溶血标本对乙型肝炎病毒表面抗原检测结果的影响

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的检测是诊断乙型肝炎的主要指标。随着检验技术的不断发展，酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测HBsAg的试剂、方法也已成熟，因其方法简便、灵敏度高、特异性强、实验条件要求不高，而被各级各类医疗机构广泛采用。虽然检测时标本要求空腹采集，不能溶血，但往往在实际工作中会因种种原因造成标本溶血。     

HBsAg弱阳性样本的3种测定方法比较

目的比较胶体金免疫层析试验（GICA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）与微粒子化学发光检测技术（MEIA）检测HBsAg弱阳性样本的结果符合率，以了解3种方法的特异性与灵敏度等诊断指标。方法用3种方法平行检测收集的血清标本HBsAg，并相互比较。结果3种方法检测HBsAg的结果符合率为74．3％，其中ELISA与MEIA结果符合率为94．9％；GICA与MEIA结果符合率为76．9％。GICA检测HBsAg弱阳性样本时的各项诊断指标都不甚理想。结论1．GICA的灵敏度和特异性分别为81．3％和81．3％，较ELISA和MEIA低，检测HBsAg弱阳性样本时存在一定程度的漏检率和误诊率，只能起筛查作用，遇到HBsAg弱阳性的血清标本必须与ELISA法并用，实行双检。2．ELISA较MEIA灵敏度和特异性略低，当测定标本的OD值在临界值附近即检测灰区时建议用MEIA复检。     

溶血和带血细胞标本对HBsAg结果的影响

目的通过实验来观察不同程度溶血和带血细胞标本对酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）结果的影响。方法用90例健康献血者的HBsAg为阴性的血液标本，人为造成不同程度的溶血和加入不等量的红细胞，再用ELISA一步法检测HBsAg，通过对结果的观察来分析溶血和带血细胞标本对ELISA一步法检测HBsAg的干扰程度。结果当血红蛋白大于或等于10g／L或红细胞浓度大于或等于0．125×10^12／L时，42％以上的标本吸光度值均大于临界值（P〈0．01）。结论当血红蛋白大于或等于10g／L或红细胞浓度大于或等于0．125×10^12／L时，标本对ELISA一步法检测HBsAg有影响，可造成标本假阳性。     

溶血标本对ELISA法检测HBsAg结果的影响及消除对策

ELISA法仍然是国内检测HBsAg的常用方法之一，但实验操作中各个环节对实验结果影响较大，特别是以辣根过氧化物酶（HRP）为标记的酶结合物的试剂检测HBsAg时，溶血标本可导致假阳性结果，从而影响临床诊断和治疗，给患者带来不必要的经济损失和精神负担。本组通过对大批量标本进行HBsAg的筛查也同样发现溶血标本对检测结果的影响较大，特别是对弱阳性结果影响更为明显。同时，其他因素（如采血过程、洗板不干净等）也可出现假阳性。通过对弱阳性结果标本的重新测试，探讨标本质量对ELISA结果的影响及消除假阳性的对策。     

溶血对ELISA法测定HIV抗体假阳性的观察

EUSA试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法 [1].将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来,可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原.在日常ELISA测定HIV抗体试验试验中经常会遇到溶血标本,标本溶血后会释放出血红蛋白,血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶样作用,可能造成试验的假阳性,影响HIV抗体检测的结果 ,本研究探讨溶血对ELISA法检测HIV抗体的影响,现报告如下.     

溶血对一步法和两步法HBsAg酶联免疫试剂检测结果影响的研究

目的 探讨样本溶血对一步法和两步法HBsAg酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果的影响.方法 分别将60例阴性标本、弱阳性标本和强阳性标本人为造成不同程度的溶血,比较溶血前后不同试剂检测样本OD值的变化差异,分析溶血标本是否对ELISA试验存在干扰,一步法和两步法试剂是否存在差异.结果 对于阴性标本,一步法试剂10 g/L以下溶血样本检测OD值与溶血前比较差异无统计学意义(P＞0.05),10 g/L以上重度溶血后样本孔OD 值、S /CO 值与溶血前比较差异有统计学意义(P＜0.01);两步法试剂15 g/L以下溶血样本检测OD值与溶血前比较差异无统计学意义(P＞0.05),15 g/L以上重度溶血后样本孔OD 值与溶血前比较差异有统计学意义(P＜0.01);对于弱阳性和阳性标本,两种试剂在5 g/L以上溶血后样本检测OD 值与溶血前比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 两步法试剂受溶血影响较一步法轻,轻度溶血样本对阴性标本ELISA试验结果无干扰,对于灰区结果和重度溶血标本需要重新取样,进行再捡.     

轮状病毒抗原检测试剂的评价及选用策略

目的 对轮状病毒（RV）抗原检测常用试剂的敏感性、特异性和重复性进行评价，为合理选用试剂和方法提供帮助。方法 用三种ELISA法RV抗原检测试剂和一种胶体金法RV抗原检测试剂，对165例婴幼儿腹泻粪便标本和50例无腹泻婴幼儿软便标本进行检测，同时对不同稀释度的RV抗原阳性液和5份RV抗原阴性液进行检测，并对相应的阳性标本作阻断性实验和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）对比试验。结果 不同厂家的ELISA法RV抗原检测试剂其敏感性高低相差两个稀释度，ELISA法对165例临床标本检测的阳性率各试剂间无统计学差异（P〉O．05）；RV抗原检测试剂的敏感性ELISA法高于胶体金法，两种方法对临床标本检测的阳性率有统计学差异（P〈0．01）。经PAGE对比试验和阻断性实验，ELISA法的假阳性率为8．6％，胶体金法的假阳性率为2％，即胶体金法的特异性优于ELISA法；10例RV抗原阳性标本的重复性实验中ELISA法批内、批间完全一致，胶体金法批内、批问各有一次阴性。结论 不同厂家和不同方法学的轮状病毒抗原检测试剂除重复性较一致外，其检测的敏感性和特异性均存在较大差异，临床应用中应根据不同情况合理选择相应的试剂和方法。     

影响酶联免疫试验测定结果的分析前因素及对策

酶联免疫试验(ELISA)由于其灵敏度、特异性强的特点,已经在医学检验中获得了广泛应用。但由于一些内源性及外源性干扰因素的影响,常常导致试验结果的不准确。本文就一些常见干扰因素及解决方法作如下综述。1影响ELISA测定结果的外源性因素及解决方法1.1标本溶血(1)影响原因标本溶血时可释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。(2)解决方法标本采集和处理时必须避免溶血。1.2标本受细菌污染(1)影响原因细菌菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,在ELISA试验…     

新生儿ABO溶血病实验诊断的方法学探讨

目的 探讨新生儿ABO溶血病的实验诊断方法,并筛选出更为直接、简单易行、准确度高、灵敏度好的实验诊断方法.方法 收集临床疑似病例标本44例,分别用微柱凝胶法和流式细胞仪法进行新生儿溶血病三项试验（即游离试验、释放试验和直抗试验）检测.结果 44例标本中,临床最终确诊42例.微柱凝胶法检测阳性35例,诊断符合率为83.3%;流式细胞仪法检测阳性42例,诊断符合率为100%.差异有统计学意义.（P＜0.05）.结论 对于新生儿ABO 溶血病的实验诊断,流式细胞仪法更为直接,简便易行,灵敏度高,准确度高,结果客观,易于保存,是理想的新生儿ABO溶血病临床实验室检测方法.     

吸样交叉污染对乙型肝炎病毒表面抗原检测结果的影响

在用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清标本乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的过程中，偶然发现已知的阴性HBsAg标本，当其前面连续有2个HBsAg阳性标本时，可使阴性HBsAg标本出现假阳性。排除操作中的干扰因素后，笔者怀疑是电解质检测过程中仪器吸样时造成的标本之间交叉污染所致。为了进一步明确原因，笔者进行了验证实验，现报道如下。     

无偿献血者乙肝表面抗原弱阳性标本不同检测方法结果比较

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析技术(GICA)、电化学发光免疫分析(ECLIA)、核酸检测(NAT)共4种方法检测乙肝表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的结果符合率,分析探讨4种方法的特异性与灵敏度。方法采用高灵敏度进口和国产ELISA试剂对重庆地区2013年1~12月无偿献血标本共116 351份进行HBsAg血液定性筛查,选取0.8≤S/COl范围的弱阳性标本150份进行ELISA双孔复检、GICA、ECLIA、NAT进行定量检测。结果以上4种方法检测HBsAg的结果符合率为74%,其中,GICA与ECLIA结果符合率为78.7%;ELISA与ECLIA结果符合率为91.2%;NAT与ECLIA结果符合率为85.5%,GICA检测HBsAg弱阳性标本的符合率比其他3种方法较差。结论 (1)GICA的灵敏度和特异性与其他3种方法相比较低,检测HBsAg弱阳性标本时存在比较高的假阴性率和假阳性率,建议只作初筛检测。(2)ECLIA的灵敏度和特异性略高于ELISA,当ELISA检测出现弱阳性结果时,最好用ECLIA进行复检。(3)NAT和ELISA灵敏度和特异性接近,NAT与ELISA技术的方法学差异主要是检测的对象不同,且ELISA与NAT检测各有优劣,因此2种方法进行双检可以有效提高灵敏度和特异性。     

对乙型肝炎表面抗原弱阳性结果进行确认试验的应用研究

目的评估抗体中和确认试验在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)低值弱阳性标本中的应用。方法将由微粒子酶免疫发光法(MEIA)检测的HBsAg结果(S/CO)在1.0~10.0之间的111份弱阳性血清标本进行抗体中和确认试验,并进行乙型肝炎病毒(HBV)酶联免疫吸附试验(ELISA),对比各试验结果间的差异。结果抗体中和确认试验阳性92例(82.9%),ELISA检测阳性47例(42.3%),2项试验检测结果间差异有统计学意义(P=0.033)。结论对HBsAg低值弱阳性标本,ELISA检测漏检率很高,敏感性和特异性均不佳;抗体中和确认试验可做为HBsAg弱阳性标本进一步确认的手段。     

化学发光法与ELISA法对HBsAg和HBsAb同时阳性标本检测比较

目的比较化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在检测HBsAg和HBsAb同时阳性标本的结果,评价其是否具有一致性。方法用4种不同浓度HBsAg标准品和4种不同浓度HBsAb标准品两两配合成16份样本,用CLIA、ELISA法分别检测,并于24h后再次检测;同时用4种不同浓度HBsAg血清标本和4种不同浓度HBsAb血清标本两两配合成16份样本进行同样检测。结果两种方法HBsAg检测结果均随着HBsAb浓度的增加而呈下降之势,对于1.5ng/mlHBsAg,当加入HBsAb浓度达到400mIU/ml时,CLIA法检测出现阴性结果;低浓度HBsAb受到HBsAg的影响随HBsAg的升高而加大,但随着HBsAb浓度的升高,受到HBsAg的影响呈现下降趋势,随着HBsAb浓度的升高,受到HBsAg的影响呈现下降趋势,当浓度为400mIU/ml时,CLIA法检测基本不受影响,而ELISA法仍然受到150ng/mlHBsAg影响。24h后HBsAg和HBsAb相互间影响更大,出现更多阴性结果。4种不同浓度HBsAg、HBsAb血清标本配成16份样本检测显示类似结果。CLIA法和ELISA法对HBsAg、HBsAb同时阳性标本检测的一致性微弱,标本放置24h后两法一致性加强。结论对于HBsAg和HBsAb同时阳性的标本,最好在当天能用另一种方法进行检测、印证,如果在24h以后进行复查,弱阳性一方可能检测出阴性结果,所以最好重新抽取血液检验。     

对乙型肝炎表面抗原弱阳性结果进行确认试验的应用研究

目的评估抗体中和确认试验在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）低值弱阳性标本中的应用。方法将由微粒子酶免疫发光法（MEIA）检测的HBsAg结果（S/CO）在1.0-10.0之间的111份弱阳性血清标本进行抗体中和确认试验,并进行乙型肝炎病毒（HBV）酶联免疫吸附试验（ELISA）,对比各试验结果间的差异。结果抗体中和确认试验阳性92例（82.9%）,ELISA检测阳性47例（42.3%）,2项试验检测结果间差异有统计学意义（P=0.033）。结论对HBsAg低值弱阳性标本,ELISA检测漏检率很高,敏感性和特异性均不佳;抗体中和确认试验可做为HBsAg弱阳性标本进一步确认的手段。     

ELISA检测HBsAg复检结果的分析

由于酶联免疫吸附试验(ELISA)测定过程中影响因素较多,为了提高乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测质量,我院已经对HBsAg初检临界状态的标本建立了复检制度,现就积累的实验结果作分析。一、材料和方法1 .材料　1 998年1月～2 0 0 2年1 2月间体检人员的血液标本共376 0 2例;∑96 0酶标仪;科华公司HBsAg酶免试剂盒。2 .方法　按照试剂盒说明书进行操作,用∑96 0酶标仪读数,我们将HBsAg初检临界状态的标本[吸光度(A)值0 .0 70～0 .2 0 0 ]置4°C冰箱保存,于次日进行HB sAg的复检,复检时做双孔(初检时溶血的标本,复检重新采血,均无溶血) ,…     

溶血标本在ELISA一步法和二步法中对HBVM测定结果的影响

目的通过实验观察溶血标本在酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法中对乙型肝炎两对半（HBVM）检测结果的影响。方法用80例健康人（HBVM均为阴性）的血液标本,人为造成不同程度溶血,用ELISA一步法和二步法同时检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBe）,通过对检测结果的观察来分析溶血对检测结果的干扰程度。结果当溶血程度大于或等于10g／L时,ELISA一步法40％以上的标本0D值均大于临界值,差异有统计学意义（P〈0．01）;ELISA二步法仅为3％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论当溶血程度大于或等于10g／L对ELISA一步法检测HBVM的结果有干扰,可造成临界假阳性;ELISA二步法干扰不明显,无统计学意义。     

ELISA法检测HBsAg灰区和单试剂反应性样本的确认结果分析

目的 探讨ELISA法检测HBsAg结果判定灰区设置的必要性,以及中和试验对HBsAg灰区和单试剂反应性样本的确认情况.方法 采用两个不同厂家生产的ELISA HBsAg试剂对献血者标本分别进行检测,对检测结果在0.7≤S/CO＜1或单试剂为反应性的标本,再用同种试剂进行双孔复试,双孔中至少有1孔结果仍在灰区内或仍为反应性,留取标本做HBsAg中和试验确证.结果 136例灰区标本中HBsAg中和试验检测出阳性标本10例,阳性率为7.35％,结果异常标本14例;159例单试剂反应性标本中HBsAg中和试验检测出阳性标本19例,阳性率为11.95％,结果异常标本16例.灰区与单试剂反应性样本阳性率的差异没有统计学意义;S/CO值在0.70～0.79区间、0.80～0.89区间、0.90～0.99区间的阳性率有逐渐升高的趋势,但差异无显著性;双试剂灰区的阳性率高于单试剂灰区的阳性率,但差异无统计学意义.结论 对HBsAg灰区和单试剂反应性标本,ELISA检测漏检率较高,应结合自己实验室实际设置合适的灰区,最大限度地检出这些可疑标本,并进行确认实验,进一步减少HBsAg漏检和误检率,以提高输血安全,同时避免血源的浪费.     

电化学发光法进行HBsAg阳性确认的可行性及应用研究

目的评估电化学发光法HBsAg检测用于献血者HBsAg阳性确认的可行性,探索HBsAg ELISA的灰区设定条件和HBsAg阳性确认的替代方法,简化献血者归队的判定流程。方法以HBsAg电化学发光检测(Electrochemiluminescence assay,ECL)作为血液HBsAg常规筛查ELISA反应性的补充试验,并对HBsAg ECL反应性的标本进行中和试验(ECL)确证。联合核酸检测(Nucleic acid test,NAT)、ECL、ELISA检测技术以及献血者的跟踪检测进行HBsAg的阳性确认。比较电化学发光中和试验和HBsAg ECL对HBsAg ELISA双试剂反应性(S/CO≥1)中的HBV DNA阳性的检出能力;比较不同检测流程在补充HBsAg ECL检测前后以及不同灰区界值的设定对HBsAg确认阳性检出的效果影响,以敏感度(Sensitivity,SEN)和阳性预期值(Positive Predictive Value,PPV)表示;比较ELISA假反应性与确认阳性检出时S/CO值的分布差异。结果 2013年1月1日-2015年6月30日间,在本中心采集的192065份血液标本中检出HBsAg反应性821份,其中通过联合检测和献血者的跟踪检测估算出HBsAg确认阳性有160份。ECL对HBsAg ELISA双试剂反应性(S/CO≥1)标本的核酸检出显著高于电化学中和试验(P0.05);以HBsAg ECL作为HBsAg反应性的补充试验能够将各筛查流程的HBsAg确认阳性检出的PPV提高至92.6%-99.2%(P=0);2种HBsAg ELISA试剂各自假反应性与确认阳性检出时S/CO值的分布存在着明显的差异,S/CO≤2可作为假反应性的简化判定标准;随着灰区界值的降低,2种ELISA试剂对HBsAg确认阳性检出的SEN和PPV变化均存在1个平台区,S/CO≤1时ELISA1的此2个指标即处于其平台区,ELISA2则为S/CO≤0.8。结论 HBsAg ECL能够作为血液HBsAg筛查的阳性确认试验。以该方法得到的HBsAg阳性确认数据为依据可以简化ELISA假反应性献血者归队的判定流程、合理地设定灰区。本研究采用的2种ELISA检测试剂其假反应性献血者的判定标准均可设定为S/CO≤2.0;ELISA1不宜设置灰区,ELISA2的灰区界值宜设为S/CO=0.8。     

轮状病毒抗原检测试剂的评价及选用策略

目的对轮状病毒(RV)抗原检测常用试剂的敏感性、特异性和重复性进行评价,为合理选用试剂和方法提供帮助。方法用三种ELISA法RV抗原检测试剂和一种胶体金法RV抗原检测试剂,对165例婴幼儿腹泻粪便标本和50例无腹泻婴幼儿软便标本进行检测,同时对不同稀释度的RV抗原阳性液和5份RV抗原阴性液进行检测,并对相应的阳性标本作阻断性实验和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对比试验。结果不同厂家的ELISA法RV抗原检测试剂其敏感性高低相差两个稀释度,ELISA法对165例临床标本检测的阳性率各试剂间无统计学差异(P>0.05);RV抗原检测试剂的敏感性ELISA法高于胶体金法,两种方法对临床标本检测的阳性率有统计学差异(P<0.01)。经PAGE对比试验和阻断性实验,ELISA法的假阳性率为8.6%,胶体金法的假阳性率为2%,即胶体金法的特异性优于ELISA法;10例RV抗原阳性标本的重复性实验中ELISA法批内、批间完全一致,胶体金法批内、批间各有一次阴性。结论不同厂家和不同方法学的轮状病毒抗原检测试剂除重复性较一致外,其检测的敏感性和特异性均存在较大差异,临床应用中应根据不同情况合理选择相应的试剂和方法。     

ELISA检测梅毒螺旋体抗体影响因素探讨

<正>ELISA检测梅毒螺旋体抗体是1种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,但在实际操作中的影响因素较多,现就比较常见的影响因素作一些探讨。1标本的影响因素1.1外源性因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本保