补肾解毒法对多发性硬化小鼠CD4+ T细胞的作用

目的 研究补肾解毒法对多发性硬化小鼠中枢神经炎症及外周血CD4+ T细胞亚群（Th1、Th2、Th17、Treg细胞）的影响。方法 以实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）模型作为多发性硬化动物模型,以C57BL/6小鼠皮下多点注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)的方法复制EAE模型。将小鼠随机分为正常组,模型组,泼尼松组,中药高、中、低剂量组,每组8只小鼠。模型复制后第30天取小鼠脊髓,光镜下观察各组小鼠脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘等病理改变,流式细胞仪检测小鼠脾脏Th1、Th2、Th17、Treg细胞亚群,ELISA法检测脾脏细胞培养上清液中干扰素-γ（interferon gamma, IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）、白细胞介素-17A（interleukin-17A, IL-17A）水平。结果 中药高剂量组、泼尼松组炎症评分和脱髓鞘评分明显低于模型组（P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组、泼尼松组脾细胞培养后上清液中致炎因子IFN-γ、IL-17A降低明显,而抑炎因子IL-4、IL-10升高明显,Treg比例明显升高,Th1和Th17比例明显降低,差异均具有统计学意义（P<0.05)。结论 补肾解毒法能够调节EAE小鼠失衡的CD4+ T细胞亚群,显著抑制EAE模型的炎性反应。     

腺病毒介导的"睡美人"转座子与IL-10共表达对NOD小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的：观察腺病毒介导的"睡美人"（SB）转座子与白细胞介素10（IL-10）共表达对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠脾细胞中Th17/Treg细胞平衡的影响,阐明IL-10对NOD小鼠的可能治疗机制。方法：提取C57BL6小鼠的脾细胞并培养,将脾细胞分为对照组、空载体组和治疗组。对照组脾细胞不做任何处理,空载体组将不含IL-10基因而有转座子序列的腺病毒载体和不含转座酶的腺病毒载体共同感染小鼠脾细胞,治疗组将含有IL-10基因和转座子序列的腺病毒载体以及含有转座酶的腺病毒载体共同感染小鼠脾细胞。感染48 h后RT-PCR法检测各组小鼠脾细胞中IL-10 mRNA表达水平。感染48 h后将上述3组处理的脾细胞分别种植到对照组、空载体组和治疗组NOD小鼠右后腿的腘窝皮下,每组6只小鼠,每周注射1次,共6次。注射结束后4周处死小鼠,ELISA法检测各组NOD小鼠血清中IL-10表达水平;流式细胞术检测各组NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+、Th17和Treg细胞的比例。结果：与对照组和空载体组比较,治疗组C57BL6小鼠脾细胞中IL-10 mRNA表达水平明显升高（F=72.71,P<0.05）,NOD小鼠血清中IL-10表达水平明显升高（F=8.89,P<0.05）,NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+细胞和Treg细胞比例明显升高（F=72.09,P<0.05;F=12.98,P<0.05）;但治疗组小鼠脾细胞中Th17细胞比例明显下降（F=6.39,P<0.05）;NOD小鼠脾细胞中CD4+IFN-γ+细胞比例在对照组、空载体组和治疗组之间比较差异无统计学意义（F=2.72,P>0.05）。结论：腺病毒介导的SB转座子与IL-10共表达后可以升高NOD小鼠血清中IL-10表达水平;同时可明显升高NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+细胞比例,降低Th17细胞比例,升高Treg细胞比例,调控Th1/Th2和Th17/Treg的平衡,对NOD小鼠起到治疗作用。     

SOCS3在风湿性心脏病大鼠CD4~+T细胞分化中的作用及机制

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在风湿性心脏病大鼠脾脏CD4~+T细胞分化中的作用及机制。方法 建立灭活A组链球菌(GSA)诱导的大鼠风湿性心脏病模型,分离脾脏CD4~+T细胞;实验分6组:空白对照组(A组)、GSA免疫大鼠CD4~+T细胞组(B组)、GSA免疫大鼠CD4~+T细胞+PYrAd-rSOCS3转染组(C组)、GSA免疫大鼠CD4~+T细胞+PYrAd-GFP转染组(D组)、GSA免疫大鼠CD4~+T细胞+siRNA-SOCS3转染组(E组)、GSA免疫大鼠CD4~+T细胞+siRNA-control转染组(F组);采用RT-qPCR和Western blot法检测SOCS3、P/T-STAT3(仅检测蛋白)、T-bet、Gata3、RORγt和Foxp3的mRNA和蛋白表达;采用ELISA法检测各组细胞上清液中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的水平。结果与A组比较,B组SOCS3、STAT3、P-STAT3、T-bet、RORγt、IFN-γ和IL-17表达上调(均P<0.05),而Gata3、Foxp3、IL-4和TGF-β表达下调(均P<0.05)。与B组比较,C组SOCS3表达进一步上调(P<0.01),而STAT3、P-STAT3、T-bet、RORγt、IFN-γ和IL-17表达下调(均P<0.05),同时Gata3、Foxp3、IL-4和TGF-β表达上调(均P<0.05)。与B组比较,E组SOCS3表达下调(P<0.01),STAT3、P-STAT3、T-bet、RORγt、IFN-γ和IL-17表达上调(均P<0.05),而Gata3、Foxp3、IL-4和TGF-β表达下调(均P<0.05)。结论 SOCS3通过抑制STAT3的磷酸化而抑制CD4~+T细胞向Th1和Th17细胞过度极化,在风湿性心脏病发病中可能具有负向调节的作用。     

黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠的治疗作用及机制研究

目的：观察中药黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）小鼠的治疗作用,并探讨其免疫调节机制。方法：建立C57BL／6小鼠EAE模型,通过5级临床症状评分观察黄芪对EAE小鼠的治疗作用;HE染色观察黄芪对EAE小鼠脊髓炎症细胞浸润的影响;CCK-8法检测脾脏髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）多肽MOG35-55特异性T细胞增殖情况;ELISA法检测脾脏MOG35-55特异性T细胞培养上清液中IFN-γ、TNF—α、IL-17、IL-4的水平。结果：黄芪能够有效抑制EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统的炎性反应,抑制MOG35-55特异性T细胞增殖及IFN-γ、TNF-α、IL-17的分泌,促进IL-4的分泌。结论：黄芪能够有效抑制中枢神系统的自身免疫反应,这种作用与其抑制MOG35-55特异性T细胞增殖,减少Th1、Th17型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌相关。     

人参皂苷Rg1抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及免疫机制

目的 观察人参皂苷Rg1对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的抑制作用及其对脾淋巴细胞T细胞亚群和外周血细胞因子水平的影响。方法 采用C57BL/6小鼠皮下多点注射MOG35-55、百日咳毒素的方法复制EAE模型。将EAE小鼠随机分为模型组,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组,同时设置正常对照组,每组6只。首次免疫后第10天予以不同剂量Rg1腹腔注射,连续给药14 d。第35天处死小鼠后取脊髓,观察各组小鼠脊髓炎症细胞浸润和脱髓鞘等病理变化,采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17、Treg细胞亚群,采用ELISA法检测外周血白细胞介素（interleukin,IL）-17A、干扰素γ（interferon gamma, IFN-γ）、IL-6、IL-10水平。结果 与模型组比较,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组小鼠神经症状评分显著下降（P＜0.05）,脊髓炎症细胞浸润评分和脱髓鞘评分显著降低（P＜0.05）,脾淋巴细胞CD4+、CD8+、Th1、Th17 T细胞亚群比例显著降低（P＜0.05）,Treg（CD4+CD25+FoxP3+）比例显著升高（P＜0.05）,外周血IFN-γ、IL-17A、IL-16水平显著降低（P＜0.05）,IL-10水平显著升高（P＜0.05）,人参皂苷Rg1的作用呈现明显的剂量依赖性。结论 人参皂苷Rg1可显著改善EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统脱髓鞘和炎症细胞浸润,其作用可能与调控Th17、Th1、Treg细胞亚群失衡,抑制炎症细胞因子表达相关。     

哮喘鼠白细胞介素23水平变化及其作用机制

目的：通过检测哮喘鼠血清白细胞介素23（IL-23）在激素治疗前后的水平变化及与IL-4、IFN-γ、IL-17的相关性,探讨其在哮喘发病中的作用。方法：将30只健康雌性BALB/C小鼠按完全随机设计原则分为3组,每组10只,即OVA致敏并激发的哮喘模型组（A 组）、鸡卵白蛋白(OVA)致敏、激发并予激素治疗组（B组）和正常对照组（C 组）。末次激发24 h后,各组小鼠摘眼球取血,ELISA法检测血清IgE、IL-4、IFN-γ、IL-17和IL-23的含量。结果：① 小鼠的行为学改变、血清IgE水平增高以及 IL-4 显著增高而 IFN-γ降低、IL-4与IFN-γ呈负相关等,均证明哮喘模型制备成功。② A组小鼠血清中IL-23 的水平 ［(155.56±12.50) ng·L^-1］ 高于C组［(51.49±6.34) ng·L^-1］,而B组小鼠血清IL-23 的水平 ［(88.00±6.43) ng·L^-1］ 低于A组（P＜0.01）。③ IL-23与IL-17含量成正相关关系(r= 0.763,P＜0.05),与IL-4、IFN-γ均无相关性。结论：IL-23参与哮喘的发病,糖皮质激素对其有抑制作用。IL-23可能是通过诱导IL-17的产生间接促进哮喘发病,IL-23对于Th1 类细胞因子IFN-γ及 Th2 类细胞因子IL-4均无明显调节作用。     

肺炎链球菌3型多糖对支气管哮喘小鼠气道炎症及Treg/Th17细胞的影响

目的观察肺炎链球菌3型多糖(T3P)对支气管哮喘小鼠气道炎症以及Treg/Th17细胞的影响,探讨T3P对哮喘小鼠的免疫调节作用。方法 BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和T3P组,每组8只。哮喘组以卵清蛋白(OVA)致敏、气道激发建立哮喘模型,对照组以PBS代替,T3P组在OVA致敏前皮下注射T3P进行干预。观察小鼠肺组织病理改变,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及BALF中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、IL-17浓度,实时荧光定量PCR法检测肺组织中转录因子Foxp3和RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测Treg和Th17细胞占CD4~+细胞百分比。结果 T3P组小鼠肺组织炎症反应程度弱于哮喘组,血清OVA-IgE,BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞比例以及IL-4、IL-17浓度均低于哮喘组(P<0.05),IFN-γ、IL-10浓度高于哮喘组(P<0.05),小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达水平及Treg占CD4~+细胞百分比均高于哮喘组(P<0.05),RORγt mRNA表达水平和Th17细胞占CD4~+细胞百分比均低于哮喘组(P<0.05)。哮喘组和T3P组小鼠肺组织Foxp3-mRNA/RORγt-mRNA比值及Treg/Th17细胞比例与BALF中嗜酸粒细胞数量呈负相关。结论 T3P可以通过抑制过敏原特异性IgE表达调节Th1/Th2、Treg/Th17细胞平衡,抑制气道炎症。     

IL-1β 或TNF-α 干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2 及Th17/Treg 平衡的影响

目的：探讨IL-1β或TNF-α干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。方法：子宫蜕 膜细胞经体外分离后,加入10–8 mol/L雌二醇(E2)+10–7 mol/L孕激素(P)培养7 d后,分别给予IL-1β或TNF-α干预24 h,收 集上清液,制备条件培养液。应用条件培养液刺激子宫蜕膜T细胞72 h后,收集上清液,ELISA 法检测上清液IFN-γ, IL-2,IL-17,IL-5,IL-10及TGF-1β的表达。收集子宫蜕膜T细胞,提取RNA,用实时定量PCR检测细胞因子mRNA的 表达。通过T细胞分泌的细胞因子水平来评估子宫蜕膜细胞对Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。结果：IL-1β或TNF-α 干预子宫蜕膜细胞24 h后,其条件培养液能够促使子宫蜕膜T细胞Th1细胞因子IFN-γ分泌增加7~8倍,IL-2分泌增加 6~7倍,Th17细胞因子IL-17分泌增加15~19倍,Th2细胞因子IL-10和IL-5的分泌无差异,Treg细胞因子TGF-1β的分泌无 差异;其条件培养液促使IFN-γ和IL-17 mRNA表达增加,而IL-10及TGF-1β mRNA的表达无差异。结论：IL-1β或TNF-α 刺激的子宫蜕膜细胞改变母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg细胞的平衡,向Th1及Th17偏移。     

IL-17在小鼠肾移植急性排斥反应早期诊断中的作用

目的:研究Th17细胞及相关因子白细胞介素17 (IL-17)在小鼠肾移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立小鼠肾移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组;在移植术后3,7d分别应用ELISA检测2组小鼠血清中IFN-γ和IL-17的含量,应用流式细胞技术检测移植肾中浸润淋巴细胞中Th1和Th17细胞数量,...     

RHO激酶抑制剂及CD8+T细胞在EAE模型的作用机制的研究

目的 观察RHO激酶抑制剂—法舒地尔对RHOA、ROCK-II以及CD8细胞在脑和脊髓组织中表达的影响,探索RHO激酶抑制剂-法舒地尔在EAE模型中的作用机制。 方法 把90只Lewis大鼠随机分为5组：A组（空白对照Lewis大鼠）,B组（免疫后第13天）,C组（免疫后第21天）D组（免疫后第35天）及E组（法舒地尔干预组）。以豚鼠全脊髓为抗原混合福氏完全佐剂（CFA）诱导Lewis大鼠EAE模型,观察实验动物神经功能损害的情况;利用免疫组织化学染色法观察实验动物组脑、脊髓组织中RHOA、ROCK-II、以及CD8+T细胞的表达。 结果 成功建立Lewis大鼠EAE模型,A、B、C、D、E五组中RhoA、Rock-II以及CD8细胞在脑、脊髓组织均有表达,在免疫后21天达高峰,在免疫后及法舒地尔干预组的脑、脊髓组织中表达较空白对照组明显增加,差异有显著性（P<0.05）;法舒地尔干预组RhoA、Rock-II以及CD8细胞在脑、脊髓组织的表达较免疫后各个时间点有所减轻,差异有显著性（P<0.05）;免疫后第13天组与免疫后35天组比较,差异无显著性（P>0.05）。 结论 Rho激酶抑制剂可以抑制EAE的病情进展、减轻神经元及轴索损害,其机制可能是抑制了Rho激酶参与白细胞及巨噬细胞迁移、浸润、吞噬过程;抑制Rho信号转导通路对细胞骨架的调节作用,而起到促进轴突再生、保护神经元的作用。     

法舒地尔对软骨细胞基质降解的影响及其机制

目的：研究法舒地尔对大鼠软骨细胞的基质降解的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：用CCK-8检测法舒地尔是否具有毒性并确定合适的药物浓度。分别按空白组、法舒地尔组（10 μmol/L）、IL-1β组（10 ng/mL）和IL-1β（10 ng/mL）+法舒地尔组（10 μmol/L）对细胞进行分组处理。使用硝酸还原酶法测定NO水平;Western blot检测COX-2、iNOS、MMP-13、p-MYPT、ROCK1、ROCK2、p-Erk/Erk、p-JNK/JNK与p-p38/p38水平;qRT-PCR测定MMP-13和二型胶原（Collagen-II）mRNA表达;细胞免疫荧光检测MMP-13的表达水平。结果：与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组ROCK1、ROCK2和p-MYPT受到抑制（P＜0.05）;与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组的COX-2、NO、iNOS和MMP-13的表达受到显著抑制（P＜0.05）;IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组的p-Erk、p-JNK、p-p38表达降低,并且Erk、JNK与p38磷酸化水平降低（P＜0.05）;与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组二型胶原（Collagen-II）表达得到上调（P＜0.05）。结论：法舒地尔可抑制IL-1β诱导的软骨细胞基质降解,该作用可能通过抑制MAPK信号通路来实现。     

IFN-γ在多囊卵巢综合征中的表达及对卵巢颗粒细胞的影响#br#

目的: 探讨炎症因子γ-干扰素（IFN-γ）在多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）疾病发生及发展过程中的作用。方法: 收集31例PCOS患者及22例健康志愿者肝素抗凝外周血,分离单个核细胞,分析IFN-γ⁺ Th1和IL-4⁺ Th2细胞比例;流式CBA法检测PCOS患者血浆IL-4、IL-6和IFN-γ水平;将人卵巢颗粒细胞瘤KGN细胞分为对照组（常规培养）和干扰素处理组（250 ng/mL IFN-γ）,分析IFN-γ对KGN细胞周期、增殖及凋亡的影响。结果： 与对照组相比,PCOS患者外周血单个核细胞中Th1细胞的比例明显上调(P<0.01);PCOS患者血浆中IFN-γ水平较对照组增高(P<0.05)。IFN-γ与KGN细胞体外共培养后,干扰素处理组CFSE标记KGN细胞的增殖较对照组明显右移,G₀-G₁期细胞增加(P<0.01),同时IFN-γ处理组凋亡比例增高(P<0.01)。结论： PCOS患者外周血中IFN-γ⁺ Th1细胞比例和血浆中IFN-γ均增高,IFN-γ可抑制KGN细胞增殖并促进KGN细胞凋亡。     

呼吸道合胞病毒感染致毛细支气管炎患儿Th1/Th2亚群的变化

目的: 探讨毛细支气管炎患儿在呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)感染后,Th1/Th2 细胞亚群的变化。方法: 选取26例RSV感染的毛细支气管炎患儿,且咳嗽、气喘及呼吸困难症状明显,并可在肺部闻及明显哮鸣音等为急性期组;经治疗后咳嗽、气喘及呼吸困难症状明显缓解,肺部哮鸣音减少或消失的18例患儿为恢复期组;同期20例外科住院年龄相仿的疝气择期手术患儿为对照组。应用流式细胞术检测各组患儿外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的IFN-γ和IL-4表达水平,RT-PCR检测各组PBMC中T-bet的变化。结果： 与对照组相比,毛细支气管炎患儿急性期IFN γ水平显著降低,IL 4水平明显增高（P均<0.05）;与急性期比较,恢复期患儿IFN-γ水平升高而IL-4明显下降（P均<0.05）。Th1特征性转录因子T bet在毛细支气管炎患儿急性期表达减少,恢复期呈现增高趋势。结论： RSV感染致毛细支气管炎患儿Th1/Th2 细胞亚群分泌的细胞因子失衡,T bet表达减少,Th2细胞占优势,其变化趋势以急性期为明显。     

OSAHS患儿血清Th1／Th2细胞因子检测及临床意义

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患儿血清Th1/Th2免疫平衡相关细胞因子的检测及临床意义.方法 收集61例OSAHS患儿内镜下腺样体阻塞程度数据,并测定患儿血清中Th1细胞因子-肿瘤坏死因子β（TNF-β）和干扰素-γ（IFN-γ）,Th2细胞因子IL-10、IL-13和IL-12的水平.同时收集26名正常儿童样本为对照组,进行相同血清细胞因子检测.结果 OSAHS患儿血清IFN-γ的水平要明显低于正常对照组儿童,差异有统计学意义（P〈0.01）;但OSAHS 患儿其他血清Th1/Th2免疫平衡相关细胞因子（TNF-β、IL-10、IL-13和IL-12）与对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）.OSAHS患儿IFN-γ水平与其腺样体肥大阻塞后鼻孔程度之间并无相关性.结论 Th1和Th2免疫反应间存在制衡机制.儿童OSAHS病例中,血清IFN-γ的水平下降表明,由此导致Th1细胞介导的保护性细胞免疫反应下降,Th1/Th2失衡,从而使儿童腺样体扁桃体过度肥大而发病.     

OSAHS患儿血清Th1/Th2细胞因子检测及临床意义

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患儿血清Th1/Th2免疫平衡相关细胞因子的检测及临床意义。方法 收集61例OSAHS患儿内镜下腺样体阻塞程度数据,并测定患儿血清中Th1细胞因子—肿瘤坏死因子β（TNF-β）和干扰素-γ（IFN-γ）,Th2细胞因子IL-10、IL-13和IL-12的水平。同时收集26名正常儿童样本为对照组,进行相同血清细胞因子检测。结果 OSAHS患儿血清IFN-γ的水平要明显低于正常对照组儿童,差异有统计学意义（P<0.01）;但OSAHS 患儿其他血清Th1/Th2免疫平衡相关细胞因子（TNF-β、IL-10、IL-13和IL-12）与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。OSAHS患儿IFN-γ水平与其腺样体肥大阻塞后鼻孔程度之间并无相关性。结论 Th1和Th2免疫反应间存在制衡机制。儿童OSAHS病例中,血清IFN-γ的水平下降表明,由此导致Th1细胞介导的保护性细胞免疫反应下降,Th1/Th2失衡,从而使儿童腺样体扁桃体过度肥大而发病。     

胰腺癌患者外周血CD4+T亚群细胞因子及转录因子的表达及其临床意义

目的: 探讨胰腺癌患者外周血中CD4⁺T亚群细胞因子及转录因子表达。方法: 收集27例胰腺癌患者和30例健康者外周血标本,ELISA法检测两组血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17、转化生长因子(TGF)-β及IL-10含量。实时荧光定量PCR检测两组血清中相关转录因子T细胞表达的T盒(T-box expressed in T cells,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA-binding factor 3, Gata-3)、视黄酸相关的孤儿受体γt (RAR-related orphan receptor gamma t, RORγt)及叉头框蛋白p3(Forkhead box protein P3, Foxp3)表达。结果： 与对照组相比,胰腺癌组外周血中细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显降低,T-bet mRNA表达下降(P均<0.05);IL-4、IL-17、TGF-β及IL-10水平明显升高,Gata-3 mRNA、RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达明显升高(P均<0.05)。结论： 胰腺癌患者外周血中Th1类细胞因子及转录因子表达下降,Th2、Th17和Tregs类细胞因子及转录因子表达升高;Th2、Th17及Treg细胞可能协同促进胰腺肿瘤疾病的进展。     

JQ1对系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞中自身免疫相关基因表达的作用

目的：探讨溴结构域(bromodomain and extra-terminal,BET)蛋白抑制剂JQ1对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)外周血CD4+T细胞中自身免疫相关基因表达的作用。方法：利用磁珠分选获得SLE患者CD4+T细 胞,采用流式细胞检测CD4+T细胞纯度。用JQ1(100 nm/L)处理CD4+T细胞6,24,48 h后收集细胞。采用实时荧光定 量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测不同辅助性T细胞亚类特异性基因的mRNA表达。采用ELISA法检测细胞培 养上清中细胞因子的蛋白水平。结果：磁珠分选所得CD4+T细胞百分比为97.2%。与对照组相比,JQ1处理组IFNG, IL-17F,IL-21,CXCR5和FOXP3 mRNA表达水平在6,24,48 h均显著降低(P<0.05),IL-17A mRNA表达在6,24 h显著 下降(P<0.01),IL-4 mRNA表达在24,48 h显著升高(P<0.01),TGF-β1 mRNA表达在6,48 h显著升高(P<0.05)。JQ1处理 48 h细胞培养上清中IFN-γ,IL-21和IL-17蛋白水平明显下降(P<0.05),IL-4和TGF-β蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论： BET蛋白抑制剂JQ1可纠正SLE患者CD4+T细胞中的免疫调节失衡,促进免疫稳态恢复。