制备抗人C_4血清的一种简易方法

用超剂量的混合人新鲜血清免疫豚鼠,制得抗C_4血清,用经DEAE—纤维素层析除去C_4成分的人血清作固相或液相吸收,可除去杂抗体。所得抗血清经免疫电泳及美国Mils公司抗C_4血清鉴定证实。8只豚鼠所得抗体单向免疫扩散效价在1:16～1:64间,可满足临床测定要求。     

人血清C4抗体制成

我院传染病学教研室用豚鼠红细胞吸附抗C_4-C_4复合物,然后免疫豚鼠,制备出入C_4抗体。经疫免电泳和EAC_(14)凝集反应鉴定,证     

两种方法提取异种C_(lq)活性的比较

采用优球蛋白沉淀法和 DNA 沉淀法从人、猪、兔、豚鼠血清中提取 C_(lq)。发现除 DNA法的提取量略低于优球蛋白法外,两法所得 C_(lq)的生物学活性大致相同.所用的4种血清以豚鼠血清中 C_(lq)的含量最高;用间接乳凝试验检测,人 C_(lq)的结合活性最高,豚鼠 C_(lq)次之;用固相 C_(lq)结合-ELISA 法检测,豚鼠 C_(lq)的灵敏度最高,人 C_(lq)的灵敏度最低,这可能是人 C_(lq)中污染了 IgG 所致.说明异种 C_(lq)可以替代人 C_(lq)检测人循环免疫复合物.     

自制多巴胺抗体的特异性与敏感性

作者用多巴胺-牛血清白蛋白复合物作为免疫原.免疫新西兰大白兔,成功地制备了抗多巴胺抗血清,用ABC免疫组织化学法,在经Bouin液固定的豚鼠消化道常规石蜡切片上检测,抗血清的效价为1:1000-1:2000,替代试验、吸收试验和交叉吸收试验证明,抗血清所显示的阳性染色为多巴胺抗体与组织中多巴胺的特     

人补体C_4抗血清的制备与血浆C_4活化的检测

补体C_4除在正统途径活化过程中形成C_3转化酶的重要作用和有过敏毒素性质的C_4a分段外,其它方面的机理还不清楚,但其活化的可能重要意义已为人们所注意.为了探讨C_4活化的病理意义,我们也纯化了人血清C_4并成功的制备了人C_4抗血清以用来分析C_4及其活化分段。 国外自从1963年Muller-Eberhand纯化C_4以来,分离方法虽经各方不断改进,但为我们条件所限,沿用仍感困难。我们的改良方法主要是综合Muller-Eberhard,Bolotin及Lachman等人的方法而成,而且能够获得较纯和有活性的C_4。具体是从180ml多份混合血清以pH7.0,0.025mol/L Tris缓冲液     

白三烯衍生物 C_4,D_4和 E_4对人和豚鼠心脏实验标本的作用

近来了解到慢反应物质-A 系由白三烯(Leukotrienes LT)衍生物 C_4,D_4及 E_4所组成,并已合成制备其纯品。本实验用该纯制品研究它们的心脏药理作用以了解它们在过敏性休克反应时引起心功能障碍的机制。白三烯 C_4,D_4,E_4均能引起豚鼠持久的,剂量相关的收缩力和冠脉血流量下降,效应强度依次为 LTD_4>C_4>E_4。LT C_4和 D_4的作用可被慢反应物质拮抗剂 FPL55712所拮抗。其负性肌力作用不象是继发于     

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶多克隆抗体的制备

目的：制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶（NRDR）多克隆抗体。方法：应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果：免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1：2000时检测极限为160rig蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论：获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好。为NRDR的进一步研究打下基础。     

使用小剂量胰岛素和hCG制备高灵敏度抗血清

本文报告一种使用小剂量胰岛素和人绒毛膜促性腺激素(hCG)简单、快速制备高灵敏度抗血清的方法。免疫原与Freund’s完全佐剂相混合,三只豚鼠和三只新西兰兔分别皮内注射0.1mg胰岛素和hCG;首次免疫后40天和50天时再按首次量接种胰岛素和hCG,三次免疫的动物全部产生适用于胰岛素和hCG高灵敏度酶免疫测定的抗血清。使用最佳抗血清,胰岛素和hCG最小测定值分别达0.03μU/管和0.03mU/管。本方法也适于用其它昂贵抗原制备高灵敏度抗血清。     

小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备

目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4 000;Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应;免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应。结论所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究。     

血浆补体C_3活化的简捷敏感检测法

补体系统的活化主要有正统及旁路两个途径。这两个途径相交于C_3阶段。因此C_3的活化可以考虑是总补体系统活化的反映,其检测乃具有临床诊断与治疗以及理论上重要的参考价值。目前尚无较为理想的检测方法。有人应用交叉免疫电泳法及能够同时沉淀C_3及其活化多肽分段的抗血清来测定C_3c或C_3d分段做为监测补体活化的指标。但此项技术每次测的样品不多,抗血清耗量大,操作繁杂,需时久,定量的准确性不够理想,因而很难普及。近几年Brandslund等(1981),Bernowicz等(1983)相继提出了优于交     

黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。     

酶联免疫吸附试验在检测志贺氏菌侵袭力中的应用

笔者采用酶联免疫吸附 (ＥＬＩＳＡ)试验检测志贺氏菌的侵袭力 144株 ,取得较好的效果 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　菌株　 144株志贺氏菌均为从我院门诊及住院患者粪便中培养出来 ,经生化、血清学检验确定的菌株。1.2　豚鼠角膜 (Ｓｅｒｅｎｙ)试验　选重 2 0 0～ 30 0ｇ ,符合医学试验用的豚鼠 ,按文献报道的方法进行实验[1] 。1.3　抗ＶＭＡ(ＶｉｒｕｉｎｃｅＭａｋｅｒＡｎｔｉｇｅｎ)血清的制备　选取豚鼠角膜试验阳性的志贺氏 2ａ菌株免疫家兔制备抗血清。同时将该菌株连续传代 ,获丧失侵袭力的无毒菌株 ,分别用无毒菌株及加热灭…     

豚鼠IgE提取与生物学特性鉴定

本文用马血清免疫豚鼠,获得高IgE含量血清。经饱和硫酸铵盐析,DE-52纤维素层析和Sephadex G-200凝胶过滤连续纯化,提取了豚鼠IgE纯品,并进行了鉴定。提取过程中用反向间接血凝法代替被动皮肤过敏反应(PCA)追踪检测IgE。所获IgE免疫家兔后,产生的抗血清能有效地触发豚鼠耳肿反应。     

乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

目的分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×103和27×103左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。     

抗P37多克隆抗体的制备 纯化与鉴定

目的：用P37融合蛋白免疫动物制备抗血清,为猪鼻支原体感染作用的分子机制提供依据。方法：诱导表达GST-P37蛋白并以其免疫兔制备免疫血清,ELISA法检测抗血清的效价;Western blot-ting检测抗血清特异性。结果：免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗P37抗体,该抗体能检测到P37蛋白的表达。结论：成功制备了抗P37的多克隆抗体,对进一步研究P37的功能提供了一个有用的工具。     

自身置换法测定A14—[~(125)碘]单碘原子碘化胰岛素的比放射活性:着重探讨抗胰岛素抗体的重要性

本文报告了一种筛选合适抗血清的简便方法。用此法对28株豚鼠抗胰岛素抗血清进行了检测,将其中典型的两株,以自身置换法测定了两批A14—[~(125)碘]单碘原子碘化胰岛素的比放射活性。本文着重探讨了抗血清的重要性,并对自身置换法应用中的若干要点进行了讨论。     

抗豚鼠IgG血清制备及豚鼠IgG含量测定

取作者单位培育的封闭群DHP/ZMU-1豚鼠血清,经3次盐析、2次层析。层析的第2峰洗脱蛋白,经鉴定证明为IgG,已达电泳纯。用该IgG作抗原免疫新西兰兔,制得抗豚鼠IgG血清,其特异性符合要求,效价1:16,可供实验用。用制备的抗血清,测得体重为200～250g的普通级豚鼠的血清IgG含量为3.88±1.33mg/ml(n=88),正常值范围:2.20～6.83mg/ml。     

人神经元特异性烯醇化酶蛋白表达及抗体制备

目的克隆和表达人的神经元特异性烯醇化酶(HuNSE)基因,制备HuNSE多克隆抗体,以期用于朊病毒病及相关疾病的临床诊断。方法经RT-PCR扩增HuNSE基因和测序验证后,将其克隆于原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中诱导表达HuNSE蛋白,蛋白经Ni-NTA亲和纯化后,免疫兔子,所制备的抗血清用ELISA、Westernblotting和免疫组化鉴定。结果所表达的HuNSE蛋白相对分子质量约为22000,以其为抗原制备的HuNSE特异性抗血清具有良好的免疫反应性。Westernblotting和免疫组化结果显示抗血清可识别重组和不同哺乳动物脑组织中的NSE蛋白。结论NSE基因在大肠杆菌中获得了高效表达,所制备的NSE特异性抗血清可用于朊病毒病及其他神经退行性疾病的诊断和研究。     

犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

目的: 制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法: 以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21 后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG) 诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果: 成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1:400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。 结论: 本研究利用原核表达的MVC GST-NP1 融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。     

正常人血清补体C_3分离提纯与兔抗人C_3血清的制备

本文报告利用菊糖从正常人血清中吸附补体C_3,再将菊糖C_3复合物免疫家兔,制备免抗人C_3血清。免疫方法是用活卡介苗代替死卡介苗接种家兔,作为基础免疫,活化免疫系统,然后用微量菊糖C_3复合物加弗氏完全佐剂进行皮下、肌肉与淋巴结内多点直接注射。只免疫两次,即获得较高效价的抗C_3血清。既缩短了免疫过程,也节约抗原用量。