抗轮状病毒单克隆抗体简报

本研究用牛轮状病毒NCDV株为抗原,免疫2月龄Balb/c雌鼠,二个半月后取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP_2/o融合,共融合二次,融合率达100％。平行采用酶联免疫吸附试验和血凝抑制试验两种方法,从192个原始孔中初步筛选出12个阳性孔,其中11个孔为酶联免疫吸附试验阳性、1个孔为血凝抑制阳性。将其中几个孔进行三次有限稀释克隆化,得到3株抗轮状病毒单克隆抗体(2G_2、3F_4、4B_5)。在酶联免疫吸附试验中,2G_2株     

引起成人腹泻的新轮状病毒在原代人胚肾细胞上的培养和传代

目的 探讨用细胞培养系统在体外培养新轮状病毒（RV）。方法 含新RV的病人粪便标本经高浓度胰蛋白酶（100μg/ml)37℃作用1h,接种于原代人胚肾（PHEK）细胞,37℃吸附1h后,补加无血清含胰蛋白酶（100μg/ml）的DMEM,37℃转鼓培养3d,收获细胞培养液,冻融1次,作为下一代培养的接种物,培养传代。用聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫荧光（IF）、电镜（EM）、免疫电镜（IEM）等方法对细胞培养液进行病毒核酸、抗原及形态检查。结果 从10份粪便标本中培养分离到1株病毒,定名为J19。该病毒在PHEK细胞上稳定培养传代（28代）,其病毒核酸（dsRNA）电泳图型与初始用于接种细胞的粪便标本中的dsRNA电泳图形完全一致,而与A、B、C组RV dsRNA电泳图型明显不同。J19株感染的细胞与病人恢复期血清呈IF阳性反应,与成人腹泻轮状病毒（ADRTV）腹泻病人恢复期血清、兔抗A组RV和兔抗ADRV血清均为IF阻性;EM和IEM在该病毒的细胞培养液中观察到,在形态上与初始接种物中病毒一样的轮状病毒颗粒,而且可被新RV腹泻病人恢复期血清凝集,结论 成功地从含新RV的成人腹泻粪便标本上分离培养出1株轮状病毒－－J19,并能在细胞稳定传代。J19株不属于A、B、C组RV,而是一种新RV。关于新RV在细胞上培养传代,本文是第一次报告。     

抗轮状病毒SA_(11)抗体的制备

为了建立用血清学方法直接从粪便中快速检测轮状病毒,以替代目前国内普遍使用的电镜检查法并加以推广,我们参照美国疾病控制中心用抗轮状病毒SA_(11)抗体作酶联免疫吸附试验(ELISA),检测急性小儿腹泻患者粪便中轮状病毒抗原的办法,从国外引进了轮状病毒SA_(11),并以之制备豚鼠抗SA_(11)抗体成功。     

抗肾小球基底膜抗体肾炎动物模型的建立及应用研究

目的:建立稳定的抗小鼠肾小球基底膜(GBM)抗体诱导的小鼠肾炎模型,用于相关药物药效学及机制的研究。方法:1制备含抗小鼠GBM抗体的兔血清。分离获得小鼠GBM组分,制备成冻干粉免疫家兔,得到含抗小鼠GBM抗体的兔血清。2建立抗小鼠GBM抗体诱导的小鼠肾炎模型。将兔Ig G与弗氏完全佐剂(CFA)充分乳化,于C57BL/6小鼠右脚脚掌注射进行致敏,3 d后尾静脉注射兔血清进行再次免疫。3肾炎小鼠口服肾上腺皮质激素类药物醋酸泼尼松龙(PNS)进行干预治疗,口服给药14 d,2 mg·kg-1·d-1,观察小鼠蛋白尿、蛋白肌酐比、血生化的变化。结果:注射含抗小鼠GBM抗体的兔血清(200μl,300μl,500μl),成功建立小鼠肾炎模型,模型小鼠蛋白尿及血清尿素氮(BUN)水平显著升高,血清白蛋白(ALB)水平明显降低,具有统计学意义(P0.05,P0.01);PNS治疗后,能明显降低肾炎小鼠蛋白尿水平、蛋白肌酐比及BUN水平(P0.05,P0.01),缓解小鼠肾炎症状。结论:含抗小鼠GBM抗体的兔血清能够成功诱导小鼠肾炎模型,醋酸泼尼松龙能够有效发挥治疗作用,证实该模型可用于相关药物药效学及机制的研究。     

光生物素标记抗体用于人心钠素基因表达的检测

光生物素与兔抗鼠IgG以不同克分子比在可见光照射下进行标记。标记抗体用于抗原的检测,敏感度可达62.5pg/2μl。用同样方法对大肠杆菌TAP106(pYX40)中心钠素的表达进行了检测,与(125)~Ⅰ标记的兔抗鼠IgG得到一致的结果。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG, 用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab₂)；用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab₂)；采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP)；用直接ELISA 和 Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定；应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%；兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab₂)免疫双扩散效价为1:64；兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA 和 Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000；酶免(IEA)效价为1∶2000。 结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。     

牛脑和人脑神经元特异性烯醇酶的制备及免疫组织化学的应用

从牛脑和人脑内分别提取神经元特异性烯醇酶(Neuron-specific enolase,简称NSE,又称γγ烯醇酶),并制备了兔抗牛NSE抗血清(抗NSE_b)和兔抗人NSE抗血清(抗NSE_h)。用猫、狗的脊髓和大脑运动皮质切片,进行免疫组织化学-PAP法染色,其中神经元均呈阳性反应,神经胶质均阴性,并与美国的兔抗人NSE抗血清(抗NSE_H)进行染色对比。     

1220名献血员乙肝病毒血清学标志的酶联法检测

<正> 材料与方法 待检血清样品为我院常规献血员,梅毒螺旋体试验均为阴性,肝动能正常。①表面抗原的测定方法,采用的酶联试剂EIA诊断试剂盒为厦门新创科技有限公司配制。该试剂盒为干包被微孔条,献血员血清不同稀释直接加样,每孔加样100μl每孔加酶联试剂1滴(50μl)置45℃40min,取出后甩去孔内液体,用PBST洗涤液充分洗涤,每次洗后均需拭干,共洗5次,然后每孔加Color A、Color B液各1滴,避光置室温15～20min,凡待测样品中有明显蓝色者为酶际反应阳性。②核心抗体(抗—HBC)的测定方法,抗—HBC     

轮状病毒血症血清中干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α与心肌损害的关系

目的 探讨轮状病毒(RV)血症血清中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与心肌损害的关系.方法 收集131例RV感染且其血清RV抗原阳性的患儿血清,其中心肌损害者89例,设为观察组;无心肌损害者42例,设为对照组.采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,检测两组血清中IFN-γ、TNF-α浓...     

ELISA间接法检测人轮状病毒血清抗体的研究

本文对ELISA间接法检测人轮状病毒(RV)血清抗体的方法学进行了探讨.结果表明,RV抗原能直接包被酶标反应板,与经免疫血清间接包被者无甚差异;RV抗原经EDTA、硫氰酸钾或盐酸胍预作用后再行包被,可提高抗原的包被效果.以ELISA间接法和间接双抗体夹心法同时检测34份血清标本,两者检出率无差异(P>0.05);进一步检测11份阳性血清的抗体效价,两法GMT分别为755.1和822.1,也无差异(P>0.05).进行ELISA间接法阻断试验,阻断率达95.6%;重复性试验表明变异系数在3.7～8.7%之间.因此,ELISA间接法敏感性高、特异性强和重复性好,可代替ELISA间接双抗体夹心法以检测RV血清抗体.     

抗A组轮状病毒单克隆抗体特性鉴定及临床初步应用

本文报道了A组RV McAb的特性鉴定及临床初步应用。用从河南省腹泻犊牛粪便中分离的HN-7毒株(RV)免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术获得2株分泌A组RV特异性McAb的杂交瘤细胞。所获2个McAb(2C_7、3C_9)与A组RV第1血清型Wa株、第3血清型SA-11株、第6血清型NCDV株,以及从国内猪、牛粪便中分离的4株未分型毒株的间接ELISA效价达1:10~5～1:10~6,但与这7个毒株的血凝抑制滴度≤1:8,中和效价≤1:100,表明这2个McAb是针对A组RV共同抗原的。用此McAb建立的单夹心ELISA技术,测定162人、牛腹泻粪样,与常规ELISA总符合率为98.8％。     

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测婴幼儿急性胃肠炎粪便中轮状病毒

我们应用豚抗轮状病毒免疫球蛋白、兔抗轮状病毒免疫血清、羊抗兔-酶结合物进行ELISA(双夹心法)检测婴幼儿急性胃肠炎粪便中轮状病毒,并与电镜、补体结合试验的结果作了比较。初步结果表明,ELISA是一种较为特异、敏感、微量的方法。     

人基质金属蛋白酶-1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的 :获得兔抗人基质金属蛋白酶 1 (MMP 1 )多克隆抗体 ,并将其初步应用于临床检测。方法 :将人MMP 1融合蛋白经亲和层析法纯化 ,并将其作为抗原免疫家兔 ,获得兔抗血清 ,经饱和硫酸铵纯化 ,获得初步纯化的兔抗人MMP 1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP 1的OD值。结果 :获得初步纯化的兔抗人MMP 1特异性多克隆抗体 ,该抗体能与人MMP 1起反应。结论:制备的MMP 1多克隆抗体可初步用于临床检测     

MLCK定量检测的双抗体夹心ELISA方法建立

目的:建立定量检测人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的双抗夹心ELISA法.方法:用抗MLCK兔多克隆抗体包被酶标板,1％小牛血清白蛋白(1％BSA)作为封闭液,抗MLCK羊多克隆抗体和HRP-兔抗羊抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的优化;同时对新建立方法的灵敏度、精密度进行了评价...     

人基质金属蛋白酶—1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的：获得兔抗人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)多克隆抗体，并将其初步应用于临床检测。方法：将人MMP-1融合蛋白经亲和层析法纯化，并将其作为抗原免疫家兔，获得兔抗血清，经饱和硫酸铵纯化，获得初步纯化的兔抗人MMP-1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验(ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP-1的OD值。结果：获得初步纯化的兔抗人MMP-1特异性多克隆抗体，该抗体能与人MMP-1起反应。结论：制备的MMP-1多克隆抗体可初步用于临床检测。     

斑点酶联免疫吸附试验的建立和应用

建立了一种快速检测轮状病毒抗原的新技术——斑点酶联免疫吸附试验.用兔抗人轮状病毒IgG包被硝酸纤维素膜,然后直接浸入粪标本中反应,随后与酶标兔抗人轮状病毒IgG作用,再用底物显色,根据斑点颜色深浅,肉眼即可判断阳性或阴性结果,不需要任何特殊仪器设备.将该法与常规ELISA及聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了比较,结果表明,与常规ELISA结果的符合率为98.11%,与聚丙烯酰胺凝胶电泳的符合率为90.57%,而且更为快速、敏感、经济、简便,易于在基层推广和现场应用.     

牛奶中新发现的抗体

人奶中含有大量新生儿所需的体内抗体,给新生儿提供了抗许多普通传染病的自然保护物。但是在巴尔的摩(Balci-more)约翰斯霍普金斯医学校(JohnsHopkins Medical Shoot)的一个研究中表明,牛奶与市场上用牛奶制成的婴儿食品不同,牛奶相似于人奶,它含有保护婴儿抵抗普通腹泻病病毒的抗体。这种病毒叫轮状病毒(Rotavirus)。他们在三月七日的新英格兰医学杂志上报道了这个研究的结果。在未消毒和(巴化)消毒的牛奶中发现了轮状病毒的抗体,然而,虽然大多数婴儿食品是用牛     

免疫斑点试验检测轮状病毒抗体的研究

本文报道一种检测轮状病毒(RV)抗体的免疫斑点试验。应用此法从60份正常儿童血清标本中检出含RV抗体者53份,阳性率88.33％,并且测得RV Wa株和SA-11株免疫血清的抗体滴度分别为2048和1024,但较难确定抗体的型特异性。该法与脊髓灰质炎病毒抗体无交叉反应,阻断试验阳性。重复测定可得稳定结果,而且整个实验过程仅2小时,均在室温下操作,无需特殊仪器设备,具有简便、经济的优点,为RV感染血清流行病学调查和动物免疫血清初筛的一种实用方法。     

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定

目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。     

人类轮状病毒和婴幼儿急性腹泻

急性腹泻是婴幼儿最常见疾病之一。全世界每年约有该病患儿七亿五千万。许多病原可致此病,但以轮状病毒(RV)引起者最为多见。患者中的50～70%系由RV感染所致。