抗CD3—抗胶质瘤双特异性抗体体外细胞毒作用的多因素分析

目的：探索胶质瘤免疫治疗的新途径。方法：采用单比实验和联合作用等对比分析，观察抗ＣＤ３－抗胶质瘤双抗和相应单抗等多因素细胞毒作用。结果：单用抗体、单用ＩＬ－２没有明显的细胞毒作用；ＬＡＫ细胞＋抗体和／或ＬＡＫ细胞＋抗体＋ＩＬ－２具有明显的细胞毒作用，其中双抗的增强作用明显高于其它各组；源于恶性胶质瘤患者的ＬＡＫ细胞的细胞毒作用较正常人低，但双抗＋ＩＬ－２可增强其活性。结论：抗ＣＤ３－抗胶质瘤双特异性抗体连同ＩＬ－２可将激活的人外周血淋巴细胞特异地介导至胶质瘤细胞后发挥细胞毒作用。     

脑肿瘤局部浸润单个核细胞亚群及其免疫功能的原位免疫组织…

应用免疫组化方法对５１例脑肿瘤局部浸润的单个核细胞进行观察。发现主要是辅助／诱导（ＣＤ４）Ｔ细胞、抑制／细胞毒（ＣＤ８）Ｔ细胞和单核巨噬细胞参与肿瘤免疫。仅９例及７例分别有少许Ｂ细胞与ＮＫ细胞。ＣＤ４、ＣＤ８Ｔ细胞的密度与单核巨噬细胞密度呈正相关，与肿瘤体积呈负相关。各病理类型脑肿瘤中ＣＤ４亚群均受抑制，胶质瘤还选择性抑制ＣＤ８亚群。脑肿瘤局部免疫状态不受肿瘤发生部位和浸润Ｔ细胞标记增殖期淋巴细胞     

抗CD_3抗体活化杀伤细胞免疫表型变化对抗胶质瘤活性影响

研究用抗ＣＤ３抗体刺激体外培养了８例胶质瘤病人的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）和外周血淋巴细胞（ＰＢＬ细胞），从中发现了一种新型高效的广谱抗肿瘤效应细胞──ＣＤ３ＡＫ细胞，通过与ＣＤ３＋ＴＩＬ、ＣＤ３－ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞比较分析的方法分析了这些效应细胞培养前后细胞表面表型的变化以及对自体胶质瘤细胞，异体胶质瘤细胞，Ｕ２５１ＭＧ及Ｕ９３７等的杀伤活性的影响，同时也讨论了抗ＣＤ２抗体在Ｔ细胞活化中的作用及活化机制。由于αＣＤ３ＡＫ细胞来源广泛，制备简单和抗肿瘤细胞毒活性强，所以将有可能代替ＴＩＬ细胞成为过继免疫治疗的主要抗肿瘤效应细胞。     

脑肿瘤局部浸润单个核细胞亚群及其免疫功能的原位免疫组织化学观察

应用免疫组化方法对５１例脑肿瘤局部浸润的单个核细胞进行观察。发现主要是辅助／诱导（ＣＤ４）Ｔ细胞、抑制／细胞毒（ＣＤ８）Ｔ细胞和单核巨噬细胞参与肿瘤免疫。仅９例及７例分别有少许Ｂ细胞与ＮＫ细胞。ＣＤ４、ＣＤ８Ｔ细胞的密度与单核巨噬细胞密度呈正相关，与肿瘤体积呈负相关。各病理类型脑肿瘤中ＣＤ４亚群均受抑制，胶质瘤还选择性抑制ＣＤ８亚群。脑肿瘤局部免疫状态不受肿瘤发生部位和浸润Ｔ细胞标记增殖期淋巴细胞（Ｋｉ－６７）抗原、标记活化Ｔ细胞（ＨＬＡ－Ｄｒ）及标记白细胞介素－２－受体（ＣＤ２５）表达水平的影响。     

脑胶质瘤患者的全身和局部免疫功能观察

检测了４６例脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞计数、淋巴细胞亚群、淋巴细胞转化试验（ＬＴＴ），同时对３４例脑胶质瘤局部浸润的单个核细胞进行了现察，结果发现患者外周血淋巴细胞数量、ＣＤ３、ＣＤ４亚群、ＣＤ４／ＣＤ８比值、ＬＴＴ等指标明显低于正常人。胶质瘤局部浸润的ＣＤ４亚群淋巴细胞数目明显少于ＣＤ８亚群、ＣＤ４／ＣＤ８比值为０．７９±０．１１．显著低于正常。３４例胶质瘤中仅有３～４例检测出Ｋｉ－６７、ＨＬＡ－Ｄｒ、ＣＤ２５阳性Ｔ细胞、ＣＤ２０阳性Ｂ细胞和ＣＤ５６阳性ＮＫ细胞，提示参与胶质瘤局部抗肿瘤免疫的主要是Ｔ淋巴细胞，而且大多处于非活化状态，ＮＫ细胞活性降低。     

脑胶质瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及β2—微球蛋白的初步研究

本文对胶质瘤病人及对照组分别检测了周围血中Ｔ淋巴细胞亚群及β２－微球蛋白（β２－ｍＧ）含量及脑脊液中β２－ｍＧ含量，结果表明，脑胶质瘤病人ＣＤ４＋（辅助／诱导性Ｔ淋巴细胞）降低，ＣＤ８＋（细胞毒／抑制性Ｔ淋巴细胞）增高，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋降低，与对照组有显著差异（Ｐ＜０．０５），脑胶质瘤病人血及脑脊液中β２－ｍＧ含量增高与对照组比较有显著差异（Ｐ＜０．０５）。脑胶质瘤病人β２－ｍＧ增高与ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值之间呈负相关性。本组实验证明，脑胶质瘤患者存在细胞免疫功能低下，且β２－ｍＧ含量与细胞免疫功能呈负相关。β２－ｍＧ可反映细胞免疫功能状态。     

加热对恶性胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的：为探索加热治疗胶质瘤的机理，本文对加热引起恶性胶质瘤细胞的多重生物学效应做了研究。方法：用Ｍ．Ｔ．Ｔ．法测定胶质瘤细胞存活率；用Ｋｉ－６７抗增殖细胞核抗原单克隆抗体，通过免疫组织化学ＡＢＣ染色分析胶质瘤细胞的增殖活性；用划痕染料示踪技术观察胶质瘤细胞的细胞间隙连接通讯。结果：加热能抑制胶质瘤的存活率和增殖活性，并能促进细胞间隙连接通讯的增强。在４１℃～４５℃温度范围内，随着温度的升高，这些作用越明显。结论：恶性胶质瘤对加热有良好的敏感性，为加热治疗胶质瘤提供了有力的依据。     

加热及增加细胞内氧自由基水平对恶性胶质瘤细胞生物学特性的影响

本文就加热及同时增加细胞内氧自由基水平对恶性胶质瘤细胞存活、增殖和细胞间隙连结通讯的影响做初步观察。用Ｍ．Ｔ．Ｔ法测定胶质瘤细胞存活率；用Ｋｉ－６７抗增殖细胞核抗原单克隆抗体，通过免疫组织化学ＡＢＣ染色分析胶质瘤细胞的增殖活性；用划痕染料示踪技术观察胶质瘤细胞的细胞间隙连结通讯。结果表明，Ｈ２Ｏ２和３ＡＴ能增强加热对胶质瘤细胞存活与增殖的抑制作用，促进胶质瘤细胞间隙连结通讯的改善，存在着明显的剂量和时间效应。实验结果提示，通过内外源性增加胶质瘤细胞内的氧自由基水平，将有助于强化加热治疗胶质瘤效果，并可以减少加热的剂且，降低副作用。     

人脑胶质瘤免疫抑制因子研究

实验表明人脑胶质瘤原代培养细胞及４个人脑恶性胶质瘤体外细胞系细胞培养上清液（Ｓｕ－ｐｅｒｎａｔａｎｔ，ＳＮ）显著抑制植物血凝素ＰＨＡ－Ｐ刺激的正常人或胶质瘤患者自体和异体外周血淋巴细胞增殖。我们发现用抗转化生长因子－β_２（ＴＧＦ－β_２）单克隆抗体可显著降低胶质瘤ＳＮ的免疫抑制活性。４个人脑胶质瘤体外细胞系应用抗ＴＧＦ－β_２单抗免疫组化染色呈阳性反应，３例正常脑组织呈阴性反应。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交实验表明上述４个人脑胶质瘤体外细胞系均表达６ｋｂ的ＴＧＦ－β_２ｍＲＮＡ，而４例人胎脑则无表达。这些结果提示人脑胶质瘤细胞可以自体分泌免疫抑制因子抑制患者的免疫功能，而这抑制因子的主要成份是ＴＧＦ－β_２。     

树突状细胞的培养及其诱导的神经胶质瘤体外杀伤作用研究

目的　研究负载肿瘤抗原的树突状细胞 (DCs)活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)对神经胶质瘤细胞的体外杀伤效应 ,探讨其用于临床治疗的可行性。方法　体外原代培养 12例胶质瘤细胞 ,冻融法获取胶质瘤细胞抗原 ,联合应用粒细胞 /巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素 4和肿瘤坏死因子 α等 ,对人外周血单核细胞进行体外诱导来获取DCs并负载肿瘤抗原 ,激活自体T淋巴细胞 ,制备特异性CTLs,MTT法检测对胶质瘤细胞的体外杀伤效应。结果　负载胶质瘤抗原的DCs激活的CTLs对胶质瘤细胞有明显的杀伤作用 ,显著高于K5 6 2细胞对照组 ,并且杀伤率随着效靶比的增加而增加。结论　从人外周血中诱导的DCs负载胶质瘤抗原后 ,激活的CTLs在体外对胶质瘤能产生高效的杀伤作用 ,为临床应用DCs瘤苗奠定基础     

逆转录病毒载体介导中国单疱病毒TK基因转导脑胶质瘤细胞

目的：研究载中国单疱病毒胸苷激酶基因逆转录病毒重组体（ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ）和羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）体外转染和杀伤脑胶质瘤效果，探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。方法：ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ重组体病毒感染胶质瘤细胞，Ｇ４１８筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测抗Ｇ４１８胶质瘤细胞中的ＴＫｃ基因表达。药物敏感实验观察ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ的毒性反应。结果：１．０ｍｇ／ｍｌＧ４１８筛选１０～１４天获抗性胶质瘤细胞克隆；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示抗Ｇ４１８细胞ＴＫｃ基因明显表达；ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ高度敏感，其ＥＤ５０为：Ｃ６ＴＫｃ０．０２μｇ／ｍｌ，Ｕ２５１ＴＫｃ０．００６μｇ／ｍｌ，Ｕ８７ＴＫｃ０．００４μｇ／ｍｌ，ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ的敏感性是非转基因胶质瘤细胞的５００倍以上。结论：载中国ＴＫｃ基因逆转录病毒重组体可有效转染脑胶质瘤细胞并使其对ＧＣＶ高度敏感，该系统可望用于脑胶质瘤的基因治疗。     

小鼠神经干细胞对胶质瘤趋向性实验研究

目的 探讨小鼠神经干细胞（NSCs）在体外和体内对胶质瘤细胞的趋向性。方法 将原代培养6d的小鼠NSCs悬液离心、收集备用。制备C6胶质瘤细胞、3T3成纤维细胞爬片，随后与NSCs共同培养3d。用荧光染料Hoeehst33342标记NSCs，借助立体定向技术于胶质瘤动物模型内接种NSCs，观察NSCs在胶质瘤动物模型脑内的分布情况。结果 小鼠NSCs对C6细胞有明显的趋向性。体内实验见肿瘤组织内满布标记的NSCs。结论 小鼠NSCs无论在体外或体内对胶质瘤细胞均有一定的趋向性。     

凋亡肿瘤细胞抗原致敏的树突状细胞瘤苗治疗大鼠颅内胶质瘤的实验研究

目的观察凋亡肿瘤细胞抗原致敏的树突状细胞(dendriticcell,DC)瘤苗对颅内胶质瘤免疫治疗的效果。方法通过立体定向接种建立Wistar大鼠C6胶质瘤动物模型;从大鼠骨髓分离DC前体细胞,经重组大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF) 白细胞介素4(rrIL-4)诱导培养、扩增获得功能性DCs;DCs经采用热诱导凋亡的C6胶质瘤细胞体外致敏后皮下回输荷瘤大鼠体内,1次/周,共5次。观察荷瘤大鼠的存活期,MRI观察颅内肿瘤生长情况,循环血中CD8 T淋巴细胞水平及体外细胞毒反应、增殖反应均以流式细胞仪检测。结果经过治疗的荷瘤大鼠生存期明显延长,MRI显示实验组大鼠肿瘤被明显抑制,外周血中CD8 T淋巴细胞比例增加,体外细胞毒试验提示经凋亡肿瘤细胞抗原致敏的DC瘤苗可以诱导针对C6胶质瘤的特异性细胞毒性T淋巴细胞,并且未观察到自身免疫反应的发生。结论经凋亡肿瘤细胞抗原致敏的DC瘤苗对于颅内胶质瘤是一种安全有效的治疗方法。     

动脉硬化性脑血管病T淋巴细胞亚群的初步研究

动脉硬化性脑血管病Ｔ淋巴细胞亚群的初步研究刘卫彬，陈理娥细胞免疫是Ｔ淋巴细胞介导的免疫应答。Ｔ淋巴细胞不仅是细胞免疫的承担者，也是机体免疫应答最重要的调节细胞，按其免疫调节功能可分为Ｔ辅助细胞（ＴｈｅｌｐＣｅｌｌ，Ｔｈ）和Ｔ抑制细胞（Ｓｕｐｐｒｅｓｓ...     

树突状细胞活化的CTLs对神经胶质瘤的体外杀伤作用研究

目的研究负载肿瘤抗原的树突状细胞(DCs)活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对神经胶质瘤细胞的体外杀伤效应,探讨其用于临床治疗的可行性。方法体外原代培养胶质瘤细胞,冻融法获取胶质瘤细胞抗原,联合应用粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子-α等,对人外周血单核细胞进行体外诱导来获取DCs并负载肿瘤抗原,激活自体T淋巴细胞,制备特异性CTLs,MTT法检测对胶质瘤细胞的体外杀伤效应。结果负载胶质瘤抗原的DCs激活的CTLs对胶质瘤的杀伤作用显著高于对K562细胞的杀伤作用(P<0.01),并且杀伤活性随着效靶比的增加而增加;负载胶质瘤抗原的DCs激活的CTLs对胶质瘤的杀伤活性明显高于未经胶质瘤抗原致敏的DCs刺激的CTLs对胶质瘤的杀伤作用(P<0.01)。结论联合应用细胞因子从人外周血中诱导出的DCs负载胶质瘤抗原后,激活的CTLs在体外对胶质瘤细胞能产生高效而特异的杀伤作用,为临床应用DCs瘤苗奠定基础。     

胸苷激酶基因治疗人多形性胶质母细胞瘤BT325并诱导BT325和9L肿瘤细胞的凋亡

目的：了解转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）前后胶质瘤细胞对更昔洛韦（ＧＣＶ）的药物敏感性；钙通道阻滞剂尼莫地平是否增强ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗的肿瘤杀伤作用，以及该治疗方法能否诱导胶质瘤细胞凋亡。方法：用带有ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因的重组逆转录病毒载体，转染人多形性胶质母细胞瘤株ＢＴ３２５。用ＭＴＴ法测定ＧＣＶ对转染ＨＳＶ－ＴＫ基因ＢＴ３２５瘤细胞的杀伤作用。结果：０．１ｕｇ／ｍｌ的ＧＣＶ对转ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＢＴ３２５瘤细胞有杀伤作用，加入尼莫地平后，０．０１ｕｇ／ｍｌ的ＧＣＶ即有杀伤作用。同时发现该治疗方法可以引起胶质瘤细胞的凋亡。结论：ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗对胶质瘤有很强的杀伤作用，并可以引起肿瘤细胞的凋亡；尼莫地平有协同作用，这可能使尼莫地平做为一种增敏剂在脑肿瘤该治疗中使用。     

逆转录病毒载体介导中国单疱毒TK基因转导脑胶质瘤细胞

研究载中国单疱病毒胸苷激基因逆转录病毒 且体和羟甲基无环鸟苷体外转染和杀伤脑胶质瘤效果，探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。方法：ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ重组体病毒感染胶质瘤细胞，Ｇ４１８筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测抗Ｇ４１８胶质瘤细胞中的ＴＫｃ基因表达。     

细胞过继免疫疗法治疗恶性胶质瘤研究进展

概述细胞过继免疫疗法治疗恶性胶质瘤过程中淋巴因子激活的杀伤细胞、自然杀伤细胞、γδT细胞、肿瘤浸润淋巴细胞、抗原特异性细胞毒性T细胞、CD4+T细胞等效应细胞的作用,以及各种效应细胞特性、优缺点,以及目前研究趋势和进展。     

旋毛虫对BALB/c小鼠体内C6胶质瘤细胞的干扰作用

目的观察旋毛虫感染对BAlB/c小鼠体内C6胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种C6胶质瘤细胞,荷瘤20d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤重量及抑瘤率,并对T淋巴细胞亚群进行检测。结果(1)治疗组(先荷瘤,后接虫)小鼠肿瘤重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4 /CD8 显著高于对照组(P<0.01);(2)预防组(先接虫,11d后荷瘤)肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4 /CD8 显著高于对照组(P<0.01)。结论旋毛虫对BALB/c小鼠体内的C6胶质瘤细胞的生长有一定的抑制作用,并且预防组的抑瘤效果好于治疗组。     

人脑胶质瘤细胞多药耐药性的形成及其耐药特性的研究

目的探讨人脑胶质瘤细胞多药耐药性（ＭＤＲ）的形成规律及其耐药特性。方法采用长春新碱（ＶＣＲ）在体外对人脑胶质瘤ＢＴ３２５细胞持续诱导获得了表现为ＭＤＲ特征的人脑胶质瘤细胞模型．以ＭＴＴ法测定胶质瘤细胞增殖，透射电镜行超微结构研究，通过流式细胞仪，检测培养的胶质瘤细胞与３２例术后胶质瘤新鲜组织标本中Ｐ－糖蛋白的表达。结果耐药的胶质瘤细胞ＢＴ３２５／ＶＣＲ对长春新碱的耐受程度为其亲本细胞的２４倍，对阿霉素、威猛交叉耐药，对５－氟脲嘧啶敏感。透射电镜下见ＢＴ３２５／ＶＣＲ细胞常染色质明显，线粒体丰富，粗面内质网增多。研究表明ＢＴ３２５／ＶＣＲ表现为Ｐ－糖蛋白介导的典型ＭＤＲ。胶质瘤新鲜组织标本中，Ｐ－糖蛋白表达阳性率为３７５％（１２／３２），同肿瘤的恶性程度呈正相关（Ｐ＜０．０１）。结论长春新碱能够诱导人脑胶质瘤细胞产生Ｐ－糖蛋白介导的典型ＭＤＲ。胶质瘤中多药耐药基因产物Ｐ－糖蛋白表达的阳性率同肿瘤的恶性程度呈正相关。应用流式细胞仅能早期发现耐药细胞，具有临床推广价值。