血管生成因子VEGF、bFGF、endostatin在胰腺癌细胞中的表达

目的 探讨胰腺癌细胞血管生成因子表达水平与其恶性生物学行为的关系.方法 通过RT-PCR及ELISA检测胰腺癌细胞株SW1990、Capan-1、Aspc-1、MiaPaCa-2、Panc-1及PCT-3中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和内皮素(endostatin)的表达水平,同时通过Boyden Chamber趋化小室及CCK-8法进行6株胰腺癌细胞株的侵袭性及增殖检测. 结果 VEGF在6株细胞中均有表达,但是表达量存在显著差异,以侵袭性最强的Panc-1表达最强.bFGF在6株细胞中均有表达,但是表达量存在显著差异,增殖及侵袭性较强的Panc-1和PCT-3中的表达水平高于其他细胞株.6株胰腺癌细胞endostatin表达差异显著,在侵袭性最强的Panc-1中表达水平最高,其他细胞株不表达或表达量很低.胰腺癌细胞株胞外的VEGF及endostatin表达显著高于细胞内,bFGF细胞内表达显著高于细胞外.结论 血管生成因子VEGF、bFGF和endostatin的表达水平可能与胰腺癌细胞增殖与侵袭密切相关.     

胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药机制的研究

目的探讨胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的可能机制。方法以体外诱导建立的人胰腺癌耐药株SW1990/Fu为模型,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学(ICC)方法测定耐药相关基因在SW1990/Fu产生获得性耐药前后的变化;罗丹明外排实验检测SW1990/Fu细胞膜上的P-gp泵功能。结果RT-PCR结果显示多药耐药基因1(MDR)和肺耐药相关蛋白基因(LRP)在SW1990/Fu中的表达率分别为0.97±0.23和0.95±0.34,而在SW1990中的表达率仅分别为0.67±0.19和0.53±0.16,两者差异有统计学意义(P<0.05);多药耐药相关基因(MRP)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)在2株细胞中的表达水平无明显变化。ICC与RT-PCR的结果一致。在罗丹明浓度为0.5mg/L时,只检测到(11.4±2.5)%的SW1990/Fu细胞内有荧光染科积蓄,在亲本细胞中罗丹明阳性细胞为(57.9±5.4)%,而在P-gp阴性的HL60细胞中,(99.5±3.3)%的细胞内存在罗丹明的积聚。当罗丹明浓度增加时,其在SW1990/Fu细胞内的积聚也明显增加。结论耐药基因MDR1和LRP表达增强可能是胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的主要机制。     

耐药相关基因拓扑异构酶-Ⅱα在人胰腺癌细胞株中的表达

目的：探讨耐药相关基因拓扑异构酶－Ⅱα（TOPO－Ⅱα）在人胰腺癌细胞株中的表达。方法：通过逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）和Western-blot方法测定6株人胰腺癌细胞株（SW1990、Capan-2、AsPC-1、MiAPaCa-2、PANC－1、P3）中的TOPO－Ⅱα在基因和蛋白水平上的表达。结果：（1）TOPO－Ⅱα基因的表达以SW1990最高，PANC－1最低，与其他细胞株相比均具有显著性差异（P＜0．05）；（2）TOPO－Ⅱα蛋白的表达以SW1990、Capan-2较高，AsPC-1较低。SW1990，Capan-2与其余4株之间存在着显著性差异（P＜0．05），而SW1990与Capan-2之间无显著性差异（P＞0．05）；AsPC-1、MiAPaCa-2、PANC－1、P3之间均无显著性差异（P＞0．05）。结论：胰腺癌细胞对TOPO－Ⅱα抑制剂的低敏感性与TOPO－Ⅱα蛋白的低水平表达有关，TOPO－Ⅱα可能参与了胰腺癌对化疗的耐药。     

多药耐药相关基因及其蛋白在介导胰腺癌细胞原发性耐药中的作用及调控

目的 检测多药耐药相关基因（MDR1）及其蛋白（P-gP）在胰腺癌细胞株的表达,初步探讨胰腺癌发生先天性耐药的机理。方法 选择8株人胰腺癌细胞株,采用RT-PCR方法检测MDR1mRNA在胰腺癌细胞中的表达;通过免疫细胞化学方法检测P-gP的表达;以流式细胞仪检测胰腺癌细胞对罗丹明的外排情况,评价P-gP泵功能;最后通过P-gP抑制物维拉帕米与化疗药物联合应用,检测其对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果 MDR1mRNA在胰腺癌细胞株SW1990中的表达最高,除PCT-2未检测到MDR1的表达外,其余6株细胞均有MDR1的微弱表达;免疫细胞化学染色结果证实P-gP在SW1990中的表达明显高于其他细胞株。57．9％±5．4％的SW1990细胞内有罗丹明蓄积,而在P-gP阴性对照细胞中,99．5％±3．3％的细胞内存在罗丹明的积聚,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。P-gP抑制物维拉帕米与阿霉素或表阿霉素联合应用时可以部分逆转肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。结论 MDR1及P-gP在人胰腺癌细胞中存在一定量的表达;维拉帕米联合阿霉素可以明显抑制P-gP阳性细胞的生长。     

Hedgehog信号通路相关蛋白在人胰腺癌SW1990耐药株中的表达及意义

目的:探讨Hedgehog信号通路蛋白在人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990中的表达,为克服胰腺癌获得性耐药提供实验基础。方法:采用浓度梯度递增法建立人胰腺癌SW1990耐药株,采用噻唑蓝法测定SW1990亲代与耐药细胞IC50。实时荧光定量PCR检测亲代与耐药细胞mRNA中hedgehog信号通路成员Shh、SMO、Gli-1的表达差异。Western印迹法检测亲代与耐药细胞中上述蛋白质的表达。结果:人胰腺癌耐药株SW1990的IC50从亲代的(3.1±0.2)μmol/L提高到(232.2±12.3)μmol/L。荧光定量PCR结果显示耐药株中Shh、Gli-1的表达提高了(12.07±1.71)倍和(4.15±0.42)倍。亲代SW1990中未检测到SMO表达,而耐药细胞中却可以检测到SMO的表达。Western印迹结果同样显示,人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高表达上述蛋白质。结论:人胰腺癌耐药株中高表达部分hedgehog信号通路蛋白。针对hedgehog信号通路的靶向治疗可能为克服胰腺癌耐药提供新的理论基础。     

碱性成纤维细胞生长因子小干扰RNA对胰腺癌细胞血管内皮细胞生长因子表达的调节作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小干扰RNA(siRNA)对胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响.方法 利用siRNA技术抑制VEGF及bFGF表达,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰腺癌细胞株VEGF表达变化.结果 Panc-1及PCT-3细胞VEGF mRNA表达受到显著抑制,Panc-1为0.20 ±0.05,PCT-3为0.23±0.02.sw1990及PCT-3分泌VEGF受到显著抑制,sw1990为(1940.67 ±93.84) ng/L,对照组为(2560.67±181.79) ng/L;PCT-3为(174.00±98.73) ng/L,对照组为(779.33 ±317.52) ng/L.结论 bFGFsiRNA能够抑制胰腺癌细胞VEGF核酸及蛋白水平表达.     

胰腺癌细胞株耐药与凋亡相关基因的改变

目的探讨凋亡相关基因的改变与胰腺癌细胞耐药的关系。方法利用含有18000条人类基因的cDNA基因芯片对人胰腺癌细胞株SW1990及其耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM间的差异表达基因进行筛选。结果人胰腺癌细胞株SW1990与耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM间的共同差异表达基因有170条,其中6条与细胞凋亡相关。结论凋亡相关基因hSiah2、TIA1、CDC2、PDCD2、MAPK6及MAP4K3可能参与了胰腺癌耐药过程的发生,可能成为新的胰腺癌耐药相关基因。     

三苯氧胺对人胰腺癌细胞mdr1基因表达逆转作用的实验研究

目的：研究三苯氧胺（TAM）对入胰腺癌细胞mdr1基因表达的逆转作用。方法：TAM和5-Fu作用于入胰腺癌细胞株（Capan-Ⅱ、SW1990），用MTT法测定细胞增殖的情况，流式细胞仪检测mdr1基因蛋白表达的变化，RT-PCR检测mdr1基因mRNA的变化。结果：高剂量的TAM对ERa阳性的Capan-Ⅱ细胞有抑制作用，TAM可以逆转Capan-Ⅱ细胞和T47D细胞中mdr1蛋白和mRNA表达。结论：高剂量的TAM对ERa阳性的Capan-Ⅱ细胞有抑制作用，可以逆转mdr1的表达。     

胰腺癌阿霉素耐药细胞株SW1990/ADM的建立及其耐药机理研究

目的　建立人胰腺癌阿霉素 (ADM )耐药细胞株SW 1990 /ADM ,探讨其耐药机理。方法　采用ADM体外浓度梯度倍增法诱导培养人胰腺癌细胞株SW 1990 10个月 ,获得耐药细胞株SW 1990 /ADM ,脱药培养 2个月后检测其生物学性状、药物敏感性及多药耐药基因mdr1的功能及表达情况。结果　与亲本细胞株SW 1990相比 ,SW1990 /ADM在形态学上发生了一系列变化 ;对包括ADM在内的多种化疗药物均表现出一定的耐药性 ,其对ADM、丝裂霉素、氟尿嘧啶和健择的耐药指数分别达到 4 9.6 0、7.2 5、3.80和 1.2 5 ;其mdr1mRNA的表达亦明显高于亲本细胞株SW 1990 (P<0 .0 1)。结论　体外浓度梯度倍增法可建立稳定传代的人胰腺癌耐药细胞株SW1990 /ADM。其耐药性与mdr1的表达呈正相关。     

白细胞介素6对人胰腺癌细胞上皮间质转换的影响及机制探讨

目的 应用白细胞介素6(IL-6)作用于人胰腺癌细胞株SW1990、Capan-2和沉默STAT3基因的SW1990细胞,观察细胞上皮间质转换相关基因的变化并探讨其机制.方法 使用IL-6作用人胰腺癌细胞株SW1990、Capan-2和沉默STAT3基因的SW1990细胞.MTT法检测细胞增殖.荧光定量PCR、Real-time PCR、Western blot检测STAT3、p-STAT3、Snail、Twist和E-cadherin基因mRNA和蛋白表达.体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 100μg/L IL-6作用人胰腺癌细胞株后,细胞增殖能力增强(P＜0.05).Western blot显示P-STAT3的表达增加;荧光定量PCR、Real-time PCR、Western blot显示Snail mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.05);E-cadherinmRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05);细胞侵袭能力增强.而IL-6作用沉默STAT3基因的SW1990细胞,Snail和E-cadherin mRNA和蛋白表达均无明显改变.结论 IL-6可能通过激活STAT3信号转导通路,上调Snail和下调E-cadherin基因表达,促进胰腺癌细胞上皮间质转换,进而增强侵袭能力.     

逆转mdr1基因导致肿瘤多药耐药性的研究进展

目的 介绍目前mdr1基因导致肿瘤对化疗药物产生多药耐药性的研究进展。方法 采用文献回顾的方式对肿瘤研究中采用的各种方法逆转mdr1基因导致肿瘤多药耐药性的文献进行综述。结果 mdr1基因及其表达产物P-糖蛋白的过度表达是导致肿瘤具有多药耐药性的重要原因，可以从mdr1基因的mRNA和P-糖蛋白两个方面进行有效的逆转肿瘤多药耐药性。结论单一阻抑mdr1基因或P-糖蛋白的表达，以逆转肿瘤多药耐药性的临床试验结果并不满意，多种方法联合应用是今后逆转肿瘤对化疗药物多药耐药性的研究热点。     

老年肌肉减少症与离心抗阻训练研究进展

老年肌肉减少症是随年龄增长而出现的骨骼肌量逐年衰减、肌肉功能逐年衰退的骨骼肌退行性疾病,正常人均可出现。患者的爆发力下降最为明显,平衡功能受损,因而频繁跌倒而致伤。抗阻训练是一种对抗老年肌肉减少症的有效干预方式,包括传统抗阻训练、爆发力抗阻训练和离心抗阻训练。近年来,离心抗阻训练在干预老年肌肉减少症的病理进程、预防和治疗运动损伤、提高老年人功能活动能力方面的作用凸显。通过适度拉长肌肉的离心训练不仅能够提高绝对肌力,还能够提高起动速度,增加爆发力的起动力量,继而提高爆发力。此外,离心训练还能增强制动力量,使机体能够快速有效地制动、减速、转向等,提高机体对运动的控制能力,有效地提高平衡能力,避免因运动控制不良导致的运动损伤,能够有效地预防跌倒,避免因跌倒所致的骨折等病症。但是,由于离心抗阻训练需要较高的技巧,目前仍未确立安全有效的训练方法和负荷强度等相关参数,因而仍期待更多的相关实验研究。本文综述了近年来研究者在离心抗阻训练与老年肌肉减少症方面相关的研究进展,以期为后续研究抛砖引玉。     

Clinical significance of P-glycoprotein expression analyzed by immunohistochemical staining in cancer tissues

P-glycoprotein is a transmembrane protein with increased drug efflux from resistant cells, which is encoded by the MDR1 gene. An overexpression of P-glycoprotein has been reported to correlate with the degree of resistance to anticancer agents, especially to adriamycin. In this study, the expression of P-glycoprotein was analyzed immunohistochemically by using a monoclonal antibody, MRK16 against P-glycoprotein in 18 fresh human tumors. The expression of P-glycoprotein was detected in eight (44 per cent) tumor specimens out of 18 patients. Although six (75.0 per cent) of the 8 P-glycoprotein positive tumors were resistant to adriamycin, the other two tumors showed clinical responses. Furthermore, five (50.0 per cent) of the 10 P-glycoprotein negative tumors exhibited positive clinical responses. These results suggest that P-glycoprotein expression may not be a useful marker to predict intrinsic resistance to adriamycin in fresh human tumors.     

Molecular epidemiology and antimicrobial resistance mechanisms of Campylobacter coli from diarrhoeal patients and broiler carcasses in Belgium

The aim of this study was to better understand the molecular epidemiology of Campylobacter coli isolated from multiple sources in Belgium, by studying the genotypic diversity and antimicrobial resistance phenotypes and resistance mechanisms of 59 C. coli isolates. Isolates from broiler carcasses and human cases were genotyped using multilocus sequence typing (MLST), porA typing, flagellin gene A restriction fragment length polymorphism (flaA–RFLP) typing, and by PCR binary typing (P‐BIT). Thirty‐two MLST sequence types, 24 flaA types, 31 porA alleles, and 29 P‐BIT types were identified among the screened isolates. Some types and alleles were shared among strains recovered from both broiler carcasses and diarrhoeal patients. Both porA typing and MLST revealed a similar discriminatory power (0.969), which was the highest discriminatory power when compared to other methods. Minimum inhibitory concentrations against seven different antibiotics (ciprofloxacin, chloramphenicol, nalidixic acid, streptomycin, tetracycline, gentamicin, and erythromycin) were analysed. Strains were most frequently resistant to tetracycline (81.4%), followed by: ciprofloxacin and nalidixic acid (76.3%); streptomycin (33.9%); erythromycin (27.1%); and chloramphenicol (3.4%). All isolates were sensitive to gentamicin. Multidrug resistance was observed in 24 of 59 C. coli isolates (40.7%). Molecular screening of antimicrobial resistance mechanisms revealed the predominance of the gyrA T86I substitution among ciprofloxacin‐ and nalidixic acid‐resistant isolates, the tet(O) gene among tetracycline‐resistant isolates and the 23S rRNA A2075G mutation among erythromycin‐ resistant isolates. Furthermore, some erythromycin‐resistant isolates harboured a diverse array of resistance mechanisms, including the presence of ermB, 23S rRNA A2074G mutation, and point mutations the rplD and rplV ribosomal genes, and the cmeABC multidrug efflux pump genes.     

61. Axilläre Verfahren

Zusammenfassung Die Ursachen von Versagern (zu geringes Volumen an Lokalanästheticum, Fehllage der Injektionskanüle, ungenügende Ausbreitung) sowie Komplikationen (Nervläsionen) bei der axillären Plexus-Blockade werden besprochen. Die Anwendung von Teflonkanülen oder short bevel-Nadeln zur Vermeidung von Komplikationen sowie die Anwendung der Loss of Resistance-Technik und Injektion von Röntgenkontrastmittel zur Anhebung der Treffsicherheit werden empfohlen.     

A high prevalence of mupirocin and macrolide resistance determinant among Staphylococcus aureus strains isolated from burnt patients

Infections due to Staphylococcus aureus have become increasingly common among burn patients. The antibiotic resistance profile of S. aureus isolates and inducible resistance against clindamycin were investigated in this study. The presence of mecA gene, mupA gene and macrolide resistance genes were detected using PCR and multiplex-PCR. The resistance rate to methicillin, erythromycin and mupirocin were 58.5%, 58% and 40%, respectively. The prevalence of constitutive and inducible resistance among macrolide resistant isolates was 75% and 25%, respectively. Ninety five percent of the isolates were positive for one or more erm genes. The most common genes were ermA (75%), ermC (72%) and ermB (69%), respectively. The ermA gene predominated in the strains with the inducible phenotype, while ermC was more common in the isolates with the constitutive phenotype. The msrA gene was only found in one MRSA isolate with the constitutive phenotype. A total of 27 isolates (25%) carried the mupA gene. All the mupirocin resistant isolates and almost all the erythromycin resistant isolates were also resistant against methicillin which may indicate an outbreak of MRSA isolates with high-level mupirocin and erythromycin resistance in the burn unit assessed.     

携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒的构建及其应用的初步研究

目的　构建携带反义多药耐药相关蛋白 (MRP)的重组腺病毒并转染人肝癌耐药细胞株 ,为肝癌耐药的基因治疗提供实验研究基础。方法　将MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack CMV上 ,与骨架质粒在细菌体内进行同源重组 ,经 2 93细胞包装、扩增后得到携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy GFP ASmrp ,再用其转染人肝癌耐药细胞株SMMC 772 1 /ADM。结果　成功地构建了携带反义MRP的重组腺病毒 ,病毒滴度为 2 .5× 1 0 9efu/ml,多重感染复数为 1 0 0时对SMMC 772 1 /ADM细胞株转导效率可达 90 %以上。结论　构建的重组腺病毒AdEasy GFP ASmrp可望有效地将反义MRP导入人肝癌耐药细胞株 ,为肝癌耐药机理及其逆转方式的研究提供实验基础。