银翘感冒颗粒体外抗甲型流感病毒作用的药效学实验

目的通过实验观察银翘感冒颗粒的体外抗甲型流感病毒作用。方法采用鸡胚接种和血凝试验测定病毒效价。结果药物的直接灭活作用(A组)和药物抑制病毒在鸡胚内的增殖作用(B组)的血凝滴度(GMT)分别为13.61和18.52(P<0.01)。结论银翘感冒颗粒在对甲型流感病毒的直接灭活作用和抑制病毒在鸡胚内的增殖作用方面均有效。     

四种板兰根提取物抗流感病毒作用实验研究

【目的】研究板蓝根中性、酸性、碱性和两性提取物抗流感病毒作用及其对机体免疫力的影响。【方法】用鸡胚培养法观察板蓝根提取物对流感病毒接种鸡胚的毒性抑制作用;以病毒滴鼻感染小鼠,建立病毒感染小鼠的模型,观察4种提取物对模型小鼠死亡率及脾T细胞、B淋巴细胞增殖的影响。【结果】鸡胚实验显示,板蓝根酸性提取物能显著阻滞病毒感染鸡胚。动物实验表明,经过酸性提取物治疗的小鼠死亡率明显降低,鼠脾T细胞、B淋巴细胞刺激指数增高,免疫功能增强,其它3种提取物均无上述作用。【结论】板蓝根酸性提取物具有较强的直接抑制流感病毒的作用。     

金银花、连翘配伍提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的实验研究

目的:观察金银花、连翘配伍提取物(JLT)体外抑制甲型流感病毒FM1株的作用。方法:采用血凝试验方法,测定不同质量浓度JLT体外和鸡胚内抑制流感病毒效价,分析JLT对病毒增殖的影响。结果:与病毒对照组比较,JLT组血凝效价降低,其抑制作用时间可从1 h持续到24 h,其对病毒的抑制作用随着药物质量浓度的降低而逐渐减弱;JLT在400 mg/mL、200 mg/mL及100 mg/mL时,对感染流感病毒鸡胚具有预防和保护治疗作用(P<0.001),而在400 mg/mL时的预防作用明显优于阳性对照组(P<0.05)。结论:JLT可有效抑制甲型流感病毒FM1株。     

抗感颗粒抗甲型流感病毒的实验观察

目的 观察抗感颗粒在鸡胚和BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用.方法 (1)鸡胚实验:将甲型流感病毒鼠肺适应株FM1接种9日龄鸡胚,再将不同剂量的抗感颗粒注入鸡胚,以血凝效价为指标,观察抗感颗粒对流感病毒的作用,设立流感病毒对照组和利巴韦林片对照组,每组6个鸡胚.(2)小鼠实验:将BALB/c小鼠随机分为病毒感染模型组、正常对照组、利巴韦林片组及抗感颗粒低、中、高剂量组,每组20只小鼠.用流感病毒感染小鼠后灌胃给药,以实验小鼠的生存情况、死亡保护率及延长生命率等指标观察抗感颗粒的抗流感病毒作用.结果 在鸡胚实验中,抗感颗粒高、中剂量组均能抑制流感病毒复制并达到显效结果,病毒血凝效价比流感病毒对照组分别低了5个、3个稀释度.在小鼠实验中,抗感颗粒各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状,减少小鼠死亡,死亡保护率为35.0%～55.0%;生存时间延长,延长生命率为73.0%～88.9%、最低有效剂量为3.00g/kg.结论 抗感颗粒对甲型H1N1流感病毒的增殖有抑制作用,对流感病毒感染引起的小鼠死亡有保护作用.     

2种纯化流感病毒方法的比较研究

目的比较2种纯化浓缩鸡胚尿囊液中流感病毒方法。方法将流感病毒鸡胚尿囊液分别采用蔗糖密度梯度离心法(sucrose—density—gradient—centrifugation,SDGC)和红细胞吸附释放法(absorption and release-RBC,AR—RBC)进行纯化,收集纯化病毒测定血凝效价,比较2种纯化方法。结果SDGC法纯化病毒可在30％和45％蔗糖层面交界处的区带中检测到流感病毒,血凝效价为1：2560;用AR—RBC法纯化病毒过程中用新鲜鸡红细胞出现了溶血现象,而用甲醛处理过的鸡红细胞则无此现象,血凝效价均为1：2560。结论与SDGC法纯化病毒比较,AR-RBC法是一种经济实用、操作简便并有较高纯化效率的方法,尤以甲醛处理过的鸡红细胞纯化效果最好。     

纳米银对流感病毒H3N2灭活作用的探讨

[目的]探讨纳米银(Nanosilver,NaAg)对流感病毒H3N2的灭活作用。[方法]采用血球凝集试验、鸡胚培养法、MTT分析法、血球吸附试验探讨NaAg对流感病毒H3N2的灭活作用。利用透射电镜、流式细胞仪检测病毒诱导细胞的凋亡。[结果]NaAg/H3N2组血球凝集试验效价为1∶2,鸡胚尿囊液血凝效价低于1∶2,流感病毒H3N2对照组血球凝集试验效价、鸡胚尿囊液血凝效价均为1∶1024,二者比较差异具有显著性意义(P<0.001);NaAg溶液在狗肾MDCK细胞上最大无毒浓度为25μg/mL;流感病毒H3N2在MDCK细胞上半数感染浓度(TC ID50)为10-3.5/0.1 mL。等体积的50μg/mL NaAg与40 TC ID50流感病毒H3N2溶液室温充分混和作用2 h后感染MDCK细胞,细胞的存活率为(98.16±2.67)%,而20 TC ID50流感病毒H3N2感染MDCK细胞,细胞的存活率为(35.21±1.45)%,二者比较差异具有非常显著性意义(P<0.001)。25μg/mLNaAg溶液有效抑制了20 TC ID50流感病毒H3N2诱导MDCK的细胞凋亡。[结论]纳米银对流感病毒H...     

黄芪赤风口服液在狗肾传代细胞(MDCK)上抗流感病毒活性的研究

采用观察MDCK细胞病理变化 (CPE)和测定培养液中红细胞吸附效价 (HA)的方法对黄芪赤风口服液 (简称黄赤液 )对甲、乙两型流感病毒株的抑制作用进行了研究。结果表明 :用黄赤液先处理细胞后攻击病毒 ,或病毒先感染细胞后加黄赤液或黄赤液与病毒同时加入 ,1∶80稀释的黄赤液均能明显保护MDCK细胞 ,抑制甲型流感病毒A/PR/ 8/ 34及乙型流感病毒B/沪防 / 14 / 95的复制 ,降低流感病毒感染滴度 1.5～ 2个log以上。提示黄芪赤风口服液在体外有明显的抗流感病毒的作用。     

Real-Time PCR与流感病毒分离关系研究

目的研究提高流感病毒分离率的方法。方法 Real-Time PCR检测500份流感监测病例,选择甲型流感H1N1、H3N2和乙型流感阳性及阴性样品各10份共计40份,分别接种MDCK细胞和鸡胚,用红血球凝集试验测定病毒滴度,以血凝抑制试验鉴定毒株型别。结果阳性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型8份、H3N2型7份、乙型流感8份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型0份、乙型流感5份。阴性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型3份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型2份、H3N2型0份。结论 MDCK细胞分离流感病毒时,Ct值已经在阴性范围之内的样品也应进行病毒分离,以提高病毒分离率;鸡胚分离流感病毒时,应选择MDCK细胞接毒一代且滴度达到1∶128的强毒株进行分离。     

经卵白给药研究利巴韦林在鸡胚内抗甲型流感病毒的作用

目的建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型。方法设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度。结果在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。结论在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制。     

茶多酚主要成分EGCG体外抗流感病毒FM1株作用

【目的】研究茶多酚主要成分EGCG体外抗甲型流感病毒FM1株感染及抑制病毒复制的作用。【方法】细胞培养测定抗病毒效价,采用细胞病变抑制(CPE)法和空斑减少试验法,在不同试验策略(治疗、保护)下,评价其体外抗流感病毒作用。【结果】CPE法观察及四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测结果显示:在治疗及保护模式下,4～32 mg/mL EGCG均有显著抑制病毒、提高细胞存活率的作用(P<0.01)。空斑减少试验结果显示:2种模式下EGCG治疗指数(TI)分别为39.31及43.48,能有效抑制流感病毒,符合CPE法的结果。【结论】EGCG具有一定的体外抗甲型流感病毒FM1株的作用。     

牛蒡苷元体外抗流感病毒活性

目的：体外观察牛蒡苷元（arctigenin,ACT)抗甲1流感病毒作用，为进一步确认ACT是牛蒡子Fructus arctii解表功能有效成分提供实验依据。方法：采用MDCK细胞培养法，通过红细胞凝集实验，以流感病毒血浆滴度为指标，观察ACT对流感病毒复制的抑制作用。结果：ACT浓度(mmol/L)为6．7，13．4，26．8和53．6的血凝滴度抑制率（％）分别为0．75，87．5和100。结论：ACT在体外有直接抑制流感病毒复制的作用，是牛蒡子解表功能的有效成分，对其进行含量测定作为牛蒡子质量标准的定量指标是适宜和可行的。     

麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒作用靶点的研究

目的研究麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒的作用靶点。方法运用细胞培养技术、血凝试验和MTT法检测麻杏石甘汤在4种给药方式中对流感病毒血凝滴度和流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响。结果在直接灭活病毒作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内的血凝滴度低于病毒对照组,在15.63￣31.25mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在干预病毒吸附作用中,麻杏石甘汤在1.95￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在保护宿主细胞作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组,差异均有统计学意义(P<0.01￣0.05)。在这3种给药方式中,麻杏石甘汤对流感病毒感染的MDCK细胞的治疗指数高于利巴韦林。在抑制病毒增殖的作用中,麻杏石甘汤在7.81￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度显著低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.01￣0.05)。与利巴韦林组比较,检测的麻杏石甘汤5个浓度点的作用不明显,在给药方式中,麻杏石甘汤对MDCK细胞的治疗指数也低于利巴韦林组。结论麻杏石甘汤通过直接杀伤病毒、干预病毒吸附、抑制病毒增殖、保护宿主细胞而发挥抗流感病毒作用,该方直接杀伤病毒、干预病毒吸附和保护宿主细胞的作用优于利巴韦林片,抑制病毒增殖的作用不及利巴韦林片。     

紫贻贝多糖抑制流感病毒在鸡胚中增殖的研究

目的:研究紫贻贝多糖(MEPS)对流感病毒在鸡胚中增殖的抑制作用。方法:采用血凝滴度测定研究MEPS对鸡胚培养甲型流感病毒的抑制作用。结果:与病毒对照组比较,MEPS各剂量组的血凝滴度降低差异有非常显著性(P<0.01)。结论:MEPS能明显抑制鸡胚培养流感病毒的增殖,具有开发成抗流感病毒生物制剂的前景。     

儿茶提取物对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

用流感病毒鼠肺适应株A/FM /1 /47(H1N1 )感染的小鼠肺炎为模型 ,研究儿茶提取物对流感病毒感染机体免疫功能的影响 ,包括对迟发型超敏反应 (DTH)及中和抗体产生的影响。结果显示 :儿茶提取物可显著增强 2 ,4 二硝基氟苯 (DNFB)诱发的小鼠DTH反应 ,即儿茶素 +病毒感染组和儿茶素对照组小鼠的耳肿胀度和脾指数都明显增加 ,与正常对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;提示 :儿茶提取物具有增强小鼠T细胞免疫功能的作用。儿茶提取物实验组的中和抗体平均效价为 1∶2 0 3 ,与病毒感染对照组 (平均效价为 1∶1 0 4.2 )相比具有非常显著性差异 (P <0 .0 1 ) ;说明儿茶提取物可增强流感病毒感染小鼠中和抗体的水平 ,提示其对小鼠体液免疫功能亦有增强作用。研究表明 :儿茶提取物具有增强病毒感染机体的细胞免疫和体液免疫功能的作用。     

用MDCK细胞培养副流感病毒的初步尝试

目的:初步探索用MDCK细胞培养副流感病毒。方法:用不同血凝效价副流感病毒感染MDCK细胞,观察副流感病毒在细胞上的生长情况,并检测血凝效价的变化。结果:1∶512副流感病毒感染MDCK细胞后24h即出现明显的细胞病变效应,但病毒的血凝效价有所下降。结论:副流感病毒可以引起MDCK细胞出现细胞病变效应,但在该细胞内不能复制。     

MDCK、Vero和Hep-2细胞共培养分离甲型H1N1型流感病毒

目的用MDCK、Vero和Hep-2细胞共培养体系,分离甲型H1N1流感病毒,提高流感监测效率及缩短临床诊断周期。方法选取4株经国家流感中心复核鉴定、本实验室保存的甲型H1N1流感病毒,用病毒培养液1:2稀释后分别接种MDCK、Vero和Hep-2共培养细胞瓶和MDCK细胞瓶,每组设空白对照,用生理盐水代替接种。经35℃、5%CO2培养后记录甲型H1N1型流感病毒毒株在共培养细胞瓶和MDCK细胞瓶中的细胞病变效应(CPE)、血凝滴度和荧光定量PCR反应的CT值。结果培养后,2组接种流感病毒的细胞瓶均出现典型细胞病变,MDCK细胞瓶CPE略强于共培养细胞瓶,分离物-70℃冻融2次后检测血凝滴度,2组接种流感病毒的细胞瓶内分离物,血凝滴度均(1∶32;提取分离物核酸,荧光定量PCR检测,CT值均(20。结论用MD-CK、Vero和Hep-2细胞共培养体系可以分离流感病毒,同时还可分离鉴定其它呼吸道病毒。     

中草药提取液对流感病毒诱导细胞凋亡的影响

探讨金银花、黄芩和连翘的提取液对甲3型流感病毒诱导狗肾传代细胞(MDCK细胞)凋亡的影响。方法采用金银花、黄芩和连翘3种中草药的提取液进行抗病毒试验,以细胞病变、姬姆萨染色在光镜下观察细胞形态学变化,Annexin V和PI双染用流式细胞仪测定细胞凋亡率,评价药物对甲3型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡的影响。结果在MDCK细胞上甲3型流感病毒(血凝滴度为1∶64)的TCID50为0.65.100μL-1;实验浓度:金银花为1∶256(1.95g.L-1),黄芩为1∶64(7.81g.L-1),连翘为1∶64(7.81g.L-1)。在光镜下观察甲3型流感病毒对照组的MDCK细胞,可见被感染的MDCK细胞出现了细胞凋亡特有的形态学变化。Annexin V和PI双染经流式细胞仪测定显示3种药物实验组的细胞凋亡率[金银花(28.13±3.30)%、黄芩(13.47±3.04)%、连翘(19.17±6.55)%]均显著低于病毒对照组[(54.10±4.58)%](P<0.001)。结论 7.81g.L-1的黄芩及7.81g.L-1的连翘均能抑制100TCID50的甲3型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。1.95g.L-1的金银花不能够有效抑制100TCID50的甲3型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

儿茶提取物抗流感病毒作用的小鼠体内实验研究

用流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/4 7(H1N1)感染小鼠 ,制备小鼠肺炎模型 ,研究儿茶提取物对流感病毒感染小鼠死亡的保护作用。结果显示 :高剂量组对感染小鼠具有很好的死亡保护作用 (P <0 .0 5) ,高、中剂量组均可明显延长感染小鼠的平均存活时间。高剂量组 ( 12 .5g/L)的肺指数、肺指数抑制率和肺病变程度与阳性药物 (病毒唑 )对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5)。研究表明 :该儿茶提取物在小鼠体内具有有效的抗流感病毒作用     

复方感冒冲剂体外抗流感病毒作用

目的探讨复方感冒冲剂体外对流感病毒（H3N2）的抑制作用,为临床合理用药提供科学依据。方法使用狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney,MDCK）建立体外病毒感染模型。将病毒与药物通过三种不同给药方式,通过细胞病变法观察复方感冒冲剂对流感病毒的抑制及对被感染细胞的保护作用。结果复方感冒冲剂在感染病毒同时加药方式下对流感病毒（H3N2）感染的MDCK细胞有明显的保护作用;在先给药再感染病毒的方式下对MD-CK细胞的保护作用较弱;在先加病毒后加药的方式下,复方感冒冲剂对病毒感染的MDCK细胞无明显保护作用。结论复方感冒冲剂具有体外抗流感病毒作用,其药效发挥可能依赖机体的代谢并与给药方式有关。