胃癌组织和细胞中P115 、MIF的表达及意义

目的 观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义.方法 用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MKN-28,BGC-823)中的蛋白和mRNA表达情况.结果 P115和MIF在胃癌组织中的阳性表达率分别为73.3%、80%,在正常胃黏膜中的阳性表达率分别为40%、46.7%,胃癌组织中P115和MIF的表达明显高于正常胃黏膜(P＜0.01) ,且P115的表达和MIF的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017);胃癌组织中P115、MIF的蛋白和mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P＜0.01).免疫细胞化学,Western blot和RT-PCR结果显示: P115、MIF在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823中的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜上皮GES-1(P＜0.01);且低分化胃癌细胞株BGC-823中P115和MIF 的表达水平明显高于高分化胃癌细胞株MKN-28(P＜0.05).结论 P115和MIF的过表达,可能在胃癌的发生过程中起协同作用;对P115和MIF相互作用机制的深入探讨有可能使其成为研究胃癌发生、发展的分子机制的新靶点.     

TRAILmRNA与胃癌凋亡关系的研究

目的检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)mRNA在胃癌中的表达及其与凋亡的关系.方法利用原位杂交技术检测67例胃腺癌及对应的正常胃黏膜中TRAILmRNA的表达,同时利用原位末端标记技术(TUNEL)检测癌组织中的凋亡指数(AI),并分析它们之间的关系.结果①TRAILmRNA在正常胃黏膜中阳性表达率为95.52%,高于癌组织中的阳性表达率52.24%(P＜0.05);②胃癌组织中细胞凋亡指数为1.85±0.66;③TRAILmRNA阳性组与阴性组中凋亡指数分别为3.06±0.45、1.21±0.13,两组间存在着显著性差异(P＜0.05);④TRAILmRNA与胃癌组织中的患者的年龄、性别、肿瘤直径、部位、大体分型、浸润深度及有无淋巴结转移无明显的关系(P＞0.05);与肿瘤的分化程度有关,分化程度越低,TRAIL的表达率越低(P＜0.05).结论TRAIL可能在胃癌凋亡过程中起重要作用.     

胃癌中Cx43与P-Ezrin表达的意义及相关性研究

目的 探讨正常胃黏膜与胃癌组织中间隙连接蛋白43 (Cx43)与磷酸化骨架连接蛋白(P-Ezrin)的表达及与胃癌临床病理特征间的关系.方法 采用免疫组织化学SP法及Western blot技术检测正常胃组织(对照组)、胃癌组织(胃癌组)中Cx43与P-Ezrin的表达和分布情况.结果 免疫组织化学和Western blot检测结果显示Cx43在对照组中的阳性表达率均高于胃癌组(P＜0.05),P-Ezrin在胃癌组中的阳性表达率则高于对照组(P＜0.05);Cx43与P-Ezrin蛋白的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期及浸润深度密切相关,与患者的年龄及性别无关;胃癌组织中Cx43与P-Ezrin呈负相关(r=-0.58,P＜0.05).结论 Cx43与P-Ezrin参与胃癌的发生发展,二者联合检测可用于胃癌的生物学行为和预后的评估.     

靶向下调Cav3.1诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡

目的 探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法检测30例喉癌患者中Cav3.1在喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况;siRNA瞬转技术构建靶向下调Cav3.1的Hep-2细胞系,应用Western blot检测各组细胞BAX、Cleaved-caspase-3、BCL-2的表达情况,应用CCK-8实验检测该喉癌细胞增殖的情况,Annexin V-PI染色技术检测喉癌Hep-2细胞凋亡的情况.结果 相对癌旁组织,Cav3.1在喉癌组织中高表达(P＜0.05);下调组Cav3.1在喉癌细胞中mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05);下调Cav3.1可抑制喉癌细胞的增殖(P＜0.05),促进喉癌细胞的凋亡(P＜0.05),Western blot验证下调Cav3.1,BAX、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,BCL-2表达明显下降(P＜0.05).结论 Cav3.1在喉癌组织和喉癌细胞系中高表达,下调Cav3.1抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞凋亡.     

胃癌和胃癌前病变bcl-2基因表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的探讨胃癌前病变及胃癌中bcl-2基因表达状况及其与细胞凋亡的关系.方法应用原位杂交和免疫组织化学技术检测10例正常胃粘膜、72例慢性萎缩性胃炎和53例胃癌中bcl-2基因的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较.结果bcl-2基因在正常胃粘膜及不同胃粘膜病变中均有不同程度的表达.bcl-2 mRNA在胃癌组织中的表达率为77.36%,显著高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠化生(20.00%,25.00%,44.44%,P＜0.01);异型增生组织bcl-2 nRNA表达率为75.00%,显著高于正常胃粘膜及萎缩性胃炎(P＜0.05).胃癌组织bcl-2蛋白表达率为81.13%,显著高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠化生(20.00%,31.25%,52.78%,P＜0.01),异型增生组织bcl-2蛋白表达率为75.00%,显著高于正常胃粘膜及萎缩性胃炎(P＜0.01).x2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性.凋亡细胞原位检测结果显示,bcl-2蛋白表达阳性肠化生和胃癌组织中的凋亡细胞指数显著低于bcl-2蛋白阴性组(P＜0.05及P＜0.01),bcl-2蛋白表达状态与细胞凋亡指数呈负相关.结论bcl-2基因对胃癌前组织及胃癌细胞凋亡具有抑制性调控作用,细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用.     

胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及细胞凋亡检测

目的:检测胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及胃腺癌细胞的凋亡.方法:采用原位杂交技术检测45例胃腺癌、23例癌旁不典型增生及21例正常胃黏膜组织中cFLIP mRNA的表达;运用TUNEL法检测胃腺癌细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI).结果:胃腺癌组织中cFLIP mRNA的阳性表达率高于正常黏膜及不典型增生组织...     

抑癌基因RASSF1A在胃癌中的表达及意义

目的 研究胃癌组织中抑癌基因RASSF1A的表达并探讨其临床意义.方法 应用免疫组化法分别检测39例胃癌组织标本和18例正常对照胃组织标本RASSF1A蛋白表达; RT-PCR法检测4株胃癌细胞株、正常胃黏膜细胞株GES-1以及阳性对照Hela细胞中RASSF1A mRNA的表达;结合病理学特征进行分析.结果 胃癌组织RASSF1A表达阳性细胞明显少于正常对照胃组织(P＜0.01);不同分化程度、临床分期及浸润深度的胃癌组织,其RASSF1A表达存在显著性差异(P＜0.05).4株胃癌细胞株中仅MKN45细胞有RASSF1A mRNA表达;而正常胃黏膜细胞株GES-1和阳性对照Hela细胞均表达RASSF1A mRNA.结论 胃癌组织中RASSF1A基因表达明显减少,其可作为评估胃癌恶性程度和预后的一项有意义的指标.     

Norrin对胃癌细胞凋亡的抑制作用

目的 研究Norrin蛋白对胃癌细胞凋亡的抑制作用.方法 采用免疫组化检测Norrin在151例不同病理分级的胃癌组织中的表达,并进行临床病理分析;Western blot检测不同胃癌细胞株中Norrin的表达情况;随后通过慢病毒转染技术构建Norrin低表达的胃癌细胞株BGC823,并以Western blot检测干扰效果;再以流式细胞术检测Norrin正常表达(Lv-sh-ctrl组)与低表达(Lv-sh-Norrin组)BGC823细胞凋亡的变化,最后使用Western blot检测Mcl-1、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达.结果 Norrin在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,且Norrin的表达高低与胃癌的Lauren分型、分化程度、TNM分期、术后生存率差异有统计学意义(P＜0.05),而与性别、年龄、部位、直径、组织学类型差异无统计学意义(P＞0.05);在胃癌细胞株中,Norrin在高中分化的SGC7901、AGS细胞中低表达,而在低分化的BGC823细胞中高表达;干扰Norrin基因表达可明显增加胃癌细胞的凋亡,Lv-sh-Norrin组细胞凋亡率(12.26 ±0.70)％相比于Lv-sh-ctrl组(7.58±0.68)％明显增加,P＜0.05);同时Western blot结果显示,相比于Lv-sh-etrl组,Lv-sh-Norrin组中抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2蛋白表达减少;促凋亡分子Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达增加.结论 Norrin通过抑制Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达,促进Mcl-1、Bel-2蛋白表达,抑制胃癌细胞的凋亡.     

Pokemon在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的检测Pokemon基因在胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达水平,并分析其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学Eli Vision法检测75例胃癌组织和35例癌旁正常胃黏膜组织中Pokemon蛋白的表达。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测30例新鲜胃癌组织及相应癌旁正常胃黏膜组织中Pokemon mRNA的表达。结果免疫组织化学分析结果显示,在胃癌和癌旁正常胃黏膜组织中,Pokemon蛋白的阳性表达率分别为78.7%(59/75)和34.3%(12/35),差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,30例新鲜胃癌组织中Pokemon mRNA的表达水平显著高于相应癌旁正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中Pokemon的表达与浸润深度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 Pokemon在胃癌的发生、发展和侵袭转移中具有重要作用,可能成为胃癌治疗的有效靶点。     

hTERT蛋白在胃腺癌组织中定量表达的研究

目的 探讨hTERT蛋白在胃腺癌组织中表达情况及其与胃癌进展的关系.方法 对68例胃腺癌和10例正常组织采用流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达.结果 hTERT蛋白流式细胞术测定在进展期胃癌、早期胃癌和正常胃黏膜荧光指数FI值分别为1.92±0.17、1.60±0.18和0.98±0.15,进展期胃癌hTERT含量高于早期胃癌(P＜0.01)、早期胃癌高于正常胃黏膜(P＜0.01);中、低分化腺癌hTERT蛋白FI值分别为1.89±0.20和1.92±0.19显著高于高分化腺癌1.71±0.19(P＜0.01);有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.05);T1-T2级胃癌TERT蛋白FI值高于T3-T4级胃癌(P＜0.05).结论 hTERT高表达与胃腺癌进展相关,可作为胃癌进展的生物学标志之一.     

TRAIL、Survivin mRNA表达与胃癌凋亡发生的相关关系

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和SurvivinmRNA在胃癌中的表达及其与凋亡的相关关系。方法:利用原位杂交技术检测67例胃腺癌及对应的正常胃粘膜中TRAIL和SurvivinmRNA的表达,同时利用原位末端标记技术(TUNEL)检测癌组织中的凋亡指数(AI)。结果:①TRAILmRNA在正常胃粘膜中的阳性表达率高于癌组织中的阳性表达率。②胃癌组织中细胞凋亡指数为1.85+0.66。③TRAILmRNA阳性组与阴性组、SurvivinmRNA阳性组与阴性中凋亡指数分别存在着显著性差异(P<0.05)。④TRAILmRNA和SurvivinmRNA在胃癌中的阳性表达率呈明显的负相关(P<0.05)。⑤TRAILmRNA和SurvivinmRNA与胃癌组织中的患者的年龄、性别、肿瘤直径、部位、大体分型、侵润深度及有无淋巴结转移无明显的关系(P>0.05),与肿瘤的分化程度有关(P<0.05)。结论:TRAIL和Survivin在胃癌凋亡过程中起着重要的作用,TRAIL可诱导凋亡,Survivin则抑制凋亡发生。     

半定量RT-PCR法测定TRAIL、survivin在胃癌组织中的表达及其意义

目的 检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）及抑制凋亡基因家族成员survivin在胃癌组织中的表达，并探讨其意义。方法 利用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测82例胃腺癌及对应的正常胃组织中TRAIL和survivin的表达。结果 TRAIL在正常胃组织中的表达阳性率及相对表达量均明显高于癌组织（P〈0．05）；而survivin的表达则与TRAIL表达相反，正常胃组织中不表达，在胃癌组织中的表达阳性率为62．2％。TRAIL和survivin表达量与肿瘤的分化程度有关，分化程度越低，TRAIL mRNA表达量越低，而survivin mRNA表达量越高，高分化胃腺癌与低分化胃腺癌间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 TRAIL和survivin在胃癌凋亡过程中起着重要的作用，TRAIL可诱导凋亡，survivin则抑制凋亡发生。     

PI3K/PKB通路在胃癌中的表达及其与PTEN相关性研究

目的探索PI3K/PKB信号转导通路在胃癌发生发展过程中的作用及其与PTEN的相关性。方法对112例胃癌及76例正常胃粘膜组织采用免疫组织化学Envision二步法检测PI3K、PKB和PTEN蛋白、采用原位分子杂交法检测PTENmRNA。结果胃癌组PI3K及PKB表达均明显高于正常胃粘膜组(分别为χ2=9.994,P<0.05;χ2=15.823,P<0.001);随着癌浸润深度的加深(χ2=7.896,P<0.05;χ2=7.939,P<0.05)和淋巴结转移的出现(χ2=9.455,P<0.05;χ2=8.115,P<0.05)PI3K及PKB表达明显增强。而PTEN在胃癌中的表达明显低于正常胃粘膜(χ2=78.494,P<0.001);在胃癌浸润超过肌层组明显低于未超过肌层组(χ2=11.308,P<0.01);伴淋巴结转移组表达明显低于无淋巴结转移组(χ2=17.870,P<0.001)。胃癌组PTENmRNA表达明显低于正常胃粘膜组(χ2=53.959,P<0.001)。且PTEN与PI3K及PKB蛋白表达强度呈明显负相关(r=-0.354,P<0.001;r=-0.222,P<0.05)。结论PI3K/PKB信号转导通路和PTEN在胃癌发生发展过程中分别起促进和抑制作用,两者呈负相关,PI3K/PKB通路有望成为PTEN失活时治疗胃癌的靶点。     

胃癌组织中Dnmt1基因mRNA和蛋白的表达

目的:探讨正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中Dnmt1基因mRNA及蛋白的表达以及两者之间的关系.方法:应用原位杂交技术及免疫组化SP法检测20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及60例胃癌组织中Dnmt1基因mRNA及蛋白的表达状况.结果:Dnmt1 mRNA在正常胃黏膜腺上皮中基本呈阴性表达(除部分增生的小凹上皮),其阳性率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌三组间呈递增趋势,组间有统计学差异(P<0.01).Dnmt1蛋白在正常胃黏膜腺上皮中基本呈阴性表达(除部分增生的小凹上皮和淋巴细胞),其阳性率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌三组间呈递增趋势,组间有统计学差异(P<0.01).Dnmt1 mRNA和蛋白的阳性表达与年龄、性别、肿物的大小、浸润深度、有无脉管转移等临床病理特征无关,而与有无淋巴结转移有关(P<0.05).Spearman等级相关分析显示Dnmt1蛋白与mRNA表达呈正相关(rs=1.000,P<0.01).结论:Dnmt1在胃癌组织中的高表达与胃癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关.     

鼠双微粒体-2基因和突变型p53基因表达与肝癌细胞增殖和凋亡关系的研究

目的　探讨鼠双微粒体 2 (murine double minute 2, MDM2) 基因和突变型 p53 基因表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡的相关关系。方法　应用免疫组织化学、原位分子杂交和 TUNEL 方法检测原发性肝细胞癌组织中MDM2基因和突变型 p53基因表达与肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡情况, 并分析 MDM2 基因和 p53 基因表达与肝细胞癌组织学分级、类型、增殖和凋亡的相关关系。结果　①MDM2蛋白和mRNA 、p53蛋白和mRNA 在肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁肝组织和正常肝组织 (均P<0 .05); MDM2 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级和类型无相关关系 (均P>0 05); p53 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级具有相关关系 (P<0 .05)。②肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡的阳性率分别为 100%和 50%, 两者相比差异有极显著性意义 (P< 0 .01); MDM2mRNA 和 p53 mRNA阳性表达与肝癌细胞增殖均具有相关关系 (均P<0. 05), 但与肝癌细胞凋亡均无相关关系 (均P>0. 05)。结论　MDM2 和 p53的蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中呈过表达状态, MDM2 基因和 p53基因过表达在肝细胞癌发生、增殖和分化中起重要作用。     

靶向HPV16-E5的siRNA对TRAIL诱导宫颈癌Caski细胞凋亡的影响

目的 探讨靶向人乳头瘤病毒16早期蛋白5（HPV16-E5）的siRNA对TRAIL蛋白诱导子宫颈癌Caski细胞株凋亡的调节作用。方法 HPV16-E5 特异性 siRNA转染48h后,RT-PCR检测HPV16-E5 mRNA的表达;流式细胞术及caspase-8活性检测试剂盒分别检测空白对照组、siRNA-E5单独作用组、TRAIL单独作用组、siRNA-E5+TRAIL作用组、无关序列RNA+TRAIL作用组细胞的凋亡率及caspase-8的活性水平;RT-PCR及Western blotting检测siRNA干扰后Caski细胞表面TRAIL死亡受体DR4、DR5的表达。结果 RT-PCR检测结果显示,转染48h后,siRNA-E5组HPV16-E5 mRNA的表达较空白对照组和无关序列对照组下调(P<0.05); siRNA-E5+TRAIL作用组较TRAIL单独作用组相比细胞凋亡率明显增加(P<0.05),而无关序列RNA+TRAIL作用组较TRAIL单独作用组细胞凋亡率无明显变化(P>0.05);siRNA-E5组TRAIL受体DR4、DR5的表达较无关序列对照组、空白对照组无明显差异(P>0.05);caspase-8活性水平在siRNA-E5+TRAIL作用组明显较TRAIL单独作用组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 靶向HPV16-E5的siRNA可增强TRAIL诱导宫颈癌Caski细胞的凋亡作用,其机制与增强caspase-8的活化有关。     

胃癌发生发展中可溶型Fas/FasL的表达及其意义

目的:探讨Fas/FasL基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Westem印迹杂交技术,对20例正常胃黏膜,22例癌前病变和35例胃癌组织中Fas/FasL的表达情况加以分析。结果:正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Fas阳性率分别为85%、45%、37%;FasL的阳性率分别为20%、27%、46%。Western印迹杂交显示:胃癌细胞产生的Fas蛋白以分子量30 kDa的可溶型Fas(sFas)为主,伴少量的43 kDa膜型Fas(mFas)。结论:Fas在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性(P<0.05);FasL在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性(P<0.05)。     

DR4及DR5在胶质母细胞瘤中的表达研究

目的:研究TRAIL的死亡受体(Death receptor,DR)DR4和DR5在胶质母细胞瘤中的表达,探讨其临床意义。方法:联合采用免疫组化和原位杂交方法检测34例胶质母细胞瘤及25例正常脑组织中TRAILR的表达。结果:34例胶质母细胞瘤均大量表达死亡受体DR4和DR5,而25例正常脑组织中11例(44.0%)表达DR4,9例(36.0%)表达DR5。胶质母细胞瘤组织中DR的高表达明显不同于正常脑组织中DR的低表达,两者间差异有显著性(P<0.01)。原位杂交显示,DR在全部34例胶质母细胞瘤组织和大部分正常脑组织中均呈强阳性表达,两者之间无显著差异性(P>0.05)。结论:胶质母细胞瘤中普遍存在DR的高表达,这可能为胶质母细胞瘤的凋亡诱导治疗提供新的靶点和新的策略。DR在蛋白质水平的表达差异可能是TRAIL选择性诱导凋亡的机制之一。