阴沟肠杆菌不同β-内酰胺酶基因型检测与耐药性研究

目的 了解医院感染阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶的情况,并对产不同β-内酰胺酶型菌株的耐药性进行研究.方法 采用三维试验确证试验检测AmpC酶与超广谱β-内酰胺酶(ESBLs).聚合酶链反应(PCR)扩增基因,K-B法检测阴沟肠杆菌对13种抗菌药物的耐药情况.结果 80株阴沟肠杆菌中29株ESBLs编码基因结果阳性,3株含有两种不同的基因型,分别为TEM型6株、SHV-2型2株、CTX-M-2型5株、CTX-M-3型8株和CTX-M-9型11株;26株ampC基因PCR扩增呈阳性;产超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)阴沟肠杆菌对美罗培南外的12种抗菌药物的耐药率在66.7%～100.0%,无论是单一产酶株,还是SSBLs菌株,其耐药率均显著高于不产酶株.差异有统计学意义(P＜0.05);美罗堵南仍是阴沟肠杆菌耐药率最低的抗菌药物.结论 阴沟肠杆菌已呈现出多药耐药和高度耐药特征,ESBLs基因型以CTX-M型为主,三维试验与PCR检测具有良好的一致性,产AmpC酶和ESBLs酶是阴沟肠杆菌耐药的主要原因.     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶基因及其流行病学研究

目的分析医院2008-2010年临床分离阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶及其对抗菌药物的耐药性,并了解其耐药基因的传播机制。方法采用改良三维试验筛选AmpC酶,双纸片扩散法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测ESBLs和AmpC酶的基因,采用微量肉汤稀释法分析细菌耐药性,质粒接合试验分析耐药基因的传播特点。结果同时产ESBLs和AmpC酶菌株对三、四代头孢菌素及含酶抑制剂药物的耐药率均>50.0%;45株改良三维试验阳性,14株ESBLs确证试验阳性,ESBLs和AmpC酶的基因阳性者分别为25、38株,分别以TEM-1型、MIR-3型为主,其次为CTX-M-3、DHA-1型,SHV-11型广谱β-内酰胺酶2株,未检测到CIT、MOX、FOX、ACC型AmpC酶的基因,5株接合试验成功。结论阴沟肠杆菌主要携带TEM-1型广谱β-内酰胺酶、CTX-M-3型ESBLs和MIR-3型AmpC酶,耐药现状严重,应采取积极有效的措施预防多药耐药菌株的播散与暴发流行。     

产CTX-M酶肠杆菌科细菌耐药性及其相关耐药基因研究

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布。方法采用纸片扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗菌药物的耐药性,用聚合酶链反应(PCR)技术检测相关耐药基因并用DNA序列分析确认基因亚型。结果检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%;检测菌株对亚胺培南全部敏感,质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;产ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX-M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株。结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多;碳青霉烯类抗菌药物是目前治疗产ESBLs细菌最有效药物。     

变性高效液相色谱分析浙江沿海地区ESBLs基因类型研究

目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型,了解浙江沿海地区ESBLs基因型分布情况。方法对171株多药耐药肠杆菌科细菌进行表型确证试验,采用多重PCR对标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株进行CTX-M扩增,扩增产物经DHPLC分析,通过与标准菌株色谱峰比对进行临床菌株基因分型。结果 171株多药耐药肠杆菌科细菌,有142株临床菌株ESBLs表型阳性,经多重PCR扩增142株肠杆菌科109株携带CTX-M基因,52株为CTX-M-1产物,57株为CTX-M-9产物,检出率达79.80%,其中大肠埃希菌携带CTX-M基因比例最高,其次是肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌;109株临床菌株PCR产物经DHPLC分析检测出4种CTX-M基因型,33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14。结论运用DHPLC技术检测出CTX-M型ESBLs菌株有4种基因型,其中CTX-M-14型是CTX-M型ESBLs主要型别;该地区细菌携带CTX-M型ESBLs以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌最多见。     

某医院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的了解某医院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌检出率,确定其基因型,并对其相关流行病学进行研究。方法收集2004年10月—2005年7月医院临床标本分离的多重耐药大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌134株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NC-CLS)所推荐的方法进行表型确证试验,以聚合酶链反应(PCR)法进一步检测CTX-M酶基因型,PCR产物测序并确定其基因型。随机扩增多态DNA(RAPD)对携带CTX-M酶的阳性菌株作流行病学分析。结果112株ESBLs表型阳性的肠杆菌科细菌中90株携带CTX-M基因,共检出3种基因型,即CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。RAPD共测40株菌,19株大肠埃希菌有7种RAPD类型,11株肺炎克雷伯菌有5种RAPD类型,10株阴沟肠杆菌有7种RAPD类型。结论肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs相当普遍,主要为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。CTX-M酶存在克隆传播。     

阴沟肠杆菌流行菌株产超广谱β-内酰胺酶分析

目的研究江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的状况。方法采用改良的双纸片法(MDDT)进行ESBLs的初筛;以ESBLs引物(CTX-M、CTXM-1、CTX-M-2、CTX-M-9、SHV、TEM、VEB、PER型)进行PCR扩增,对扩增产物进行序列分析。结果MDDT初筛结果证明该菌株产超广谱β-内酰胺酶,CTX-M型ESBLs引物有扩增产物,序列分析表明该株阴沟肠杆菌携带CTX-M-3型ESBLs。结论江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产CTX-M-3型ESBLs,是造成该流行株对三代头孢菌素耐药的重要原因。     

多重耐药阴沟肠杆菌β-内酰胺酶编码基因的研究

目的了解北京朝阳医院临床分离的多重耐药阴沟肠杆菌的β-内酰胺酶编码基因. 方法对12株临床分离的多重耐药的阴沟肠杆菌进行琼脂稀释法药敏试验、改良三维试验法和聚合酶链反应克隆测序. 结果 12株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药,改良三维试验法证实同时产生AmpC酶和ESBLs;其中,9株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为SHV-2、SHV-12、CTX-M-3和CTX-M-14型ESBLs;对另外3株进行粗酶等电点测定发现,存在7.89和8.0等电点条带,并被克拉维酸抑制;12株细菌ampD和ampC基因PCR扩增均呈阳性,将6株耐药菌进行ampD基因的克隆测序发现均存在羧基端可疑的突变位点. 结论 12株多重耐药的阴沟肠杆菌同时产生≥1种的ESBLs及高产AmpC酶.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的分子流行病学研究

目的调查北京医院住院患者2002年1～8月期间产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离率、耐药情况和各种基因型的流行分布. 方法采用浓度梯度法对86株大肠埃希菌和132株肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物进行最低抑菌浓度测定,采用酶抑制剂增强法对产ESBLs菌株作确认试验;等电点测定及PCR扩增对产ESBLs菌初步分型,然后对PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型,并做结合实验. 结果肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产ESBLs细菌阳性率分别为18.9%和29.1%, ESBLs菌合计的阳性率为22.9%;ESBLs阳性菌对抗生素的耐药率明显高于ESBLs阴性菌;在50株产ESBLs阳性菌株中,TEM型31株(62%)均为TEM-1型;CTX-M型26株(52%),其中CTX-M-14型11株,CTX-M-22型9株,CTX-M-24型 5株,CTX-M-13型1株;SHV型22株,占44%,SHV-1型5株,SHV-12型5株(4株菌被结合实验结果证实含有SHV-12型基因的质粒),SHV-2a型3株(2株菌含有该型基因质粒),2株SHV-2(2)型(2株菌含有该型基因质粒),未分出亚型7株,同时结合实验也证实不含有SHV型基因的质粒. 结论 CTX-M型和SHV型是北京医院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

老年人呼吸道革兰阴性杆菌感染耐药机制研究

目的研究老年人下呼吸道感染革兰阴性杆菌的耐药机制. 方法分别用双纸片增效确认试验,改良三维法、自动细菌鉴定和药敏系统(VITEK)及Etest方法测定耐药菌产酶情况. 结果 80株肺炎克雷伯菌及143株大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)率分别为27.5%和28.7%,CTX-M基因型分别占48%和56%;124株阴沟肠杆菌中有21.8%单独高产AmpC酶,8.1%单独产ESBLs,3.2%即产ESBLs又高产AmpC酶;71株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中有18.3%产金属β-内酰胺酶. 结论产ESBLs、高产AmpC酶和金属β-内酰胺酶是住院老年患者下呼吸道感染的重要因素.     

阴沟肠杆菌喹诺酮耐药基因的检测

目的调查阴沟肠杆菌中喹诺酮耐药基因（qnr）的携带状况,为临床治疗提供依据。方法使用VITEK-AMS鉴定病原菌;qnr与超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐药基因型检测采用聚合酶链反应（PCR）扩增技术;耐药基因水平传播采用质粒接合试验;根据CLSI指南进行药敏试验。结果55株阴沟肠杆菌中,23.6%qnr基因检测阳性,其中46.2%的qnr基因阳性菌株对环丙沙星敏感,qnr基因阴性菌株的敏感率为83.3%;38.2%的产ESBLs菌株qnr基因检测阳性,2株qnr基因阳性菌株接合试验成功。结论产ESBLs阴沟肠杆菌中常同时携带qnr基因,qnr基因可以进行菌株间的水平传递。     

重症监护病房产ESBLs及AmpC酶阴沟肠杆菌耐药性研究

目的监测医院重症监护病房患者感染阴沟肠杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的耐药性特征。方法采用酶提取物三维试验方法检测AmpC酶和检测ESBLs。结果 86株阴沟肠杆菌中检出单产ESBLs 21株、单产AmpC酶20株、同时产AmpC酶和ESBLs株即SSBL阳性株15株,检出率分别为24.4%、23.3%和17.4%;产酶阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药率大部分均高于既非产Ampc酶又非产ESBLs菌株,即SSBL(-)。结论重症监护病房产AmpC酶和ESBLs的阴沟肠杆菌呈多药耐药,对于产AmpC酶阴沟肠杆菌临床经验用药应首选头孢四代抗菌药物,对于产ESBLs酶阴沟肠杆菌临床经验用药,应首选碳青霉烯类抗菌药物。     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶基因分型及耐药相关性研究

目的了解温州地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的基因分布及其与耐药的相关性。方法对临床分离的常见革兰阴性杆菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌)的产ESBLs菌株进行基因分型,并对其耐药相关性进行分析。结果温州地区产ESBLs大肠埃希菌以携带CTX-M-9中的CTX-M-14型基因为主,且大多合并携带TEM-1型广谱酶基因;肺炎克雷伯菌以CTX-M-14和多亚型的SHV型基因型为主,亦大多合并携带TEM-1型广谱酶基因;在阴沟肠杆菌和鲍氏不动杆菌中ESBLs基因携带变化较大,阴沟肠杆菌中主要携带CTX-M-14、SHV-56型ESBLs基因及TEM-1型广谱酶基因,另外发现主要有VEB-1型基因携带;鲍氏不动杆菌中主要以特异的TEM-128和PER-1型基因携带为主,不同ESBLs基因携带菌株显示了较大的临床耐药差异。结论温州地区的革兰阴性杆菌存在ESBLs基因的多样性分布特征,不同的基因型ESBLs可能与介导不同的β-内酰胺类抗菌药物耐药相关。     

多重耐药阴沟肠杆菌流行状况及耐药机制的研究

目的了解多重耐药阴沟肠杆菌的流行状况及耐药机制。方法58株临床分离的对第三代头孢菌素耐药的阴沟肠杆菌进行琼脂稀释法药敏试验、表型筛选法和聚合酶链反应克隆测序。结果58株阴沟肠杆菌表型筛选结果显示，高产AmpC酶株、单产ESBLs株和同时产AmpC酶和ESBLs株的检出率分别为65．52％、13．79％和20．69％；58株阴沟肠杆菌对多种抗菌药物耐药，高产AmpC酶菌株、单产ESBLs菌株和同时产AmpC酶和ESBLs菌株对头孢哌酮／舒巴坦的敏感率分别为55．3％、87．5％和16．7％；对哌拉西林／他唑巴坦的敏感率分别为28．9％、50％和8．3％；对头孢吡肟的敏感率分别为97．4％、37．5％和16．7％；对亚胺培南的敏感率均为100％；58株临床分离株ESBLs编码基因的测序结果显示，分别为SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-3型ESBLs；58株临床分离株的ampD基因PCR扩增显示49株阳性，占84．48％，对其中8株进行克隆测序，均存在可疑的羧基端突变位点。结论产生AmpC酶和ESBLs是阴沟肠杆菌对头孢菌素耐药的主要机制。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌临床菌株耐药表型与基因型

目的调查临床分离鉴定的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药表型与基因型的关系。方法以琼脂稀释法测定67株产ESBLs肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的MIC;应用PCR扩增其SHV、TEM和CTX-M型β-内酰胺酶编码基因,并对部分菌株的PCR产物进行克隆测序以确定其基因亚型。结果67株除未检出对亚胺培南耐药株外,对其他10种抗菌药物的耐药率在10.45%～89.55%,多重耐药率为74.63%;其中60株对氨基糖苷类耐药株和44株对β-内酰胺类耐药株的交叉耐药率各为88.33%和40.91%;67株SHV、TEM和CTX-M基因型检出率分别为91.04%、56.72%、28.36%,对其中7株克隆测序发现存在SHV-12、TEM-1及CTX-M-3基因亚型。结论67株产ESBLs肺炎克雷伯菌对除亚胺培南以外的大多数抗菌药物,呈现明显的多重耐药和交叉耐药,其中7株同时产SHV-12和CTX-M-3型超广谱和TEM-1型广谱β-内酰胺酶。     

阴沟肠杆菌产AmpC酶及ESBLs的检测与耐药性分析

目的探讨阴沟肠杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药机制,以指导临床合理用药。方法收集2014年3月至2015年4月丹东市中心医院临床分离到的阴沟肠杆菌132株,通过双抑制剂扩散协同试验法检测AmpC酶及ESBLs,采用K-B纸片法进行药敏试验。结果 132株阴沟肠杆菌中,检出产AmpC酶的有34株,占25.76%;产ESBLs的有23株,占17.42%;同时产AmpC酶及ESBLs的有8株,占6.06%。产不同类型β-内酰胺酶其耐药性有所不同,产酶株的耐药性明显高于非产酶株,并呈现多重耐药现象。结论临床应加强对产酶阴沟肠杆菌的检测及耐药性监测,根据不同类型产酶菌株合理选择抗菌药物,以控制医院感染流行。临床治疗多重耐药阴沟肠杆菌感染应首选碳青霉烯类药物。     

产ESBLs大肠埃希菌CTX—M型耐药基因分析

目的了解某院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）在大肠埃希菌中的检出率，并确定其基因型。方法对该院2005年1—12月临床送检标本中分离的197株大肠埃希菌进行ESBLs表型确证试验和接合试验；采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX-M酶基因型，对PCR产物测序并确定其基因型。结果197株大肠埃希菌中有104株（52．79％）ESBLs表型检测阳性，其中91株符合供体菌标准，64株（70．33％）接合成功，接合子均确证产ESBLS。PCR扩增结果示104株产ESBLs大肠埃希菌中共有98株（94．23％）携带CTX-M型基因，其中38株（36．54％）检出blaCTX-M-1组基因，69株（66．35％）检出blaCTX-M-9组基因。64株接合子中共有51株（79．69％）携带CTX-M型基因，其中18株（28．13％）检出blaCTX-M-1组基因，35株（54．69％）检出blaCTX-M-9组基因。基因测序确定存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15、CTX-M-14、CTX-M-27五种基因亚型，以CTX-M-14为主。结论该院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重，产ESBLs细菌基因型以CTX-M-9组的CTX-M-14亚型为主，同时存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15和CTX-M-27等多种亚型。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌临床分离株中β-内酰胺酶(bla)基因流行状况。方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的的表型筛选与确证试验检测ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株bla(TEM)、bla(SHV)、bla(CTX-M)基因,并对PCR阳性产物进行克隆后测序确定其基因亚型。结果 46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,基因检出率分别为bla(TEM)11株,占23.9%;bla(SHV)13株,占28.3%;bla(CTX-M)43株,占93.5%;携带1种bla基因菌株21株,占45.7%;携带2种20株,占43.5%;携带3种3株,占6.5%;全部菌株bla(TEM)基因测序结果均为TEM-1亚型,bla(SHV)基因为SHV-11、12、28亚型;部分菌株bla(CTX-M)基因测序结果为CTX-M-15、24、38亚型。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌中ESBLs基因型以CTX-M型为主,其次为SHV型,部分菌株同时携带广谱β-内酰胺酶基因TEM-1或SHV-11;监测产ESBLs细菌β-内酰胺酶基因流行状况,有助于指导临床合理应用抗生素。     

在中国大陆首次检出CTX-M-15型超广谱β-内酰胺酶基因

目的探讨湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率及其基因型。方法采用多重PCR法对产ESBLs的142株临床分离株进行CTX-M酶基因检测,然后用组特异性引物对CTX-M酶整个开放阅读框进行扩增,PCR产物测序并确定其基因型。结果湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs检出率为76.8%（109/142）;组特异性PCR产物测序后发现有三种基因型,分别为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。结论本地区CTX-M型ESBLs检出率高,共检出三种CTX-M酶基因型,这是在中国大陆首次发现CTX-M-15型ESBLs。     

阴沟肠杆菌感染的临床分布与耐药性

目的了解医院阴沟肠杆菌感染的临床分布及耐药性,以指导临床防治该菌感染。方法采用K-B纸片扩散法检测药物敏感性,通过改良酶提取物头孢西丁和头孢曲松三维试验检测AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。结果2002年1月~2004年12月临床分离阴沟肠杆菌162株,标本来源主要为痰液、尿液、伤口分泌物,分别占62.3%、11.7%、9.9%,73.5%菌株分离自各病区重症监护病病房(ICU);单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs、单产ESBLs检出率分别为19.1%、11.7%、14.2%;产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同时产AmpC酶和ESBLs菌株中尤为严重,全部菌株对亚胺培南敏感。结论临床上阴沟肠杆菌主要引起呼吸道、尿路和各种伤口感染,并多发于ICU患者;AmpC酶和ESBLs在阴沟肠杆菌中广为流行,限制β-内酰胺类抗菌药物的应用是减少产酶株流行的重要措施。     

腹腔和胆道分离产ESBLs大肠埃希菌的酶基因型及分子流行病学检测

目的了解腹腔和胆道分离的大肠埃希菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型及产酶菌株的流行情况。方法采用聚合酶链反应扩增TEM、SHV、CTX-M型ESBLs基因并测序,用ERIC-PCR方法进行分子流行病学研究。结果产ESBLs大肠埃细菌中,TEM-1+CTX-M-1组+CTX-M-8组、CTX-M-2组+CTX-M-9组各3株,CTX-M-8组+CTX-M-9组2株,TEM-1型为5株,TEM-1+CTX-M-1组、TEM-1+CTX-M-8组、TEM-1+CTX-M-9组、CTX-M-2组+CTX-M-9组、CTX-M-8组、SHV-5+TEM-1、SHV-1、TEM-1+CTX-M-2组+CTX-M-8组+CTX-M-9组各1株,4株细菌PCR检测为阴性,3株产CTX-M-2组+CTX-M-9菌株中,两株ERIC-PCR谱型相近。结论腹腔和胆道分离的大肠埃希菌中,ESBLs基因型以CTX-M型为主;少数产酶菌株间存在克隆传播现象。