辽宁省肾综合征出血热基因分型及序列分析

目的：了解辽宁省汉坦病毒的分子特征，建立肾综合征出血热（HFRS）病毒基因库。方法：用RT-PCR方法对间接免疫荧光阳性鼠肺标本进行目的基因的扩增并测序，与标准汉坦病毒（HV）株一起进行同源性分析及系统发生树分析。结果：23株扩增产物与L99HV同源性在78．5％～99．6％之间，属汉城型（SEO）型HV，除[01]Shenyang-Yuhong／5／2005／sewer-r，[02]Shenyang-Yuhong／4／2005／sewer-r，[03]Shenyang-Yuhong／7／2005／sewer-r外，同源性均在94％以上。获得的23株HV序列在系统发生树上的遗传距离较近，同源性也均在94．7％以上，基本属于同一亚型。各株与LR1 HV相应序列进行比较同源性仅在26．7％～43．7％之间。结论：辽宁省是以SEO型HV为主的SEO和汉滩（HTN）混合型疫区，且SEO型汉坦病毒变异较小，稳定性较高。     

山东省汉坦病毒分子流行病学研究

目的探讨山东省汉坦病毒（HV）的分子流行病学特点。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及核苷酸序列测定技术,对肾综合征出血热（HFRs）监测点的阳性鼠肺标本进行目的基因扩增并测序,与国内外的HV毒株进行同源性分析及系统发生树分析。结果有15份标本扩增出汉城（SEO）型S、M片段,对其中10份扩增片段进行序列分析认为均为SEO型HV,S片段之间的同源性≥96.3％,其推导的氨基酸序列同源性（JN5-153S和DY1S除外）≥96．8％;M片段之间及与山东省以往分离的ZB8同源性≥97．5％,其推导的氨基酸序列同源性为98．6％～100％。结论近年来山东省流行的HV仍以SEO型S3亚型为主。同一地区或地理位置相邻的地区病毒基因组同源性较高,具有明显的地区聚集性,基因型别较为稳定。     

云南省楚雄州汉坦病毒宿主动物及分子流行病学研究

目的 掌握汉坦病毒(HV)在云南省啮齿动物中的流行情况及其遗传特征.方法 采用笼夜法捕鼠,鼠肺标本用直接免疫荧光法检测HV抗原,用RT-PCR法检测HV核酸及分型,对产物进行序列测定,用PHYLIP软件包进行系统发生分析.结果 2005-2006年在云南省楚雄州10个县(市)居民区共捕获鼠类4属8种1421只,其中褐家鼠1056只,构成比高达74.31%,其次为黄胸鼠(19.70%).检测鼠肺组织1029份,HV抗原阳性53份,总带病毒率为5.15%,带病毒鼠种为褐家鼠(5.08%,38/748))、黄胸鼠(5.97%,12/201)、大足鼠(7.69%,2/26)和斯氏家鼠(6.25%,1/16).HV汉城型(SEO)核酸检测阳性21份(褐家鼠15份,黄胸鼠4份,大足鼠2份).获得的12个病毒S片段核苷酸序列与GenBank中国SEO型病毒R22、L99和HLD65株同源性较高,为87.1%～99.7%;与汉滩型(HTN)76-118株同源性仅为64.4%～69.1%.系统进化分析显示,楚雄州12个病毒S片段核苷酸序列与SEO型亲缘关系较近,与HTN型及其他型HV相距较远,证实这12份病毒标本均为SEO型病毒,并可分S1和S3两个亚型.结论 首次证实楚雄州10个县(市)广泛存在以褐家鼠为主要传染源的HFRS家鼠型疫源地及SEO型病毒的流行.分析发现SEO型不同亚型病毒的分布有其地域特点和独立性.     

安徽省汉坦病毒的基因序列分析

目的了解安徽省汉坦病毒(HV)型别及分子特征,为防治提供科学依据。方法将汉坦病毒抗原阳性的鼠肺及急性期病人血清标本接种Vero细胞,分离汉坦病毒。阳性培养物提取病毒总RNA,应用RT-PCR扩增病毒S片段,产物经测序拼接获得S片段全基因序列,用DNAStar、MEGA 4.1等生物软件进行核苷酸序列分析,构建基因序列系统进化树,确定病毒型别。结果免疫荧光检测,513鼠肺标本21份阳性,分离6株病毒;4份急性期病人血清分离1株病毒。选择3株病毒进行S片段基因测序,测定序列与汉坦病毒HTN、SEO、SNV型毒株比较,表明两株为HTN型,一株为SEO型,序列相似性达98.4%以上。结论安徽省流行的HV为HTN型和SEO型,以HTN型为主,未发生较大变异。     

湖南省2006年肾综合征出血热病原学监测研究

目的 了解湖南省啮齿动物中汉坦病毒带病毒率、基因型别和分布.方法 采用直接免疫荧光(DFA)法检测鼠肺汉坦病毒抗原,从汉坦病毒阳性鼠肺标本中提取病毒RNA,应用汉坦病毒型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、核苷酸序列测定以及基因分型和同源性分析.结果 总鼠密度为3.15%,鼠带病毒率为1.31%,在室内捕获的7只褐家鼠、黑线姬鼠、小家鼠、黄胸鼠鼠肺标本中均发现携带SEO型病毒,在室外捕获的1只黑线姬鼠鼠肺标本则携带HTN型病毒.成功对6份阳性PCR产物进行了序列分析,浏阳市1、2、4、6号标本同源性较高为100%,邵东市的7、8号标本同源性也较高为100%,但两地区间的同源性差异为89.3%,L99株与浏阳分离株的同源性为94.4%,与邵东分离株的同源性为88.3%.结论 湖南省汉坦病毒存在HTN和SEO型,以SEO型为主.     

大林姬鼠中汉坦病毒的分离及其S片段的序列分析

目的 分析吉林省大林姬鼠携带的汉坦病毒(HV)在进化过程中的系统发生关系。方法采用病毒分离技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、克隆以及测序技术对中国大林姬鼠携带的HV进行研究。结果从4只大林姬鼠Hv抗原阳性的肺组织标本中分离到2株HV(CJ189和CJ193)，对其中CJ193病毒株的S片段进行克隆、测序以及分析，基因分型结果为汉滩型(HTN)汉坦病毒。根据S片段的核苷酸序列同源性分析，CJ193与Aa2499核苷酸序列的同源性最高(94．3％)，而与Ap61、Ap63的同源性最小(83．3％，82．9％)。由全S片段构建的HTN型汉坦病毒的系统发生树表明CJ193与Aa2499等俄罗斯黑线姬鼠携带的HV的亲缘关系最近，其次为中国的HTN型病毒，然后才是Ap61、Ap63等俄罗斯大林姬鼠携带的HV。结论从我国吉林省大林姬鼠分离到的CJ193株是HTN型汉坦病毒的新亚型。     

上海地区汉坦病毒基因分型和序列分析

[目的 ]　研究上海地区汉坦病毒基因型分布。　 [方法 ]　采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)、核苷酸测序法和系统发生树分析上海宿主动物中获得的 3 6株汉坦病毒M基因片段。　 [结果 ]　上海郊区汉坦病毒流行株有HTN型和SEO型 ,以HTN型为主 ;市区流行株为SEO型。核苷酸序列同源性及系统发生树分析表明上海地区HTN型汉坦病毒存在 3个不同分支 ,不同HTN型病毒间的核苷酸的差异在 6% -19%。　 [结论 ]　上海地区汉坦病毒以HTN型为主。可能存在汉坦病毒的不同基因亚型 ,对本市肾综合征出血热 (HFRS)的防治有重要指导意义     

汉坦病毒四川分离株S85-46 的遗传学特征

目的：了解汉坦病毒四川分离株S85－46株分子流行病学特征。方法：将特异性引物从S85－46病毒感染细胞PCR扩增的产物克隆于T载体,正确的克隆纯化后测序,应用DNASTAR软件比较分析。结果：S85－46株M片段与HTN型毒株同源性为84．1％－99．7％,而与SEO型毒株同源率仅为70．4％－70．9％,表明S85－46毒株属HTN型。核苷酸同源性比较显示,S85－46与韩国分离的76－118株高度同源,而与国内一些HTN型病毒差异较大。而且同一地区的毒株也以差异很大。S片段全基因序列同源性比较也支持以上的观点。结论：不同地区汉坦病毒的流行株基因序列可以高度同源。     

北京地区1996至2000年肾综合征出血热流行状况研究

目的：搞清北京地区鼠间汉坦病毒（HIV）感染分布状况、HV基因型、病例血清型,为确定疫源地性质和制定防制策略提供依据。方法：分别应用间接免疫荧光（IFAT）、逆转录多降酶链反应（RT－PCR）和微量细胞中和试验方法,对北京地区捕获鼠的标本进行带病毒情况、毒株的型和病人血清型别检测。结果：北京地区鼠间广泛存在着HV感染,鼠的年度带病毒率为1.89%-6.17％。不同区（县）21份免疫荧光阳性鼠肺RT－PCR基因护增分型,均能以SEO型特异性引物扩增出300bp的DNA基因片段,而不能被HNT型特异性引物所扩增。9株核苷酸序列测定结果与SEO型HV代表株L99、SEO核苷酸同源性达94.3%－100％,与HNT型HV代表株A9同源性＜71％。9株SEO型HV核苷酸序列存在一定差异,所构建的地至少存在4个不同分支。BF10与L99株核苷酸同源性100％,BF7与G199同源性99.3%,是否为远程传播而来也应深入研究。55例肾综合征出血热（HFRS）病例血清型,53例为SEO型病例,2例Ⅰ、Ⅱ型中和抗体滴度等同病例未能定型。结论：证实SEO型HV淡近年北京地区主要流行株,并构成了众多SEO型HV疫源地,此为近年发病迅速增多的根本原因。     

宁夏汉坦病毒分离株M基因片段的序列分析

目的比较它们与已知汉坦病毒的同源性和亲缘关系。方法用RT－PCR扩增了宁夏汉坦病毒分离株的M基因330hP片段,通过PGEM－T载体质粒将基因片段克隆进入大肠杆菌JM109,并进行核苷酸序列的测定;与其它汉坦病毒核苷酸序列的同源性比较。结果NX－143株病毒与HTN型毒株核着酸序列的同源性在79．4％～82．4％之间,与其它血清型毒株的同源性为57．6％～71．5％。表明NX－143属于HTN型病毒。结论NX－143属于HTN病毒新的基因亚型,国内可能同时存在多种亚型的HTN型病毒。     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD_(10)株分子生物学特征研究

[目的 ]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的 1株汉坦病毒SD10 株的分子生物学特征 ,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别。 [方法 ]用RT PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型 ,并与其他相关毒株比较。 [结果 ]经M片段部分序列分析表明 ,该毒株为汉坦病毒汉城型 (SEO)第 3亚型 (S3)。与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性。 [结论 ]山东省家鼠型疫区毒株稳定。     

北京地区流行性出血热SEO型汉坦病毒基因差异的研究

目的 提示北京地区啮齿类动物所携带的流行性出血热（ＥＨＦ）汉坦病毒的基因型、毒株差异,追溯其传染来源。方法 本研究应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增技术及核苷酸序列测定方法对免疫荧光抗原阳性的标本进行研究分析。结果 对５个阳性标本的３００ｂｐ部分Ｍ基因组片段序列分析表明均为ＳＥＯ型汉坦病毒;毒株核苷酸序列比较表明：与其他ＳＥＯ型毒株同源性均达９４％以上,而与其他ＨＮＴ型毒株同源性均低于７     

深圳市鼠类感染汉坦病毒的分子特征

目的 了解深圳市宿主动物携带汉坦病毒状况、病毒型别及分子特征.方法 笼日法捕鼠,计算鼠密度,确定鼠种构成.共捕获宿主动物472只,褐家鼠为优势鼠种,占87.29%.免疫荧光抗原阳性鼠肺标本中提取病毒RNA,应用汉坦病毒型特异性引物进行逆转录.套式PCR扩增M片段基因和核苷酸序列测定,对汉坦病毒进行基因分型和同源性分析.结果 21只来自我市不同区褐家鼠的鼠肺标本中均发现携带汉城型病毒,汉坦病毒M片段核苷酸同源性高达95.4%以上,属于同一亚型.系统进化树显示它们可以分为6个小进化分支,与SZ2083进化关系相对最近.但发现来源于地理位置较近的病毒株并没有显示出较高的基因组核苷酸序列的同源性,反而相隔较远的病毒株呈现出一致性.结论 深圳市汉坦病毒的主要宿主动物是褐家鼠,携带的汉城型汉坦病毒之间的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列同源性较高,但也存在一定的差异.这种差异形成的原因有待进一步研究.     

4株在山东分离的汉城型汉坦病毒株分子生物学特性研究

[目的 ]比较山东省汉城型汉坦病毒的生物学特性。 [方法 ] 2 0 0 2年使用核苷酸序列测定方法结合交叉空斑减少中和试验 ,对 1 984～1 997年从山东分离的汉坦病毒株SD2 5、SD70 、SD2 7和SD1 0 进行分析 ,比较其差异。 [结果 ]汉坦病毒株SD2 5、SD70 、SD2 7和SD1 0 均为家鼠型汉坦病毒 ,核苷酸及氨基酸序列与已知SEO型病毒具有较高的同源性 ,这 4株病毒间的同源性高达 98%以上。 [结论 ] 4株病毒相互间变异很小 ,证实了汉城型汉坦病毒的稳定性     

山东地区不同季节优势恙螨自然感染恙虫病东方体的分子流行病学调查

目的从分子水平探讨山东地区不同季节优势恙螨自然感染恙虫病东方体（Ot）情况及其作为恙虫病传播媒介的可能性.方法根据Ot-Sta56 kDa外膜蛋白基因部分序列设计Ot种和型特异性引物,对标本提取的DNA先采用种特异性引物扩增,然后再采用型特异性引物扩增分型,并对部分标本进行序列测定.结果从不同季节优势恙螨幼虫共得到11株Ot分离株和16份恙螨匀浆,从这27份标本提取的DNA经首轮PCR扩增后,18份标本有预期的目的带.对首轮PCR产物采用nested PCR扩增分型,结果17份为Kawasaki型,1份（LHGM2株）为Karp型.序列同源性分析结果证实了nested PCR分型结果：XDM2株首轮PCR产物碱基序列与Kawasaki型相应DNA片段的碱基序列同源性最高,为97.00%,在系统发育树上与Kawasaki株位于同一分支,应属于Kawasaki型;LHGM2株首轮PCR产物碱基序列与Karp型相应DNA片段的碱基序列同源性最高,为96.45%,在系统发育树上与Karp株位于同一分支,应属于Karp型.结论山东地区不同季节优势恙螨中存在Ot自然感染,Ot主要基因型为Kawasaki型.