普罗布考抑制过氧化氢刺激大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制

目的研究普罗布考抑制过氧化氢促大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制。方法采用MTT3、H-胸腺嘧啶核苷掺入法、流式细胞术和逆转录聚合酶链反应观察过氧化氢刺激条件下普罗布考对血管平滑肌细胞细胞周期、DNA合成、细胞增殖和凋亡的影响。结果普罗布考抑制过氧化氢刺激血管平滑肌细胞增殖和DNA合成。与过氧化氢组比较,普罗布考 过氧化氢组细胞计数、吸光度值和3H-胸腺嘧啶核苷掺入量分别下降了46.9%、45.0%和39.5%(P<0.05)。普罗布考通过使血管平滑肌细胞生长停滞在G0/G1期抑制过氧化氢刺激细胞增殖。过氧化氢使细胞外信号调节激酶1 mRNA相对表达量增加近6倍,丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶1 mRNA相对表达量下降了82.2%。普罗布考抑制细胞外信号调节蛋白激酶1 mRNA的表达,增强丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶1 mRNA的表达。普罗布考诱导过氧化氢刺激条件下血管平滑肌细胞凋亡。结论普罗布考通过下调细胞外信号调节蛋白激酶1 mRNA的表达抑制细胞周期运转和诱导血管平滑肌细胞凋亡两种机制抑制过氧化氢刺激血管平滑肌细胞增殖。     

天花粉蛋白通过下调p-ERK及CyclinD1表达抑制PC3细胞增殖

目的探讨天花粉蛋白(TCS)体外对前列腺癌细胞(PC3)生长的抑制作用及可能机制。方法采用噻唑蓝(MTT)检测TCS对PC3细胞的抑制作用。流式细胞术(FCM)检测TCS对PC3细胞周期的影响,Western印迹检测TCS对ERK、p-ERK及细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达的影响。结果 MTT结果显示TCS能有效抑制PC3细胞的生长,具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测发现TCS能够将PC3细胞阻滞于G1期,Western印迹检测TCS能抑制ERK磷酸化及细胞周期调节蛋白Cyclin D1的表达。结论 TCS对PC3细胞的增殖具有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)细胞增殖信号通路及降低Cyclin D1表达,从而诱导细胞发生G1期阻滞有关。     

普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达

目的观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1mRNA水平和蛋白的表达。结果用氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1mRNA水平呈时序上调;用50μmol/L普罗布考预处理细胞4h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调。结论普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达。     

大黄素对人血管平滑肌细胞周期蛋白D1表达的影响

目的　观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和细胞周期蛋白D1 (CyclinD1 )表达的影响 ,探讨大黄素在药物置入物 (涂层支架 )上应用的可能性。方法　取对数增长期的平滑肌细胞 ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围 ,求出IC50 并干预细胞。然后分别用流式细胞仪和Western blot法进行细胞周期时相和CyclinD1表达的测定。结果　与对照组比较 ,IC50 时药物组G0 /G1 期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降 ,CyclinD1表达高峰延迟、表达量下调 ,细胞周期受阻于G0 /G1 期。结论　大黄素可以通过下调CyclinD1表达 ,阻滞细胞周期的进程 ,是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物。     

PHLPP1对结直肠癌细胞生长抑制及细胞周期阻滞的作用

目的探讨PHLPP1对结直肠癌细胞生长和细胞周期的影响。方法以荧光定量PCR和Western印迹方法检测结直肠癌细胞HT29、Lovo、SW480和人正常结肠上皮细胞FHC中PHLPP1表达水平。在结直肠癌细胞中转染pcDNA3.1-PHLPP1,筛选稳定转染的细胞株用荧光定量PCR和Western印迹方法测定细胞中PHLPP1水平。MTT测定结直肠癌细胞增殖情况,PI单染法测定结直肠癌细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测结直肠癌细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞周期依赖性蛋白激酶(Cdk)4和凋亡蛋白活化型Caspase-3、活化型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)表达水平。结果 PHLPP1表达水平由高到低依次为:FHCSW480HT29Lovo,选用Lovo细胞做后续实验。pcDNA3.1-PHLPP1转染可以上调结直肠癌细胞中PHLPP1表达水平。高表达PHLPP1的结直肠癌细胞的增殖能力降低,细胞G0/G1期比例升高,细胞中CyclinD1、Cdk4蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3、活化型Caspase-9蛋白水平也升高。结论 PHLPP1在结直肠癌细胞中表达下调,上调其表达可以将结直肠癌细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导结直肠癌细胞凋亡,降低结直肠癌细胞增殖能力。     

氧化苦参碱对人结肠癌细胞株SW1116细胞周期通路相关调控因子的影响

背景：氧化苦参碱为中药苦参的主要有效成分，研究显示其对结肠癌细胞具有杀伤作用。目的：观察氧化苦参碱对人结肠癌细胞株SW1116细胞周期通路相关调控因子的影响，阐明其抗结肠癌作用的分子机制。方法：分别以2、3、4mg／m1氧化苦参碱干预SW1116细胞24h或48h，以流式细胞仪检测细胞周期，以逆转录聚合酶链反应（RTPCR）和蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白（cyclin）D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）、CDK抑制剂p53、核转录岗子E2F1和S期激酶相关蛋白2（Skp2）mRNA和蛋白水平的表达。结果：氧化苦参碱干预可使SW1116细胞周期阻滞于G0／G1期，cyc1inD1、CDK4、E2F1和Skp2mRNA和蛋白表达显著下降，p53mRNA和蛋白表达显著上升，作用呈剂量和时间依赖性（P〈0．05）。结论：氧化苦参碱可通过影响细胞周期相关通路以抑制人结肠癌细胞增殖。     

丹参素对胃癌MGC803细胞周期的影响及凋亡诱导作用

目的研究丹参素的体外抗肿瘤细胞增殖作用及其分子机制。方法 MTT法检测丹参素对人肿瘤细胞的抗增殖作用,流式细胞术检测细胞周期分布的改变及细胞凋亡,Western blot检测细胞周期素CyclinB1蛋白的表达,比色法测定Caspase-3和Caspase-6的活性。结果丹参素可诱导MGC803细胞出现G2/M期阻滞并诱导细胞凋亡。细胞中CyclinB1蛋白表达下调,Caspase-3和Caspase-6的活性显著升高。结论丹参素具有抗肿瘤细胞增殖作用,通过抑制细胞周期素CyclinB1表达诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。     

氧化型脂蛋白诱导血管平滑肌细胞表达单核细胞趋化蛋白-1

为了解脂蛋白对平滑肌细胞的单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达的影响，在牛主动脉平滑肌细胞培养基中分别加入低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和氧化型极低密度脂蛋白，培养24h，用异硫氰酸胍法提取细胞的总RNA，用γ-32P末端标记的单核细胞趋化蛋白-1的寡核苷酸探针进行狭缝杂交分析，检测平滑肌细胞的单核细胞趋化蛋白-1mRNA的表达。同时用夹心酶联免疫吸附试验检测条件培养基中单核细胞趋化蛋白-1的蛋白含量。结果发现。培养的牛主动脉平滑肌细胞能表达单核细胞趋化蛋白-1mRNA及蛋白，氧化型低密度脂蛋白和氧化型极低密度脂蛋白使其单核细胞趋化蛋白-1mRNA的表达明显增强，同时也使其条件培养基中单核细胞趋化蛋白-1的蛋白水平增加，而低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白仅使平滑肌细胞中单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白的表达轻度增加。提示氧化型低密度脂蛋白和氧化型极低密度脂蛋白能诱导平滑肌细胞表达高水平的单核细胞趋化蛋白-1。     

TAM诱导MA782细胞凋亡及其对Cyclin D1、p21/CIP1表达的影响

将TAM体外作用于MA782细胞。采用MTT法检测细胞增殖活性；采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布；采用免疫组化ABC法检测细胞Cyelin D1、p21蛋白表达，并用病理图像分析软件进行半定量分析；采用RT-PCR法检测MA782细胞Cyelin D1 mRNA表达情况。结果显示TAM在体外能明显抑制MA782细胞生长，诱导细胞凋亡。TAM诱导后MA782细胞Cyelin D1 mRNA及蛋白表达下降，而p21蛋白表达上升（P均〈0.01）。认为TAM诱导MA782细胞凋亡的机制可能与其下调Cyelin D1蛋白和mRNA表达及上调p21蛋白表达有关。     

脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中血管细胞粘附分子1表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌血管细胞粘附分子1的影响。方法用脱氢表雄酮(5μmol/L)作用于氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)诱导的体外培养的SD大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫细胞化学、免疫蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应检测其血管细胞粘附分子1蛋白及mRNA的表达。结果当细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白后,血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌明显升高(P<0.05),而同时加入脱氢表雄酮可使血管细胞粘附分子1的分泌降低(P<0.05)。结论脱氢表雄酮能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌,而且可能是脱氢表雄酮抗动脉粥样硬化的机制之一。     

淫羊藿苷对人肝癌HepG2细胞的作用及其机制研究

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对HepG2肝癌细胞的作用及其可能机制。方法:给人肝癌HepG2细胞施加不同浓度的ICA(0～40μM)培养,用CCK-8法和集落形成试验测定细胞增殖能力,通过流式细胞术分析检测细胞周期进程和细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法分析细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、以及芳烃受体(AHR)蛋白的表达水平。结果:ICA可抑制HepG2细胞的集落形成和细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G0～G1期,并诱导肝癌细胞凋亡。此外,ICA上调AHR蛋白表达,且其对HepG2细胞增殖的影响被AHR拮抗剂CH223191抑制。结论:ICA可能通过激活AHR信号抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和诱导细胞周期阻滞于G0～G1期,并诱导细胞凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与信号调节激酶的关系

目的 观察氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与细胞外信号调节激酶活性的关系.方法 50 mg/L 氧化型低密度脂蛋白处理血管平滑肌细胞不同时间,或同时加入25 μmol/L细胞外信号调节激酶信号通路的特异性阻断剂,Western 印迹检测血管平滑肌细胞小凹蛋白1和细胞外信号调节激酶的变化.结果 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白作用细胞24 h后小凹蛋白1的表达明显下降,细胞外信号调节激酶磷酸化活性显著增高,阻断氧化型低密度脂蛋白对细胞外信号调节激酶的激活可显著促进小凹蛋白1的表达.结论 血管平滑肌细胞源性泡沫细胞小凹蛋白1的表达下调与氧化型低密度脂蛋白激活细胞外信号调节激酶及其介导的信号传导密切相关.     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞亲环素A表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞亲环素A表达的影响,以进一步探讨氨氯地平对动脉粥样硬化的作用机制。方法用不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0和10.0μmol/L)预孵育平滑肌细胞1h后,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育,逆转录聚合酶链反应和Western blotting法检测细胞亲环素AmRNA及蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白抑制平滑肌细胞亲环素AmRNA及蛋白的表达,而氨氯地平预处理可上调亲环素A的表达。结论氨氯地平可逆转氧化型低密度脂蛋白抑制平滑肌细胞亲环素A表达的作用。     

氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞磷酸酶PTEN活性的影响

为探讨氧化型低密度脂蛋白促血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号转导机制，将兔血管平滑肌细胞分为对照组、低密度脂蛋白组和氧化型低密度脂蛋白组。以细胞计数和噻唑蓝比色法测定细胞增殖能力，Western blot定量与细胞骨架蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶（PTEN）表达水平，免疫沉淀和特异底物diC16PIP3脱磷酸绿色试剂法检测该磷酸酶活性。实验发现氧化型低密度脂蛋白（50mg/L)可使细胞计数及噻唑蓝比色吸光值分别增加1．78和3．21倍，而低密度脂蛋白（50mg/L)无明显作用。各浓度低密度脂蛋白及氧化型低密度脂蛋白对该磷酸酶蛋白表达水平均无显著影响。氧化型低密度脂蛋白对PTEN活性的抑制在20－50mg/L范围内呈浓度依赖性。时间曲线表现为10min作用最强，并可持续达24h(与对照组比较，均P＜0．01）。结果提示；氧化型低密度脂蛋白可能通过对负性调节蛋白PTEN磷酸酶的凶制而发挥促进血管平滑肌细胞增殖功能。     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响。方法密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度氧化型低密度脂蛋白(分别为5、10及20mg/L)干预48h。MTT法检测氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测氧化型低密度脂蛋白对细胞凋亡率的影响,逆转录聚台酶链反应检测bcl-2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测bcl-2蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性抑制内皮祖细胞增殖,诱导内皮祖细胞凋亡(P<0.01);基础状态下内皮祖细胞表达bcl-2mRNA及蛋白,氧化型低密度脂蛋白处理能抑制其表达,并存在量效关系(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白通过下调bcl-2的表达诱导内皮祖细胞凋亡、抑制内皮祖细胞增殖,这可能影响血管内皮的修复及新生血管的形成。     

姜黄素对血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1和p21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素（curcumin）抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导细胞周期停滞的作用,以及对细胞周期蛋白cyclinD1,p21waf1/cip1表达的影响。方法 采用组织贴块法体外培养大鼠VSMC,MTT法测定姜黄素对VSMC增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期分布,Western印迹法检测cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白的变化。结果 MTT示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMC增殖;30 μmol/L以上浓度姜黄素显著抑制增殖的VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05),G0/G1期增加(P<0.05);30 μmol/L的姜黄素可抑制cyclinD1表达,促进p21waf1/cip1蛋白表达。结论 姜黄素具有明确的抑制VSMC增殖和细胞周期停滞的作用,其与cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白变化有关。     

同型半胱氨酸经由N-甲基-D-天冬氨酸受体-Cyclin D通路诱导血管平滑肌细胞增殖

目的探讨同型半胱氨酸可否经由N-甲基-D-天冬氨酸受体通路诱导血管平滑肌细胞增殖及其可能的终末靶分子。方法以同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞增殖,并合用N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂MK801以观察其对血管平滑肌细胞增殖的影响。应用MTT法检测血管平滑肌细胞增殖;流式细胞术测定细胞周期;逆转录聚合酶链反应检测Cyclin D1 mRNA的表达。结果同型半胱氨酸显著刺激血管平滑肌细胞增殖、促进血管平滑肌细胞从G0/G1向S期转换,并上调Cyclin D1 mRNA的表达。而N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK801同步抑制血管平滑肌细胞增殖及血管平滑肌细胞从G0/G1向S期转换,同时降低Cyclin D1 mRNA的表达,上述效应皆具明显的剂量-效应关系。结论同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞的促增殖效应可能部分是通过N-甲基-D-天冬氨酸受体介导,并最终经由Cyclin D通路实现。     

沉默E盒锌指结合蛋白1对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究沉默E盒锌指结合蛋白(ZEB)1对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-231作为研究对象,用慢病毒LV-ZEB1-siRNA和LV-siRNA control感染细胞,荧光定量PCR和Western印迹检测细胞ZEB1表达水平。MTT法测定乳腺癌细胞增殖能力,流式细胞术分别检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞周期蛋白p27、细胞周期素(cyclin)E和凋亡蛋白激活型Caspase-3(酶切Caspase-3)蛋白水平,提取细胞线粒体和胞质蛋白,Western印迹方法检测细胞色素(Cytochrome)C蛋白表达情况。结果慢病毒LV-ZEB1-siRNA下调乳腺癌细胞中ZEB1 mRNA和蛋白水平,LV-siRNA control对乳腺癌细胞中ZEB1 mRNA和蛋白水平无影响。沉默ZEB1后的乳腺癌细胞增殖能力降低,细胞G0/G1期比例升高,S期比例降低,细胞中p27蛋白水平升高,cyclin E蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,细胞中酶切Caspase-3蛋白水平升高,细胞线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低,胞质中Cytochrome C蛋白水平升高,与未经感染的细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论沉默ZEB1具有抑制乳腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡的作用。     

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌祖细胞增殖和表型的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌祖细胞生物学性状的影响.方法 分离人外周血单个核细胞,用纤粘连蛋白、血小板源性生长因子BB和EGM培养基诱导培养出平滑肌祖细胞,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法鉴定.用分别含终浓度为25、50、100、200 mg/L氧化型低密度脂蛋白的培养基培养平滑肌祖细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果 平滑肌祖细胞呈"峰、谷"样生长,可表达α-平滑肌肌动蛋白和调宁蛋白.4种不同浓度氧化型低密度脂蛋白组细胞增殖能力均高于对照组(P<0.05),当氧化型低密度脂蛋白为50 mg/L时细胞增殖能力最强,氧化型低密度脂蛋白组细胞内α-平滑肌肌动蛋白的表达明显弱于对照组.结论 氧化型低密度脂蛋白可以促进血管平滑肌祖细胞的增殖并减弱其α-平滑肌肌动蛋白的表达.     

Flavopiridol通过调节CDK4/CDK6/cyclinD1复合物表达抑制肝癌细胞增殖

目的研究flavopiridol对肝癌细胞Huh7增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法Flavopiridol处理Huh7细胞后,检测细胞增殖和凋亡,进行细胞周期分析。Westernblot检测flavopiridol对cDK4／cDK6／cyclinD1复合物表达的影响。结果Flavopiridol可显著抑制Huh7细胞增殖;Flavopiridol可剂量依赖性导致Huh7细胞发生凋亡,空白对照组凋亡细胞2．65％,550nmol／L剂量处理组凋亡细胞14．17％;Flavopiridol可剂量依赖性引起Huh7细胞G1期阻滞,空白对照组G1期细胞51．06％,550nmol／L剂量处理组G1期细胞57．53％;Flavopiridol可抑制Huh7细胞Gl期相关的蛋白细胞周期素依赖激酶（CDK）4,CDK6,细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结论Flavopiridol通过抑制肝癌细胞G1期cDK4／cDK6／cyclinD1蛋白复合物表达,引起细胞G1期阻滞并发生凋亡,从而抑制细胞增殖。