生长年限对滇重楼中甾体皂苷活性成分和生物量积累的影响

目的 探究云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis（滇重楼）根茎中甾体皂苷活性成分和生物量积累随生长年限的变化状况,以期为滇重楼的质量控制提供科学依据。方法 以7、8、9、11、12、13、14、15年生滇重楼为研究对象,采用HPLC法和直接称重法测定不同年限滇重楼根茎中8种甾体皂苷（重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅲ、H、V和纤细薯蓣皂苷）含量和生物量。结果 8种甾体皂苷活性成分线性关系良好（R²≥0.999 5）,精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于3%,验证了该方法的可行性;随着年限的增长,滇重楼根茎生物量呈逐渐增长的趋势,其生长发育可分为增长缓慢期（第1～4年）、增长快速期（第5～10年）和增长平缓期（第11年后）3个阶段,其中7年生滇重楼根茎生物量增长最快,平均年增长量达（31.843±14.225）g;滇重楼根茎中8种甾体皂苷成分含量在不同生长年限的变化呈随机波动、无规律,《中国药典》2020版规定的3个指标成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ含量之和与8种甾体皂苷总和的变化趋势一致;用4个主成分对不同年限滇重楼药材进行综合评价,结果显示7年生样品在所有样品中的综合得分位于前7名。结论 建立了同时测定滇重楼中8种甾体皂苷活性成分含量的方法,可用于滇重楼的质量评价;滇重楼并非种植年限越长越好,建议以7年生滇重楼采收入药为最佳。     

多基源重楼的质量等同性研究

目的： 对不同种属、不同产地重楼属植物中甾体皂苷（重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ）含量进行对比研究,为重楼属药材合理利用提供理论依据。 方法： 采用HPLC-UV法测定重楼属4种药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的含量。Agela Venusil XBP-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相A相为乙腈,B相为水,梯度洗脱（0~5 min,34%~44%A;5~15 min,44%~49%;15~18 min,49%~50.5%;18~22 min,50.5%~51.8%;22~25 min,51.8%~52.5%;25~30 min,52.5%~53.5%）,检测波长203 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温25 ℃,进样量20 μL。 结果： 不同种属、不同产地的重楼属植物中甾体皂苷含量和组成有显著性差异。 结论： 4种重楼属植物具有化学等同性,花叶重楼、毛重楼可替代重楼使用。     

HPLC测定彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ的含量

目的：建立同时测定彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ高效液相色谱分析方法。方法：采用高效液相色谱法对彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ同时进行含量测定：Hypersil ODS2(4.6 mm×150 mm,5 μm)；预柱：IBBM-612111,C-18柱芯；乙腈-0.02%磷酸(43∶57)为流动相,流速1 mL·min^-1,检测波长203 nm,柱温40 ℃。结果：重楼皂苷Ⅰ在0.102 4～3.2 μg线形关系良好,r=0.999 8,平均回收率97.4%,RSD 1.8%(n=6)；重楼皂苷Ⅱ在0.064～2.0 μg线形关系良好,r=0.999 9,平均回收率101.4%,RSD 1.0%(n=6)。结论：本方法准确可靠、重复性好,能有效控制该制剂的质量。     

α-常春藤皂苷的平衡溶解度及表观油水分配系数的测定

目的： 测定α-常春藤皂苷的平衡溶解度及表观油水分配系数（P_app）。 方法： 采用HPLC测定α-常春藤皂苷在水、有机溶剂及缓冲液中平衡溶解度,在正辛醇-水及缓冲盐溶液中表观油水分配系数,流动相乙腈-0.2%磷酸水溶液（45：55）,检测波长203 nm。 结果： 25 ℃时,α-常春藤皂苷在水中平衡溶解度0.011 g·L^-1,P_app=24.73（logP_app=1.39）,在正丁醇和乙醇中平衡溶解度分别为86.10,28.18 g·L^-1。 结论： α-常春藤皂苷的水溶性较差,改善其口服制剂的溶出度有利于提高体内生物利用度。     

不同遮阴处理对七叶一枝花生长 光合特性及品质的影响

目的 七叶一枝花是典型的阴生植物,研究不同遮阴条件对七叶一枝花叶片光合作用、生长和代谢产物含量的影响。方法 在85%和95%遮阴条件下,采用紫外-可见分光光度法测定七叶一枝花叶片的光合色素含量,运用便携式光合作用测定仪测定叶片净光合速率（P_n）、胞间二氧化碳浓度（C_i）、蒸腾速率（T_r）、气孔导度（G_s）并拟合光响应曲线,测定植株的生长指标并利用超高效液相色谱-紫外法（UPLC-UV）与高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定不同部位皂苷类及糖类成分含量。结果 95%遮阴条件下叶绿素含量与植株生长指标均优于85%遮阴;95%遮阴条件下叶片的日光合速率低于85%遮阴,但C_i、T_r和G_s的光响应差异无统计学意义;不同遮阴条件对重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷含量有极显著影响,且往年生根茎和须根中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅶ总量在2种遮阴条件下差异有统计学意义（P<0.01）,85%遮阴较高;不同遮阴条件对根部的蔗糖含量影响较大,95%遮阴处理蔗糖含量较高。七叶一枝花移栽到北京后极喜阴,在95%遮阴下植株农艺性状得到改善。结论 研究结果为开展优化遮阴度和遮阴时间以平衡植物生长、增加活性代谢产物的积累研究提供参考。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长252 nm，柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9)，7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9)，11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8)；平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%)，99.1%(RSD1.9%)，99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确，重复性好，为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长252 nm，柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9)，7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9)，11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8)；平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%)，99.1%(RSD1.9%)，99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确，重复性好，为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

马兜铃酸Ⅰ，Ⅱ在大鼠体内的药动学研究

目的：建立高效液相色谱法测定血浆中马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)和马兜铃酸Ⅱ(AAⅡ)浓度的方法，研究其在大鼠体内的药动学。方法：HPLC测定大鼠静脉注射AAⅠ和Ⅱ后的血药浓度，并进行药动学分析。结果：AAⅠ在0.056～56.3 mg·L^-1与峰面积比呈良好的线性关系(r=0.999 7)，样品平均回收率为88.7%，日内日间精密度的RSD均<8%。AAⅡ在0.192～11.52 mg·L^-1与峰面积比呈良好的线性关系(r=0.998 9)，样品平均回收率为85.8%，日内精密度的RSD<3%，日间精密度的RSD小于10%。按5 mg·kg^-1剂量尾静脉给予AAⅠ与AAⅡ混合物后,两者在大鼠体内的处置过程符合二房室模型，AAⅠ的主要药动学参数为：t_1/2α(8.2±1.7) min，t_1/2β(79.6±28.5) min，CL(0.010±0.003) L·min^-1·kg^-1；AAⅡ的主要药动学参数为：t_1/2α(56.7±38.1) min，t_1/2β(209±37.9) min，CL(0.003±0.001) L·min^-1·kg^-1。结论：AAⅠ和AAⅡ的HPLC简单可靠,可用于两者的血药浓度分析及药动学研究。静注给药后AAⅠ与AAⅡ的血药浓度的变化速度有较大差异，前者的分布和消除相对较快而后者相对较慢。     

HPLC-ELSD法测定清咽胶囊中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量

目的 :采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定清咽胶囊中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量。方法:以乙腈-水(48 ∶52)为流动相,Hypersil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)为固定相,流速1.0 mL ·min^-1,漂移管温度45 ℃,载气流量1.5L ·min^-1。 结果: 重楼皂苷Ⅰ的回收率97.27%,RSD为1.22%(n=6);重楼皂苷Ⅱ的回收率97.09%,RSD 1.40%(n=6)。 结论 :该方法简便、快速、重复性好,可用于清咽胶囊的质量控制。     

预知子药材HPLC-ELSD指纹图谱研究

目的: 建立不同产地预知子药材的HPLC-ELSD指纹图谱分析方法,并与不同产地预知子药材指纹特征相比较,为科学评价与有效控制预知子药材质量提供新方法。 方法: 采用HPLC-ELSD法测定了10个不同产地的预知子药材样品。使用Cosmosil-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),ELSD检测器,流动相乙腈-0.2%甲酸水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,ELSD检测器,漂移管温度110℃,气流流速3.0 L·min^-1。采用直观分析和相似度软件评价不同产地预知子药材指纹图谱的相似度。 结果: 建立了不同产地预知子的HPLC-ELSD指纹图谱,检测了10个产地的预知子药材,标定了14个共有峰,各色谱峰分离度较好,相似度较高,达到了中药指纹图谱研究的技术要求。对其中的常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷X,saponins X),常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷 B,saponins B),常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷P_D,saponins P_D),常春藤皂苷元 3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷A,saponins A)进行了首次归属。 结论: 该法具有良好的重复性和稳定性,数据准确可靠,建立的HPLC-ELSD指纹图谱可为预知子药材的质量控制提供科学准确的依据。     

中药重楼研究进展

重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis或七叶一枝花Paris polyphylla var.chinensis的干燥根茎。对近年来重楼甾体类、氨基酸类无机元素、其他化合物以及止血作用、抗肿瘤作用、抗菌、抗炎作用、大脑与肾脑的保护作用,临床作用进行了归纳总结。认为甾体皂苷是重楼的主要活性物质,具有抗肿瘤、消炎、止血、抗氧化、促进子宫收缩和保护血管内皮细胞等药理作用。临床内服用于止血、止痛、抗癌抗肿瘤,外用抗感染、抗炎镇痛。目前,还未开发出具有很好活性的创新药物,需要加快重楼的药物创新研究。     

重楼药材和混伪品中5种皂苷的含量及对《中国药典》2015年版重楼含量测定修订的探讨

重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis或七叶一枝花P.polyphylla var.chinensis的干燥根茎。针对现行重楼药材标准存在的问题,前期研究提出"删除重楼皂苷Ⅵ,增补重楼皂苷H,以重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,H和Ⅶ的总量进行限度控制"。为了考察更广范围内重楼样品中重楼皂苷H的含量以及重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量,该研究基于2015年版《中国药典》重楼标准定量方法的色谱条件,进行了同步测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ含量的方法学验证,测定了69批不同来源重楼样品的含量;同时,测定了易混伪药材头顶一颗珠以及重楼属7种近缘植物根茎中5种重楼皂苷的含量。结果表明重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ分别在0.006 48~0.828,0.006 52~0.834,0.006 17~0.790,0.006 31~0.808 g·L-1线性关系良好,平均加样回收率在100.2%~101.4%,RSD均小于3.5%。方法学验证均符合含量测定要求。36批不同产地的七叶一枝花样品中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量在0.050 9%~3.99%(不含3批未检出);33批不同产地的云南重楼样品中4种成分总量在0.115%~3.23%。同属近缘植物中,球药隔重楼和长柱重楼中甾体皂苷含量较高,狭叶重楼、金线重楼、黑籽重楼含量较低,毛重楼几乎不含皂苷。饮片易混伪品头顶一颗珠中重楼皂苷Ⅵ在0.526%~1.55%,并且不含重楼皂苷H。建议以干燥品计,含重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量不得少于0.80%进行限度控制,以提升商品重楼药材质量,遏制低含量的重楼属近缘种(比如毛重楼、黑籽重楼和狭叶重楼等)以及头顶一颗珠的混伪现象。     

不同产地不同种类重楼药材重金属元素的含量测定及分析

目的:分析测定不同产地不同种类的重楼药材中的重金属含量,为重楼种植地区的选择和其重金属元素限量标准提供参考。方法:从云南省10个产地收集8种共39份重楼药材样品,采用微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测定重楼药材中的重金属砷(As),铜(Cu),汞(Hg),镉(Cd),铅(Pb),铬(Cr)的含量,采用聚类分析,统计分析和主成分分析不同产地和种类对重金属含量累积特征进行分析。结果:六种重金属含量均符合《中医药-中药材重金属限量》ISO国际标准;按《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》限量值标准,As,Cd,Pb的超标率为15. 4%,5. 1%,2. 6%,Cu,Hg均符合相关要求。聚类分析,主成分分析可将样品按产地分为大理和昭通两类,统计分析结果表明产地对重金属含量的影响极显著,不同品种间差异较小。结论:该研究结果表明云南省各产区种植重楼的重金属含量基本符合相关标准,重楼药材的重金属含量差异主要表现为地域差异,为规范化种植重楼药材和其重金属含量限量标准的制定提供了理论依据。     

长柱重楼中主要甾体皂苷类成分的定性定量分析

为了从化学成分上研究长柱重楼是否具有重楼药材代用品的开发价值,该研究利用UPLC-Q-TOF MS比较了长柱重楼和滇重楼的化学成分,并进一步利用HPLC-UV同时测定了77株不同来源的长柱重楼中8种重楼皂苷的含量。结果显示长柱重楼和滇重楼的化学成分相似,长柱重楼化学成分更为复杂,鉴定的22个主要共有峰均为甾体类化合物。不同株长柱重楼中重楼皂苷的含量具有一定的差异,其中药典规定4种甾体皂苷(重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ)总量最高的为3.30%,最低的为0.068%,8种甾体皂苷总量最高的为6.18%,最低的为0.71%。长柱重楼中78%的样品符合《中国药典》要求,整体质量较为稳定,可以作为重楼替代品种进行研究开发。     

重楼中几个甾体皂苷类成分对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的 对重楼中的成分进行分离鉴定,结合药理模型筛选具有抑制血管生长活性的成分.方法 采用乙酸乙酯提取和硅胶柱层析法进行提取分离;利用1HNMR、13CNMR、13CNMR-APT、MS、IR、UV确定其化学结构,并且应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选.于鸡胚发育的第7天,将加药后的明腔海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育2d后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出观察.结果 从重楼中分离得到了4个甾体皂苷类成分,分别为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅴ和纤细薯蓣皂苷.通过活性筛选发现重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷3组鸡胚尿囊膜的小血管数目均小于空白组,其中重楼皂苷Ⅰ经统计分析P＜0.05具有显著性差异.结论 重楼皂苷Ⅰ具有抑制血管生长的活性.     

重楼的基源、生长条件与质量相关性研究

目的 比较不同基源、生长条件及采收季节的重楼皂苷含量,为重楼的引种栽培提供科学依据.方法 采集不同基源、不同生长年限、不同海拔及不同采收季节的重楼药材,按2015年版《中华人民共和国药典》重楼总皂苷含量测定方法进行测定.色谱柱为ACQUITY UPLC?HSS T3(3.0 mm×100 mm,1.8μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,检测波长203 nm,进样量5μl,流速0.5 ml/min,柱温35℃.结果 在所测样品中,总皂苷含量范围在1.35%~3.89%之间,含量顺序为:多叶重楼>滇重楼>华重楼;3~10年生的华重楼,生长年限越长,总皂苷含量越高;在海拔400~800 m生长的华重楼,总皂苷含量随着海拔上升而增加;春季采收的云南重楼其皂苷含量高于其他季节.结论 不同基源、生长条件、采收季节的重楼皂苷含量不同,引种栽培重楼应综合考虑.     

濒危民族药重楼种质资源调查及质量评价研究

重楼是一味传统民族药,其基源为重楼属多种植物的根茎,该属植物全世界共有26种,我国分布有20种.以横断山脉南段为核心的川、滇两省是重楼属植物在欧亚大陆的地理分布中心,也是重楼药材的传统产区.本课题对该地区重楼属的种质资源、开发利用情况、濒危状态开展了实地调查,并依据2005年版<中国药典>重楼药材的质控标准对该地区50份不同产地的重楼药材进行了质量评价,结果 可为重楼药材质量的系统评价和资源保护利用提供参考.     

Correlation among cytotoxicity,hemolytic activity and the composition of steroidal saponins from Paris L.

Ethnopharmacological relevance: Cytotoxicity and hemolysis of saponins were the characteristic activities. Many researches have been devoted to the synthesis of saponins devoid of the hemolysis by structure-activity relationship studies. However, saponins contained in the plants were not fully researched on the two activities such as Parissteroidal saponins. Paris steroidal saponins as the active compounds of Paris plants have multiple effects.Materials and Methods: In the present study, we investigated the cytotoxicity and hemolytic activity of Paris plants collected from twelve places in China. The contents of nine known steroidal saponins in the plants were determined simultaneously using HPLC-ELSD method. The two activities are not related to the contents of saponins.Results: As the results of hemolysis of saponins shown, the hemolysis was positive related to the sugar chain. The membrane toxicity suggested that the integration of saponins with the membrane in erythrocyte was correlated to the kinds of saponins and the hemolysis of disosgenyl saponins were stronger than that of pennogenyl glycosides.Conclusions: These results provided information about the hemolysis and cytotoxicity of Paris steroidal saponins, which may be useful for their synthesis devoid of hemolysis toxicity.     

基于顶空气相色谱法测定的重楼总皂苷中有机溶剂残留质量控制研究

目的:建立重楼总皂苷中正己烷、苯、甲苯、间二甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1,2-二乙基苯等共8种有机溶剂残留的测定方法。方法:将重楼总皂苷溶解于25%N,N-二甲基甲酰中,应用顶空气相色谱法,采用石英毛细管柱和氢离子火焰检测器,以高纯氮气为载气,测定重楼总皂苷中8种有机溶剂的残留量。结果:该法可将8种有机残留完全分离,且线性关系良好,r=0.9987~0.9998,精密度RSD均小于5.0%,平均加样回收率为95.24%~98.57%。结论:此法简便、准确、可靠,可用于大孔树脂制备的重楼总皂苷中有机溶剂残的质量控制。     

扩大重楼药用资源研究进展

重楼作为一种重要的中成药原料,目前市场需求量巨大,价格飞涨。为了保护重楼野生资源,满足重楼市场需求,目前对重楼及同属植物的化学成分、药理作用、临床应用、资源调查、人工栽培等多方面的研究已广泛开展。该研究对重楼属植物化学成分研究、重楼地上部分化学成分研究、胶质重楼与粉质重楼化学成分研究和重楼内生菌研究等方面的资料进行分析综述,以便对扩大重楼药用资源范围,寻找重楼替代品提供研究线索。研究发现重楼属植物、重楼地上部分、胶质重楼、重楼内生菌均能找到或产生重楼的重要化学成分甾体皂苷,但最终能否真正成为重楼替代品,还需进一步的实验研究,并在临床上得到有效的验证。