不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响

目的探讨不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响。方法建立CO2气腹体外模型，以不同压力（0、7、14mmHg）的CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞处理4h，设未处理组为对照组。采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况。结果7mmHg组第1—5天吸光度值明显高于0mmHg组、14mmHg组、对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；7mmHg组G2／M期的人宫颈癌CaSki细胞数值明显高于0mmHg组、14mmHg组、对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；14mmHg组S期人宫颈癌CaSki细胞数值明显高于0mmHg组、7mmHg组、对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）；人宫颈癌CaSki细胞的增殖指数随着CO2气腹压力的升高而增高；电镜下观察结果显示，7mmHg组、14mmHg组均可见明显异常的核分裂像。结论CO2气腹在一定的压力状态下表现出较强的促细胞生长效应。     

CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞Survivin和Bcl-2表达的影响

目的 探讨CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞抗凋亡能力的影响.方法 建立腹腔镜CO2气腹体外模型,以不同压力(0、7、14 mmHg)的CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞处理不同时间(1、2、3、4 h),设未处理为对照组.采用RT-PCR、Western blot分别检测CO2气腹处理后各组细胞Survivin mRNA 和Bcl-2蛋白的表达情况.结果 当压力为7、14 mmHg时,Survivin和Bcl-2的表达均随着气腹处理时间的延长呈上升趋势(P＜0.05).当处理相同时间时,7 mmHg组Survivin和Bcl-2的表达量均明显高于其他压力组和对照组(P＜0.05).结论 在一定压力和作用时间范围,CO2气腹能提高宫颈癌细胞的抗凋亡能力,这可能是CO2气腹促肿瘤生长的机制之一.     

腹腔镜CO_2气腹对人宫颈癌CaSki细胞中凋亡抑制因子表达的影响

目的:研究CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞中survivin mRNA和蛋白表达的影响,探讨其促肿瘤生长的分子机制。方法:建立腹腔镜CO2气腹体外模型,以不同压力(0mmHg、7mmHg、14mmHg)的CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞处理不同时间(1h、2h、3h、4h),设未处理组为对照。采用RT-PCR法和免疫细胞化学法分别检测处理后各组细胞survivin mRNA和蛋白表达情况。结果:CO2气腹在一定的压力和作用时间范围上调CaSki细胞中survivin mRNA和蛋白的表达。结论:CO2气腹促肿瘤生长的效应可能是通过抑制肿瘤细胞的凋亡而实现的。     

CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞MMP-9和VEGF表达的影响

目的 探讨腹腔镜二氧化碳（CO2）气腹对人宫颈癌CaSki细胞株基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响.方法 建立腹腔镜CO2气腹体外模型,将CaSki细胞株分别置于0、7和14mmHg的CO2气腹环境下培养1、2、4和8h.采用RT-PCR和Western blot法分别检测处理后各组CaSki细胞株中MMP-9和VEGF表达情况.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与0 mmHg CO2气腹组相比,7和14 mmHg CO2气腹组CaSki细胞株MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白表达显著增加（P＜0.05）,且随着处理时间的延长MMP-9和VEGF的表达呈上升趋势（P＜0.05）,处理4h时MMP-9和VEGF的表达量达到高峰;在同一时间点时,7mmHg CO2气腹组的MMP-9和VEGF表达量最高（P＜0.05）.结论 在一定压力和作用时间范围内,CO2气腹可能是通过上调MMP-9和VEGF的表达,进而促进肿瘤生长.     

不同CO_2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响

目的探讨不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响。方法建立CO2气腹体外模型,以不同压力(0、7、14 mm Hg)的CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞处理4 h,设未处理组为对照组。采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况。结果7 mm Hg组第1-5天吸光度值明显高     

腹腔镜不同气腹介质对人宫颈癌细胞株CaSki体外生长影响的研究

目的:探讨腹腔镜不同气腹介质对人宫颈癌细胞株CaSki体外生长的影响.方法:体外培养CaSki细胞,模拟腹腔镜建立CO2气腹和N2气腹处理细胞,另设未处理组为对照.采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况.结果:处理后48h起CO2促进CaSki细胞生长,N2组在处理后48～72h短暂抑制细胞增殖;CO2组G2-M期细胞明显增加;CO2组细胞见明显核分裂像,N2组可见线粒体肿胀,核周间隙扩大.结论:CO2气腹促进CaSki细胞生长,而N2气腹则起一定的抑制作用.     

CO2气腹对人宫颈癌CasKi细胞p-ERK和p-Akt表达的影响

目的:探讨CO2气腹对人宫颈癌CasKi细胞信号转导通路的影响.方法:建立腹腔镜CO2气腹体外模型,以不同压力(12mmHg、13mmHg及14mmHg)的CO2气腹对人宫颈癌CasKi细胞处理2h,设未处理组为对照组.采用四唑盐比色试验(MTT)、免疫细胞化学法、Western blotting检测CasKi细胞体外生长情况、相关信号转导通路核心蛋白p-ERK和p-Akt的表达水平.结果:CO2处理组中CasKi细胞增殖加快,相关信号转导通路核心蛋白p-ERK和p-Akt的表达显著增加(P<0.01).各个CO2处理组间,CasKi细胞增殖及p-ERK与p-Akt的表达无显著差异(P>0.05).结论:在临床常用腹腔镜气腹压力和作用时间范围内,CO2气腹激活相关信号转导通路,这可能是CO2气腹促肿瘤细胞生长机制之一.     

模拟二氧化碳气腹对人肾癌786-O细胞体外增殖的影响

目的:通过建立体外模拟CO2:气腹环境,研究CO2气腹对人肾癌786-O细胞增殖的影响.方法:建立体外模拟CO2气腹环境.以14mmHg气压对人肾癌786-O细胞作用不同时间(2、4 h),以培养于常规条件下肾癌细胞为对照,用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Survivin蛋白表达水平.结果:与对照组比较,CO2气腹处理后的两组人肾癌786-0细胞增殖速度明显加快(P<0.05).且48 h后细胞增殖速度的加快与气腹作用时间呈直线相关(R2=1,P<0.01);细胞周期中处于增殖期的细胞比例显著增高(P<0.01);PCNA表达明显增强(P<0.01);细胞凋亡率亦显著减少(P<0.05),且凋亡率的减少与气腹作用时间呈直线相关(R2=1,P<0.01);Survivin表达显著增强(P<0.01)结论:体外模拟CO2气腹环境,可促进人肾癌786-O细胞增殖,且随着接触CO2时间的延长,肾癌786-O细胞增殖速度加快.     

CO2对人宫颈癌细胞株CASKI的增殖及CDK4和Cyclin D1表达的研究

目的：探讨腹腔镜二氧化碳（CO2）气腹对宫颈癌细胞体外生长的影响。方法：体外培养人宫颈癌细胞株Caski，以14mmHg气压的CO2处理2h，用四唑盐比色试验（MTT）、流式细胞术（FCM）和免疫细胞化学法检测Caski细胞外生长情况，细胞周期变化及周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1的表达水平。结果：CO2处理后Caski细胞增殖加快，细胞周期中处于增殖期的细胞比例增高，周期相关蛋白CDK4和CyclinD1的表达显著增加。结论：CO2可以促进Caski细胞的增殖。     

一种腹腔镜人工气腹体外模型的建立及评价

目的：建立腹腔镜人工气腹体外模型并评价其效果。方法：采用不锈钢密封罐和自动气腹机建立腹腔镜人工气腹体外模型,用M1Tr法观察CO2气腹（7mmHg,4h）对人宫颈癌细胞CaSki体外生长的影响,实验重复3次。设未处理组为对照。结果：CO2气腹组和对照组同次处理的组间比较结果显示,处理后第24h、48h两组吸光度值无明显差异（P〉0．05）,处理后第72h、96h、120hCO2组各时间点吸光度值明显高于对照组（P〈0．05）。两组组内3次重复实验同一时间点所测吸光度值（A）无显著差异（P〉0．05）。结论：采用密封罐和自动气腹机建立的腹腔镜人工气腹体外模型是一种进行腹腔镜体外研究的理想模型;采用该模型发现CO2气腹促进人宫颈癌细胞CaSki的体外生长。     

体外模拟二氧化碳气腹环境对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过建立体外模拟二氧化碳(CO2)气腹的手术环境,研究CO2气腹环境对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,对腹腔镜用于宫颈癌手术的安全性作出初步评价。方法体外建立模拟CO2气腹环境,流式细胞仪PI染色分析宫颈癌细胞株Hela细胞周期和凋亡,比较不同CO2灌注压力(0～16mmHg)和作用时间(1～4h)对细胞增殖程度和凋亡的影响,MTT比色法测定活细胞数量。结果Hela细胞在不同的CO2气腹环境中培养48h后,实验组与对照组一样均呈增殖性生长。但随压力增加和作用时间的延长,实验组细胞增殖的速率变慢;48h后,各压力实验组之间的细胞增殖指数(PI)和对照组之间的PI值出现显著性差异(P<0.05)。实验组不同CO2压力作用的凋亡细胞指数随作用时间的增加呈上升趋势,并且随CO2压力的增高,凋亡细胞比例也随之增加,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。MTT比色法显示,Hela细胞随着CO2作用时间的延长和压力的增大,细胞增殖受抑制程度增大,其中4h作用组抑制程度最为显著(P<0.05)。结论体外模拟CO2环境对宫颈癌细胞(Hela)的生长均有明显的抑制作用,其抑制程度与CO2气体的压力和作用时间显著相关;CO2的压力和作用时间,均与宫颈癌细胞凋亡过程有关。     

模拟CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响

目的 通过建立体外模拟CO2气腹环境，研究CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响。方法 建立体外模拟CO2的气腹环境，在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为12mmHg，作用时间4h。处理后用MTT法检测细胞增殖情况；通过流式细胞仪观察细胞周期变化。结果 MTT法检测细胞增殖结果显示，气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖速度与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）；流式细胞仪检测人胃癌MKN-45细胞周期，CO2气腹组增殖指数与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 体外模拟持续12mmHg CO2气腹环境，连续对人胃癌MNK-45细胞作用4h，不会促进胃癌细胞的增殖和生长。     

模拟CO2气腹在体外对胃癌细胞生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响

目的 通过体外对胃癌细胞系的培养,探讨体外建立的CO2气腹模拟环境对胃癌细胞系SGC-7901的生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响.为腹腔镜用于治疗消化道恶性肿瘤的安全性作初步评价,并提供相关的实验室证据.方法 收集对数生长期SGC-7901细胞,胰酶消化制成细胞悬液,根据不同实验的需要以不同的细胞浓度接种于不同的培养板,培养24h细胞贴壁后,随机分为4组:对照组、CO2气腹作用1h组、CO2气腹作用2h组、CO2气腹作用3h组,其中作为对照组的细胞始终置于细胞培养孵箱中培养,而实验组在纯CO214mm Hg压力下培养1、2、3h,然后再置于37℃细胞孵箱内培养.48h后收获细胞用MTT法检测各组细胞的增殖情况;用流式细胞技术检测各组细胞周期分布情况和凋亡比例;RT-PCR检测各组细胞nm23H1、CD44v6 mRNA转录水平;免疫细胞化学检测各组细胞中nm23H1、CD44v6的表达情况.结果 各CO2作用组经过模拟CO2气腹环境培养后,除1h作用组较对照组吸光度差异无统计学意义外,2h和3h作用组吸光度较对照组均显著上升(P<0.05);流式细胞仪检测各组细胞周期,对照组和各CO2作用组在培养48h后随CO2作用时间增加,增殖指数上升幅度变大,但1h作用时间组和对照组增殖指数差异无统计学意义(P>0.05),2h和3h作用组增殖指数和对照组比较显著上升(P<0.05);凋亡细胞比例随CO2作用时间的延长而下降,CO2作用1h时,凋亡细胞比例与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),1h后,凋亡细胞比例差异更显著(P<0.01);PCR电泳结果经凝胶成像自动分析系统分析发现实验组nm23H1-mRNA表达与对照组比较差异不具有统计学意义(P>0.05),而CD44v6-mRNA表达2h和3h组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学结果显示CO2气腹可使CD44v6的表达上调,其中2～3h组差异有统计学意义(P<0.01),但CO2气腹对nm23H1表达的影响无统计学意义(P>0.05).结论 在体外实验中模拟CO2气腹环境促进了恶性肿瘤细胞的增殖、抑制了其凋亡,使CD44v6的表达上调,而对nm23H1的表达无影响;尽管CO2气腹促进肿瘤细胞生长、增加肿瘤细胞播散转移的机制未明,但其可使CD44v6的表达上调,有可能通过CD44v6基因的功能机制增加恶性肿瘤细胞侵袭和转移的潜在风险.     

^60Co-γ射线辐射对宫颈癌Hela细胞株增殖基因表达的影响

目的：探讨^60Co-γ射线辐射后宫颈癌Hela细胞株增殖基因Ki-67、PCNA表达变化。方法：采用免疫细胞化学法、RT—PCR法检测不同辐射剂量下宫颈癌Hela细胞中Ki-67、PCNA蛋白和基因的表达情况。结果：免疫细胞化学法未发现Ki-67、PCNA蛋白表达的差异;RT—PCR法显示在照射后第1天、第2天出现Ki-67、PCNA高表达,之后表达下调,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：PCNA、Ki-67在辐射后先表达上调,继而表达下调,可能证明Hela细胞在放射后出现加速增殖。     

宫颈癌Ki-67及PCNA表达的比较研究

目的研究Ki-67及PCNA两种增殖抗原在宫颈癌组织中的表达特点，了解其表达的相关性。方法采用免疫组化方法（S—P法）对57例宫颈癌（包括原位癌，早期浸润癌及浸润癌）组织切片进行Ki-67及PCNA染色，并对两者进行相关性分析，同时检测9例慢性宫颈炎作为对照研究。结果9例慢性宫颈炎中Ki-67均表达阴性，而PCNA有8例基底细胞阳性；在宫颈癌中PCNA抗原表达强度明显高于Ki-67（P〈0．005）。结论在宫颈癌组织中PCNA抗原表达较强，几乎涵盖了所有Ki-67的增殖信息。     

CO2气腹环境对人宫颈癌 Hela细胞生长及卡铂敏感性的影响

①目的探讨体外模拟腹腔镜二氧化碳（ CO2）气腹环境对人宫颈癌Hela细胞生长的影响;CO2气腹环境作用后Hela细胞对卡铂敏感性的影响。②方法将体外培养的处于对数生长期的Hela细胞分为4组,即CO2组、卡铂组、CO2＋卡铂组及对照组。用CCK8法检测各组细胞的增殖活性;通过流式细胞仪PI染色分析细胞周期;Annexin V-FITC检测细胞早期凋亡率。③结果 CO2气体与卡铂间无交互作用（ P ＞0．05）;CO2处理组Hela细胞增殖抑制率明显下降（ P ＜0．01）;卡铂组与对照组、CO2＋卡铂组与CO2组比较,卡铂处理组He-la细胞增殖抑制率上升明显（ P ＜0．01）,并使肿瘤细胞停滞于S期,G1、G2期细胞明显减少,凋亡指数明显增加。④结论 CO2环境能促进人宫颈癌Hela细胞生长：卡铂对人宫颈癌Hela细胞生长有显著抑制作用;CO2环境作用后,人宫颈癌 Hela细胞对卡铂敏感性无明显变化。     

水飞蓟宾对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其机制研究

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,Slybin)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抗增殖作用及其机制.方法 MTT法观察水飞蓟宾对细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的变化.结果水飞蓟宾可明显抑制HepG2的增殖,经水飞蓟宾作用后PCNA及Ki-67的表达显著减弱(P<0.01);水飞蓟宾可使实验组细胞阻滞于G2/M期,并产生明显凋亡(P<0.05);光镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,电镜可见凋亡及凋亡小体.结论水飞蓟宾可通过下调HepG2中PCNA及Ki-67蛋白的表达,改变细胞周期进程,诱导细胞凋亡来发挥其增殖作用.     

体外模拟CO2、He气腹对胃癌细胞增殖的影响

目的 研究体外建立模拟CO2、He气腹环境对胃癌MKN-45细胞增殖的影响,初步探讨CO2气腹腹腔镜胃癌手术的安全性.方法 体外建立模拟CO2、He气腹环境,全自动气腹机维持压力为12 mmHg,作用3 h并没对照组.处理后0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h,用pH计检测细胞培养液pH值变化;用MTT法检测第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖情况.结果 处理结束后CO2气腹组细胞培养液pH值呈弱酸性,与对照组比下降非常显著(P<0.01),处理后2 h pH值恢复正常;He气腹组pH值呈弱碱性,与对照组比升高显著(P<0.05),1.5 h恢复止常.MTT法检测细胞增殖结果 显示,CO2气腹组和He气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖与对照组比无统汁学差异(P>0.05).结论 体外模拟12 mmHg CO2气腹和He气腹持续作用3 h时,均不促进胃癌细胞增殖.     

蝙蝠葛活性成分对Hela细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株的抑制增殖作用.[方法]应用MTT法检测蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株增殖抑制作用及其细胞毒活性;分别采用倒置显微镜、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色观察Hela细胞处理前后的形态学变化;采用流式细胞仪检测Hela细胞株的细胞周期分布相;应用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原Ki-67、细胞周期蛋白CyclinD1及候选抑癌基因Syk的表达情况.[结果]MTT比色法观察结果表明,蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的抑制增殖作用,且呈现明显的质量浓度和时间依赖性.倒置显微镜、AO/EB染色观察见,蝙蝠葛活性成分处理的Hela细胞出现一系列典型的凋亡细胞特征.流式细胞仪检测结果显示,蝙蝠葛活性成分作用后加药组出现G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期和G2/M期细胞比例则明显下降(P<0.01),将细胞阻滞在G0/G1期;免疫细胞化学观察结果表明,蝙蝠葛活性成分作用后加药组Syk表达增加,Ki-67和CyclinD1蛋白表达降低,与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.01).[结论]蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的生长抑制作用,并可导致G0/G1期阻滞.G0/G1细胞周期阻滞可能是蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用的机制之一.     

宫颈病变中PCNA、Ki-67的表达及其与高危型HPV感染的相关性分析

目的:探讨PCNA、Ki-67在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达意义及与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的关系.方法:收集手术切除的宫颈标本280例,其中,研究组中宫颈癌72例,CIN148例,对照组中慢性宫颈炎60例.应用免疫组化检测宫颈标本中增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67抗原的表达情况,采用PCR技术检测宫颈标本中HR-HPV感染情况.结果:宫颈癌组、CIN组PC-NA表达阳性率明显高于宫颈炎组,且宫颈癌组、CINⅡ～Ⅲ组PCNA阳性率高于CIN Ⅰ组,差异具有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组、CIN组Ki-67表达阳性率明显高于宫颈炎组,且宫颈癌组、CINⅡ～Ⅲ组Ki-67阳性率高于CINⅠ组,差异具有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组、CIN组、PCNA、Ki-67过表达情况明显高于宫颈炎组,且CINⅡ～Ⅲ组PCNA、Ki-67过表达率明显高于CINI组,差异具有统计学意义(P＜0.05);PCNA表达强度与HPV感染呈现正相关(r=0.706,P=0.011);Ki-67表达强度与HPV感染呈现正相关(r=0.695,P=0.021).结论:PCNA、Ki-67在早期宫颈癌及不同级别CIN中的表达存在很大差异,不同级别CIN中HPV感染率亦存在较大差异,因此临床上可以通过联合检测HPV、PCNA、Ki-67等指标对早期宫颈癌、CIN进行辅助诊断.