miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2（ZEB2）对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1 组 、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1 组 、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2 组。CCK-8 法 、克隆形成 、划痕愈合 、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果：胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织（P<0.01）,且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关（r=-0.419,P<0.01）。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达（均P<0.01）。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果（P<0.05或P<0.01）。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论：miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。     

miR-409-3p调控靶基因Beclin-1抑制小细胞肺癌细胞的自噬进而抑制其生长和转移

目的:探究miR-409-3p及其靶基因对小细胞肺癌细胞自噬、生长和转移的影响。方法:qRT-PCR检测miR-409-3p在HPAEpiC、SBC-5、NCI-H446、HOP-92细胞中的表达,SBC-5细胞中转染miR-409-3p mimic和miR-NC,CCK8法检测转染后细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验检测miR-409-3p和Beclin-1的靶向结合,SBC-5细胞中转染miR-409-3p mimic后转染Beclin-1过表达质粒（miR-409-3p mimic+Beclin-1）,然后检测各组细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡水平。Western blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62的表达。结果:miR-409-3p在SBC-5、NCI-H446、HOP-92细胞中的表达显著低于HPAEpiC细胞。miR-409-3p mimic组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著低于miR-NC组,凋亡水平显著高于miR-NC组。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示miR-409-3p靶向结合Beclin-1。miR-409-3p mimic+Beclin-1组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著高于miR-409-3p mimic组,细胞凋亡水平显著低于miR-409-3p mimic组。miR-409-3p mimic组细胞Beclin-1、LC3-Ⅱ表达显著低于miR-NC组,p62表达显著高于miR-NC组。miR-409-3p mimic+Beclin-1组细胞LC3-Ⅱ表达显著高于miR-409-3p mimic组,p62表达显著低于miR-409-3p mimic组。结论:miR-409-3p调控靶基因Beclin-1抑制SBC-5细胞生长和转移,其机制可能为抑制小细胞肺癌细胞的自噬。     

miR-139-5p靶向GPR56抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:研究miR-139-5p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测软骨肉瘤细胞中miR-139-5p、GPR56的mRNA表达;Western blot检测细胞中GPR56的蛋白表达;将miR-139-5p组（转染miR-139-5p mimics）、miR-NC组（转染miR-NC）、si-NC组（转染si-NC）、si-GPR56组（转染si-GPR56）、miR-139-5p+pcDNA3.1组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1共转染）、miR-139-5p+pcDNA3.1-GPR56组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1-GPR56共转染）,均以脂质体法转染至U-2OS细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭。结果:与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞U-2OS中miR-139-5p表达显著降低,GPR56表达显著升高（P＜0.05）。过表达miR-139-5p、敲减GPR56均可明显抑制U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭;GPR56是miR-139-5p的靶点。过表达GPR56可逆转miR-139-5p对U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-139-5p可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向GPR56有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

miR-1243通过靶向hnRNPA2B1调控肝癌HepG2细胞增殖和迁移

目的：探讨miR-1243通过靶向调控核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNPA2B1）表达对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响及其分子机制。方法：用qPCR和WB法检测40例肝癌组织及其癌旁组织（2019年1月至2021年8月在武汉市第三医院首义院区手术切除标本）和正常人肝细胞 QSG-7701 与肝癌细胞 HepG2、Hep3b、HuH-7 中 miR-1243、hnRNPA2B1 mRNA 水平及hnRNPA2B1、cyclin D1、MMP-2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-1243和hnRNPA2B1的靶向关系。HepG2细胞分为对照组（不转染）、miR-NC 组（转染 miR-NC）、miR-1243 mimic 组（转染 miR-1243 mimic）、miR-1243 mimic+pcDNA3.1 组（转染miR-1243 mimic 和 pcDNA3.1）、miR-1243 mimic+pc-hnRNPA2B1 组（转染 miR-1243 mimic 和 pc-hnRNPA2B1）后进行相应转染;WB 法检测肝癌组织及细胞和转染后各组细胞的 hnRNPA2B1、cyclin D1、MMP-2 蛋白表达水平;CCK-8 法检测转染后各组HepG2细胞的增殖能力;划痕愈合实验检测转染后各组HepG2细胞的迁移能力。结果：与癌旁组织或正常人肝细胞QSG-7701相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-1243呈低表达、hnRNPA2B1 mRNA及其蛋白呈高表达（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-1243与hnRNPA2B1间存在靶向关系,且miR-1243通过靶向hnRNPA2B1负调控其表达。转染miR-1243 mimic后HepG2细胞中hnRNPA2B1蛋白表达、细胞增殖能力、划痕愈合率及cyclin D1、MMP-2蛋白表达均显著降低（均P<0.05）;而同时过表达 hnRNPA2B1 和 miR-1243 可逆转过表达 miR-1243 对 HepG2 细胞增殖、迁移的抑制作用。结论：miR-1243 通过靶向hnRNPA2B1表达调控肝癌HepG2细胞的增殖和迁移。     

miR-194靶向EZH2抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-194、EZH2对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测甲状腺癌组织、癌旁正常组织及甲状腺癌细胞和正常甲状腺上皮细胞中miR-194和EZH2的mRNA表达；将miR-194（转染miR-194 mimics）、miR-NC（未转染细胞）、inhibitor-NC（转染空inhibitor）、miR-194 inhibitor（转染miR-194 inhibitor）、si-EZH2（转染si-EZH2）、miR-194+Vector（miR-194 mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-194+EZH2（miR-194 mimics和pcDNA 3.1-EZH2共转染）均以脂质体法转染到SW579、IHH-4细胞；Western blot检测细胞中EZH2的蛋白表达；MTT法检测细胞的增殖；Transwell检测细胞的迁移和侵袭；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果:与正常组相比，甲状腺癌组EZH2的表达显著升高，miR-194的表达显著降低；与人正常甲状腺上皮细胞相比，甲状腺癌细胞中EZH2表达显著升高，miR-194的表达显著降低，且过表达miR-194和沉默EZH2均可抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。EZH2为miR-194的靶标，且EZH2可逆转过表达miR-194对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-194可抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，可能与靶向EZH2有关，将可为miR-194靶向治疗甲状腺癌提供依据。     

LncRNA TUG1靶向miR-138-5p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA 138-5p（miR-138-5p）在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-qPCR法检测胰腺癌组织及其细胞系中TUG1和miR-138-5p表达水平。通过小干扰RNA下调PANC-1细胞中TUG1水平或转染miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TUG1和miR-138-5p的靶向关系。共转染TUG1-siRNA和miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在胰腺癌组织及其细胞系中，TUG1表达上调（P<0.05）而miR-138-5p表达下调（P<0.05）。在PANC-1细胞中敲减TUG1或过表达miR-138-5p，细胞活力、迁移和侵袭能力下降（P<0.05）。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明，TUG1可靶向调控miR-138-5p表达。MTT、Transwell实验结果显示，降低miR-138-5p的表达可逆转TUG1-siRNA对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:敲减TUG1能够通过上调miR-138-5p水平抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

miR-122-5p通过靶向CREB1抑制食管癌细胞及移植瘤的生长

背景与目的：miR-122在多种肿瘤中表达异常,参与肿瘤细胞增殖、凋亡等,而cAMP反应元件结合蛋白1（cAMP response element-binding protein 1,CREB1）参与食管癌发展过程,研究miR-122-5p通过靶向CREB1对食管癌细胞及移植瘤生长的作用及机制。方法：选取2017年11月—2019年11月于福建医科大学附属泉州第一医院行肿瘤切除术后保存在液氮中的食管癌及相应癌旁正常组织（距癌边缘3~5 cm）标本43例。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测食管癌组织和细胞中miR-122-5p mRNA和CREB1 mRNA的表达。将细胞分为对照组、miR-NC组、pc-NC组、miR-122-5p mimic组、pc-CREB1组、miR-122-5p mimic+pc-CREB1组,根据Lipofectamine ^TM 2000说明书将miR-NC、pc-NC、miR-122-5p mimic、pc-CREB1质粒分别或联合转染进入EC109细胞中。采用双萤光素酶报告基因实验分析靶向关系,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用克隆形成实验检测细胞生长能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、活化胱天蛋白酶-3、Bax、Bcl-2、CREB1蛋白的相对表达水平。所有裸鼠分为4组：control组、miR-122-5p mimic组、pc-CREB1组、miR-122-5p mimic+pc-CREB1组。在裸鼠左腋下皮下注射各转染过的EC109细胞。30 d后处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,测定移植瘤体积和质量,采用免疫组织化学法检测Ki-67标记指数和胱天蛋白酶-3的表达水平。结果：miR-122-5p在食管癌组织和细胞中低表达,而CREB1在食管癌组织和细胞中高表达（P均<0.01）。miR-122-5p靶向下调CREB1表达。与对照组相比,miR-122-5p组食管癌细胞克隆数目减少,PCNA和Ki-67标记指数降低,细胞凋亡率增加,活化胱天蛋白酶-3和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,食管癌EC109移植瘤体积和质量减小,Ki-67阳性细胞比率增加,活化胱天蛋白酶-3阳性细胞比率减少（P均<0.01）。过表达CREB1可逆转miR-122-5p对食管癌细胞和移植瘤增殖和凋亡的影响。结论：miR-122-5p通过靶向下调CREB1来抑制食管癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而抑制食管癌细胞和移植瘤的生长。     

长链非编码RNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究lncRNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR法检测细胞中 NR2F2-AS1、miR-425-5p的mRNA表达情况;将pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NR2F2-AS1组（转染pcDNA-NR2F2-AS1）、sh-NR2F2-AS1组(转染sh-NR2F2-AS1)、sh-NC组(转染sh-NC)、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-425-5p组（转染anti-miR-425-5p）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-NC组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-NC）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-425-5p组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-425-5p mimics）转染至MGC-803、MKN-45细胞;MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45中NR2F2-AS1的表达显著降低,miR-425-5p的表达显著升高;过表达NR2F2-AS1、抑制miR-425-5p均可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡;miR-425-5p可抑制野生型NR2F2-AS1的MGC-803、MKN-45细胞的荧光活性;过表达miR-425-5p可逆转过表达NR2F2-AS1对MGC-803、MKN-45细胞增殖和凋亡的作用。结论:lncRNA NR2F2-AS1可抑制胃癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与靶向miR-425-5p有关,将可为胃癌的治疗提供新靶点。     

miR-141-3p靶向TGF- β2 对人前列腺癌C4-2B 细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-141-3p 与转化生长因子-β2(transforming growth factor β2, TGF-β2)基因的靶向关系及其对人前列腺癌细胞株C4-2B 恶性生物学行为的影响。方法：转染miR-141-3p mimic 后,qRT-PCR 检测C4-2B 细胞miR-141-3p 和TGF-β2mRNA的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 与TGF-β2 的靶向关系。miR-141-3p mimic 与TGF-β2 过表达载体单独或共转染C4-2B细胞后, Western blotting 检测转染C4-2B细胞中TGF-β2 蛋白的表达水平,Hoechst33258 染色检测细胞凋亡情况,Transwell 实验检测各组细胞的侵袭能力。结果：miR-141-3p mimic转染后,C4-2B细胞miR-141-3p 的相对表达水平明显提高、TGF-β2 mRNA的相对表达水平明显降低（均P<0.01）。miR-141-3p mimic 与野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低（P<0.01）;miR-141-3p mimic 与突变型报告载体共转后,荧光素酶的活性没有明显变化（P>0.05）;miR-141-3p mimic 添加到pc-TGF-β2 转染的C4-2B细胞后,细胞增殖倍数明显降低、凋亡细胞数目显著增加、细胞侵袭能力显著降低（均P<0.01）。结论：miR-141-3p 与TGF-β2 存在靶向关系,且两者协同影响人前列腺癌C4-2B细胞增殖、侵袭能力并诱导其凋亡。     

环氧合酶-2抑制剂Celebrex对胰腺癌PC-3细胞株VEGF和PGE2表达的影响

目的 探讨选择性环氧合酶(COX)—2抑制剂Celebrex，对胰腺癌PC—3细胞株血管内皮生长因子(VEGF)和前列腺素E2(PGE2)表达的影响。方法 应用酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)方法，检测选择性COX—2抑制剂Cdebrex与胰腺癌PC—3细胞VEGF和PGE2表达间的时间一效应关系和剂量—效应关系。结果 Celebrex在一定时间和剂量范围内可抑制PC一3细胞株中VEGF和PGE2的表达，且VEGF和PGE2的变化趋势一致。结论 COX一2可能参与了PC一3细胞VEGF的分泌，而PGE2则可能在该过程中起着重要的介导作用。     

COX-2与子宫内膜癌的关系

目的 研究子宫内膜癌中环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）的表达及其与临床病理因素的关系。探讨COX-2在子宫内膜癌发生、发展中的作用。方法 采用免疫组织化学S-P法检测20例正常子宫内膜、20例不典型增生子宫内膜、45例子宫内膜癌等3组标本的COX-2蛋白表达水平。结果 正常子宫内膜、不典型增生内膜及子宫内膜癌组织中率分别为15.0％（3／20）、50.0％（10／20）、77．8％（35／45），由正常子宫内膜至子宫内膜癌的进展过程中，COX-2的阳性表达率呈现逐渐增高的趋势。COX-2阳性表达率与子宫内膜癌的分期、淋巴结转移、肌层浸润深度、病理类型无明显相关性。高分化内膜癌COX-2阳性表达率（89.3％）高于中低分化内膜癌（58．8％），P〈0．05。结论 COX-2在子宫内膜癌发生、发展中起着重要的作用。COX-2表达上调可能是子宫内膜癌形成中的早期事件。     

基质金属蛋白酶-2和纤维粘连蛋白mRNA表达与乳腺癌转移相关性的探讨

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达量与乳腺癌转移的关系.方法:采用荧光定量RT-PCR方法检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌的MMP-2和FN mRNA表达量,分析MMP-2和FN mRNA表达量与乳腺癌转移的关系.结果:30例淋巴结转移癌的MMP-2和FN mRNA表达量低于原发癌,组间比较差异有显著性(P＜0.05).MMP-2和FN mRNA表达量呈线性分布,但线性回归和双变量线性相关分析表明两个基因的mRNA表达量无相关性(P＜0.05).结论:MMP-2和FN mRNA表达量在转移癌较原发癌下调.     

VEGF、MMP-2与TIMP-2在大肠癌中的表达

 目的　研究VEGF、MMP 2与TIMP 2在大肠癌组织中的表达、相互关系及与肿瘤生物学行为的相关性。方法　对 5 4例大肠癌患者的手术切除之癌组织和癌周正常组织 ,应用免疫组织化学方法检测其VEGF、基质金属蛋白酶MMP 2和组织金属蛋白酶抑制剂TIMP 2的表达情况 ,探讨两者之间的相互关系及其与肿瘤生物学行为的相关性。结果　VEGF、MMP 2与TIMP 2这三种蛋白在肿瘤组织中表达水平明显高于在正常组织中的表达。这三种蛋白的表达呈正相关 ,且表达水平与组织类型、组织分化程度、淋巴结转移、临床分期和五年生存率有统计学相关性 (P <0 .0 5 )。结论　大肠癌中VEGF、MMP 2与TIMP 2的表达 ,可能是癌肿发生、生长和浸润转移的重要因素 ,可作为判断肿瘤恶性程度的重要指标。     

MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D表达与结肠癌侵袭转移的关系研究

目的探讨MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D在结肠癌侵袭转移中的作用。方法采用组织芯片技术,应用免疫组化方法,检测77例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶组织中MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D的表达情况。结果MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D的高表达率在原发灶和转移灶中分别为20.78%VS41.56%、61.04%VS44.16%、75.32%VS53.25%。MMP-2高表达率在原发灶显著低于转移灶;TIMP-2和Cathepsin D高表达率在原发灶均显著高于转移灶（P均〈0.05）。MMP-2表达强度在原发灶显著低于转移灶,TIMP-2及Cathepsin D表达强度在原发灶显著高于转移灶（P〈0.001）。结论MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D的表达与结肠癌细胞浸润和转移能力有关,高表达MMP-2和低表达TIMP-2的癌细胞更易发生淋巴道转移。     

In vitro phosphorylation of BRCA2 by the checkpoint kinase CHEK2

Germline mutations in both BRCA2 and CHEK2 are associated with an increased risk for male breast cancer. To search for potential interactions between the products of these breast cancer susceptibility genes, we undertook systematic mapping of BRCA2 for potential phosphorylation sites by CHEK2. In vitro kinase assays and mass spectrometric analysis identified a 50 amino-acid fragment within the N-terminus of BRCA2 potentially targeted by CHEK2, containing two major phosphopeptides. Inducible overexpression of this peptide, but not a derivative with mutated phosphorylation sites, leads to increased chromosome fragmentation and suppression of cellular proliferation. These results suggest a link between CHEK2 and BRCA2 pathways, which may contribute to the spectrum of cancers associated with germline CHEK2 mutations.     

肺癌TIL抗瘤活性、表型分析及临床应用的初步观察

目的 从肺癌患者手术切除的肿瘤组织中分离出肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）,经rIL-2体外激活培养,研究TIL对瘤细胞的杀伤活性及其表型变化,并对其回输后的毒副反应及患者免疫功能 变化进行了观察。方法 从51例肺癌患者手术切除的实体瘤中分离得到TIL,并经10％人AB血清RPMI－1640液培养。12例在培养前、后应用3H－TdR释放实验测定TIL对自体瘤细胞和801－D细胞的杀伤作用,13例用间接免疫荧光法测定了淋巴细胞表型CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 比例的变化。15例患者静脉输注了活化的自体TIL。结果 TIL在培养第25天左右对自体瘤细胞和801－D细胞的杀伤力比培养当天有显著性提高;淋巴细胞表型分析示CD3^ 、CD8^ 比例在培养过程中有明显提高,而CD4^ 比例和CD4^ /CD8^ 比例变化不大;自体回输的15例患者一般状况好, 无明显毒副反应,辅助检查无异常改变,免疫功能增强,复查血尿常规、生化、心肺功能等均无异常改变,远期疗效正在观察中。结论 大部分病例短期即可回输TIL,且毒副反应小,因此肺癌TIIL过继免疫治疗是一种值得在临床进一步研究的免疫治疗方法。     

THE INFECTION OF EBV FOR CERVICAL EPITHELIUM-A NEW CAUSITIVE AGENT IN THE DEVELOPMENT OF CERVICAL CARCINOMAS?

Epstein-Barr virus was considered as a caustive agent for Burrkitt' s lymphoma and non-malignant B lymphocytes proliferation. The recent studies revealed the striking association of the Infection of EBV with the development of human epithelial tumors. 43 specimens of normal exfoliated cervical epithelial cells, 47 biopsies of chronic cervlcitis and 80 tissue samples of cervical carcinomas were tested for the presences of EBV W fragments by using dot blot hybridization method. The results showed that the detectable rates of EBV DNA sequences In the normal exfoliated epithelium, the chronic cervlcitis and cervical carcinomas were 44.16%, 12.77% and 13.75%, respectively. Eleven EBV positive DNA samples from cervical cancers were also examined for the presence of HPV DNA. The result showed 9 out of 11 were HPV DNA positive, the cultanious infectious rate of both viruses was about 81.81%.In this paper, the EBV genomes existed In the part of biopsies of cervical carcinomas were first reported. The results Imp     

MD2 blockage prevents the migration and invasion of hepatocellular carcinoma cells via inhibition of the EGFR signaling pathway

BackgroundThe toll-like receptor (TLR) is an emerging signaling pathway in tumor invasion and metastasis. The activation of TLRs requires specific accessory proteins, such as the small secreted glycoprotein myeloid differentiation protein 2 (MD2), which contributes to ligand responsiveness. However, the role of MD2 in tumorigenesis and metastasis has rarely been reported. This study aimed to investigate the effects and underlying mechanisms of MD2 on the proliferation, migration, and invasion of hepatocellular carcinoma (HCC).MethodsCell counting kit 8 (CCK8), cell colony formation, wound healing, and transwell assays were conducted to determine cell viability, proliferation, migration, and invasion, respectively. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) was performed to assess the expression of MD2 in HCC cell lines and human normal liver cell lines as well as the silencing efficiency of MD2 blockage. Western blot and qRT-PCR assays were performed to detect the protein and mRNA expression levels of epithelial mesenchymal transformation (EMT) markers and epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling molecules.ResultsMD2 was highly expressed in HCC tissues and cell lines. High expression of MD2 was associated with poor prognosis of HCC patients. In addition, MD2 silencing slightly inhibited the proliferation of HepG2 and HCCLM3, and significantly suppressed cell migration and invasion. Furthermore, MD2 blockage could distinctly prevent the EMT process by increasing the protein and mRNA levels of E-cadherin and Occludin, and decreasing the levels of Vimentin, N-cadherin, and Snail. Finally, the phosphorylation level of EGFR as well as its downstream molecular Src, Akt, I-κBα, and p65 were downregulated in HCC cells with MD2 silencing.ConclusionsOur findings suggest that high expression of MD2 may affect the EMT, migration, and invasion via modulation of the EGFR pathway in HCC cells.     

THE CERVIX MULTI－VIRUSES INFECTION AND THE DEVELOPMENT OF CERVICAL CARCINOMAS

ＴＨＥＣＥＲＶＩＸＭＵＬＴＩ－ＶＩＲＵＳＥＳＩＮＦＥＣＴＩＯＮＡＮＤＴＨＥＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＯＦＣＥＲＶＩＣＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡＳＺｈａｎｇＷｅｉ张伟；ＪｉｎＳｎｕｎｑｉａｎ金顺钱；ＬｉｕＢｏｑｉ刘伯齐；ＬｉａｎｓＸｉａｏ梁肖；ＭｉｎｇＬｉｈｕ...