膝骨性关节炎患者关节滑液IL-6表达及临床意义

目的 检测膝骨性关节炎(Knee Joint Osteoarthritis,KOA)患者关节滑液中细胞因子IL-6在其不同严重程度中的表达,探讨它们的内在关系和特点.方法 采取36例膝骨性关节炎病例组和6例对照组的膝关节滑液,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定IL-6的表达水平.结果 IL-6在KOA各严重程度组与对照组中的表达:IL-6的水平在病情严重程度相对较轻的患者中也可显著升高,但各严重程度组与对照组比较,无统计学意义(P=0.143＞0.05),各严重程度组组间比较,无统计学意义(P＞0.05);IL-6与 ISOA指数呈零相关(r=0.078,P=0.651＞0.05).结论 KOA中度严重程度以上患者关节滑液中IL-6表达在早期即可显著升高,但与 KOA的严重程度无明显相关性,尚不能以其关节滑液中IL-6的具体水平作为判定关节严重程度.     

重组大肠杆菌表达的Ber e1纯化工艺中去除内毒素效果研究

目的 去除重组巴西坚果过敏原蛋白Ber e 1(rBer e 1)溶液中的内毒素,为后续实验和重组过敏原蛋白的临床应用打下基础.方法 采用亲和层析法、超滤法和离子交换法联合应用以及Triton X-114萃取法与亲和层析法联合应用,比较这两个方案去除重组蛋白溶液中的内毒素效果.结果 亲和层析法、超滤法和离子交换法联合应用的内毒素去除率为99.99％,内毒素浓度为6.25 EU/ml,蛋白回收率为42.8％;Triton X-114萃取法与亲和层析法联合应用的内毒素去除率为99.99％,内毒素浓度为2.09 EU/ml,蛋白回收率为26.1％.结论 Triton X-114萃取法与亲和层析法联合应用蛋白溶液内毒素的去除效果较佳,且内毒素含量以及Triton X-114残留量均在《中国药典》的规定范围内.     

中药补肾法治疗膝骨性关节炎患者的临床疗效观察

目的观察中药对膝骨性关节炎患者关节滑液及血清中透明质酸含量的影响,探究中药防治骨关节炎的现代机制.方法自2006年6月~2008年6月就诊的膝骨性关节炎患者,选取其中30名肝肾亏虚型膝骨关节炎患者为治疗组,治疗前进行滑液及血清透明质酸浓度的检测,服用补肾中药独活寄生汤加减1个月后测血清透明质酸浓度,并监测半年及1年后透明质酸的浓度,把不同阶段检测的数据与20例正常组所得数据进行比较分析.结果治疗前OA患者的血清HA浓度明显升高,滑液中HA浓度减低,与正常组相比P<0.01;治疗组的血清和滑液HA浓度与治疗前比较均P<0.01,血清中的浓度减低,而滑液中的浓度出现了较明显的提高.结论中医补肾法能提高膝关节透明质酸的水平,同时降解血清中透明质酸,从而达到保护关节软骨延缓软骨退变的重要作用.     

人膝骨关节炎滑液蛋白质组学研究 及国人骨关节炎流行病学Meta分析

目的　分析国人骨关节炎的发病特点,研究蛋白质组学技术在骨关节滑液中的应用,为早期诊断膝骨关节炎提供依据.方法　抽取本院２０１４年１月至 ２０１５年本院接诊的膝关节骨性关节炎患者的膝关节液４０份,作为研究组,并选择同期健康体检者的膝关节滑液１０份作为对照组.应用蛋白质芯片对关节滑液进 行分析.结果　通过两组膝关节滑液的对比,研究组患者的样本涂片显微镜下可见少量的淋巴细胞、白细胞、红细胞及上皮细胞,通过油镜观察可见单核细胞、中性 粒细胞.对照组患者显微镜下观察可见少量上皮细胞及染色的蛋白液.发现研究组的样本分子量在１５９７８．８、１５９７７．６出现了蛋白质峰,而对照组没有蛋白质峰出 现.结论　通过了解蛋白质组学在关节滑液中的作用,可以进一步的研究膝骨关节炎的发病机制,为日后的治疗提供理论依据.     

低强度脉冲超声波联合壮骨伸筋胶囊治疗膝骨性关节炎疗效及对关节滑液中IL-1β和VEGF水平影响

目的探讨低强度脉冲超声波联合壮骨伸筋胶囊治疗膝骨性关节炎疗效及对关节滑液中IL-1β和VEGF水平影响。方法选择2017年5月～2018年5月在我院骨科康复门诊120例KOA患者,按采用随机数字法原则将患者随机分为对照组、观察组1、观察组2和观察组3,每组各30例;对照组给予布洛芬缓释胶囊口服,观察组1组给予低强度脉冲超声波治疗,观察组2给予壮骨伸筋胶囊口服,观察组3给予低强度脉冲超声波联合壮骨伸筋胶囊口服;比较四组疗效及关节滑液中IL-1β和VEGF浓度变化。结果四组总有效率有显著差异(χ~2=30.67,P0.01);治疗后四组关节滑液中IL-1β和VEGF浓度差异有统计学意义(F=5.43、5.60,P0.01)。结论低强度脉冲超声波联合壮骨伸筋胶囊能显著提高疗效,显著降低关节滑液中IL-1β和VEGF水平。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶，为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶，测定其比活力，并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用，采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分，比活力为89.08 U·mg^-1，比纯化前提高了7.37倍，该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基，采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分，且比活力相对提高。     

胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化

目曲优化应用于胃癌蛋白质组学研究的双向凝胶电泳技术。方法利用双向凝胶电泳技术分离正常胃黏膜和胃癌组织中的蛋白质。比较不同蛋白提取方法（机械匀浆＋TCA沉淀法，碾磨＋丙酮／TCA沉淀法）、不同最高聚焦电压、不同样本上样量以及不同pH值范围固相pH梯度胶条对双向凝胶电泳结果的影响。结果机械匀浆＋TCA沉淀法得到的蛋白质点较多，但电泳图谱中出现大量横纹，对电泳图后期分析的干扰相对严重；碾磨＋丙酮／TCA沉淀法则能达到最高聚焦电压，上样量少，使用pH5-8固相pH梯度胶条获得可分辨的蛋白质点数最多且效果较好。结论对胃癌组织、正常胃黏膜组织的全蛋白抽提方法和电泳条件进行了优化。     

大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织的二维凝胶电泳分析

目的应用二维凝胶电泳对SD大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织的蛋白进行初步分析.方法分离大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织,以对侧眼视网膜组织为对照,经样本初处理后,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色,然后分析电泳图谱,观察蛋白的分离效果,对比、分析其表达蛋白质点的差异,寻找SD大鼠视网膜中与慢性高眼压相关的蛋白质.结果用化学裂解法结合超声波粉碎,可以裂解视网膜神经组织,使其大部分蛋白质得到溶解,成功建立对大鼠青光眼慢性高眼压眼及对照眼视网膜组织进行样本处理、二维凝胶电泳的基本方法和条件,得到两组视网膜组织的二维凝胶电泳图谱.各组织蛋白在小胶上均能显示120～290个左右的斑点.两组视网膜组织的凝胶图谱呈现出9个斑点的差异.结论二维凝胶电泳可以有效分离、显示视网膜特异表达蛋白质.通过双向电泳,我们发现SD大鼠视网膜蛋白质表达与对照眼相比有质和量的差异.     

硒酵母在慢性肝病中抗纤维化作用的临床疗效

目的：初步探讨硒酵母在慢性肝病中抗纤维化的作用,评价应用硒酵母补硒治疗的临床效果。方法：将住院患者随机分为治疗组及对照组,观察两组患者血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型前胶原、层粘连蛋白、透明质酸酶在治疗前后的变化情况。结果：治疗组肝病患者治疗后血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型前胶原、层粘连蛋白、透明质酸酶较治疗前均有下降,两组比较有显著性差异（P〈0.01）。对照组肝病患者血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型前胶原、层粘连蛋白、透明质酸酶治疗前后比较,无显著性差异（P〉0.05）。结论：硒酵母能够有效地减少胶原合成、前胶原、透明质酸酶的分泌,降低血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型前胶原、层粘连蛋白、透明质酸酶的含量。通过补硒可用来阻止肝纤维化。     

孕激素对人子宫内膜癌细胞系Ishikawa影响的蛋白质组学研究

目的 寻找并鉴定人子宫内膜癌细胞系Ishikawa在孕激素处理后表达发生变化的蛋白质，为阐明孕激紊治疗子宫内膜癌的作用机制提供线索。方法 利用固相梯度双向凝胶电泳技术建立药物处理前后细胞总蛋白双向凝胶电泳图谱。经PDQuest软件分析，选取差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析，获得肽质量指纹图谱，Mascot软件搜索NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果 经双向凝胶电泳和图像分析，筛选出41个差异表达蛋白点，其中23个在药物处理后表达上调，18个表达下调。经质谱鉴定的蛋白包括7个孕激素处理后表达上调的蛋白：RAB6A蛋白、splicing factor 3a、儿茶酚氧位甲基转移酶、谷胱甘肽硫转移酶、角蛋白8、CCT6A、AHA1；1个在孕激素处理后表达下调：肽基脯氨酸异构酶A。结论 建立了孕激素处理前后的Ishikawa细胞双向蛋白质电泳图谱，初步鉴定了部分与孕激素治疗相关的蛋白，发现孕激素通过干预雌激素的代谢、调节细胞骨架蛋白和细胞内泡膜转运相关蛋白以及分子伴侣蛋白表达等多条途径发挥作用。为进一步了解孕激素作用机制，改善孕激素的疗效提供了新线索。     

人肾组织磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳的建立与优化

目的:利用二维凝胶电泳法分离人肾组织磷酸化蛋白质组.方法:利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集人肾组织磷酸化蛋白.样品浓缩除盐后,进行一维等电聚焦分离和二维SDS电泳分离提取人肾组织磷酸化蛋白.结果:成功提取了人肾组织磷酸化蛋白,并得到了磷酸化蛋白的双向凝胶电泳图谱.结论:磷酸化蛋白富集技术与二维凝胶电泳技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步研究人肾组织磷酸化蛋白奠定基础.     

类风湿关节炎蛋白质组学的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为特征的自身免疫性疾病。近年来,类风湿关节炎蛋白质组学方面的研究取得了较大的进展。采用二维电泳、质谱技术、蛋白芯片、生物信息学等蛋白质组学的方法,与正常人或骨关节炎进行比较,从RA患者血清、滑液或者滑膜中寻找差异蛋白,筛选出标志蛋白,从而协助RA的诊断、治疗及预后判断。     

炎症细胞因子在膝关节骨性关节炎滑液中的表达及临床意义

目的 探讨炎症细胞因子(IL-1、TNF-α、IL-6)在膝关节骨性关节炎(KOA)滑液中的表达及其与KOA临床分期的关系。方法 选择行膝关节镜和人工膝关节置换术的50例KOA患者为研究对象,并以30例单纯半月板损伤患者为对照组,采用酶联免疫吸附(ELISA)方法分别测定滑液中IL-1、TNF-α、IL-6含量。结果 与对照组比较,KOA组滑液中IL-1、TNF-α、IL-6水平显著上升,相比较有显著性差异(P＜0.05)。IL-1、TNF-α水平随着临床分期的增加而逐渐升高,滑液中IL-1、TNF-α水平为:晚期＞中期＞早期,相比较均有显著性差异(P＜0.05);IL-6水平随着临床分期的增加而下降,滑液中IL-6水平为:早期＞中期＞晚期,相比较均有显著性差异(P＜0.05)。IL-1、TNF-α与KOA临床分期呈正相关性(r=0.567,0.583,P＜0.05),IL-6与KOA临床分期呈负相关性(r=-0.486,P＜0.05)。结论 KOA患者滑液中存在IL-1、TNF-α、IL-6水平的高表达,IL-1、TNF-α随着临床分期的增加其含量逐渐上升,而IL-6随着临床分期的增加其含量逐渐降低。IL-1、TNF-α与骨性关节炎病变有密切关系,而KOA患者关节液中IL-6的含量不能直接反映出骨性关节炎的严重程度,但并节液中IL-6水平在诊断早期病变有一定的参考价值。     

补肾活血方对膝骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TGF-β1的影响

目的探讨补肾活血方对膝骨性关节炎(KOA)的临床疗效及作用机制。方法选择肾虚血瘀型KOA病人42例,共58个膝关节患者,口服补肾活血方进行治疗。分别于治疗前、治疗1个疗程及2个疗程后进行膝关节功能评分;采集患膝关节液,双抗体夹心ELISA法测定白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平。结果治疗后患者膝关节功能评分明显提高,膝关节液中IL-1β水平逐渐下降,TGF-β1的水平逐渐升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血方可降低KOA患者关节液中IL-1β水平,升高TGF-β1水平,改善KOA患者膝关节活动功能。     

医用三氧关节腔注射对老年膝关节骨性关节炎患者IL-1β的影响

目的 观察医用三氧对老年膝骨性关节炎患者关节腔滑液和血浆中白细胞间介素IL-1β的影响.方法 老年膝骨性关节炎患者72例,随机均分为3组,分别为医用三氧组（O组）、玻璃酸钠组（H组）和未注药组（N组）.O组膝关节内注入30 μg/ml医用三氧20 ml,H组膝关节内注入玻璃酸钠25 mg,N组未进行膝关节内注药.每周2次,4周1个疗程.于治疗前和治疗1疗程后1周时,抽取治疗侧膝关节滑液和外周静脉血,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL-1β的含量.3组患者均口服盐酸曲马朵缓释片进行疼痛治疗.并选择健康志愿者24例为对照组（C组）.根据ISOA进行病情和疗效评估.结果 3组患者治疗前ISOA评分、滑液及治疗前后血浆中IL-1β含量均高于C组（P＜0.05）;治疗后O组和H组ISOA评分、滑液中IL-1β含量均比N组及治疗前降低（P＜0.05）.KOA患者IL-1β表达量与膝关节ISOA评分呈明显正相关（r=0.58,P=0.008）.结论 膝骨性关节炎患者关节腔内注射医用三氧与玻璃酸钠均可抑制关节炎的炎性反应,减少关节腔炎性因子的释放,降低关节滑液IL-1β的含量.     

关节镜下清理术与透明质酸钠关节内注射治疗膝骨关节炎

目的：探讨关节镜下清理术（arthroscopic debridement, AS）和透明质酸钠关节内注射(intra-articular sodium hyaluronate injection,SHI)治疗膝骨关节炎(KOA)的临床疗效,以及治疗前后血清和关节液中IL-1和NO水平的变化。方法：将轻、中度KOA患者69例,随机采用AS组32例（41膝）和SHI组37例（48膝）治疗,并收集治疗前后血清和膝关节液测定IL-1和NO。膝关节功能用Lysholm评分。IL-1测定为常规ELSIA法,NO测定用硝酸还原酶法。结果：AS和SHI治疗后随访1年,每组Lysholm评分与治疗前比较均有提高,差异均有显著性（P<0.05）,AS治疗组的优良率（78.0%）显著高于SHI治疗组（58.3%）;每组治疗后关节液和血清中IL-1、NO水平均较治疗前降低,两组比较差异亦有显著性（P<0.05）。结论：AS和SHI均能使患膝Lysholm的功能评分较治疗前提高,均能降低关节液和血清中炎性介质浓度,都是KOA的有效治疗方法;但在KOA功能改善方面AS更优于SHI。     

利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物

目的 利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白.方法 收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质.结果 血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少.大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白( transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1).其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达.大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72) mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01) mg/L,P＜0.01].结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物.     

防风膝痹汤联合针刺治疗痛痹型膝骨关节炎

目的 研究防风膝痹汤联合针刺治疗对痛痹型膝骨关节炎(KOA)的疗效及其对KOA患者关节液肿瘤坏死因子(TNF)-α 及白介素(IL)-1β 的影响.方法 选取2014年1月-2016年1月我院骨科收治的痛痹型患者56例,随机分为对照组及观察组,各28例.对照组采用膝骨关节腔注射透明质酸钠联合塞来昔布治疗,观察组采用防风膝痹汤联合针刺治疗,连续治疗4周.观察2组临床症状和体征,采用KOA分级量化评分与视觉模拟疼痛评分(VAS)进行综合疗效评价;酶联免疫法检测患者膝骨关节液的TNF-α 及IL-1β 的浓度水平.结果 观察组总有效率92.86%,对照组75.00%(P<0.05).2组治疗后KOA分级量化评分比较(5.26±1.84)与(6.55±2.19)(P<0.05).对照组VAS明显高于观察组(2.69±1.02)与(1.42±0.77),差异有统计学意义(P<0.05).观察组TNF-α 浓度水平明显低于对照组(21.36±4.75)与(36.43±6.51)pg/mL(P<0.05).观察组IL-1β 浓度水平明显低于对照组(10.51±3.23)与(18.32±4.18)pg/mL(P<0.05).结论 防风膝痹汤联合针刺治疗痛痹型KOA患者,能明显减少KOA分级与VAS评分,降低关节腔内促炎相关细胞因子TNF-α 及IL-1β 的浓度水平,具有显著的抗炎止痛效果.     

中药熏蒸联合手法推拿、股四头肌锻炼对膝骨性关节炎患者关节液内脂肪因子visfatin及chemerin含量的影响

【目的】研究中药熏蒸、手法推拿、股四头肌锻炼综合治疗对膝骨性关节炎患者关节液中脂肪因子visfatin及chemerin含量的影响,探讨中药熏蒸联合手法推拿、股四头肌锻炼治疗膝骨性关节炎的可能机理。【方法】选取膝骨性关节炎患者60例,按照完全随机方法分为治疗组和对照组各30例,治疗组给予中药熏蒸+中医手法推拿+股四头肌锻炼治疗,对照组单纯给予中药熏蒸治疗。治疗2个疗程(2周)后,观察2组临床疗效及治疗前后膝关节西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎调查量表(WOMAC)评分,并检测关节液中脂肪因子visfatin和chemerin含量。【结果】(1)经2个疗程治疗后,治疗组总有效率为96.7%,对照组为83.3%,治疗组疗效优于对照组(P0.01)。(2)治疗后,2组WOMAC评分均明显下降(P0.01),且治疗组的下降作用更为明显(P0.01)。(3)治疗后,2组关节液visfatin和chemerin含量均较治疗前明显下降(P0.01),且治疗组的下降作用优于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】中药熏蒸联合手法推拿、股四头肌锻炼治疗膝骨性关节炎临床疗效明显,并能明显减少关节液内visfatin和chemerin含量,这可能是中药熏蒸联合手法推拿、股四头肌锻炼治疗膝骨性关节炎的机理之一。     

中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳方法的建立及优化

目的建立中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)方法并对其进行优化。方法以正常人血浆样品为研究对象,对白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品、全血浆和热SDS法全血浆样品进行pH梯度2-DE分离,凝胶经硝酸银染色后,利用PDQuest软件对2-DE图谱进行重复性分析,并对不同处理方法的全血浆2-DE图像的结果进行比较。结果与全血浆直接上样2-DE凝胶图谱比较,白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆上样双向电泳蛋白有所增多,但由于白蛋白/IgG球蛋白去除过程中的非特异性吸附,造成了同一样品在蛋白质图谱上的明显差异;与全血浆直接上样和白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品上样2-DE凝胶图谱比较,热SDS法处理血浆样品可以得到更多的蛋白质,且重复性好(P<0.05),凝胶硝酸银染色显示蛋白质点染色深、分散清楚。结论热SDS法全血浆上样2-DE分析法具有蛋白丢失少、操作简便、重复性好的特性,是证侯血浆蛋白质组学研究的有效手段。