FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸联合治疗对荷胃癌小鼠调节性T细胞的影响

目的： 研究FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸 (1-D-methyl tryptophan,1-D-MT)联合应用是否有利于改善荷胃癌小鼠的免疫耐受状态。方法：用脂质体转染法,将pcDNA3.1-IDO质粒和pcDNA3.1 (+)空质粒稳定转染MFC细胞,并设未转染组;用RT-PCR和Western blot法检测未转染组、空质粒转染组和pcDNA3.1-IDO转染组IDO mRNA和蛋白的表达;然后建立荷胃癌小鼠皮下移植瘤模型,并设未转染组、空质粒转染组,IDO+生理盐水 (NS)组、FOLFOX4组、1-D-MT组和FOLFOX4+1-D-MT联合处理组,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏中Treg细胞数量变化;RT-PCR检测FOXP3 mRNA表达量变化。结果：IDO mRNA与蛋白表达在稳定转染pcDNA3.1-IDO质粒组细胞较未转染组、空质粒转染组表达量明显增加 (P<0.05)。IDO+NS组小鼠脾脏Treg细胞比例及FOXP3 mRNA含量较未转染组、空质粒组均明显增多 (P<0.05)。FOLFOX4+1-D-MT组和1-D-MT组与FOLFOX4组相比,Treg细胞比例及FOXP3 mRNA含量均明显降低 (P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT组降低更明显 (P<0.01)。结论：通过抑制Treg的增殖及降低FOXP3 mRNA表达,FOLFOX4与1-D-MT联合应用可降低机体免疫逃逸能力。     

FOLFOX4联合1-MT对胃癌小鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的： 观察FOLFOX4联合1-甲基-色氨酸 (1-methyl tryptophan,1-MT)对荷胃癌小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,以及对胃癌组织吲哚胺-2,3-双加氧酶 (indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)表达的影响。方法：将IDO真核表达质粒 (pcDNA3.1-IDO)转染小鼠胃癌细胞MFC,建立稳定表达IDO的细胞株,RT-PCR与Western blot法检测细胞中IDO的表达。小鼠皮下接种转染pcDNA3.1-IDO的MFC细胞悬液,建立高表达IDO的小鼠胃癌皮下移植瘤模型 (32只),同时设空白对照 (8只,接种未转染的MFC细胞)和阴性对照 (8只,接种转染pcDNA3.1质粒的MFC细胞),观察各组小鼠成瘤情况。将32只模型小鼠随机分为1-MT治疗组、FOLFOX4治疗组、FOLFOX4+1-MT联合治疗组和未治疗组 (阳性对照组),每组8只。治疗组分别注射给予1-MT、 FOLFOX4或FOLFOX4+1-MT,阳性对照组给予生理盐水。观察各组小鼠一般情况及肿瘤质量差异。注射细胞悬液后第12天处死所有小鼠,剥离瘤体并称重,计算各组小鼠平均瘤质量及抑瘤率,另取肿瘤标本采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织中IDO的表达。结果：RT-PCR与Western blot均检测到pcDNA3.1-IDO转染细胞中IDO的表达。高表达IDO的胃癌皮下移植瘤模型小鼠肿瘤质量大于空白对照组和阴性对照组小鼠 (P<0.05),且其胃癌组织IDO的表达亦较空白对照组和阴性对照组明显增加 (P<0.05)。给予1-MT、FOLFOX4 和FOLFOX4+1-MT治疗后,模型小鼠进食量均不同程度增加,行动较之前灵活,嗜睡也有不同程度好转,FOLFOX4+1-MT联合治疗组小鼠症状基本缓解。1-MT治疗组、 FOLFOX4治疗组和FOLFOX4+1-MT联合治疗组小鼠肿瘤质量均小于未治疗组 (P<0.05),其抑瘤率分别为 8.91%、80.20%、86.13%,FOLFOX4+1-MT联合治疗组小鼠肿瘤质量小于1-MT治疗组和FOLFOX4治疗组 (P<0.05)。1-MT治疗组、FOLFOX4治疗组和FOLFOX+1-MT联合治疗组小鼠胃癌组织中IDO的表达均低于未治疗组 (P<0.05);FOLFOX4+1-MT联合治疗组胃癌组织中IDO的表达低于1-MT治疗组和FOLFOX4治疗组 (P<0.05)。结论：1-MT对胃癌小鼠皮下移植瘤的生长和胃癌组织IDO的表达具有抑制作用,并能与FOLFOX4发挥协同抗肿瘤作用。     

脂质体介导pcDNA3.1-IDO转染hepG2细胞的初步研究

目的：建立脂质体介导pcDNA3.1-IDO转染人肝癌细胞株hepG2细胞的转染方法。方法：在大肠杆菌中扩增pcDNA3.1-IDO质粒,通过lipofectamineTM2000转染试剂将pcDNA3.1-IDO转入人肝癌细胞hepG2,同时设置空质粒转染组（pcDNA3.1-hepG2细胞）和空白对照组（hepG2细胞）。分别应用RT-PCR和Western blot方法检测吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）基因及IDO蛋白在hepG2细胞中的表达。结果：经RT-PCR和Western blot检测证实空质粒转染组和空白对照组hepG2细胞无IDO基因及蛋白的表达,而重组质粒组的hepG2细胞均表达IDO基因和蛋白。结论：通过脂质体介导成功地将pcDNA3.1-IDO转染入肝癌细胞株hepG2细胞。这为研究IDO基因奠定了基础。     

吲哚胺2,3-双加氧酶上调人肝癌细胞人类白细胞抗原-G的表达

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）对肝癌细胞人类白细胞抗原-G（humanleucocyte antigen-G,HLA-G）表达的影响。方法:用脂质体lipofectamine^TM2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-7721细胞作为实验组（pcDNA3.1-IDO质粒转染组）,同时设置空载体对照组（pcDNA3.1转染组）和空白对照组（未转染组）,用RT-PCR和Western blot鉴定实验组和2个对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达,然后分别给予实验组细胞IDO的抑制剂(2.5 mmol/L 1-D-MD和底物（200μmol/L L-色氨酸）干预48 h,进一步用实时荧光定量PCR和Westernblot检测上述5组细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平。结果:RT-PCR和Western blot显示空载体对照组和空白对照组未见IDO表达,而实验组细胞高表达IDO。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,实验组HLA-G mRNA和蛋白表达水平较空载体对照组和空白对照组均明显上调（P均<0.05）,给予1-D-MT和L-色氨酸干预后此效应可逆转。结论:在肝癌SMMC-7721细胞,IDO可以上调HLA-G的表达,色氨酸降解途径参与了此调节过程。     

白细胞介素-17过表达胃癌细胞 在小鼠体内的成瘤效应研究

目的：建立小鼠荷瘤模型,研究白细胞介素-17（IL-17）过表达的胃癌细胞在小鼠体内的成瘤效应。方法：分别以MFC、MFC/pcDNA3.1和MFC/IL-17细胞接种615小鼠,细胞浓度为5×10⁶个/mL,按每只200 μL注射于小鼠背部皮下。每组10只,观察小鼠皮下肿瘤生长情况。3周后处死小鼠,分别采用RT-PCR和Western blot法检测肿瘤组织内IL-17、VEGF、Podoplanin mRNA和蛋白表达;免疫组化法检测微血管密度。结果：MFC/IL-17组小鼠于接种后5~7 d开始形成肿瘤结节,且生长迅速,肿瘤质量为（5.384±0.391）g,大于MFC组[（1.726±0.445）g]和MFC/pcDNA3.1组[（2.064±0.397）g]（P < 0.05）。RT-PCR和Western blot结果显示,与MFC和MFC/pcDNA3.1组相比,MFC/IL-17组小鼠肿瘤组织内IL-17、VEGF、Podoplanin mRNA和蛋白表达均明显增加（P < 0.05）。免疫组化结果显示,与MFC和MFC/pcDNA3.1组相比,MFC/IL-17组小鼠肿瘤组织内微血管密度明显增加（P < 0.05）。结论：IL-17可能通过上调VEGF、Podoplanin和CD31的表达促进血管和淋巴管形成,加速肿瘤生长。     

转染KISS-1对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的 影响

 目的 探讨KISS-1基因对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的影响。 方法 通过脂质体介导将pcDNA3.1-KISS-1转染人食管鳞癌细胞EC-1,用Western blot法检测转染前、后KISS-1蛋白的表达。将单纯EC-1细胞、稳定转染空质粒的EC-1细胞、稳定转染pcDNA3.1-KISS-1的EC-1分别接种于BALB/c-nude裸鼠,构建裸鼠食管鳞癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情 况,测量肿瘤体积和瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;免疫组织化学和半定量RT-PCR技术检测肿瘤组织中KISS-1蛋白和mRNA的表达。 结果 KISS-1基因转入食管鳞癌EC-1细胞,KISS-1蛋白的表达（1.143±0.218）较空质粒转染组（0.745±0.130）和对照组（0.855±0.184）明显增加（P<0.05）,转染KISS-1基因组裸鼠较空质粒转染组和对照组肿瘤生长速度慢,体积（949.42±102.26）mm3与空质粒转染组（1339.82±72.23）mm3和对照组（1384.04±97.07）mm3相比明显减小（P<0.05）,瘤体重量（0.498±0.654）g与空质粒转染组（0.638±0.066）g和对照组（0.676±0.108）g相比明显减轻（P<0.05）。 结论 通过基因转染的方法能表达有活性的KISS-1,并能抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长。     

Indoleamine 2,3-dioxygenase up regulates the expression of human leucocyte antigen-G in hepatocellular carcinoma cells

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)对肝癌细胞人类白细胞抗原-G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)表达的影响.方法:用脂质体lipofectamineTM2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-77 2 1细胞作为实验组(pcDNA3.1-IDO质粒转染组),同时设置空载体对照组(pcDNA3.1转染组)和空白对照组(未转染组),用RTPCR和Western blot鉴定实验组和2个对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达,然后分别给予实验组细胞IDO的抑制剂(2.5 mmol/L 1-DMT)和底物(200μmol/L L-色氨酸)干预48 h,进一步用实时荧光定量PCR和Westernblot检测上述5组细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平.结果:RT-PCR和Western blot显示空载体对照组和空白对照组未见IDO表达,而实验组细胞高表达IDO.实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,实验组HLA-G mRNA和蛋白表达水平较空载体对照组和空白对照组均明显上调(P均＜0.05),给予1-D-MT和L-色氨酸干预后此效应可逆转.结论:在肝癌SMMC-7721细胞,IDO可以上调HLA-G的表达,色氨酸降解途径参与了此调节过程.     

重组人血管内皮生长因子165对K562白血病细胞生物学活性的影响

目的：探讨人重组血管内皮生长的因子165对人K562白血病细胞生物学活性的影响。方法：利用pcDNA3.1（＋）质粒构建人重组含VEGF165的真核表达载体,脂质体转染至K562白血病细胞,并用G418筛选阳性克隆;以RT-PCR测定重组质粒载体VEGF165基因的表达;MTT法测定K562白血病细胞的生长;建立裸鼠皮下移植人K562肿瘤模型,测定肿瘤体积的大小;免疫组化检测肿瘤的微血管密度（MVD）。结果：成功构建pcDNA3.1（＋）-VEGF165表达质粒。K562白血病细胞转染重组质粒后,明显增加K562细胞中VEGF165 mRNA的表达,转染重组质粒的K562细胞增殖明显快于对照组;移植重组pcDNA3.1（＋）-VEGF165质粒转染的K562细胞之后,荷瘤鼠移植瘤生长明显快于对照组;并且移植瘤组织微血管密度明显高于对照组（P〈0.05）。结论：利用pc DNA3.1（＋）真核表达质粒可成功构建含人VEGF165的重组质粒,重组质粒转染K562细胞后,体内外均明显促进K562细胞增殖。     

miR-32-5p通过靶向下调EZH2的表达抑制胰腺癌PANC-1细胞的恶性 生物学行为与裸鼠移植瘤生长

目的：探究miR-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2（EZH2）对胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法：利用GEPIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析miR-32-5p表达与患者临床病理因素的关系。qPCR法检测正常胰腺HPDE6-C7细胞和胰腺癌PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p和EZH2 mRNA的表达,通过LipofectamineTM 2000将miR-NC、miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor、pcDNA-NC、pcDNA EZH2质粒分别转染PANC-1细胞,其分为对照组（不转染）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-32-5p mimic组（转染miR-32-5p mimic）、Anti-miR-32-5p 组（转染miR-32-5p inhibitor）、miR-NC+pcDNA-NC组（转染miR-NC+pcDNA-NC）、miR-NC+pcDNA EZH2组（转染miR-NC+pcDNA EZH2）、miR-32-5p mimic+pcDNA-NC组（转染miR-32-5p mimic+pcDNA-NC）、miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2组（转染miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2）。双荧光素酶报告基因实验验证miR-32-5p与EZH2的靶向关系;MTT法及克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力,WB法检测各组细胞EZH2、E-cadherin、N-cadherin的表达;裸鼠成瘤实验检测转染后各组 PANC-1 细胞移植瘤的生长情况,免疫组化染色法观察移植瘤组织中Ki67和MMP-2的表达。结果：GEPIA数据库显示胰腺癌组织中EZH2的表达水平高于癌旁组织,患者预后生存期与EZH2的表达水平呈负相关（均P<0.05）;miR-32-5p表达水平与胰腺癌神经浸润、肿瘤分化程度、TNM 分期、淋巴结转移有明显的关联（均P<0.05）;与HPDE6-C7细胞相比,PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p呈高表达、EZH2 mRNA呈低表达、miR-32-5p表达水平与EZH2 表达水平呈负相关（均P<0.05）。miR-32-5p靶向EZH2且抑制其表达（均P<0.05）;过表达miR-32-5p能够下调Ki67、MMP-2、N-cadherin 表达水平、上调 E-cadherin 表达水平,抑制 PANC-1 细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制移植瘤质量增加（均 P<0.05）。结论：miR-32-5p能够靶向调控EZH2从而影响胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT进程及裸鼠体内移植瘤的生长。     

IDO-siRNA对胃癌细胞株MGC803中IDO与IL-6水平的影响

目的：本实验以吲哚胺2,3双加氧酶（IDO）为切入点,对比分析IDO-siRNA干扰前后胃癌细胞株MGC803中IDO及IL-6表达水平变化,研究IDO在胃癌及抑郁中发生、发展的作用,探讨胃癌促发抑郁的可能分子机制。方法采用siRNA干扰技术转染胃癌细胞株MGC803,免疫细胞化学法及RT-PCR法观察IDO蛋白及基因水平的变化,ELISA法检测转染siRNA前后胃癌细胞株上清液中IL-6表达水平,研究IDO对胃癌细胞株以及抑郁相关细胞因子的影响。结果胃癌细胞MGC803经转染IDO-siRNA后IDO的表达经免疫细胞化学及RT-PCR法的检测均明显下降（P﹤0.05）;转染IDO-siRNA 24 h后胃癌细胞MGC803的细胞上清液中IL-6的表达较未转染前明显降低,差异有统计学意义（P﹤0.01）。结论 IDO在胃癌细胞株MGC803中高表达;IDO-siRNA可抑制胃癌细胞株MGC803中IDO的表达;胃癌细胞株MGC803经IDO-siRNA干扰后分泌的细胞因子IL-6的表达减弱,表明IDO与IL-6的表达存在关联,IL-6可能在胃癌及抑郁的发生发展中起一定的作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。