TWEAK及其受体Fn14在大鼠骨关节炎(OA)关节软骨和滑膜中的表达

目的 检测肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导因子14 (fibroblast growth factor inducible 14,Fn14) mRNA及蛋白在大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨和滑膜中的表达情况,初步了解TWEAK及其受体Fn14在OA发病中的作用.方法 42只大鼠中随机选取18只行膝关节前交叉韧带切断(anterior cruciate ligament transection,ACLT)制作OA模型作为实验组,另外18只接受手术但不切断前交叉韧带作为假手术组,剩余6只作为正常对照组.饲养至1、2、4周时,实验组及假手术组随机各取6只处死,6只正常对照组在第4周处死,采集所有动物关节软骨及滑膜组织,用实时定量PCR及Western blot分别检测TWEAK和Fn14在mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 术后第2和第4周实验组动物关节滑膜中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表达水平显著上调,与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第2周实验组动物关节软骨中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表水平与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TWEAK及其受体Fn14的mRNA及蛋白表达水平在大鼠OA关节软骨及滑膜组织中的表达显著增高,它们可能是参与OA的重要细胞诱导因子.     

白藜芦醇对佐剂性关节炎大鼠血管内皮因子表达的影响

目的：探讨白藜芦醇( Res)对佐剂性关节炎( AA)模型大鼠关节滑膜组织的抗炎作用和对血管内皮生长因子( VEGF)表达水平的影响。方法60只SD大鼠随机分正常组(10只)和模型组(50只),模型组左后足趾皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型,模型组在建模后12 d再分5组：模型对照组、Res低剂量组(5 mg/kg )、Res中剂量组(15 mg/kg)、Res高剂量组(30 mg/kg)、阳性药塞来昔布组(5 mg/kg),给药16 d后处死大鼠,对各组大鼠踝关节滑膜组织行病理切片、HE染色和VEGF免疫组化染色。观察滑膜增生、血管翳形成、炎症渗出、关节软骨和骨破坏等情况。 Western blot法检测VEGF蛋白的表达情况。结果 Res治疗组的关节病理学评分明显低于模型对照组,免疫组化染色以及Western blot结果显示, Res 能降低滑膜组织 VEGF 表达水平。结论 Res 有改善大鼠关节滑膜炎症、抑制滑膜组织VEGF表达的作用,这可能与Res治疗AA关节炎有关。     

肿瘤坏死因子与人工关节无菌性松动关系的探讨：附7例报告

目的　探讨人工关节无菌性松动的病因。方法　选择 7例松动人工髋关节病例 ,翻修手术时取松动关节周围的界膜组织 ;选择 1 0例骨折内固定患者 ,拆除内固定时取内固定物周围瘢痕组织。标本作组织学检查 ,并作肿瘤坏死因子(TNF)测定。结果　松动人工髋关节周围的界膜组织中含大量组织细胞和纤维母细胞 ;免疫组化染色显示 ,组织细胞标记抗体、溶菌酶和 α1 -抗胰蛋白酶染色阳性。而骨折内固定物周围的瘢痕组织主要为纤维成分。松动人工髋关节周围界膜组织中的TNF浓度明显高于骨折内固定物周围的瘢痕组织 (P<0 .0 1 )。结论　在生物性因素方面 ,磨损微粒是松动发生的关键性因素 ,它可刺激组织细胞分泌 TNF等溶骨性因子 ,这些溶骨性因子直接或间接地激活破骨细胞 ,从而引起人工关节周围骨吸收、骨溶解 ,最终导致人工关节无菌性松动。     

TWEAK对THP-1细胞中LOX-1表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂(TWEAK)对人单核细胞(THP-1)中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法通过半定量RT-PCR检测不同浓度的TWEAK对THP-1细胞中LOX-1mRNA的表达,通过Western blot检测不同浓度的TWEAK对THP-1细胞中LOX-1蛋白表达的影响。结果发现TWEAK能够上调THP-1细胞中LOX-1mRNA及蛋白的表达,并且具有浓度和时间依赖性。结论 TWEAK可通过诱导单核-巨噬细胞表达LOX-1而具有致动脉粥样硬化的作用。     

人工髋关节无菌性松动27例的病因分析

目的 探讨人工髋关节松动的病因，提前预防，提高手术疗效。方法 27例松动翻修的人工髋关节，手术时取关节周围的界膜组织，同时取32例拆除内固定物的周围瘢痕组织，进行光镜、偏振显微镜及细菌培养。结果 松动人工髋关节周围存在的界膜中含大量磨屑微粒、细胞释放活性因子和酶类，而骨折内固定物周围的瘢痕组织主要有纤维成分。结论 关节磨损后，其力学因素和生物学因素导致骨溶解，无菌性假体松动，故确保假体稳定及抗骨吸收因子药物应用是防止松动的重要条件。     

桂皮醛对关节炎大鼠炎症因子及骨桥蛋白的作用

目的 探讨桂皮醛(Cin)对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠的作用及对骨桥蛋白(OPN)水平的影响。方法 选取20只SPF级SD健康雄性大鼠,随机选取5只大鼠为对照组,其余大鼠建立Ⅱ型CIA大鼠模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量Cin组、高剂量桂Cin组,每组5只。造模成功后连续给药3周,1次/天,低、高剂量Cin组分别给予剂量为100、200 mg/kg的Cin灌胃处理,正常组和模型组使用等量生理盐水灌胃处理。观察Cin对CIA大鼠关节炎评分影响,检测各组大鼠血清中OPN、白介素-6(IL-6)、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,免疫组织化学法(IHC)检测滑膜组织中OPN表达,Western blot法检测滑膜组织中OPN的蛋白表达,RT-QPCR方法检测软骨中OPN mRNA水平,HE染色观察各组大鼠关节组织病理改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠关节炎评分显著升高,血清中OPN、IL-6、IL-17和TNF-α的水平显著升高,OPN在滑膜、软骨表达水平升高,关节组织出现明显的炎症细胞浸润和滑膜增生;与模型组比较,低、高剂量Cin组能够降低大鼠关节炎评...     

全髋关节置换与髋关节表面置换治疗髋臼骨折后骨关节炎的疗效研究

目的比较全髋关节置换和髋关节表面置换对髋臼骨折后骨关节炎的临床疗效。方法将菏泽市立医院2008年1月至2010年5月收治的髋臼骨折后创伤性关节炎患者61例(61髋)随机分为全髋关节置换组(31例)和髋关节表面置换组(30例),术后评定髋关节功能。结果随访时间为9个月至5.5年,所有患者髋关节活动显著改善,疼痛症状消失或明显好转,无神经血管损伤、假体松动、关节脱位、下肢深静脉血栓形成、股骨颈骨折等并发症发生。全髋关节置换组3髋有X线片透亮区,1髋有局灶性骨溶解。髋关节表面置换组术后髋关节屈伸活动度大于全髋关节置换组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论髋臼骨折后创伤性关节炎的年轻患者和对运动要求较高的老年患者,可选择髋关节表面置换术,术后关节功能改善明显,髋关节屈伸活动度较好。     

RANKL/RNAK/OPG信号通路影响小鼠膝关节假体无菌性松动的作用机制

目的 研究RANKL/RANK/OPG信号通路在小鼠膝关节假体无菌性松动中的作用机制。方法 28只小鼠以计算机随机数字表法分成正常组、实验组，最终均分别纳入12只。实验组通过在胫骨近端骨髓腔中注射钴铬颗粒悬液建立小鼠膝关节假体无菌性松动模型，正常组注射等量等渗盐水。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测界膜组织中RANKL、RNAK、OPG mRNA表达量；免疫组化染色法检测界膜组织中RANKL、RNAK、OPG、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)蛋白表达量。结果 与正常组比较，实验组建模后6、12周界膜组织RANKL、RNAK mRNA及蛋白表达量，RANKL/OPG升高，OPG mRNA及蛋白表达量降低(P<0.05)。与建模后6周比较，正常组建模后12周界膜组织RANKL、RNAK mRNA及蛋白表达量及RANKL/OPG降低，OPG mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05),实验组界膜组织RANKL、RNAK mRNA及蛋白表达量及RANKL/OPG升高，OPG mRNA及蛋白表达量降低(P<0.05)。与正常组比较，实验组建模后6、12周界膜组织TRAP...     

人工关节翻修所获界膜中的组织学及超微结构观察

为探讨成纤维细胞（ Ｆｂ） 在无菌性松动中的作用。对髋关节翻修所获界膜（ 组１） 、相应髋关节滑膜（ 组２） 、内固定物周围异物反应组织（ 组３） 及正常髋关节滑膜（ 组４） 中 Ｆｂ 的分布及形态学进行了组织学与超微结构的对比观察。结果显示：成纤维细胞在各组中的分布及形态表现不同,组１ 与组２ 中呈现功能活跃相,而组３ 与组４ 中呈相对静止状态。提示 Ｆｂ 对假体松动及骨溶解有影响。     

胃腺癌组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-4的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-4(TRAIL-R4)在诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法:应用Western blot、RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学技术,检测31例正常胃黏膜和胃腺癌组织中TRAIL-附蛋白和mRNA的表达.结果:Western blot结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4蛋白的阳性表达率80.65%,高于其在胃腺癌组织中的阳性表达率6.45%(P＜0.05);免疫组织化学结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4蛋白均有强染色,在胃腺癌组织中染色均为阴性(P＜0.05);RT-PCR结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4 mRNA表达高于胃腺癌组织中的表达(P＜0.05);原位杂交结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4 mRNA染色均为阳性,而在胃腺癌组织中阳性表达率为3.23%(P＜0.05).结论:TRAIL-R4在胃癌组织中的表达缺失是TRAIL特异性诱导肿瘤细胞凋亡的原因之一.     

Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

目的通过比较Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠和正常大鼠关节滑膜组织蛋白质谱的差异,探讨类风湿性关节炎可能的发
病机制,寻找类风湿性关节炎致病相关蛋白。方法建立Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠模型。采用双向凝胶电泳的蛋白质组学
技术比较Mtb诱导的佐剂性关节炎大鼠和正常大鼠关节滑膜组织蛋白质谱的差异;采用Western blot技术和荧光定量PCR技术
验证其中2种差异蛋白表达情况。结果建立了佐剂性关节炎模型组及正常组滑膜组织双向凝胶电泳图谱,获得变化趋势2倍
以上的蛋白质点8个,其中模型组相对于空白对照组下调蛋白4个,模型组相对于空白对照组上调蛋白4个。Western blot方法
和荧光定量方法对其中2种蛋白进行验证,结果与蛋白质组学结果一致。结论类风湿关节炎滑膜病变是一个多种蛋白质参与
的复杂过程,这些表达差异蛋白质可能参与了类风湿性关节炎的进展。
     

大鼠关节软骨酸敏感离子通道的表达

目的探讨大鼠关节软骨酸敏感离子通道(ASICs)的表达及其意义。方法利用RT-PCR和Western blot检测ASICs在大鼠关节软骨的表达。结果大鼠关节软骨存在ASIC1a、ASIC2a和ASIC3 mRNA及其蛋白的表达。结论ASICs在大鼠关节软骨组织的表达,其有望成为关节炎治疗的新靶点。     

不同浓度钛合金微粒对成骨细胞信号通路中转录表达因子RUNX2影响

目的关节假体松动后出现骨溶解,如何有效阻止骨溶解,一直是个难题。文中通过探讨不同浓度钛合金微粒对转录因子RUNX2影响,进一步了解磨损微粒抑制成骨细胞作用机制。方法实验分为空白对照组和钛合金微粒处理组5μg/ml(A组)、10μg/ml(B组)、15μg/ml(C组)。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组培养120 h成骨细胞增殖活性。分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western)检测培养120 h后成骨细胞的RUNX2 mRNA和蛋白表达。结果培养120 h后,与空白对照组相比,各钛合金处理组细胞增殖活性显著下降(P<0.05),B组、C组细胞中RUNX2 mRNA水平亦明显下降(P<0.01),并且RUNX2蛋白表达水平变化趋势与其mRNA的表达变化趋势一致。结论钛合金微粒降低成骨细胞增殖活性,下调成骨细胞RUNX2-转录因子的表达。钛合金微粒对RUNX2表达水平的调控可能是其抑制成骨细胞增殖的机制之一。     

丙酮酸乙酯对滑膜细胞HMGB1的影响及机制

目的 探讨丙酮酸乙酯对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞高迁移率族蛋白-1（HMGB1）表达的影响及分子机制.方法 将培养的RA滑膜细胞分为正常对照组、TNF-α组和丙酮酸乙酯＋TNF-α组;采用RT-PCR法检测细胞HMGB1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中HMGB1、IL-6和IL-8含量;采用Western blot法分别检测滑膜细胞胞质和核内NF-κB变化;采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞中的分布.结果 丙酮酸乙酯可抑制TNF-α诱导滑膜细胞IL-6、IL-8、HMGB1的分泌和HMGB1 mRNA的表达,以及NF-κ B（p65）在滑膜细胞核内的表达和移位.结论 丙酮酸乙酯能下调滑膜细胞HMGB1表达和抑制NF-κB信号通路活化,可能对RA发挥抗炎作用.     

穿山龙水溶性总皂苷对类风湿患者成纤维样滑膜细胞核因子κB p65的抑制作用

【目的】观察穿山龙水溶性总皂苷对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞核因子κB(NF-κB)p65及其抑制因子IκB-α蛋白水平和mRNA含量的影响。【方法】培养类风湿患者成纤维样滑膜细胞,分为穿山龙水溶性总皂苷低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组,10、20、30 mg/L),模型组,同时设立空白对照组;经药物干预后,采用Western blot法测定NF-κB和IκB-α蛋白水平,采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测成纤维细胞中NF-κB和IκB-αmRNA的表达。【结果】经穿山龙干预后的关节炎患者成纤维样滑膜细胞的NF-κB活化受到显著抑制,蛋白及基因表达水平较模型组显著下降(P0.05),IκB-α蛋白及基因表达显著提升(P0.05)。【结论】穿山龙水溶性总皂苷可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的核转录因子的表达,这可能是穿山龙治疗类风湿关节炎的机理之一。     

姜黄素对佐剂关节炎大鼠趋化因子受体-7表达的影响

目的 观察佐剂诱导关节炎(adjuvant induced arthritis,AA)大鼠血清和关节滑膜中趋化因子受体-7(CC-che-mokine receptor 7,CCR7)的表达,探讨姜黄素对AA大鼠的治疗作用及可能的机制,为临床治疗提供新方法.方法 40只SPF级wistar大鼠,除外对照组9外,其余均建立佐剂诱导类风湿关节炎模型.关节炎指数评分>2的再随机分为模型组、甲氨蝶呤组、姜黄素组,每组9只.甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤腹腔注射,姜黄素组给予姜黄素腹腔注射,对照组、模型组同体积生理盐水腹腔注射.各组于21 d后抽取右心室静脉血及后足病理切片,通过ELISA方法进行CCR7蛋白测定,通过HE染色及Western blot方法,观察大鼠踝关节滑膜的炎症和软骨损伤变化及蛋白表达.结果 AA大鼠模型组滑膜和血清CCR7水平均高于对照组(P<0.01),姜黄素组的CCR7水平低于模型组(P<0.01).结论 姜黄素减缓关节滑膜组织增生、炎性细胞浸润以及软骨的破坏损伤,对AA大鼠具有抗炎作用,其机制可能与姜黄素抑制AA大鼠滑膜及血清中趋化因子CCR7的表达有关.     

白血病抑制因子在骨性关节炎组织的表达及临床研究

[目的]探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)在骨性关节炎(OA)关节组织中的表达规律及临床相关性。[方法]切取(32人)73例骨性关节炎滑膜、软骨和软骨下骨组织,含10人正常关节组织标本,应用RT-PCR检测LIF mRNA在OA不同病变阶段中的表达,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测LIF在组织中的含量。[结果]中度OA病变软骨下骨LIF mRNA表达量最高。重度OA软骨中LIF mRNA的表达量最高,软骨下骨的表达量最低。ELISA检测LIF在各组织的含量情况与上述结果一致。[结论]LIF在OA组织中表达呈现出一定的时间及空间分布的规律,提示LIF作为一种分解代谢因子可能参与了OA发病过程。     

温哥华B、C型股骨假体周围骨折及股骨近段骨折合并髋关节疾患的治疗策略

目的温哥华B、C型股骨假体周围骨折及股骨近段骨折合并髋部疾患需同时行髋关节置换患者在需解决的问题及治疗策略上有众多相同之处,文中探讨温哥华B、C型股骨假体周围骨折及股骨近段骨折合并髋部疾患(如股骨头坏死、髋关节骨性关节炎、股骨颈骨折等)需同时行髋关节置换者的治疗方法。方法 8例股骨假体周围型骨折及5例股骨近段骨折合并髋关节疾患需行全髋关节置换的患者,其中男7例,女6例;年龄48~78岁,平均61.5岁。由同一组人员都进行人工全髋关节置换及股骨骨折内固定治疗。结果 13例骨折均获得临床愈合,髋关节功能均明显改善。结论温哥华B、C型股骨假体周围骨折及股骨近段骨折合并髋部疾患需同时行髋关节置换患者在治疗上应根据患者的一般状况、骨折类型、骨折部位、假体是否松动以及局部骨质量来综合考虑,可取得了良好的结果。     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

基于缺氧组织中NLRP3炎症小体的活化研究膝痹宁减轻KOA滑膜炎症的效应机制

目的 基于缺氧组织中NLRP3炎症小体的活化研究膝痹宁减轻膝骨关节炎滑膜炎症的效应机制。方法 大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组。膝痹宁组药液灌胃,空白组、KOA组消毒生理盐水灌胃作为对照;第56天处死大鼠提取滑膜组织;HE染色评估滑膜炎症;缺氧探针免疫荧光染色观察大鼠膝关节滑膜组织缺氧程度;qPCR和Western blot检测缺氧转录因子1α（HIF-1α）、Caspase-1 p10、NLRP3及GSDMD的mRNA和蛋白表达;ELISA法测定NLRP3炎症小体活化下游IL-1β、IL-18的水平。结果 HE染色发现,KOA组滑膜组织较空白组表现出更多的炎性细胞浸润,衬里层细胞排列紊乱,膝痹宁组较KOA组炎性细胞浸润减少。大鼠滑膜组织的探针免疫荧光染色显示,KOA组与较空白组缺氧程度加重,膝痹宁组则较KOA组减轻。同时,KOA组滑膜组织中HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平均较高于空白组（P<0.01）,膝痹宁组则较KOA组降低（P<0.01）。此外,KOA组Caspase-1 p10、NLRP3、GSDMD的mRNA及蛋白表达水平均高于空白组（P<0.05）,而膝痹宁组较KOA组有所降低（P<0.05）。KOA组滑膜组织中IL-1β、IL-18的水平较空白组升高（P<0.01）,膝痹宁组较KOA组降低（P<0.01）。结论 膝痹宁能有效改善KOA滑膜组织缺氧状况,降低HIF-1α的表达,减少NLRP3炎症小体的活化,减轻滑膜炎症。