肾综合征出血热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定(简报)

本研究用陕西省分离的肾综合征出血热(HFRS)病毒82—010H株免疫BALB/C鼠和C×S/2小鼠,经三次免疫后血清抗体可达1:320～1:1280,选有较高免疫水平的鼠     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

作者用SP2/0骨髓瘤细胞与绿脓杆菌Ⅰ群10115株免疫的BALB/c鼠脾细胞融合获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株C_3、D_1和D_3,对其中C_3杂交瘤株作了PHA、ELISA、IFA检定分析,证明能分泌高效价特异的单克隆抗体。PAGE结果出现一特殊区带。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_1。     

小鼠细胞毒性T细胞向流感病毒感染肺部的非特异性浸润

流感病毒A/WSN株免疫小鼠的次代效应T细胞,经~(125)I-UdR标记,转输给同种病毒感染的同系鼠,T细胞进入感染肺的数量为未感染肺的2.5～5倍;未免疫的对照T细胞进入感染及未感染肺的数量则无明显差别。抗原性与流感无关的仙台病毒及Smliki森林病毒免疫效应T细胞,进入流感感染鼠肺的数量亦远高于未感染鼠肺,表现为非特异性,但异种病毒效应T细胞存留时间较同种病毒效应T细胞短暂。     

一次脾内直接注射免疫动物制备单克隆抗体

以绒毛膜促性腺激素(hCG)为抗原,对4只BALB/c小鼠分别进行一次脾内直接注射免疫,免疫后第5天分别取其血清进行ELISA检测条件,其血清抗体稀释度均在6400倍以上,然后用其免疫鼠的脾细胞与其同系小鼠的骨髓细胞进行融合,获得两株分泌型杂交瘤细胞株,其代号分别为2D_(11)、3B_5。     

具有T辅助活性的抗原特异性T细胞杂交瘤

本文报道应用利什曼原虫抗原免疫CBA/T6小鼠,7天后取免疫小鼠的淋巴结经在体外抗原再刺激下培养一周后,分离得致敏的T淋巴母细胞,与T胸腺瘤株BW5147进行细胞杂交,获得几株具有利什曼原虫抗原特异性T辅助活性的T细胞杂交瘤。4B_(11)、4C_7和5D_7株表现两个亲代细胞的表面抗原特征Thy 1,1和Thy1,2。在B细胞抗半抗原斑点形成细胞应答过程中,T细胞杂交瘤的辅助活性仅接受利什曼原虫抗原的刺激信号,不应答其     

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。     

小鼠肝炎病毒(MHV-1)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

用小鼠肝炎病毒(MHV-1)接种DBT细胞,收获病毒经反复冻融、超声波处理、逐级差速离心提纯和浓缩。用该病毒提取液经腹腔免疫SPF级BALB/c系小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP_(2/0)融合,通过间接ELISA试验,筛选出5株分泌MHV-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株(C_(10)H_8、A_(11)C_(10)、F_2G_2、F_3D_(11)、F_7B_9)。5株单抗与流行性出血热病毒(EHFV)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、痘苗病毒、仙台病毒、小鼠肝炎病毒(MHV-2、-3、-JHM、-A_(59))均无反应。抗MHV-1的阳性血清能阻断5株单抗与MHV-1的反应。5株单抗均无沉淀特性和中和特性。液氮保存6个月后复苏,仍可分泌特异性抗体。用MHV-1单抗鉴定上海分离到的1株小鼠肝炎病毒(MHV-Hu_(79)),证实MHV-Hu_(79)株不是MHV-1。     

血红蛋白水平及动态变化对慢性阻塞性肺疾病急性加重期有创机械通气患者的短期预后预测价值

目的:观察慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)有创机械通气患者血红蛋白的变化及其对患者短期预后的预测价值。方法:采用前瞻性观察性方法,收集110例AECOPD行有创机械通气(IMV)患者的临床资料,在入ICU的第1、3、5、7天(D_1、D_3、D_5、D_7)记录血红蛋白(Hb),入ICU后90 d患者生存状态为观察终点,使用受试者工作曲线下面积(AUC)评价Hb及其变化值(HbΔ)预测患者预后的价值。结果:贫血组病死率明显高于非贫血组,差异有统计学意义(P<0.001)。Hb D_1,Hb D_3, Hb D_5,Hb D_7的预测患者短期预后的AUC分别是0.774(95%:0.684～0.848)、0.794(95%:0.707～0.865)、0.803(95%:0.716～0.873)、0.838(95%:0.755～0.901)。HbΔD3-1,HbΔD5-1,HbΔD7-1的AUC分别是0.499 (95%:0.387～0.611)、0.435 (95%:0.317～0.553)、0.363 (95%:0.253～0.473)。结论:AECOPD行IMV患者贫血发病率较高,入ICU 7 d内的Hb均可以预测患者的短期预后,但是7 d内的Hb变化值不能预测患者的预后。     

IgA_α重链Fc片段单克隆抗体的制备及临床应用

我们自一例α重链病患者血清纯化蛋白,取得IgAα重链Fc片段(IgAFcα)抗原,按常规免疫趾BALb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经有限稀释,克隆后获得D_2、E_4、F_5、G(10) 4株阳性细胞。接种BALb/C小鼠后获得4株抗IgA Fcα单克隆IgA Fcα而与IgG、IgM、IgDA、K或λ均无反应。将该抗体对95名正常人和63例各种疾病患者的血清标本,以血凝抑制试验(HAI)进行Ig基因标记测定,并对3例阳性者作家谱调查,结果表明此McAb-IgA Fcα可用以检测IgA同种异型Ig遗传标记。     

小鼠肺炎仙台病毒80-2株的特性

仙台病毒属于Ⅰ型副流感病毒的一个亚型。它可使小鼠、地鼠,豚鼠以及猪等实验动物发病,也会传染给人,特别是儿童。它能引起小鼠的致死性肺炎。经呼吸道传播时,造成小鼠肺炎流行。一九八○年,在我所实验动物一个小鼠饲养群中发生肺炎流行,从而分离到一株仙台病毒(以下简称为“80-2”株),对其特性作了比较系统的检定,     

抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法(IFA)检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体(McAb)C_4和C_(15)。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C_4McAb     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的动态观察

目的:动态观察细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的变化.方法:将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,收集血清,用ELISA法测定血清IgG及其亚类和IgE水平;无菌取脾,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平.结果:口服免疫组小鼠血清IgG、IgG2a 、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8～10周、2～20周、2～20周、4～8周、6～12周和10周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～16周、2～12周、2～6周和4～12周显著升高;鼻腔内接种组小鼠血清IgG、IgG2a 、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后4～10周、4～20周、2～20周、2～12周、4～12周和10～12周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～8周、2～12周、2～8周和6～16周显著升高.结论:细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生1个Th1/Th2混合型免疫应答.口服免疫和鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且前者优于后者.     

用痘苗病毒天坛株及池田株提高鼠白血病L_(7711)细胞抗原性的研究

本文用痘苗病毒天坛株及池田株分别处理615鼠白血病L_(7711)细胞制备瘤苗,对鼠进行免疫后,再用L_(7711)细胞攻击。结果表明,免疫组均比对照组腹水增长缓慢、生存期延长。证明两株病毒均能增强鼠L_(7711)白血病细胞的抗原性,而且天坛株比池田株作用明显。     

细粒棘球绦虫囊液McAb的制备及鉴定

作者用人源包虫囊液抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞杂交,获得成功。融合率100％,抗体阳性率10.7％。经克隆化培养获得分泌抗人源细粒棘球绦虫抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞5株,其染色体数为99～108。经鉴定其中3株(1D_3、2D_6、4B_(10))是特异针对细粒棘球绦虫抗原决定簇的,均属IgG_1亚类;另外2株(4F_4、1D_1)则针对细粒棘球绦虫与其他几种寄生虫抗原的共同决定簇,它们分属IgM和IgG_1类免疫球蛋白。     

清洁级长爪沙鼠病毒抗体ELISA检测法建立

经纯化长爪沙鼠IgG免疫家兔后获得的血清用辛酸法纯化抗体，电泳可见只有一条蛋白带，制备得酶标二抗工作浓度为1：25600。用间接ELISA对开放系统和屏障系统中长爪沙鼠进行淋巴细照脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，鼠肝炎病毒(MHV)和仙台病毒抗体的检测，发现其血清病毒抗体阳性率开放系统为6．0%(4/67)，22.4%(15／67)和14．9%(10／67)，屏障系统为1．3%(1／79)，1．3%(1／79)和7．6%(6／79)，如用酶标蛋白A取代酶标抗长爪涉鼠IgG抗体进行检测，则无一份血清阳性，结果表明长爪沙鼠可以自然感染LCMV、MHV和仙台病毒或其抗原相关的病毒，酶标蛋白A不宣作为酶标二抗用手长爪沙鼠抗体的检测。     

两种耶尔森氏菌对动物的致病和交叉免疫性试验

目的了解广东省鼠疫静息期小肠结肠炎、假结核耶尔森氏菌的致病和交叉免疫性。方法致病性试验:菌株分皮下注射、饮水感染昆明小鼠,观察其发病和死亡情况,然后剖检。交叉免疫性试验:提取假结核鼠株冻溶抗原加佐剂研磨免疫家兔,然后分别用小肠结肠炎0∶3猪株和鼠疫菌EV76株攻毒。试验均设对照组。结果0∶3猪株皮下注射小鼠5只全部死亡,饮水感染死亡3只,2只发病;0∶9鼠株皮下注射死亡2只,饮水感染仅发病;假结核鼠株两种途径感染仅发病。假结核鼠株免疫的家兔能抵抗0∶3猪株攻毒,用EV76株攻毒未能产生鼠疫F1抗体。结论0∶3猪株毒力强,0∶9鼠株弱,耶尔森氏菌对动物有交叉免疫力。     

仙台病毒Tianjin株及其HN／F基因真核表达质粒对人副流感病毒I型的血清中和实验研究

目的：探讨仙台病毒Tianjin株（SeV）及其核酸制备预防人副流感病毒I型（hPIV—1）疫苗的可行性。方法：（1）用sev免疫小鼠3次后取血清,间接ELISA法检测免疫血清抗体效价。（2）将倍比稀释的免疫血清与100TCID~0．1ml的hPIV一1进行中和实验,观察细胞病变（CPE）并计算50％血清中和终点。（3）构建SeV真核表达质粒pVAX1-F、DVAX1-HN,分别单独或联合免疫小鼠,取免疫血清检测对hPIV一1的中和终点。结果：SeV免疫血清抗体的50％中和终点分别为39．8、12．6、16．0、44．7、25．1;质粒免疫血清抗体的中和作用按pVAX1-HN＋pVAX1-F组〉pVAX1-HN组〉DVAX1-F组依次递减。结论：仙台病毒Tianjin株及其HN基因、F基因真核表达质粒能诱导机体产生抗hPIV-1抗体,有可能成为制备预防hPIV-1疫苗的有效毒株。     

抗小鼠白血病病毒单克隆抗体的研制及其初步应用

用密度梯度离心提纯的小鼠白血病病毒(Murine Leukemia Virus，MuLv)免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术获得6株分泌抗MuLv单克隆抗体的杂交瘤细胞。经检测，它们所分泌的抗体类型分别为IgM(F10，D6，C12，A8)和IgG1(A9，B6)。腹水效价为10^-8～10^-5。相对亲和力分别为1．25ug／ml(F10)，1．30μtg／ml(D6)，1．20μg／ml(C12)，1．0μg／ml(As)，0．07μg／ml(A9)，0．001μg／ml(B6)。F10,D6,C12，和A8能识别相同或相近的抗原表位，A9和B6识别不同的抗原位点。特异性测定结果表明：6株MeAb与11种鼠源性病毒抗原脑膜炎病毒(LCM)；流行性出血热病毒(EHF)；鼠痘病毒(Ect．)；鼠肝炎病毒(MHV)；仙台病毒(Sendai)；呼肠孤癌病毒(Reo3)；鼠肺炎病毒(PVM)；细小病毒(MVM)；鼠腺病毒(MAd)；多瘤病毒(Polyoma)；脑脊髓炎病毒(GDVII)均无反应。将MuLv MeAb标记荧光素应用于实际检测，取得较好的实验结果。     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察

目的 动态观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化.方法 将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,用流式细胞术(FCM)检测免疫小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的百分比,同时设双歧杆菌液体培养基(MRS)对照.结果 口服灌胃组的脾CD4+T细胞亚群在免疫后4～10周升高,免疫后6周达最高水平,CD8+T细胞亚群无明显变化;鼻腔内接种组脾CD4+T细胞亚群在免疫后4～8周升高,免疫后6周达最高水平,CD8+T细胞亚群无明显变化.结论 CD4+T细胞亚群在细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导的小鼠免疫应答中起关键作用.     

空弯菌抗原诱导的自身抗体产生动力学

用CJ-131菌苗经口免疫小鼠16周,观察免疫小鼠体内的自身抗体(抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白和ENA抗体)产生动力学。在CJ-131菌苗连续免疫的16周内,免疫小鼠有两个自身抗体产生峰。免疫后第6周,出现第一峰,抗组蛋白和ENA抗体的阳性率高于抗ds-DNA和ss-DNA抗体:在第16周,抗