CK20mRNA诊断大肠癌的价值与意义

实施随机数字表法把我院2010年6月~2011年8月所收治的50例结直肠癌患者均分为治疗组与对照组,所有患者实施结直肠癌根治手术,治疗组在此基础上进行门静脉单次化疗方法。治疗组患者接受手术治疗8d后CK20mRNA阴性表达为60%与对照组患者的24%相比,存在较大差异性(P0.05)。患者外周血CK20mRNA可以作为结直肠癌微转移检测的敏感指标,通过手术前的单次化疗,CK20mRNA已出现显著性的下降,手术前进行5-FU的单次化疗可以有效的降低患者的外周血以及回流入门静脉血中微转移的程度,值得在临床中进一步的使用和推广。     

CK20 mRNA和hTERT mRNA在大肠癌围手术期血行微转移中的转录特征

目的 探讨细胞角蛋白20(CK20)mRNA和人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA作为大肠癌围手术期血行微转移标志物的价值.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例大肠癌患者术前、术中及术后外周血CK20 mRNA和hTERTmRNA的表达,并对不同分化程度、不同Dukes分期的大肠癌患者CK20 mRNA和hTERT mRNA的表达进行比较.结果 40例大肠癌患者外周血CK20 mRNA和hTERT mRNA的表达率,术前分别为47.5%(19/40)和45.0%(18/40),术中为70.0%(28/40)和70.0%(28/40),术后为10.0%(4/40)和32.5%(13/40).除术后hTERT mRNA阳性率与术前无显著差异(P＞0.05)外,术中外周血CK20 mRNA、hTERT mRNA阳性率和表达强度(与内参照β-actin比值)均显著高于术前(P＜0.01,P＜0.05),术后明显低于术前和术中(P＜0.01).hTERT mRNA在低分化肿瘤的表达明显高于高、中分化组(P＜0.05),而CK20mRNA在低分化肿瘤的表达强度低于高、中分化组(P＜0.01).大肠癌围手术期Dukes B期和C D期之间CK20 mRNA和hTERT mRNA均无显著性差异(P＞0.05).结论 大肠癌患者围手术期血行微转移的发生几率较高,病理分化程度低者更易发生,但与Dukes分期无明显相关,CK20 mRNA和hTERT mRNA联合检测对大肠癌血液微转移具有较高的敏感性和特异性,是判断围手术期血行微转移的良好标志物.     

RT-PCR检测外周血CEA和CK20 mRNA对结肠癌肿瘤微转移的预测价值

目的 检测结肠癌患者外周血CEA和CK20mRNA的表达水平及评估其对肿瘤转移的预测价值.方法 分别采用RT-PCR和传统定性PCR技术,检测结肠癌患者(85例)和健康志愿者(45例)外周血CEA和CK20mRNA的表达水平.结果 85例结肠癌患者外周血CEA和CK20mRNA的水平分别为(920±104)copies/ml和(532±91)copies/ml,健康志愿者未检测到CEA和CK20 mRNA表达;CEA和CK20 mRNA水平与Dukes分期、细胞分化程度相关,Logistic回归分析得随Dukes分期进展,肿瘤转移率逐渐增加(与A期相比OR值分别为1.087、1.983、2.876);RT-PCR检测灵敏度明显高于定性PCR.结论 RT-PCR检测结肠癌患者外周血CEA和CK20 mRNA表达水平灵敏度高,CEA和CK20 mRNA具有较好的肿瘤微转移预测价值.     

联合检测K-ras、P53基因突变及CEA mRNA表达对大肠癌肝转移的预测价值

目的:通过对大肠癌患者手术后门静脉血K-ras、P53基因突变及CEA mRNA表达进行分析,探讨联合检测K-ras、P53基因突变及CEA mRNA表达对大肠癌肝转移的预测价值.方法:大肠癌患者45例,取手术后门静脉血标本,用PCR-SSCP方法分别进行K-ras和P53基因突变分析,用RT-PCR方法检测CEA mRNA表达情况,统计联合检测K-ras、P53基因突变及CEA mRNA表达预测大肠癌肝转移的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比及阴性似然比.结果:手术后门静脉血K-ras、P53突变阳性率分别为46.7%(21/45)和48.9%(22/45).手术后门静脉血CEA mRNA表达阳性率为60%(27/45).45例大肠癌患者随访2年后,肝转移14例,其中K-ras、P53基因突变及CEA mRNA表达共阳性6例,共阴性1例,部分阳性7例.统计结果显示大肠癌肝转移率:共阳性组>部分阳性组>共阴性组(x2=7.30,P=0.007).联合检测(当其中一个指标为阳性时,诊断肝转移)敏感性92.9%(13/14);特异性38.7%(12/31);准确性55.6%(25/45);阳性预测值40.6%(13/32);阴性预测值92.3%(12/13),阳性似然比=12.1,阴性似然比=0.08.结论:结肠癌术后门静脉血K-ras基因和P53基因突变及CEA mRNA 表达均有较高的阳性率,联合检测对大肠癌肝转移有理想的预测价值.     

纤维支气管镜毛刷洗脱细胞中CEA mRNA、CK20 mRNA表达的临床意义

目的基因水平检测肺部疾病患者纤维支气管镜刷落细胞中CEA mRNA、CK20 mRNA表达水平临床意义。方法共收集83例肺部疾病患者纤维支气管镜刷脱细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测CEA mRNA、CK20 mRNA在其中的表达。结果肺癌与肺良性疾病CEA mRNA、CK20 mRNA之间的相对表达量差异均有统计学意义（Z分别=-3.79、-1.98,P均〈0.05）。有81.39%的肺癌患者CEAmRNA、CK20mRNA超过阳性界限,同时进行的病理学诊断（毛刷涂片或活检）阳性率为58.13%。综合CEA mRNA、CK20mRNA、涂片和活检四项联合检测结果,肺癌患者阳性检出率高达90.69%。结论通过CEA mRNA、CK20 mRNA在肺癌中异常表达的检测和与病理学诊断的的综合分析,将有助提高肺癌的阳性检出率。     

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20(CK19、20)mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)测定CK19、20 mRNA含量。结果CK19、20 mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性,CK20均为阴性。在结肠癌组,CK19检测阳性率为58.3%(21/36);CK20阳性率为36.1%(13/36);CK19、20联合检测阳性率为77.8%(28/36)。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较,CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性(P<0.05)。结合临床资料分析,结肠癌患者外周血CK19、CK20 mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切(P<0.05),而与肿瘤类型及分化程度无关(P>0.05)。结论CK19、20 mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物,两者联合检测可提高检出率。     

恶性肿瘤外周血微转移检测的临床研究

目的 研究外周血CEA、CK20mRNA表达检测在胃恶性肿瘤转移及预后判断中的作用.方法 采用逆转录实时定量PCR(Real-time PCR)法检测52例经病理确诊的胃恶性肿瘤患者,28例胃良性肿瘤患者,29例健康体检对照者外周血及组织标本CEAmRNA、CK20mRNA表达;电化学光免疫测定外周血CEA水平,结果血清CEA在胃良恶性肿瘤中的阳性检出率有显著差异(P<0.05),但在是否有远处转移者中的差异无统计学意义(P>0.05).胃癌患者外周血可检测到不同水平的CEA及CK20mRNA表达,其中,CEAmRNA的表达与胃癌病理类型及分期相关;而CK20mRNA的表达与分期及有无淋巴结转移相关;两者联合检测较单个指标的检出阳性率高.结论 胃癌CEA、CK20表达可能与转移相关;采用实时定量RT-PCR检测外周血中CEA、CK20基因的表达可能为一种较理想的无创性胃癌诊断、转移的检测方法;血清CEA水平不能反映胃恶性肿瘤的转移情况.     

胃癌术后外周血CK20 mRNA及腹腔冲洗液中IL-6、IL-10、CEA、TNF-α的变化分析

目的探讨胃癌患者手术后外周血中细胞角蛋白20(CK20)mRNA、腹腔冲洗液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、癌胚抗原(CEA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的变化。方法选取我院2015年1月-2016年9月实施胃癌根治手术的117例患者,根据手术方法分为腹腔镜组60例、传统组(传统开腹手术)57例,采用ELISA法检测两组患者手术开始时、手术结束时的腹腔冲洗液中IL-6、IL-10、CEA及TNF-α水平,采用RT-PCR法检测术前及术后72h患者外周血中CK20 mRNA水平。结果手术开始时,腹腔镜组和传统组的腹腔冲洗液中IL-6、IL-10、CEA及TNF-α水平比较,差异均无统计学意义(P0.05);手术结束时,腹腔镜组的腹腔冲洗液中IL-6、IL-10、CEA及TNF-α水平低于传统组(P0.05);两组患者手术结束时腹腔冲洗液中IL-6、IL-10、CEA及TNF-α水平均较手术开始时显著的升高(P0.05);术前,腹腔镜组和传统组的外周血中CK20 mRNA水平比较,差异均无统计学意义(P0.05);术后72h,腹腔镜组的外周血中CK20 mRNA水平低于传统组(P0.05);两组患者术后72h外周血中CK20 mRNA水平较术前显著的升高(P0.05)。结论胃癌患者术后腹腔冲洗液中IL-6、IL-10、CEA及TNF-α、外周血CK20 mRNA水平均会升高,提示手术可能加大肿瘤发生微转移的风险,尤其是传统开腹手术的风险更大。     

非小细胞肺癌患者外周血癌胚抗原和细胞角蛋白19表达与患者预后的关系

目的 探讨外周血中癌胚抗原(CEA)mRNA和细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应技术检测了84例NSCLC患者外周血细胞中CEAmRNA和CK19 mRNA的表达.结果 NSCLC患者外周血中CEAmRNA与CK19mRNA的阳性表达率分别为70.23%(59/84)和67.9%(57/84);NSCLC患者外周血中CEA与CK19的阳性表达率呈正相关(c=0.333).CEA与CK19呈阴性表达的NSCLC患者,其生存例数显著性多于阳性组(P＜0.01～0.05).接受化疗者CEA与CK19表达阳性者生存时间明显低于阴性表达者(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中CEA与CK19的表达呈正相关,检测血液中CEA和CK19表达有助于客观评估NSCLC预后.     

HL-60细胞IRP2 mRNA、TfR mRNA、Fn mRNA的表达关系研究

为了探讨白血病细胞铁代谢及其调节机制，以及铁调节蛋白2（IRP2）在HL-60细胞铁代谢中的作用，将FeCl3或去铁胺（desferrioxamine，DFO）加入含有10％胎牛血清的RPMl1640培养液中，使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下进行培养。分别于细胞培养后第12、24和48小时收集细胞，提取总RNA，采用RT-PCR半定量法测定IRP，mRNA、铁蛋白（Fn）mRNA和转铁蛋白受体（TfR）mRNA等指标的相对表达量。结果表明：①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大，组间差异无统计学意义（F组间=1．199，P〉0．05）；而细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响，组内差异有统计学意义（F组内=43．418，P〈0．01），表现为随时间的延长，IRP2 mRNA的表达降低。②各实验组之间TfR mRNA的表达差异有统计学意义（F组内=7．184，F组间=113．926，P〈0.01）。在加入DFO的两个实验组中，TfR mRNA的表达升高。在加铁的两个实验组中，与对照组相比较，于12小时时TfR mRNA的表达量上升，24小时时达到高峰，之后迅速下降。③在加铁的两个实验组中，Fn mRNA的表达量较高，大约是对照组的2倍，它们与对照组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；而在加入DFO的两个实验组中Fn mRNA的表达与对照组相比较，无明显的差异（P〉0．05）。④IRP，mRNA与TfR mRNA及Fn mRNA的表达均不相关（r=-0．005，r=0．074，P〉0．05）。结论：①IRP2在转录水平上可能是通过自身不同片段的量的变化，而在转录后水平上是以氧化修饰的方式通过自身降解，对HL-60细胞的铁代谢进行调节。②Fn mRNA和TfR mRNA不同程度地参与了对HL-60细胞内铁的调控过程。     

MPO mRNA,IgH mRNA和CD3ε mRNA表达对急性白血病分型的意义

比较基因分型和免疫分型在急性白血病诊断分型中的意义。采用链亲和素－胶体金细胞原位杂交技术，研究了９例急性白血病的髓过氧化物酶ｍＲＮＡ，免疫球蛋白重链ｍＲＮＡ和ＣＤ３ε ｍＲＮＡ的基因表达并同时分析了白血病的免疫表型。     

胃癌患者外周血癌胚抗原、细胞角蛋白20及生存素基因检测的临床意义

目的:研究癌胚抗原(CEA)mRNA、细胞角蛋白20(CK20)mRNA及生存素(survivin)mRNA与胃癌患者诊断、转移的相关性,评估其检测的临床应用价值。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法联合检测79例胃癌、56例癌前病变及50例正常对照者外周血survivin、CEA、CK20基因的转录,并分析其与临床病理及预后关系。结果:正常对照组外周血未检测到CEA、CK20、survivin mRNA的转录,癌前病变患者survivin转录检测的阳性率为16.1%,平均拷贝数为1.6±0.8。胃癌外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录阳性率分别为48.1%、60.8%、87.3%,其阳性率和肿瘤的分期、淋巴结转移等相关。Survivin mRNA高转录者5年生存率显著低于低转录者。胃癌患者外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录的联合检测对肿瘤预后的判断具有较高的特异度和阳性似然比。结论:实时RT-PCR联合检测胃癌外周血中多个肿瘤标志物基因的表达,是一种较为理想的监测肿瘤复发、判断预后的方法。     

OPN和uPA mRNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)mRNA及尿激酶犁纤溶酶原激活物(uPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)组织巾的表达及与临床病理特征的关系.方法 应用RT-PCR方法检测60例HCC癌组织、20例正常对照肝组织中OPN和uPAmRNA的相对表达量.结果 HCC癌组织中OPN和uPA mRNA的阳性表达率均分别高于对照正常肝组织(P均<0.05):痛组织中OPN mRNA的表达量在有门静脉癌栓形成组及在有早期复发转移组均高于无门静脉癌栓形成组和无早期复发转移组(分别P<0.05和P<0.01),uPA mRNA的表达水平在有包膜浸润和有门静脉痛栓形成组中均高于无包膜浸润和无门静脉癌栓形成组(分别P<0.05和P<0.01):OPN mRNA的高表达和uPA mRNA的高表达呈正相关(P<0.05).结论 HCC癌组织中OPN的表达水平可以作为判断肝癌细胞转移能力和预示肝癌早期复发的重要指标.阻断OPN的表达可能可以降低uPA的分泌,从而减少肿瘤的浸润和转移.     

PRAME mRNA和SOX9 mRNA在肺腺癌中的表达及临床意义

目的探讨黑色素瘤特异性抗原(PRAME)mRNA和性别决定基因盒9(SOX9)mRNA在肺腺癌中的表达及临床意义。方法选取2015年2月至2018年4月于该院接受手术治疗的73例肺腺癌患者为研究对象,术中收集肺腺癌癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR检测不同组织中PRAME mRNA、SOX9 mRNA的相对表达水平并进行比较;分析肺腺癌患者癌组织PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达与临床病理特征的关系;采用Spearman相关分析PRAME mRNA表达与SOX9 mRNA表达的相关性;分析PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达与肺腺癌患者预后的关系;采用COX回归模型分析影响肺腺癌患者预后的因素。结果与癌旁正常组织相比,肺腺癌癌组织PRAME mRNA的相对表达水平降低(P<0.05),SOX9 mRNA的相对表达水平升高(P<0.05)。PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达与肺腺癌患者性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),与病理分级、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman相关分析显示,肺腺癌癌组织PRAME mRNA表达与SOX9 mRNA表达呈负相关(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组肺腺癌患者PRAME mRNA的相对表达水平降低(P<0.05),SOX9 mRNA的相对表达水平升高(P<0.05)。COX回归模型分析结果显示,PRAME mRNA低表达、SOX9 mRNA高表达、低分化、临床分期Ⅲ期、有淋巴结转移均是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论肺腺癌癌组织中PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达异常,且两者呈负相关,可能为肺腺癌的病情及预后评估提供参考依据。     

Increased plasma levels of CATS mRNA but not CATB mRNA in patients with coronary atherosclerosis

Background

We hypothesized that patients with coronary atherosclerosis have increased plasma levels of cathepsin S (CATS) and cathepsin B (CATB) mRNA, the genes that are involved in atherosclerotic plaque development and destabilization.

Methods

mRNAs were isolated from plasma of 67 patients with coronary atherosclerosis (29 with stable angina, 38 with acute coronary syndrome) and 33 healthy subjects as controls, transcribed to cDNA and quantified by real-time PCR.

Results

Plasma levels were successfully measured in all samples. Patients with coronary atherosclerosis had 2.75 times higher plasma levels of CATS mRNA than controls (median 6.10 vs. 2.22; p < 0.001). No difference was observed in CATB mRNA levels (median 5.62 vs. 6.19; p = 0.866). Patients on therapy with statins and aspirin tended to have higher plasma levels of CATS mRNA than patients without statins and aspirin (median 6.41 vs. 4.27; p = 0.028).

Conclusions

Further evaluation of plasma CATS mRNA levels in patients with coronary atherosclerosis is reasonable.     

系统性红斑狼疮患者外周血滤泡辅助性T细胞与CXCR5及其配体CXCL13基因表达水平的研究

目的检测滤泡辅助性T细胞(Tfh)的CXCR5、CXCL13在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达,探讨其与SLE的发生及病情活动性的关系。方法 90例SLE患者和60例健康对照者,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR5+PD-1+/CD4+T细胞(Tfh)比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中CXCR5、CXCL13浓度,实时荧光定量RT-PCR检测PBMC中CXCR5 mRNA、CXCL13 mRNA的表达。结果活动组SLE患者外周血Tfh比例(11.01%±1.31%)、血清中CXCR5、CXCL13浓度[分别为(368.21±171.56)pg/ml、(387.59±213.54)pg/ml]和CXCR5 mRNA、CXCL13 mRNA(分别为2.15±0.63、1.71±0.37)的表达均高于健康对照组[分别为1.78%±0.11%,(210.6±100.17)pg/ml,(149.45±104.52)pg/ml,0.53±0.22,0.46±0.13;均P<0.05];SLE患者外周血Tfh比例与CXCR5 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.68,P<0.01),与SLEDAI亦呈正相关(r=0.67,P<0.01),其中CXCR5 mRNA的表达水平与SLEDAI呈高度正相关(r=0.82,P<0.01)。SLE患者外周血Tfh比例与CXCL13 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.73,P<0.01),与SLEDAI亦呈正相关(r=0.87,P<0.01)。结论 SLE患者外周血中Tfh细胞比例、CXCR5、CXCL13明显升高,可能在其发病过程中起了一定的作用。     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3,7mRNA表达的影响

目的探讨转化生长因子-β 1( TGF β 1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (KFB)Smad3,7 mRNA表达的影响,以进一步明确 TGF β 1在瘢痕疙瘩的发生、发展过程中的重要作用.方法用 RT-PCR法分别检测 TGF β 1 不同含量( 0, 5, 50, 500 pmol/L;Smad3 mRNA 24 h, Smad7 mRNA 90 min)和 TGF β 1( 500 pmol/L)作用不同时间( Smad3 mRNA 1, 2, 4, 24, 48 h; Smad7 mRNA 0.5,1,1.5,2,4,24 h)对 Smad3,7mRNA表达的影响.结果不同含量 TGF β 1刺激 KFB后 ,随 TGF β 1含量的增加 ,Smad3 mRNA水平逐渐下降,并呈含量依赖性.与 Smad3相反, 5 pmol/L TGF β 1就能使 Smad7 mRNA水平明显升高 2.6倍( 46± 7, 对照组 13± 7, t=6.150, P=0.0005),并随 TGF β 1剂量加大而略有改变,说明 KFB的 Smad7 mRNA表达对 TGF β 1的刺激非常敏感.用 TGF β 1刺激细胞后, Smad3 mRNA水平随作用时间延长而逐渐下降,到作用 48 h后下降到最低( 53± 9,对照组 18± 8, t=6.011, P=0.0005),显示出时间依赖性;而 Smad7 mRNA在细胞受到 TGF β 1刺激后 120 min即达到对照组的 2.5倍( 73± 11,对照组 53± 9, t=5.215, P=0.003) ,24 h后回落到正常对照水平.结论 TGF β 1能使 KFB细胞 Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调,而使 Smad7 mRNA表达迅速增加.     

VEGF mRNA和bFGF mRNA在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨VEGFmRNA和bFGFmRNA在胃癌组织中的表达及意义。方法应用原位杂交染色检测5 7例胃癌手术切除标本中VEGFmRNA和bFGFmR NA表达情况。结果VEGFmRNA和bFGFmRNA表达与胃癌浸润及转移有关。癌细胞浸润深度≥ 2 /3肌层病例VEGFmRNA和bFGFmRNA阳性率分别为70 .6 %和 73.5 % ,明显高于浸润深度 <2 /3肌层病例(P <0 .0 5 ) ;伴区域淋巴结转移病例VEGFmRNA和bFGFmRNA阳性率分别为 73.0 %和 70 .3% ,明显高于无淋巴结转移病例 (P <0 .0 5 )。结论VEGFmRNA和bFGFmRNA可作为胃癌的预后指标 ,可望为胃癌抑血管生成治疗提供实验依据和新线索     

SimChip--computer simulation of mRNA steady states

We developed a public Internet program called SimChip (www.simchip.de). It performs virtual "in silico experiments", which reflect the in vivo situation of gene expression. Our computer model simulates up- and downregulation of genes on the basis of differential equations for linear synthesis and non-linear decay of mRNA. Steady-state concentrations are described as ratios of the respective rate constants: c = S/D. Using physiological synthesis rates of 0 to 50 mRNA molecules per min per cell and decay rates of 0.05 to 25% per min, SimChip helps to understand the right-skewed distribution patterns of gene expression levels and calculates the experimental endpoint of the theoretically infinite time needed to achieve perfect equilibrium.