗霉菌性阴道炎时应以生品入药。     

中药百部中原百部碱的分离及含量测定

 目的建立中药百部的含量测定方法。方法用柱色谱法从蔓生百部中分离原百部碱,对原百部碱HPLC含量测定色谱条件进行优选。结果分离得到原百部碱化学单体作为含量测定对照品。含量测定采用HypersilODS色谱柱;乙睛-0.25%甲酸铵(25∶75)为流动相;检测波长,305nm;流速:1.0mL·min^-1。原百部碱进样量在0.01480～189.6μg内与峰面积线性关系良好,r=0.9996,平均加样回收率为98.4%,RSD为1.51%。蔓生、直立百部均含有较多的原百部碱,所取样品中含量为0.22%～0.36%;对叶百部中并不含有原百部碱。结论首次建立了中药百部中原百部碱的HPLC含量测定方法,能有效控制蔓生百部、直立百部的质量。     

蔓生百部总生物碱的含量测定

目的：建立蔓生百部药材总生物碱的含量测定方法。方法：采用紫外分光光度法。417nm处测定。结果：蔓生百部碱在0．02mg0．14mg范围内与吸光度呈良好的线性关系，y=247．6x-0．43，平均回收率为100．1％。结论：本文首次以自制原百部碱（纯度98％）为对照品，建立了蔓生百部药材中百部总碱的含量测定方法，对于提高《中国药典》中百部药材及相关制剂的质量标准有一定参考意义。     

Antitussive and central respiratory depressant effects of Stemona tuberosa

Aims of the study

Stemona alkaloids with distinctly different chemical skeletons are recently reported as the active components in the antitussive herb Baibu derived from the root-tubers of Stemona tuberosa. This study aims to determine if alkaloids of this herb contribute equally to the antitussive functions, act on the same sites of cough reflex, and play any role in inducing central respiratory depressant effects.

Materials and methods

Antitussive potency of four major alkaloids was evaluated on guinea pigs with citric acid aerosol to induce cough. The action sites of the alkaloids on cough reflex pathway were tested with electrical stimulation of the superior laryngeal nerve in guinea pigs. The central respiratory effects of croomine were also tested on guinea pigs.

Results

Croomine, neotuberostemonine and stemoninine showed similar antitussive potency, while tuberostemonine showed much weaker antitussive potency. Neotuberostemonine, tuberostemonine and stemoninine acted on the peripheral cough reflex pathway, while croomine acted on the central part. Croomine also showed obvious central respiratory depressant effects.

Conclusions

The four major Stemona alkaloids in Stemona tuberosa do not contribute equally to antitussive potency in guinea pigs. Neotuberostemonine, tuberostemonine and stemoninine target on peripheral cough reflex pathway. Croomine acts on central sites in the cough reflex pathway and demonstrates central respiratory depressant effects, which can partly account for the adverse reactions reported for the herb.     

百部生药学研究Ⅰ. 百部的本草考证

论证了百部自古以来一直存在的同名异物现象,本草考证结果确知峡州百部(小叶百部)、滁州百部(直立百部)、衡州百部(大百部)均系古今使用地道品种。     

Antitussive effects of Stemona tuberosa with different chemical profiles

The root tubers of Stemona tuberosa, Stemona japonica and Stemona sessilifolia are recognized by the Pharmacopoeia of the People's Republic of China as authentic sources of the herb Radix Stemonae (Baibu). Careful anatomical analyses of these three species, whose identities were confirmed by flowering and fruiting samples, revealed that the root tubers of Stemona tuberosa could be distinguished from those of the other two species by the presence of scattered fibers in the cortex and pith and by the absence of thickened striations on the surface of velamen cells. HPLC analyses demonstrated that the total alkaloid profiles could be grouped into four types represented as the major component by stenine-type Stemona alkaloids such as tuberostemonine (4) and neotuberostemonine (3), or by non-stenine types such as croomine (1) and stemoninine (2). Nevertheless, all these samples demonstrated different degrees of antitussive properties in guinea pigs. These results suggested that non-stenine-type of Stemona alkaloids also contributed to the antitussive properties. The variations in chemical profiles among herb samples add difficulty in ensuring quality control in botanical products.     

龙利叶止咳活性部位筛选及其作用机制研究

目的对龙利叶的止咳作用进行研究,筛选其活性部位,并初步研究其止咳作用机制。方法制备龙利叶75%乙醇、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、95%乙醇部位提取物,采用改良寇氏法研究龙利叶不同提取部位的急性毒性;采用氨水引咳法制备小鼠模型,用序贯法求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间,进行止咳活性部位的筛选;采用辣椒素引咳实验,通过观察龙利叶各部位提取物对小鼠阿片受体激动作用和对ATP敏感性钾通道(KATP)的作用,探讨其作用机制。结果龙利叶75%乙醇、醋酸乙酯、正丁醇和95%乙醇部位对小鼠的半数致死剂量(LD_(50))分别为浸膏7.30、17.00、69.68、75.88 g/kg;石油醚部位最大耐受量为浸膏117.71 g/kg;75%乙醇部位和醋酸乙酯部位具有止咳作用,其止咳作用与激动中枢系统的阿片受体和KATP通道有关。结论 75%乙醇和醋酸乙酯部位为龙利叶止咳活性部位,其止咳机制与激动中枢系统的阿片受体和KATP通道有关。     

对叶百部遗传多样性的ISSR分析

目的分析不同居群对叶百部Stemona tuberosa的亲缘关系和遗传多样性。方法应用ISSR分子标记技术研究长江流域以南各省对叶百部的遗传多样性;采用POPGENE32进行亲缘关系分析,NTSYSpc-2.10E进行UPGMA聚类分析。结果 7条ISSR引物共检测到74个清晰的扩增位点,多态性位点74个,多态性位点百分率100%;有效等位基因数(Ne)为1.524 4,平均Nei’s基因多样性指数(He)为0.314 6,平均Shannon多样性指数(I)为0.478 6,各居群间的遗传距离介于0~0.950 2,平均值为0.416 3。结论从分子角度揭示了对叶百部具有较高的遗传多样性,其居群间亲缘关系与地理环境有一定的相关性,实验结果将为后续对叶百部引种栽培及根用药植物资源的持续利用,特异生物碱的筛选及其运用于化学分类,以及对叶百部道地药材产区的科学选择奠定理论基础。     

基于HPLC与化学计量学方法的防风标准汤剂质量研究＊

目的 建立防风饮片标准汤剂的HPLC指纹图谱，结合化学计量学方法对其进行质量研究。方法 制备15批次防风饮片标准汤剂，建立其HPLC指纹图谱，采用相似度评价结合聚类分析（cluster analysis，CA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘判别分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）进行系统评价，同时测定了防风中4种主要成分的含量变化。结果 建立了防风标准汤剂HPLC指纹图谱，其相似度 > 0.92，确定了8个共有峰。CA的结果表明不同产地的防风质量概貌存在差异，同一产地药材质量较为稳定。PLS-DA筛选出4个差异标志物（VIP > 1）分别为3号，6号峰，4号峰，5号峰。15批次防风饮片标准汤剂共有模式下的4种主要成分分别为升麻素苷，升麻素，5-O-甲基维斯阿米醇苷，亥茅酚苷，其转移率依次为52.53%-88.03%，48.83%-82.85%，41.90%-80.45%，37.69%-84.49%。15批次防风饮片标准汤剂干膏得率36.09%-49.45%，pH值5.01-5.75。结论 本研究建立的质量评价方法适用于防风饮片标准汤剂的质量控制，可为防风配方颗粒及相关经典名方的研究提供参考。     

基于均匀设计法评价瓜蒌与制川乌反药配伍组合的祛痰镇咳作用

目的:研究瓜蒌与制川乌不同配比和剂量变化对小鼠祛痰、镇咳作用的影响。方法:采用均匀设计法,按2因素7水平以小鼠气管酚红分泌量和咳嗽次数为指标,观察瓜蒌和制川乌合煎液口服给药后对小鼠祛痰、镇咳作用的影响,并选取有显著意义的配比和剂量进行验证。结果:对气管酚红分泌量的影响:合煎液多数配比能增加小鼠气管酚红分泌量;经回归分析可知,瓜蒌有祛痰作用而制川乌没有,瓜蒌与制川乌配伍存在拮抗作用,且瓜蒌-制川乌为1∶2时拮抗作用最大。对咳嗽次数的影响:合煎液所有配比均能降低咳嗽次数;经回归分析可知,瓜蒌与制川乌分别都有镇咳作用,但二者之间没有交互作用。结论:瓜蒌与制川乌配伍能拮抗瓜蒌的祛痰作用,但对镇咳效用没影响。     

附子-甘草药对配伍前后汤液相态对比

目的： 对比分析附子-甘草配伍前后汤液的相态变化。 方法： 运用电导率仪、散射光浊度仪、旋转黏度计、表面/界面张力测定仪,在20,40,60 ℃时分别测定附子-甘草配伍前后汤液的理化参数（电导率、盐度、浊度、黏度、表面张力）;采用激光衍射法测定汤液的粒径和粒径分布,对比分析附子-甘草配伍前后汤液的相态变化。 结果： 附子-甘草配伍前后汤液相态的理化参数均有变化。附子-甘草合煎液汤液的电导率、盐度低于其他汤液,而合煎液中粒子粒径大于其他汤液。 结论： 为深入研究附子-甘草配伍前后汤液中增效减毒的物质基础及汤液相态变化提供实验基础。