简易自然杀伤试验——LDH释放改良法

<正> 自然杀伤试验作为体外细胞介导细胞毒试验,已从基础免疫学研究逐渐应用于对肿瘤、免疫性疾病及病毒感染性疾病的动态研究。为便于在临床上普及应用,一个简易、快速、稳定的常规检测方法是尚待解决的问题。 自然杀伤试验测定方法较多,常用者有形态学法、同位素法、酶释放法等。同位素法有客观指标、微量、敏感,是一般研     

LDH释放法测NK细胞毒的方法学研究

普遍用于检测NK细胞毒的方法是~(51)Cr释放法,此法缺点主要是自然释放率高和同位素的危害等。LDH释放法虽有许多优点,但影响因素甚多,使用者少。我们对LDH释放法应用的最适条件进行了系统的研究,在该文中我们通过实验认为,效靶细胞比例10∶1,效应细胞浓度为5×10~6,孵育时间为22小时是测定系统的最适条件。同时认为应设立效应细胞自然释放对照孔,以监测效应细胞的自身状态。     

各种自然杀伤细胞细胞毒测定方法的进展

目前用于检测自然杀伤细胞毒的方法有许多种,但是每一种都有其缺点。形态法简单易行,适合于临床定性。同位素法与酶释放法(比色法)可以定量,因此是实验室的常规方法。荧光法特异性好,又可定量,可做为替代同位素法的常规方法。单细胞毒法虽然能提供上述所有方法均不能提供的信息,但在一定程度上又被流式细胞仪分析法所取代。本文对每种方法所用不同标记物的优缺点进行了综合评价。     

一种改良的人外周血NK活性检测法-全血法

外周血天然杀伤(NK)细胞活性可反映机体免疫监视功能水平,常用的方法检测为分离单个核细胞(PBMC)的同位素释放法。但以分离的PBMC为效应细胞可能因体内外周血中NK细胞所处的环境及状态而差别较大;分离后可能改变淋巴细胞群间的比例;且操作繁琐,不易被临床广泛应用。本文报道应用同位素释放改良法检测正常人和肝细胞     

生化发光法检测NK细胞活性及其临床应用

<正> 目前,国内外检测NK细胞活性多数采用同位素~(51)铬释放试验、~(125)碘标法或氚标法等,其优点是灵敏度较高,操作简便,但易污染环境,影响工作人员健康。 1982年 Heberer等应用虫荧光素酶生物化学发光现象,发现NK细胞活性与虫荧光素酶生物化学发光密切相关。本文报道应用虫荧光素酶,检测NK细胞杀伤肿瘤靶细胞K_(562)前后的ATP(三磷酸腺苷)的动态变化,借以检测NK细胞免疫活性。     

DNA探针非同位素标记的研究进展

本文综述了近年来DNA探针非同位素标记的研究成果。包括DNA半抗原标记、生物素标记以及直接酶标记的原理、方法及其在医学生物学研究和临床检验中的广泛应用。还介绍了化学发光法等新技术在检测非同位素标记探针中的应用。     

用721分光光度计测定淋巴细胞增殖反应MTT颜色反应法

<正> 检测淋巴细胞的功能现多用同位素掺入法,由于需用放射性同位素和特定的仪器,使其在应用上具有一定的局限性。1983年Mosmann创用MTT[3(4.5-dimethylthiazol-2-yl)2.5-diphenyl teraz-olium bromide]颜色反应法检测细胞增殖。因其简便、快速、准确和不使用同位素等优点,受到重视和     

新城鸡瘟病毒诱导人粘附性单个核细胞产生一氧化氮与细胞毒性

本文采用Griess试剂、间接免疫荧光法和同位素释放等方法,发现新城鸡瘟病毒Losota系（NDV-L）与人外周血粘附性单个核细胞（a-MCs）作用2～4h后,可稳定地吸附在a-PBMCs表面,并使其释放一氧化氮（NO）,释放量与阳性对照组（BCG-LPS作用的a-PBMCs）相近;采用~3H-TdR释放法测定NDV-L作用的a-PBMCs对K_(562)靶细胞的细胞毒活性,发现具有明显的杀伤效应,且该杀伤效应与NO的产生有一定的依赖性。     

电化学发光法检测胃泌素释放肽前体的方法学评价

目的 对电化学发光法检测胃泌素释放肽前体(ProGRP)进行方法学评价及性能验证.方法 对电化学发光法检测胃泌素释放肽前体的不精密度、线性分析、回收实验、相关性分析、反复冻融实验以及正常参考范围验证等方面进行评价.结果 低、中、高值样本批内不精密度分别为2.08％、1.58％和2.31％,批间不精密度分别为3.72％、2.26％和2.13％;线性分析的稀释健全性良好,R2=0.9743;平均回收率为99.94％;与酶联免疫法比较,R2=0.9109,好相关性良好;反复冻融实验进行8次,CV小于5％,结果稳定性良好;结果 电化学发光法检测胃泌素释放肽前体方法可靠、检测性能良好,符合临床实验室要求,可广泛开展使用.     

铁调素对体外培养大鼠骨骼肌细胞铁代谢的影响

目的 探讨铁调素对骨骼肌铁代谢的调节机制.方法 培养大鼠骨骼肌L6细胞,随机分成4组,每组6个重复,每组各加入不同浓度的铁调素溶液(终浓度分别为0、0.05、0.1、0.15 mg/L)孵育12h,采用同位素示踪法,用55Fe测定细胞铁摄取及铁释放能力的变化;通过流式细胞仪检测细胞内铁池(LIP)铁含量;应用免疫印迹法检测膜铁转运蛋白1(FPN1)的变化.结果 与空白对照组比较,0.1mg/L 铁调素处理组肌细胞的铁释放能力明显下降(P<0.05),0.05及0.15mg/L铁调素处理组肌细胞的铁摄取和铁释放均无明显变化(P>0.05);0.1mg/L 铁调素处理组其细胞内LIP铁含量较对照组明显升高(P<0.05);0.1mg/L 铁调素处理组细胞膜上FPN1的表达较对照组明显降低(P<0.05).结论 铁调素可通过影响骨骼肌细胞FPN1的表达水平,降低骨骼肌细胞内铁的向外转运,增加细胞内铁池的铁含量,从而调节骨骼肌细胞的铁代谢.     

成骨生长肽壳聚糖-海藻酸钠微球的制备及体外检测

背景：成骨生长肽体外注射可以刺激外周血和骨髓细胞数增加,增加动物的骨量,加速骨折愈合,但因多肽不稳定性及注射应用不方便,限制了其临床应用。 目的：应用乳化交联法制备成骨生长肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微球,并对其粒径、载药、体外释药、理化特性进行检测。 方法：以戊二醛作为交联剂,应用乳化交联法制备具有控制释放功能的负载成骨生长肽壳聚糖-海藻酸钠微球,显微镜及扫描电镜观察微球的形态和粒径;利用酶联免疫吸附实验动态检测成骨生长肽壳聚糖-海藻酸钠微球的载药率、包封率和缓释规律。 结果与结论：乳化交联法制备的壳聚糖-海藻酸钠微球,球形良好,球体表面有较多微孔,具有较高的包封率(>72%)。体外药物释放实验表明,成骨生长肽可以从壳聚糖-海藻酸钠微球中缓慢释放,整个释放过程可达49 d,累积释放率>85%。提示应用乳化交联法制备的负载成骨生长肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微球,具有很好的控制释放成骨生长肽的能力。     

天然细胞毒测定-LDH释放法

近年来,体外细胞毒技术的不断发展,有力地推动了细胞免疫的研究。因细胞介导细胞毒(CMC)作用在肿瘤及一些病毒性感染疾病中具有重要意义而日益受到重视。CMC的测定方法甚多,一般可归纳为同位素法、形态学法、酶释放法及其它。上述方法都能反映出效应细胞的杀伤活性,但各     

RIA与EIA测定血清HPL的比较

目前,测定HPL的方法有放射免疫分析法、固相酶联免疫法和化学发光法等,使用较多的是放射免疫分析和固相酶联法。为了解两种测定方法的相关性,我们进行了比较实验,现将结果报告如下。     

LDH法用于检测LAK细胞杀伤活性的可行性探讨

ＬＤＨ法用于检测ＬＡＫ细胞杀伤活性的可行性探讨李翠玲崔正言李淑贞张玲ＬＤＨ（乳酸脱氢酶）释放法检测细胞毒活性具有自然释放低、操作简便、测定迅速客观、不需接触同位素等优点，但其方法学研究多集中于检测ＮＫ活性，该法是否也适用于检测ＬＡＫ活性呢？我们系统地...     

束缚应激对大鼠血小板-氧化氮释放的影响

目的 观察急性应激对大鼠血小板一氧化氮(NO)释放的影响及其机制.方法 大鼠浸水-束缚应激(WRS)2、4和8 h,以胃溃疡指数(UI)作为应激损伤的标识,采用Greiss法测定血小板孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量;同位素法测其一氧化氮合酶(NOS)活性和L精氨酸(L-Arg)转运量.结果 WRS 2 h血小板L-Arg转运量、NOS活性和孵育液NO2-含量较对照组显著增加,但随应激时间延长,其呈下降趋势,应激8 h时均显著低于对照组,胃溃疡逐渐加重.结论 WRS应激早期阶段可上调血小板L-Arg/NO通路,促进血小板NO生成;长时间应激下调L-Arg/NO通路,减少NO释放.     

即刻法数据统计处理在放射免疫分析室内质量控制中的应用

近年来,体外标记免疫分析技术的研究和应用取得许多新进展,特别是在微量全自动加样的实现和数据的微型大容量快速处理日臻完善的今天,使得各种体外标记免疫分析自动化已推广和应用于临床。如：化学发光免疫分析(CLIA)、酶联免疫分析(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、微粒子酶荧光免疫分析(MEIA)以及电化学免疫分析(ECLIA)等。其各项技术指标已达到或已超过RIA,但由于RIA低成本和高灵敏度、不受检测环境和样本干扰物质的影响、标记同位素不影响体系反应等诸多优点在临床实际中仍被广泛采用。     

检测HIV-1逆转录酶活性的ELISA方法的建立

目的　建立检测HIV 1逆转录酶活性的ELISA方法。方法　应用包被的模板和逆转录酶将生物素标记的dUTP掺入 ,用辣根过氧化物酶反应系统检测酶活性。结果　建立了检测HIV 1逆转录酶活性的ELISA方法 ,并与同位素掺入检测法进行了比较 ,用ELISA法检测了PFA等药物对HIV 1逆转录酶活性的抑制作用 ,对ELISA法的重复性、稳定性及用于抑制剂研究的特异性和敏感性进行了评价。结论　HIV 1RT活性的ELISA检测法具有简便、快速、重复性好、特异性强的特点 ,适用于抗HIV 1逆转录酶药物的大样品量筛选工作 ,并可发展成为高通量技术     

化学发光法和酶联免疫法在乙型肝炎病毒血清学检验中的效果比较

目的 比较化学发光法和酶联免疫法在乙型肝炎病毒血清学检验中的效果。方法 选取2017年2月~2019年5月我院收治的疑似乙型肝炎患者63例作为研究对象,均予以酶联免疫法、化学发光法进行血清学检验,以荧光定量PCR为金标准,比较两种检验方式准确性、血清学指标检出率。结果 共63例疑似乙肝患者,荧光定量PCR检验阳性38例、阴性25例;酶联免疫法和化学发光法中准确度、灵敏度、特异度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。38例乙肝阳性患者中,酶联免疫法HBsAb、HBcAb阳性检出率与化学发光法比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;酶联免疫法HBeAb、HBeAg、HBsAg阳性检出率低于化学发光法,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 乙型肝炎病毒血清学检验中,采用酶联免疫法、化学发光法均具良好诊断效果,但在血清标志物检验中,化学发光法检出效果更佳,有利于保证临床诊断准确性。     

免疫印迹法的ABC免疫酶染色

<正> 研究细胞膜抗原较常用的技术有免疫印迹法(Western Blotting)、~(125)I标记或~(25)S-甲硫氨酸标记活细胞后电泳放射自显影等方法,而以前者最为普遍。但免疫印迹法需用同位素,一些实验室受到限制,故有采用免疫酶技术如AB法、PAP法等,但     

组织激肽释放酶家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统及其重要应用

目前已明确,人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成,都定位于19q13.3～13.4,在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本文总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统的研究近况,并介绍了其在心血管疾病和肿瘤方面的重要应用。