原位逆转录PCR间接法检测人大肠癌组织和细胞株中CD44V6m …

探讨用原位逆转录ＰＣＲ间接法检测人类大肠癌组织及大肠癌细胞株内ＣＤ４４Ｖ６ｍＲＮ的表达。方法在大肠癌组织冰冻切片及ＨＴ２９和ＬｏＶｏ大肠癌细胞爬片上，先作蛋白酶Ｋ及ＤＮａｓｅ消化处理，再行逆转录、原位ＰＣＲＦＹ ＦＵ Ｔ ＲＹ ＦＵ ＲＧＤＲ ＷＵＧ ＶＳ ＵＱ ＳＷ     

原位逆转录PCR间接法检测人大肠癌组织和细胞株中CD44V6 mRNA的应用研究

目的探讨用原位逆转录ＰＣＲ间接法检测人类大肠癌组织及大肠癌细胞株内ＣＤ４４Ｖ６ｍＲＮＡ的表达。方法在大肠癌组织冰冻切片及ＨＴ２９和ＬｏＶｏ大肠癌细胞爬片上，先作蛋白酶Ｋ及ＤＮａｓｅ消化处理，再行逆转录、原位ＰＣＲ扩增和扩增后原位杂交检测，分析扩增产物与Ｖ６探针结合显色情况。结果ＬｏＶｏ细胞较ＨＴ２９细胞显色快而着色深，大肠癌癌灶较癌旁组织及远端正常大肠粘膜组织显色速度及强度均有显著性差异；反应液内有特异的ｃＤＮＡ扩增产物渗出；自制的原位ＰＣＲ模具性能稳定，封闭和防渗漏效果好。结论用原位逆转录ＰＣＲ间接法检测大肠癌组织及大肠癌细胞株内ＣＤ４４Ｖ６ｍＲＮＡ的表达，特异性强，定位性好，显色效果达到了光镜下分析的要求；反应液内的扩增产物还可作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及基因分析；自制的原位ＰＣＲ模具经济、方便，具有广泛的应用价值     

原位PCR技术检测肝中HBV—DNA的应用

目的：探讨原位ＰＣＲ技术在ＨＢＶ低水平感染中的意义。方法：用原位ＰＣＲ方法检测４２例肝炎患者石蜡包埋肝组织的ＨＢＶ－ＤＮＡ并与原位杂交技术检测结果进行比较。结果：原位ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为５０％，明显高于原位杂交法（１９％，Ｐ〈０．０１），肝组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率与临床诊断无关。阳性杂交信号均位于肝细胞浆，呈簇状和弥散状分布。结论：原位ＰＣＲ检测肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ具有快速、灵敏、     

用原位PCR研究石蜡包埋肝组织中微量HCV RNA

为定位分析石蜡包埋肝组织中微量ＨＣＶ ＨＮＡ，改良建立了原位ＰＣＲ检测技术，并对１７例丙型肝炎相关的肝细胞癌患者癌组织和癌周肝组织石蜡包埋切片进行检测。结果显示：该技术的特异性可靠，敏感性高于原位杂交法；两种组织切片ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率分别为４１．２％和７０．６％，阳性信号主要呈胸浆型分布；     

检测人巨细胞病毒抗原的原位免疫PCR技术

目的：建立用于诊断ＨＣＭＶ活动性感染的原位免疫ＰＣＲ方法。方法：ＨＣＭＶ ＡＤ１６９株感染的人胚肺成纤维细胞或先天畸形胎儿肾组织石蜡切片,依次加入抗ＨＣＭＶ单抗,生物素化二抗,链霉亲合素以及作为指示元件的生物素化ＤＮＡ,随后进行原位ＰＣＲ扩增,经酶显色反应判断结果。结果：应用本法检测ＨＣＭＶ感染的细胞可于感染后８ｈ清晰检出阳性信号;检测先天畸形胎儿肾组织ＨＣＭＶ感染,阳性率显著高于免疫组化法。结论     

原位PCR检测培养细胞中的单拷贝SRY基因

采用原位ＰＣＲ方法在培养的人小肠癌转移腹水细胞系（ＨＩＣＭＡ）中进行了人Ｙ染色体上单拷贝ＳＲＹ基因的原位扩增，并以ＰＣＲ方法制备的地高辛标记物探针原位检测了所扩增的片段，比较研究表明，原位ＰＣＲ法较之直接的原位杂交法，其灵敏度提高５倍以上。     

原位PCR检测培养细胞中的单拷贝SRY基因

采用原位ＰＣＲ方法在培养的人小肠癌转移腹水细胞系（ＨＩＣＭＡ）中进行了人Ｙ染色体上单拷贝ＳＲＹ基因的原位扩增，并以ＰＣＲ方法制备的地高辛标记探针原位检测了所扩增的片段，比较研究表明，原位ＰＣＲ法较之直接的原位杂交法，其灵敏度提高５倍以上     

原位PCR—杂交—步法检测胆管细胞癌组织内HBV－DNA

原位ＰＣＲ—杂交—步法检测胆管细胞癌组织内ＨＢＶ－ＤＮＡ顾广玉，王文亮（病理学教研室西安７１００３３）关键词原位ＰＣＲ；ＨＢＶ；胆管细胞癌中图号Ｒ７３５．８近年来原位ＰＣＲ方法在病毒感染的诊断中逐步得到应用．目前，用原位杂交与免疫组化方法检测组织中的...     

用原位 PCR 研究石蜡包埋肝组织中微量 HCV RNA

为定位分析石蜡包埋肝组织中微量ＨＣＶＲＮＡ，改良建立了原位ＰＣＲ检测技术，并对１７例丙型肝炎相关的肝细胞癌患者癌组织和癌周肝组织石蜡包埋切片进行检测。结果显示：该技术的特异性可靠，敏感性高于原位杂交法；两种组织切片ＨＣＶＲＮＡ阳性率分别为４１．２％和７０．６％，阳性信号主要呈胞浆型分布；在癌细胞中核型和核膜型分布比例较癌周肝组织明显增高，提示ＨＣＶ可能与宿主细胞基因存在着相互作用。     

原位PCR确诊一例由病毒性心肌炎所致心肌梗塞

目的：应用原位ＰＣＲ诊断青年型急性心肌梗塞的柯萨奇Ｂ组病毒（ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ｖｉｒｕｓ Ｂ，ＣＶＢ）感染。方法：应用原位ＰＣＲ法对具有急性心肌梗塞临床演变年轻患者的心肌活检组织进行ＣＶＢ检测，以明确病因。结果：患者的心肌活检组织中ＣＶＢ－ＲＮＡ显示阳性。结论：柯萨奇Ｂ组病毒感染所致的急性病毒性心肌炎可导致急性心肌梗塞。     

伤寒合并溶血尿毒综合征及神经性耳聋一例报告

应用原位PCR技术检测了尖锐湿疣组织切片中HPV．结果表明原位PCR间接法的敏感性及特异性明显高于原位杂交法．讨论了防止反应液挥发及组织切片脱落等问题．     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ ２０,ＮＰ ４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二乙酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

免疫球蛋白基因家族性特异性引物在单细胞PCR中的应用

探讨免疫球蛋白基因家族性异引物在单细胞ＰＣＲ中的应用。方法共使用ｋ轻链Ｖ区６个基因家族引物和３’,５’Ｊ区多个基因家族引物的引物对,λ轻链Ｖ区７个基因家族引物和Ｊ区多个甘因家族引物组成的引物对,对慢性淋巴结炎和霍奇金病组织切片上提取的单个Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞进行ＰＣＲ扩增。结果慢性淋巴结炎ＰＣＲ结果显示大部分ｋ,λ基因家族都出现重排,肯定了其细胞成分的多克隆性。组织切片上提取的多个Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞出现了ｋ     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ－２０,ＮＰ－４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨预处理（ＰＣ）对大鼠肝脏１／Ｒ损伤的影响及其机制。方法：采用原位灌流肝脏Ｉ／Ｒ模型，观察肝脏组织损伤、血管床功能、肝脏５＇－核苷酸酶活性及分布的改变。结果：ＰＣ减少肝组织ＭＤＡ产生及ＬＤＨ漏出的（均Ｐ〈０．０１），并抑制Ｉ／Ｒ引起的５＇－核苷酸酶活性下降。结论：ＰＣ对肝脏Ｉ／Ｒ损伤有保护作用，５＇－核苷酸酶参与了该保护机制。     

预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨预处理（ＰＣ）对大鼠肝脏Ｉ／Ｒ损伤的影响及其机制。方法：采用原位灌流肝脏Ｉ／Ｒ模型，观察肝脏组织损伤、血管床功能、肝脏５′－核苷酸酶活性及分布的改变。结果：ＰＣ减少肝组织ＭＤＡ产生及ＬＤＨ漏出（均Ｐ＜０．０ｌ），并抑制Ｉ／Ｒ引起的５′－核苷酸酶活性下降。结论：ＰＣ对肝脏Ｉ／Ｒ损伤有保护作用，５′－核苷酸酶参与了该保护机制。     

原位PCR检测外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA

０引言在组织细胞中定位检出低拷贝病毒，对发病机理、判断预后及指导治疗都有重要意义．原位ＰＣＲ综合了ＰＣＲ技术和原位杂交技术的特点，既能检出细胞内低拷贝病毒，同时还可对含靶序列的组织细胞进行形态学分析．为此，我们建立了原位ＰＣＲ定位检测外周血单核细胞（...     

原位检测大鼠肝癌发生过程中端粒酶活性

目的 在大鼠实验性肝癌发生过程中原位显示端粒酶及其变化。方法 用含０．０５％ ３‘－甲基－４－二甲基氨基偶氮苯的玉米粉喂饲大鼠１２周以制备肝癌模型。组织冰冻切片酶催化端粒延伸－ＰＣＲ（原位ＴＲＡＰ）法检测端粒酶活性。结果 正常肝细胞、胆管细胞以及汇管区细胞一般均为阴性。肝纤维化、早期肝硬化病变中一小部分肝细胞呈弱阳性,间质内增生的肌纤维母细胞端粒酶活性较强,增生的胆管细胞和结节状增生肝细胞显示弱至     

原位PCR和免疫组化检测垂体腺瘤P16基因

目的 研究人垂体腺瘤Ｐ１６基因的改变，同时探索原位ＰＣＲ技术的适宜条件和结果确认，以及用于基因缺失检测的可行性。 方法 原位ＰＣＲ和免疫组化技术。 结果 绝大部分间质细胞为Ｐ１６蛋白免疫组化阴性，而一部分垂体肿瘤细胞呈Ｐ１６阳性；针对Ｐ１６基因的原位ＰＣＲ信号则可见于垂体肿瘤细胞和间质细胞等各种细胞，即Ｐ１６组化阴性的细胞同样表明有Ｐ１６基因存在。 结论 原位ＰＣＲ可以是Ｐ１６基因研究的一种有效手     

利用不同DNA原进行基因多态性研究的可行性分析

目的 探讨不同ＤＮＡ源作基因多态性分析的优缺点，及以血凝块裂解液直接进行ＰＣＲ扩增的可行性和可靠性。方法 从口腔粘膜细胞、组织切片提取ＤＮＡ，并将临床生化分析遗弃的血凝块制备成裂解液和纯化ＤＮＡ，取各自样本分别进行ＰＣＲ，并进一步对血凝块纯化ＤＮＡ和血凝块裂解液所作的ＰＣＲ扩增作对照研究。结果 本研究使用的不同ＤＮＡ源所作的ＰＣＲ扩增均获得满意结果，以血凝块裂液进行的ＧＳＴＭ１，ＧＳＴＴ１和ＣＹＰ