基于NLRP3炎性体轴土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P<0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P<0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P<0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P<0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

虎杖醇提物通过NLRP3/ASC/caspase-1轴干预小鼠急性痛风性关节炎的作用研究

通过NLRP3/ASC/caspase-1轴探讨虎杖醇提物(ethanolic extract of Polygonum cuspidatum, PCE)对C57BL/6小鼠急性痛风性关节炎的干预作用及机制。采用PCE高、中、低3个剂量,以秋水仙碱为阳性对照,小鼠采用踝关节注射尿酸钠晶体(MSU)造模。动物模型通过PCE干预后,采用HE染色观察滑膜组织形态学变化;采用ELISA法测定踝关节滑膜组织分泌的IL-1β,IL-6和TNF-α浓度;蛋白印迹(Western blot)法测定滑膜组织中NLRP3,ASC,caspase-1蛋白表达情况;RT-PCR法测定滑膜组织中NLRP3,ASC,caspase-1 mRNA表达情况。结果表明,与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加,滑膜组织IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平显著升高,NLRP3,ASC,caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高;与模型组比较,虎杖醇提物组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度,关节滑膜IL-1β,IL-6和TNF-α水平以及NLRP3/ASC/caspase-1轴蛋白和mRNA表达均显著降低。该研究初步探明虎杖醇提物能防治小鼠急性痛风性关节炎,其机制可能是调控NLRP3/ASC/caspase-1轴在基因和蛋白水平上的表达。     

火针点刺放血对急性痛风性关节炎湿热蕴结证大鼠模型滑膜IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响

目的:观察火针点刺放血对湿热蕴结型急性痛风性关节炎模型大鼠滑膜组织中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨火针治疗急性痛风性关节炎的作用机制。方法:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分为空白组、模型组、火针组、西药组,于大鼠右踝关节注射0.1m L尿酸钠混悬液建立急性痛风性关节炎模型。火针点刺右踝关节肿胀最高处"阿是穴",共治疗3次。足容积法测量大鼠右踝关节肿胀度;ELISA法测定大鼠踝关节滑膜组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量。结果:模型组大鼠踝关节肿胀度,滑膜中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量较空白组显著升高(P0.01);火针组、西药组造模后96h踝关节肿胀度较模型组降低(P0.01),治疗后火针组和西药组大鼠滑膜中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量较模型组均明显降低(P0.05,P0.01),火针组、西药组大鼠滑膜中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量无明显区别(P0.05)。结论:火针可降低急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,其机制可能与抑制关节滑膜中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平有关。     

基于NALP3炎性体信号通路研究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制

目的:探究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎以及对NALP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins-3,NALP3)信号通路的影响。方法:将SD大鼠分为6组,分别为正常组,模型组(踝关节腔注射尿酸钠制备),栀黄止痛颗粒低、中、高剂量(1.0,2.5,5.0 g·kg-1)和阳性药组(秋水仙碱,3.0 g·kg-1),酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)含量,造模后24 h评定大鼠步态以及关节炎症指数,造模前、造模后6,12,24,48 h测定大鼠裸关节肿胀度。苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化法检测关节组织中NLRP3,IL-1β,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与正常组比较,模型组血清中TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α,IL-6,IL-1β含量(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠步态较差、关节肿胀显著(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、药物处理组步态、关节肿胀得到所改善,随着药物剂量浓度的增加,步态、关节肿胀分级逐渐降低(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组踝关节组织中NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组均显著降低NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白的表达(P0.01)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1表达阳性表达量显著升高,而与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒中、高剂量组显著降低阳性表达率(P0.01),具有剂量依赖性。结论:栀黄止痛颗粒能够缓解痛风性关节炎大鼠关节肿胀,其机制可能与抑制NALP3炎性体信号通路有关。     

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的:从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NALP3)炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射0.2 mL尿酸钠(monosodium urate,MSU)混悬液建立急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型,正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后,随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组,分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃,每天2次,共3 d。正常大鼠为正常组,同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72 h,行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著升高,滑膜组织NALP3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白及mRNA表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著下降,且滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均显著降低(P0.01);与秋水仙碱组比较,痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量仍较高(P0.05),但滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均较低(P0.05,P0.01)。结论:痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,从而减少IL-1β,TNF-α的生成,减轻关节炎症反应。     

祛瘀清热方对尿酸钠诱导的痛风性关节炎大鼠NLRP6/Caspase-1/IL-1β 信号通路的影响

目的：观察祛瘀清热方对尿酸钠诱导的痛风性关节炎（GA） 大鼠NLRP6/Caspase-1/IL-1β 信号通 路的影响。方法：检测受试大鼠踝关节肿胀度。用酶联免疫吸附法（ELISA） 测定大鼠血清白细胞介素- 1β （IL-1β）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α） 的含量，用Western Blot 检测滑膜组织NLRP6 和Caspase-1 含量。 结果：与正常组比较，其余各组造模之后，在不同时间点上，受试大鼠踝关节肿胀度增加（P＜0.05）。与模型 组比较，祛瘀清热方低、中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠，在造模后各时间节点，大鼠踝关节肿胀度降 低（P＜0.05）。与秋水仙碱组比较，祛瘀清热方低、中、高剂量组受试大鼠，在造模后各时间节点，大鼠踝关 节肿胀度增加（P＜0.05）。模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α 水平较正常组上升（P＜0.05）。与模型组比较，祛 瘀清热方低、中、高3 个剂量组及秋水仙碱组大鼠血清IL-1β、TNF-α 的水平降低（P＜0.05）。与秋水仙碱组 比较，祛瘀清热方低、中、高剂量组IL-1β、TNF-α 水平增加（P＜0.05）。与正常组比较，模型组及祛瘀清热 方中、高剂量组滑膜组织NLRP6 蛋白表达下调（P＜0.05），模型组Caspase-1 蛋白表达上调（P＜0.05）。与模 型组比较，祛瘀清热方高剂量组滑膜组织NLRP6 蛋白表达上调（P＜0.05），Caspase-1 蛋白表达下调（P＜ 0.05）。结论：祛瘀清热方可抑制GA 炎性反应，降低血清中IL-1β、TNF-α 含量，上调滑膜组织NLRP6 蛋白 和下调滑膜组织Caspase-1 蛋白的表达。     

基于NLRP3炎性小体通路探讨电针对急性痛风性关节炎大鼠组织蛋白酶B的影响

目的:观察电针对大鼠膝关节滑膜中组织蛋白酶B(Cathepsin-B)的影响,探讨电针治疗急性痛风性关节炎的机制。方法:60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、药物组和电针组,每组15只。采用左膝关节腔注射0.2 mL尿酸钠晶体混悬液法建立急性痛风性关节炎大鼠模型。药物组予秋水仙碱灌胃治疗(0.3 mg·kg~(-1)·d~(-1)),电针组予左侧"三阴交""足三里"电针治疗,10 min/次,1次/d,共1周。用Coderre步态分级标准对各组大鼠进行步态评分;HE染色观察大鼠左膝关节滑膜组织的形态学变化;Western blot法检测大鼠左膝关节滑膜Cathepsin-B的表达;实时荧光定量PCR法检测大鼠左膝关节滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠左膝关节滑膜有明显炎性浸润,步态评分以及Cathepsin-B蛋白和NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平显著增高(P0.01)。与模型组比较,药物组炎性浸润程度较轻,电针组稍次之;药物组和电针组步态评分以及Cathepsin-B蛋白和NLRP3、 ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均显著降低(P0.01,P0.05)。与药物组比较,电针组Caspase-1、IL-18 mRNA表达水平增高(P0.05)。结论:电针可能是通过降低膝关节滑膜中Cathepsin-B的活性来抑制NLRP3炎性小体的激活,从而治疗急性痛风性关节炎。     

加味四妙散汤对急性痛风性关节炎大鼠炎性细胞因子及多靶点调节信号通路影响

目的:探讨加味四妙散汤对急性痛风性关节炎大鼠炎性细胞因子及多靶点调节信号通路影响。方法:选取由本院实验动物中心提供雄性Wistar健康大鼠40只,依据随机数字表法分为四组,对照组、模型组、秋水仙碱组与加味四妙散汤组,每组10只;制备急性痛风性关节炎大鼠模型,使用ELISA法检测各组大鼠关节液内炎症因子含量,免疫印迹法检测关节周边组织内Caspase-1、TLR4、ASC及NF-κB蛋白表达情况,RT-PCR检测关节周边组织内Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达情况。结果:模型组IL-6、TNF-α及IL-1β含量较对照组上升,加味四妙散汤组和秋水仙碱组较模型组下降,差异均有统计学意义(P0.05),加味四妙散汤组TNF-α含量较秋水仙碱组升高,差异有统计学意义(P0.05);模型组Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达量较对照组上升,加味四妙散汤组Caspase-1、ASC mRNA表达量较模型组下降,秋水仙碱组Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达量较模型组和加味四妙散汤组下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:加味四妙散汤可抑制急性痛风性关节炎大鼠关节液内炎性因子含量,同时调节信号通路内蛋白及mRNA表达水平起到治疗作用。     

基于氧化应激和NLRP3炎性小体探讨锦鹤养心方总黄酮抗心肌缺血的作用机制

目的:研究锦鹤养心方总黄酮提取物对盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌缺血损伤保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:108只SPF级KM小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(盐酸普萘洛尔,33 mg·kg-1),总黄酮提取物高、中、低剂量组(4.4,2.2,1.1 g·kg-1),给药组连续给药7 d,各组于第5天开始,除正常组外,其余各组小鼠均于给药1 h后皮下注射ISO 20 mg·kg-1,正常组小鼠皮下注射等剂量生理盐水,连续注射3 d,制备心肌缺血模型。造模24 h后取材,记录各组小鼠第1次注射ISO前及最后1次注射24 h后心电图;测定各组小鼠的心脏指数;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌缺血面积;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),心肌钙蛋白I(c Tn I),乳酸脱氢酶(LDH),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠Ⅱ导联心电图ST段位移增加(P0.01),血清CK-MB,c Tn I,ALT,AST,LDH,MDA,IL-6,TNF-α,IL-1β含量及心脏指数水平显著升高,SOD的含量显著降低(P0.01),心肌缺血面积显著增加(P0.01),心肌组织损伤明显,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,锦鹤养心方总黄酮各剂量组小鼠Ⅱ导联心电图ST段位移降低(P0.05,P0.01),血清CK-MB,c Tn I,ALT,AST,LDH,MDA,IL-6,TNF-α,IL-1β含量及心脏指数水平降低,SOD的含量升高(P0.05,P0.01),心肌缺血面积降低(P0.05,P0.01),心肌缺血损伤明显减轻,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论:锦鹤养心方总黄酮对心肌缺血损伤具有保护作用,且呈现一定的量效关系,该作用可能与提高机体抗氧化活性,减少氧化应激损伤,抑制NLRP3炎性小体活化有关。     

复方水牛角颗粒对大鼠急性痛风性关节炎的作用机制研究

目的研究复方水牛角颗粒治疗急性痛风性关节炎的作用机制。方法 Wistar大鼠40只,随机分为正常组、模型组、中药组、西药组。大鼠单侧踝关节内一次性注入尿酸钠盐溶液诱导急性痛风性关节炎模型,正常组注射等量0.9%Na Cl溶液。造模后4 h,中药组和西药组分别给予复方水牛角颗粒、秋水仙碱灌胃,正常组和模型组灌胃等量0.9%Na Cl溶液。每日1次,共3 d,72 h后取大鼠血清、关节滑膜组织,测量大鼠踝关节周径,运用凝胶阻滞实验观察NF-κB活性;蛋白印迹法、荧光定量PCR法检测TNF-α、IL-8的蛋白和基因表达。结果与正常组比较,模型组大鼠踝关节肿胀程度明显增加,滑膜组织中NF-κB活性、TNF-α、IL-8蛋白和基因表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,中药复方水牛角颗粒可明显减轻模型大鼠踝关节肿胀程度,抑制NF-κB活性以及TNF-α、IL-8的蛋白和基因表达(P0.05,P0.01)。结论复方水牛角颗粒具有良好的抗急性痛风性关节炎作用,其部分作用机制可能为抑制NF-κB活性、下调TNF-α、IL-8表达,以减轻组织的炎性损伤。     

红藤虎杖复方免煎剂对急性痛风性关节炎模型小鼠细胞因子表达的影响

目的观察红藤虎杖复方免煎剂对急性痛风性关节炎模型小鼠细胞因子的表达,并探讨其可能作用机制。方法将KM雌雄性小鼠各36只,称重后随机分成空白组、模型组、阳性组和中药高、中、低剂量组,正常饲养1周后,连续灌胃5 d,第6天在小鼠踝关节注射尿酸钠诱导急性痛风性关节炎模型。测定足趾容积、HE染色观察滑膜组织病理形态,以及ELISA法检测IL-1β、TGF-β1、TNF-α、IL-1、IL-8、IL-1Ra在踝关节滑膜组织中的表达。结果与空白组比较,模型组右足趾容积明显增加;IL-1、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均显著增高(P<0.01);IL-1Ra、TGF-β1较空白组增高(P<0.05)。与模型组比较,阳性组、中药高、中剂量组右足趾容积明显降低;IL-1、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均显著性降低(P<0.01);TGF-β1、IL-1Ra水平均显著性增高(P<0.01)。与阳性组比较,中药高剂量组IL-1显著降低((P<0.01);中药高、中剂量组IL-1β、TNF-α较阳性组降低(P<0.05);中药高、中剂量组IL-8、IL-1Ra、TGF-β1与阳性组比较无显著性差异(P>0.05);HE染色观察显示高剂量组滑膜组织炎症浸润改善明显。结论红藤虎杖复方免煎剂能治疗小鼠急性痛风性关节炎,其作用机制可能与MSU诱导的促炎细胞因子及抗炎细胞因子的产生有关,且高剂量效佳。     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

肾茶对急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用研究

目的观察肾茶水煎剂对大鼠急性痛风性关节炎的抗炎作用。方法采用微晶型尿酸钠分别诱导大鼠急性踝关节肿胀和急性痛风性关节炎模型,以苯溴马隆为阳性对照,观察肾茶水煎剂对大鼠肿胀度的影响,并测定大鼠血清尿酸值(serum uric acid,SUA)及黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活性,ELISA试剂盒检测血清白细胞介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果模型组关节肿胀度、IL-1β及IL-8水平明显高于正常对照组(P0.05),肾茶水煎剂高、中、低剂量能不同程度抑制大鼠踝关节肿胀度,降低血清IL-1β、IL-8水平(P0.05);TNF-α水平与模型组比较无显著性差异。同时肾茶水煎剂可显著降低大鼠血清SUA水平及XOD活性(P0.05或P0.01)。结论肾茶水煎剂对大鼠急性踝关节肿胀和急性痛风性关节炎有很好的控制作用,可能与其抑制尿酸生成、利尿以促进尿酸排泄、抑制炎症细胞因子IL-1β、IL-8表达有关。     

五色梅总黄酮对佐剂诱导大鼠关节炎的作用

目的:观察五色梅总黄酮对风湿性关节炎的治疗作用。方法:采用完全弗氏佐剂(CFA)诱导关节炎大鼠模型,设正常组,模型组,阳性药地塞米松组(0.15 mg·kg-1),五色梅总黄酮高、低剂量组(100,25 mg·kg-1)。ig给药各组每天1次,连续16 d,观察造模后第3,8,16,21,24天大鼠足跖肿胀率及关节炎指数,测定大鼠炎性组织液和血清中的白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。小鼠二甲苯耳廓肿胀法和大鼠棉球肉芽肿法观察五色梅总黄酮的抗炎作用;小鼠热板法和醋酸扭体法观察五色梅总黄酮的镇痛作用。结果:与模型组比较,五色梅总黄酮100 mg·kg-1剂量组能降低佐剂性关节炎大鼠足肿胀率并降低关节炎指数(P0.05),并能降低佐剂性关节炎大鼠炎性组织液和血清中IL-1β,TNF-α水平(P0.05);五色梅总黄酮140,70 mg·kg-1剂量组均能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度,100 mg·kg-1剂量组能显著抑制大鼠棉球肉芽组织质量(P0.05,P0.01);五色梅总黄酮140,70 mg·kg-1剂量组均能显著减少醋酸引起小鼠的扭体反应次数和增加小鼠热板痛阈值(P0.05)。结论:五色梅总黄酮有效改善类风湿性关节炎大鼠关节炎症状,同时具有显著的抗炎镇痛作用,其机制可能与降低炎性组织液和血清中IL-1β,TNF-α水平有关。     

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗痛风性关节炎的作用机制

目的:探讨桂枝芍药知母汤(GT)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中炎性信号表达的影响。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组化实验,酶联免疫吸附测定(ELISA)实验,蛋白质免疫印迹(Western blot)实验。各实验取大鼠60只,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型组,正常组,GT高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg~(-1)),秋水仙碱阳性药组(3×10-4g·kg~(-1))。实验组均ig给药,正常组、模型组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。第5天ig前,大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导GA。取大鼠关节滑膜组织,免疫组化检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体的表达,Image-Pro Plus6.0图像分析系统测定平均积分吸光度(IA),Western blot检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸酶~(-1)(Caspase~(-1))信号衔接蛋白表达,ELISA测定炎性因子白细胞介素~(-1)β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),核因子-κB(NF-κB)表达水平。结果:造模72 h后,与正常组比较,模型组大鼠关节滑膜组织中NLRP3,ASC,Caspase~(-1),L~(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达明显升高(P0.05),Caspase~(-1)2表达明显降低(P0.05);与模型组比较,GT高、中剂量组NLRP3,ASC,GT各剂量组Caspase~(-1)表达水平均显著降低(P0.05),Caspase~(-1)2表达明显升高(P0.05),GT各组IL~(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达均明显降低(P0.05)。结论:GT治疗GA的作用机制可能与降低NLRP3,ASC,Caspase~(-1)表达,抑制IL~(-1)β分化成熟及NF-κB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。     

资生肾气丸对痛风性关节炎大鼠IL-1表达水平的影响

目的:观察资生肾气丸对痛风性关节炎大鼠血清中白介素1β(IL-1β)及大鼠滑膜半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶-1(Caspase-1)的表达水平的影响,探讨资生肾气丸防治痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法:将84只SD大鼠随机分为7组:空白组、模型组、中药痛风舒对照组、西药秋水仙碱对照组及资生肾气丸复方低、中、高剂量组,每组12只。采用尿酸钠联合氧嗪酸钾诱导大鼠痛风性关节炎模型,应用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-1β含量,应用免疫组化方法检测大鼠滑膜Caspase-1含量。结果:模型组和空白组IL-1β、Caspase-1含量差异有统计学意义(P0.01);西药秋水仙碱对照组、资生肾气丸复方低、中、高剂量组IL-1β和Caspase-1含量与模型组比较差异有统计学意义(P0.01);中药中剂量组与痛风舒对照组比较,IL-1β、Caspase-1含量差异有统计学意义(P0.01),但与西药对照组比较差异无统计学意义(P0.01)。结论:资生肾气丸可影响痛风性关节炎大鼠IL-1β和Caspase-1表达,对痛风性关节炎具有防治作用。     

翼首草总苷对佐剂性关节炎大鼠药效及作用机制的研究

目的探讨藏药翼首草总苷(TGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及其作用机制。方法取健康SD大鼠48只,随机选取8只作为正常组,其余40只大鼠右足趾皮内注射0.1 m L完全弗氏佐剂(CFA),致炎17 d后,随机分为5组,每组8只,即模型组,醋酸地塞米松组(0.001 g·kg-)1,翼首草总苷低、中、高剂量组(0.058,0.116,0.232 g·kg-)1,连续灌胃给药30 d。观测致炎后17,27,37,47 d大鼠足趾肿胀率、苏木素-伊红(HE)染色法观察致炎侧踝关节滑膜病理改变。致炎47 d,ELISA法测定血清中白介素-1β(IL-1β)、白介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及膝关节滑膜核因子-κB(NF-κB)的水平。结果与正常组比较,模型组足趾肿胀率明显升高(P0.01),滑膜细胞、巨噬细胞、纤维细胞大量增生,炎症细胞大量浸润,而且IL-1β、TNF-α、IL-17、NF-κB水平明显升高(P0.01)。与模型组比较,各给药组足趾肿胀率明显降低(P0.05,P0.01),并能改善滑膜细胞、巨噬细胞、纤维细胞增生与炎症细胞浸润,IL-1β、TNF-α、IL-17、NF-κB水平也明显降低(P0.05,P0.01)。结论翼首草总苷能抑制AA大鼠关节肿胀,改善AA大鼠踝关节滑膜病变,对佐剂性关节炎大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与降低体内IL-1β、TNF-α、IL-17、NF-κB的水平有关。     

基于NLRP3炎性小体探讨金铁锁提取物对类风湿性关节炎治疗机制的研究

该研究在中医药理论指导下,探究云南临床长期使用治疗风湿痹证的金铁锁的科学依据。考虑到现代医学类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)与风湿痹证在症状方面有较高相似度,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3),考察金铁锁提取物(crude extract of Psammosilene tunicoides,CEPT)治疗RA的作用机制。采用胶原诱导类风湿性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)小鼠模型,于首次免疫第32天,按关节炎评分,随机将小鼠分组,每组10只,给药;按各组给药剂量,连续给药21 d。给药过程中每间隔4 d,评价小鼠关节肿胀度、关节炎评分;测定小鼠脾脏指数,并对小鼠踝关节进行组织病理学检查;测定小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素18(IL-18)的含量;蛋白印迹(Western blot)法测定小鼠踝关节中NLRP3蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白(cystein asparate protease1,caspase-1)、CARD结构域凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)的表达;实时荧光定量核酸扩增(real-time quantitative PCR,q-PCR)检测NLRP3、caspase-1 mRNA的表达。结果显示,与模型组小鼠相比,阳性药物(甲氨蝶呤)组,金铁锁提取物低、高剂量组小鼠血清中IL-1β、IL-18炎性因子的含量及脾脏指数均显著降低(P0.01);关节炎评分、发病关节肿胀程度均显著下降(P0.01);膝关节炎性浸润有所改善;踝关节中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P0.01)。实验结果提示金铁锁可能通过抑制NLRP3炎性小体的表达,从而降低CIA小鼠足肿胀度及关节炎评分,降低炎症反应,为金铁锁在RA疾病中免疫调节的研究提供一定的实验基础及理论依据。     

银杏叶提取物对糖尿病肾病大鼠NLRP3炎性体的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠NLRP3炎性体介导的炎症反应的影响,探讨GBE保护糖尿病肾病肾脏的部分机制。方法 Wistar大鼠随机分成对照组、糖尿病组(DM)和糖尿病肾病银杏叶治疗组(DM+GBE)。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)的方法建立DM模型,并于实验12周对动物进行处理,免疫组化技术检测Caspase-1、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的水平。RT-PCR检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1βm RNA表达,ELISA技术检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β水平。结果与对照组比较,DM组大鼠血糖水平升高(P0.01);与DM组大鼠相比,DM+GBE组大鼠血糖水平降低(P0.05)。与对照组相比较,DM组大鼠肾皮质IL-1β、IL-18水平均升高(P0.05),与DM组大鼠相比,DM+GBE组大鼠肾皮质IL-1β、IL-18水平均降低(P0.01)。而Caspase-1水平略有下降,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,DM组大鼠NLRP3、ASC、IL-1βm RNA表达显著升高(P0.05),与DM组相比,DM+GBE组大鼠MDM的NLRP3、ASC、IL-1B m RNA水平均下降(P0.01)。与对照组大鼠相比,DM组大鼠血清中TNF-α、IL-1β均升高(P0.05),与DM组相比较,DM+GBE组大鼠血清中TNF-α、IL-1β均降低(P0.01)。结论 NLRP3炎性体相关炎性因子的表达及活化可能参与DN的发生及进展,经银杏叶提取物干预后,炎性反应减轻,提示银杏叶提取物肾脏保护机制可能是通过抑制NLRP3炎性体的活性来实现的。     

金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响

目的观察金刚藤颗粒对急性盆腔炎(APID)模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法将雌性SD大鼠105只随机分为假手术组、模型组及金刚藤颗粒低、中、高剂量组,每组均15只,灌胃治疗15 d后,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织的病理形态;实时定量PCR及Western blotting分别检测NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 HE染色显示,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞脱落坏死,腔壁结构紊乱,全层炎性细胞浸润,有充血水肿;与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组症状较模型组有显著改善;与对照组、假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-18水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组IL-1β、IL-18水平显著降低(P 0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著降低(P 0.05);模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平显著高于假手术组(P 0.05),金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Cas-pase-1蛋白表达水平较模型组显著降低(P 0.05)。结论金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠具有显著治疗作用,其可能通过抑制NLRP3炎症小体通路发挥免疫作用。