烧伤后大鼠骨骼肌组织泛素及泛素化蛋白表达的变化研究

为研究烧伤大鼠骼肌组织泛素（ubiquitin)及泛素化蛋白表达的变化规律，探讨烧伤后骨骼肌蛋白降解的分子机制，采用大鼠30％Ⅲ度烫伤模型，分为伤后2、6、12和24h组，每组设正常对照组，于伤后不同时间点分别测定大鼠骨骼肌孵育液中伸趾长肌蛋白降解率以及伸趾长肌组织中泛素及泛素化蛋白的表达变化。结果发现，大鼠烧伤后伸趾长肌蛋白降解率增强，尤其是肌纤维蛋白降解增强明显（P＜0．01），伤后12h增加185％，24h增加153％；伸趾长肌泛素及泛素化蛋白的表达在烧伤后各时相点均显著增加（P＜0.01)，尤以12h和24h为明显，表达增加的泛素化蛋白主要为高分子量蛋白。提示烧伤后大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢与泛素及泛素化蛋白的高表达关系密切。     

地塞米松对离体培养肌管泛素系统基因表达的调节及意义

目的研究地塞米松对体外培养的骨骼肌肌管内泛素-蛋白酶体途径基因表达的调节及其意义。方法无菌分离Wistar大鼠（2日龄）下肢肌肉,组织块培养法增殖、传代成肌细胞,融合形成肌管,并随机分为4组,分别应用含有地塞米松10ng／ml（A组）、100ng／ml（B组）、1000ng／ml（C组）和不含地塞米松（D组）的培养液培养肌管,24h后收集肌管,核糖核酸印迹法测定肌管内泛素和蛋白酶体G亚基mRNA的表达变化。结果肌管内泛素mRNA（2．4kb）和蛋白酶体C2亚基mRNA的表达A组、B组和C组均较D组显著增强（P〈0．01）,B组和C组均较A组显著增强（P〈均0．01）,而B组与C组相比无显著差异。结论地塞米松能增强体外培养的骨骼肌肌管内选择性蛋白降解途径——泛素系统的基因表达,此效应在一定范围内呈剂量依赖关系。     

胰岛素治疗对烫伤脓毒症骨骼肌蛋白高降解的影响

目的探讨胰岛素对烫伤脓毒症骨骼肌蛋白高降解的调节。方法沸水烫伤并注射内毒素建立烫伤和脓毒症兔模型,使用胰岛素控制血糖。检测伸趾长肌蛋白降解率和蛋白酶体的基因与蛋白表达变化。结果胰岛素治疗显著降低了伤后骨骼肌蛋白降解率和蛋白酶体的表达。结论胰岛素能抑制泛素-蛋白酶体途径活性的增强,减轻烫伤和脓毒症时骨骼肌蛋白高降解。     

去泛素化酶USP13在癌症中的研究进展

泛素特异性蛋白酶13(USP13)是USP去泛素化酶家族成员之一,属于半胱氨酸蛋白酶超家族.USP13通过介导底物去泛素化过程,抑制底物泛素-蛋白酶体途径降解,进而参与细胞周期、自噬、天然免疫等多种生理过程的调节.近年来,关于USP13是癌症发生的重要调节因子的报道越来越受到关注.该文系统综述了USP13调控不同癌症的分子机制及研究现状,为靶向USP13治疗相关癌症提供新思路.     

HECT类泛素连接酶Smurf1自身调控机制的研究

目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了Smurf1分子间存在相互作用,体内泛素化、半衰期及降解实验研究了Smurf1的自身泛素化降解。结果 Smurf1存在分子间相互作用和泛素化降解,这种分子间的相互调控是由C2和WW结构域介导。结论 Smurf1分子间存在自我泛素化修饰及蛋白酶体依赖的降解,是一种新的HECT类泛素连接酶的调控机制。     

严重烧伤脓毒症骨骼肌蛋白分解代谢的机制及意义

对严重烧伤脓毒症状态下的骨骼肌高分解代谢 ,目前尚无一种有效的防治措施。单纯增加热卡和蛋白供给并不能较好地改善负氮平衡。生长激素等治疗 ,尽管可减少骨骼肌蛋白降解 ,但同时有很多副作用。泛素 蛋白酶体途径研究的进展 ,使作者对骨骼肌蛋白消耗的分子机制有了较好的了解 ,它是严重烧伤脓毒症时骨骼肌蛋白降解的重要途径之一。内毒素、TNF、糖皮质激素等介质是直接或间接导致骨骼肌蛋白降解的重要诱导或调节因子。抑制炎性介质NF κB途径可有效降低严重烧伤、脓毒症状态下骨骼肌蛋白降解率。早期切除烧伤的焦痂 ,泛素转录、蛋白表达下降 ,骨骼肌蛋白降解减少。应用泛素 蛋白酶体抑制剂可减少实验动物骨骼肌蛋白降解率。初步的研究结果表明 ,防治严重烧伤脓毒症状态下的骨骼肌蛋白高分解的有效方法 ,首先是消除其根源 ,防治脓毒症 ,即治病 ;其次是针对泛素 蛋白酶体途径的作用机制和调节机制进行调控 ,这将是降低严重烧伤脓毒症状态下骨骼肌蛋白降解的有效措施     

蛋白泛素途径及其非降解功能研究新进展

泛素化是单个或多个泛素在泛素激活酶、泛素结合酶及泛素蛋白连接酶的作用下共价修饰底物蛋白质的过程。在蛋白质降解的过程中，泛素化标记被蛋白水解酶体特异性识别，发挥着枢纽的作用。而近年来的研究发现。泛素化不仅仅是蛋白质降解的标志，它有更为广泛的用途，参与了大量的生命活动。这些研究极大地丰富了对泛素化蛋白水解系统的认识，也使得在分子水平上对蛋白质降解异常导致的顽疾进行治疗不再是梦想。     

严重烫伤大鼠骨骼肌蛋白质降解途径及泛素作用的研究

目的阐明严重烧伤后蛋白质降解的主要途径，以期为伤后代谢调理和防治提供理论依据。方法以包括一侧后肢３７％体表皮肤全层严重烫伤大鼠为模型，分别抑制不同蛋白质降解途径，以荧光分光光度法测定比目鱼肌酪氨酸体外总释放量，并采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法观察泛素含量的变化。结果阻断依赖ＡＴＰ－泛素途径后，能显著抑制大鼠伤肢蛋白质降解。同时，泛素含量均呈明显的进行性增加。结论烫伤后骨骼肌蛋白质高分解主要是通过依赖ＡＴＰ－泛素途径进行的     

严重烧伤大鼠早期切痂植皮后骨骼肌泛素转录的变化

目的　探讨大鼠严重烧伤早期切痂后骨骼肌蛋白降解率变化的内在机制。方法　应用大鼠 30 %Ⅲ度背部烫伤模型 ,随机分为伤前、单纯烧伤、早期切痂和非早期切痂组 ,切痂组分别于伤后 1天和 4天行切痂手术 ,采用无创技术和骨骼肌充分氧供离体孵育系统测定伸趾长肌肌纤维蛋白降解率 ,Northernblot方法测定伸趾长肌组织中泛素转录表达的变化。结果　伸趾长肌肌纤维蛋白降解率在伤后各时间点均显著增加 (P<0 0 1) ,早期切痂组较非早期切痂组在伤后 2、4、5天显著降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。泛素转录表达在伤后均显著增加 ,但早期切痂组呈持续下降的趋势。蛋白降解率与泛素转录表达间呈显著正相关 (r=0 94 78,P <0 0 5 )。结论　烧伤早期切痂可降低骨骼肌蛋白的高分解代谢反应 ,与泛素 蛋白酶体途径活性下降有关     

PKA磷酸化p21WAF后对其泛素化修饰和稳定性的影响

目的：探索p21被蛋白激酶A（PKA）磷酸化修饰后对其泛素化修饰和稳定性的影响。方法：构建p21可能磷酸化位点的突变体p21 T145A，观察PKA体外磷酸化修饰p21；Western印迹分析PKA特异性抑制剂H89对p21稳定性的影响；通过免疫沉淀分析H89对p21泛素化修饰的影响以及p21 Thr 145突变前后和Skp2结合能力的变化。结果：PKA体外磷酸化修饰p21的Thr 145；PKA特异性抑制剂H89能够提高p21的稳定性并抑制p21的泛素化修饰；野生型（wild）p21比p21 T145A结合sk02的能力强。结论：PKA磷酸化修饰p21的Thr 145后导致其结合E3连接酶结合亚基skp2的能力增强，从而促进p21的泛素化修饰，导致p21稳定性的降低。     

一次大强度运动对大鼠骨骼肌泛素蛋白酶体途径基因表达及蛋白质降解的影响

目的:观察1次大强度运动后骨骼肌泛素蛋白酶体途径组成成分基因表达的变化,探讨该途径在运动后骨骼肌蛋白质降解中的作用。方法:36只雄性SD大鼠,体重190～220 g,跑台运动适应3天,休息1天,取6只为安静对照,其余大鼠进行1次1小时跑台运动(25 m/min,5%坡度)。运动0.5小时即刻、运动1小时即刻、运动后1小时、运动后2小时、运动后6小时,分别选6只大鼠取腓肠肌,用Real-Time PCR法测定泛素、MuRF1、MAFbx mRNA含量,用Western Blot法检测泛素化蛋白含量,用高效液相色谱法检测肌肉3-MH含量。结果:运动0.5、1小时即刻至运动后6小时,腓肠肌泛素mRNA含量与安静时比较无显著性差异(P>0.05)。1小时运动后1、2和6小时,腓肠肌MAFbx和MuRF1 mRNA含量较安静时显著升高(P<0.01,P<0.05)。1小时运动后6小时,腓肠肌泛素化蛋白含量显著高于安静时(P<0.01)。运动0.5小时、1小时即刻和运动后6小时,腓肠肌3-MH含量显著高于安静(P<0.01)。结论:1次大强度运动后,骨骼肌泛素蛋白酶体途径基因表达升高,骨骼肌收缩蛋白降解增加。     

视黄醇结合蛋白的分子机制及临床应用

视黄醇结合蛋白（retinol binding protein）是一类维生素A（VitA）的运载蛋白，参与血清和细胞内视黄醇／视黄酸的转运，是疏水小分子结合蛋白家族的成员。本文主要介绍了视黄醇结合蛋白的基因结构及表达，染色体定位，作用机制的研究进展，以及临床意义等。     

Computed tomography of the oropharynx in obstructive sleep apnea

Uvulopalatopharyngoplasty (UPPP) is currently the preferred method for treatment of the obstructive sleep apnea syndrome (OSAS). However, only 50 per cent of the patients operated upon are cured by this surgical procedure, and there is a demand for better and more objective selection criteria. Computed tomography (CT) of the oropharynx was obtained in 32 consecutive adult patients with proven OSAS. An additional 15 patients with the same complaints, but without objective evidence of OSAS, were used as a control group, together with 20 normal subjects. The axial widths of the tongue and the genioglossus and hyoglossus muscles were measured by CT. Both the tongue and genioglossus widths were significantly larger in the OSAS patients than in the two control groups (p less than 0.001). The increased tongue width will cause encroachment of the oropharyngeal airway below the level of the soft palate. Thus, CT can be used to measure the tongue size in order to evaluate its predictive value for the outcome of the UPPP procedure.     

利用荧光极化技术在均相系统内建立基于Bcl-2/Bak作用模式的高通量药物筛选体系

目的：利用荧光极化原理，在液相系统内建立基于Bcl-2／Bak相互作用模式的高通量药物筛选体系。方法：在液相系统内建立Bd-2蛋白和多肽的相互作用体系，用光度计检测荧光极化值，分析荧光极化值随蛋白或多肽浓度变化而改变的趋势。结果：对应于Bak蛋白BH3结构域的5FAM标记肽（LP）可与Bcl-2蛋白相互作用，建立了二者相互作用的饱和曲线；非标记竞争性短肽（CP）和LP竞争性地与Bcl-2蛋白结合，而无关肽（NP）则不与Bcl-2相互作用；基于Bcl-2结构筛选到的小分子化合物SC对体系内LP荧光极化值的影响模式与CP相同。结论：在均相系统内初步建立了基于抑制Bcl-2活性进而促进细胞凋亡的药物高通量筛选方法，为实现药物的高通量筛选奠定了基础。     

Diagnostic value of MRI-based 3D texture analysis for tissue characterisation and discrimination of low-grade chondrosarcoma from enchondroma: a pilot study

Objectives

To explore the diagnostic value of MRI-based 3D texture analysis to identify texture features that can be used for discrimination of low-grade chondrosarcoma from enchondroma.

Methods

Eleven patients with low-grade chondrosarcoma and 11 patients with enchondroma were retrospectively evaluated. Texture analysis was performed using mint Lesion: Kurtosis, entropy, skewness, mean of positive pixels (MPP) and uniformity of positive pixel distribution (UPP) were obtained in four MRI sequences and correlated with histopathology. The Mann-Whitney U-test and receiver operating characteristic (ROC) analysis were performed to identify most discriminative texture features. Sensitivity, specificity, accuracy and optimal cut-off values were calculated.

Results

Significant differences were found in four of 20 texture parameters with regard to the different MRI sequences (p<0.01). The area under the ROC curve values to discriminate chondrosarcoma from enchondroma were 0.876 and 0.826 for kurtosis and skewness in contrast-enhanced T1 (ceT1w), respectively; in non-contrast T1, values were 0.851 and 0.822 for entropy and UPP, respectively. The highest discriminatory power had kurtosis in ceT1w with a cut-off ≥3.15 to identify low-grade chondrosarcoma (82 % sensitivity, 91 % specificity, accuracy 86 %).

Conclusion

MRI-based 3D texture analysis might be able to discriminate low-grade chondrosarcoma from enchondroma by a variety of texture parameters.

Key Points

? MRI texture analysis may assist in differentiating low-grade chondrosarcoma from enchondroma. ? Kurtosis in the contrast-enhanced T1w has the highest power of discrimination. ? Tools provide insight into tumour characterisation as a non-invasive imaging biomarker.

     

Functional MR imaging of the auditory cortex with electrical stimulation of the promontory in 35 deaf patients before cochlea implantation

BACKGROUND AND PURPOSE: Promontory testing is used for preoperative assessment of the auditory pathway before cochlear implantation. This method depends on patient cooperation and cannot be used in children or disabled persons. Promontory stimulation during functional MR imaging (fMRI) provides a new and objective method to test the integrity of the auditory pathway. To evaluate the method, we performed this prospective study in deaf adult patients. METHODS: fMRI of the auditory pathway with electrical stimulation of the promontory was performed in 35 profoundly deaf patients, bilaterally in seven. For safe stimulation inside the MR environment, a specially designed nerve stimulator was used. We acquired nine sections parallel to the sylvian fissure by using an echo-planar pulse sequence (1.5 T). To evaluate the number of pixels in the auditory cortex, areas were counted and the minimum confidence level (p(st) value) was determined. The auditory pathway was called intact when the minimal p(st) value was 10(-5) or when the minimal p(st) value was 10(-4) in at least five activated pixels. RESULTS: Images in 85% of patients reporting an auditory sensation showed activation of the contralateral auditory cortex. In the group of patients reporting no hearing sensation, images in 75% did not show activation. CONCLUSION: This method can prove the intactness of the auditory pathway and help the surgeon in decision making before cochlear implantation. However, a negative finding should not be interpreted as indicating a nonfunctioning auditory pathway. Additional technical refinements and experience are needed to further improve this method.     

下腔静脉病变的螺旋CT诊断

目的 探讨下腔静脉病变的螺旋CT及下腔静脉CT血管造影（CTP）的影像特点。资料与方法 40例肿瘤侵犯下腔静脉及下腔静脉病变，采用螺旋CT平扫、增强扫描及下腔静脉CTP检查，分析不同扫描模式及后处理图像所示病变的部位、范围、密度变化特点及侧支循环形成。结果 19例肝癌沿肝静脉侵犯下腔静脉，癌栓位于下腔静脉肝段及肝上段；邻近下腔静脉肝段的肝癌直接侵犯下腔静脉；6例轻度强化，未见明显侧支循环形成。9例肾癌沿肾静脉侵犯下腔静脉，癌栓位于肾上段，无强化，见肾包膜静脉侧支形成及性腺静脉增粗。5例下腔静脉血栓管腔狭窄或闭塞，呈节段性，壁不光整，可见条状或斑点状钙化，CTP后延迟扫描，病变段无明显强化，见明显的侧支循环。3例下腔静脉内血管平滑肌瘤病，起自子宫，沿卵巢静脉及髂静脉上行，经下腔静脉侵入右心房，病变密度较均匀，无钙化及坏死囊变，强化较明显，病变段附近见大量侧支循环形成。发育异常所致布一加综合征（Budd-Chiari syndrome）3例，表现为肝上段节段性狭窄，周围见大量的侧支循环形成。下腔静脉内平滑肌肉瘤1例，病变位于肝下段下腔静脉，呈节段性增粗，边缘不光整，密度不均，延迟CT扫描后不均匀强化，邻近见大量侧支循环形成。结论 下腔静脉病变的CT表现以充盈缺损、无或轻-中度强化、管腔狭窄及侧支血管形成为特征，下腔静脉CTP的三维重建能立体显示管腔狭窄和侧支血管，合理的CT扫描模式有利于病变的诊断和确定手术方案。     

Superior Vena Cava Syndrome Associated with Right-to-Left Shunt through Systemic-to-Pulmonary Venous Collaterals

Superior vena cava (SVC) obstruction is associated with the gradual development of venous collaterals. We present a rare form of systemic-to-pulmonary subpleural collateral pathway that developed in the bridging subpleural pulmonary veins in a 54-year-old woman with complete SVC obstruction. This uncommon collateral pathway represents a rare form of acquired right-to-left shunt due to previous pleural adhesions with an increased risk of stroke due to right-to-left venous shunting, which requires lifelong anticoagulation.