分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用

目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。     

原核细胞中不溶性重组蛋白的提取

大肠杆菌中外源蛋白的表达有时以不溶性形式存在，提取困难，本文用４０ｍｍｏｌＮａＯＨ提取经超声洗涤后的不溶性单链抗体蛋白，提取率及纯度均分别达到８０％以上。提取的单链抗体经变性、复性处理后仍具有特异结合抗原的活性。     

乳腺癌患者血清HER-2/neu胞外域的临床意义

乳腺癌患者血清HER-2/neu胞外域(ECD)水平升高与预后差指标如总生存期、无疾病生存期短有关,对激素治疗和某些化疗制剂反应差,但对Herceptin单独或与化疗制剂联合治疗的反应增强。许多研究者赞成检测进展期乳腺癌患者血清HER-2/neuECD水平,因为在转移出现之前常出现血清HER-2/neuECD水平升高,而且血清HER-2/neuECD的变化与疾病临床过程相平行。因此,检测乳腺癌患者血清HER-2/neuECD水平对选择合适的治疗方案及评估预后具有重要意义。     

CD154 cDNA克隆、单克隆抗体制备及特异性鉴定

本研究目的是获得特异性抗人CD15 4单克隆抗体。利用特异引物 ,通过RT PCR从人外周血淋巴细胞中扩增出编码CD15 4分子的cDNA全长 ,将其克隆在谷胱甘肽巯基转移酶 (GST )融合蛋白表达载体pGEX4T 3中 ,转染大肠杆菌Jm10 9经诱导获得GST CD15 4表达。融合蛋白经分离纯化后 ,免疫Balb/c小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,通过ELISA双筛 ,得到 2株抗CD15 4单抗 (1D3和 5H4)。其亚型分别是IgG2a和IgG1。又将CD15 4cDNA全长构建真核表达载体pcDNA3 CD15 4,并转染COS细胞 ,以G418筛选后 ,经RT PCR结果证实pcDNA3 CD15 4已成功转染COS细胞。所获单抗对转染CD15 4的COS细胞和刺激活化的人淋巴细胞有特异性结合反应 ,为进一步研究单抗功能奠定了实验基础。     

P53融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的 为研制出能特异与Ｐ＾５３结合的单克隆抗体,使对Ｐ＾５３的检测得到更为广泛的应用。方法 用ＰＣＲ技术扩增编码人Ｐ＾５３Ｎ－端１８０个氨基酸的ＤＮＡ片段并将其克隆在谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）表达质粒Ｐ＾ＧＥＸ－２Ｔ中。用该重组质粒转化大肠杆菌ＪＭ１０９,并经异丙基β－Ｄ硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导产生Ｐ＾５３－ＧＳＴ融合蛋白。用Ｐ＾５３－ＧＳＴ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。常规细胞融合,间接酶联免疫吸附试     

经免疫重建制备的抗胃癌单克隆抗体A12

单克隆抗体(McAb)做为载体在定位诊断及导向治疗应用研究中至关重要。理想的McAb应能与绝大多数靶细胞呈阳性反应,以期减少相应抗原异质表达对靶向治疗的不利影响,同时与正常组织应较少反应,以减少非特异分布和副反应。本文采用SY86B人胃癌裸鼠模型及外源性BALB/c脾细胞免     

SNCG 基因的研究进展

synucleinγ(SNCG)，又称为BCSG1(breast cancer specific gene1)或persyn，属于synuclein家庭成员，该家族有3个成员，分别为α—synuclein、β—synuclein和γ—synuclein。近年来的研究发现，SNCG的表达与乳腺癌细胞的生长、浸润、转移和预后有关，该基因在乳腺癌中过度表达，其多拷贝的性质导致肿瘤易转移和临床预后较差。最近发现SNCG与卵巢癌关系密切。     

抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。     

应用噬菌体随机肽库筛选结肠癌患者血清中的肿瘤标记物的研究

目的用噬菌体随机呔库技术对结肠癌病人血清进行差异性筛选。以获得特异性的肿瘤标志物。方法用噬菌体随机十二肽库与结肠癌病人血清和正常人血清进行淘选．经过几轮吸附和洗脱得到重组噬菌体库。采用ELISA方法进行单克隆鉴定。挑选20个阳性范隆测序获得相同的序列：19B（GSMSRYVRWYIP）。人工合成小肽19B的寡核苷酸序列，并将其与原核表达载体PGEX-4T—I连接。转化大肠杆菌BI-21（DF3），诱导融合蛋白的表达。以Glutathione Sepharose 4B进行纯化。结果用纯化的蛋白包被抗原板检测24例正常人血清和24例结肠癌病人的血清．证实小肽在正常人血清和结肠癌病人血清间存在差异。结论小肽19B有可能作为检测结肠癌的生物标志物。