缺氧条件下梭曼对PC12细胞的毒性作用

目的：为研究有机磷化合物的细胞毒性及其在缺氧或低氧环境中毒性升高的机理，为高原有机磷中毒的预防和治疗用药提供依据。方法：利用ＭＴＴ比色法、放免技术及荧光分析法测定缺氧条件下梭曼中毒ＰＣ１２细胞存活率、ｃＡＭＰ含量和细胞内游离钙浓度（〔Ｃａ＾２＋〕）ｉ的变化。结果：单纯梭曼中毒组ＰＣ１２细胞存活率无明显改变，缺氧及缺氧中毒细胞胞存活率显著下降；缺氧组、梭曼中毒组及缺氧梭曼中毒组的细胞ｃＡＭＰ含量〔Ｃ     

氯化镉对中国地鼠肺细胞的细胞毒性和染色体畸变效应

用ＭＴＴ法研究不同浓度的氯化镉对中国地鼠肺细胞的细胞毒性，结果表明：ＭＴＴ还原量减少，甲生成量与氯化镉浓度、染毒时间之间存在依赖关系，２４和４８小时的半数生长抑制浓度分别为５．７×１０＾－５和１．６６×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ。我们还研究了不同浓度的氯化镉对ＣＨＬ细胞的染色体畸变效应，结果表明：不同浓度氯化镉引起的ＣＨＬ细胞染色体畸变率显著高于阴性对照组，畸变类型主要包括染色体断裂、易位、多倍体等。畸     

尿粘康酸作为苯内接触剂量的应用

为将尿粘康酸（ＴＴＭＡ）应用于苯接触人群的检测，应用高效液相色谱－紫外检测器系统检测苯接触人群尿ＴＴＭＡ。结果显示，尿ＴＴＭＡ在苯接触人群中有显著增加，随着空气苯浓度的增加，尿ＴＴＭＡ增加显著，显示出良好的相关关系（ｒ＝０．９４０，Ｐ＜０．０５）。当苯接触浓度为均值２．４６２ｍｇ／ｍ３时，接触人群尿ＴＴＭＡ与对照组相比，其差异具有统计学意义。提示，尿ＴＴＭＡ可作为苯接触特异、灵敏的生物检测指标，尤其对于低苯接触。尿ＴＴＭＡ在男女苯接触人群中差异无显著性。甲苯可抑制尿ＴＴＭＡ的形成。应用协方差分析可粗略校正甲苯的混杂作用。     

CT引导下细针穿刺肝癌肿块行肿瘤药敏试验

目的：介绍肝穿刺取材行细胞扩增再以ＭＴＴ法进行肿瘤药敏试验。材料和方法：３０例原发性肝癌患者，ＣＴ引导下细针穿刺肝癌肿块，取材行细胞扩增，按处方推荐剂量血药浓度用ＭＴＴ法行药敏试验，２１例成功。结论：以肝穿刺标本行肿瘤块药敏试验是简便、可行的，值得推广     

预热对K562细胞肿瘤坏死因子α敏感性的影响

为探讨预热对肿瘤细胞肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）敏感性的影响及其机理,将白血病患者胸腔渗出细胞系（Ｋ５６２细胞）在４０℃预热不同时间（０,３０,６０,９０,１２３０,１５０和１８０ｍｉｎ）,使细胞热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）高表达;然后将预热６０ｍｉｎ细胞和未预热细胞分别暴露于５０,１００,２００和４００Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦ－α１６小时,用ＭＴＴ比色法检测细胞活力。保持ＴＮＦ－α浓度为１００Ｕ／ｍｌ,     

嗜银蛋白在矽肺纤维化过程中的意义

目的探索ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ１细胞（具有肺泡巨噬细胞特性的人血单核细胞株）上清液对中国仓鼠肺成纤维（ＣＨＬ）细胞核仁组成区相关的嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）形成及其增殖的关系。方法通过５个系列浓度（０、５０、１００、２００和５００μｇ／ｍｌ）的ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ１细胞培养上清液作用于ＣＨＬ细胞,采用综合改良ＡｇＮＯＲｓ染色技术,观察其ＡｇＮＯＲｓ形成并计数;四唑盐（ＭＴＴ）比色法检测ＣＨＬ细胞的增殖。结果随ＳｉＯ２浓度增大,ＣＨＬ细胞ＡｇＮＯＲｓ颗粒均数、颗粒分散度以及ＭＴＴ分析Ａ５７０ｎｍ值均相应增大,呈良好的剂量反应关系,并和ＳｉＯ２尘的肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）的细胞毒性指数呈高度负相关（ｒ＝－０．９６８,Ｐ＜０．０１）。结论ＳｉＯ２刺激的ＴＨＰ１细胞上清液可以引起肺成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ含量的改变,并与成纤维细胞的增殖和ＳｉＯ２尘ＰＡＭ细胞毒性相一致。     

煤烟致大鼠肺细胞氧化应激损伤的机制探讨

目的：探讨煤烟导致细胞体系氧化应激损伤的机制。方法：以Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和甘露醇等不同作用位点的抗氧化剂作为实验干预手段，采用ＭＴＴ比色法和溴乙锭荧光法观察煤烟所致细胞毒性和肺细胞ＤＮＡ交联形成作用。结果Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡ）可以有效地降低煤烟气致的细胞毒性和细胞ＤＮＡ交联形成作用；而甘露醇却没有观察到上述作用。结论煤烟在细胞内经代谢活化后产生的某些代谢产物可以降低氏内谷胱甘肽含量，引起     

镧对小鼠皮层细胞内游离钙和代谢活力的影响

目的探讨镧离子对神经细胞内游离钙和代谢活力的影响。方法测定Ｆｕｒａ２负载的小鼠皮层单个细胞的钙荧光比值,ＭＴＴ比色法测定小鼠皮层培养细胞的代谢活力。结果０．５～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ氯化镧不影响皮层细胞的静息荧光比值,但明显拮抗谷氨酸和地塞米松及胞外高钾诱发的荧光比值增加;３．０ｍｍｏｌ／Ｌ氯化镧直接升高皮层细胞的钙荧光比值,并加剧谷氨酸引起皮层细胞代谢活力的抑制。结论皮层细胞内钙受不同浓度镧暴露的影响,高浓度镧可直接干扰皮层细胞钙稳态并加剧兴奋性神经毒性损伤     

噻唑兰比色法判断六价铬细胞毒性及增殖毒性

采用噻唑兰（ＭＴＴ）比色法判断重铬酸钾对人胚肺（ＨＥＬ）细胞的毒性及对其增殖抑制的影响，以０～８０μｍｏｌ／Ｌ重铬酸钾分别染毒３，６，２４小时，及终止染毒后继续培养２４小时，结果表明重铬酸钾的细胞毒性及增殖毒性，均有良好的剂量效应和时间效应关系，比较重铬酸钾细胞生物学效应时，在低剂量（≤１０μｍｏｌ／Ｌ）范围，采用细胞增殖抑制率为方法较好；在中高剂量（〉１０μｍｏｌ／Ｌ）时，只能用存活率观察，但染     

SiO2刺激THP—1上清液引起早期矽结节样病变

目的：探索ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ－１细胞（具有肺泡巨噬细胞特性的人血单核细胞株）上清液是否可引起大鼠的矽肺样病变。方法：用ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ－１细胞培养上清液经非暴露式气管内注入,０．５ｍｌ／次,１次／周,共４次,末次注射后１周处死,取肺脏常规切片,Ｈ．Ｅ染色,镜下观察病理变化,并通过５个系列浓度（０、５０、１００、２００和５００μｇ／ｍｌ）的ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ－１细胞培养上清液作用于ＣＨＬ细胞（中国仓鼠肺成纤维细胞）,采用四唑盐（ＭＴＴ）比色法检测ＣＨＬ细胞的增殖。结果：ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ－１细胞培养上清液可引起大鼠肺内早期矽结节样病变。经ＭＴＴ分析,ＣＨＬ细胞增殖活性随着ＳｉＯ２剂量的增大而逐渐增强,呈剂量－效应关系。结论：ＳｉＯ２刺激的ＴＨＰ－１细胞上清液在体内可引起早期矽结节样病变,在体外可以引起肺成纤维细胞增殖     

DNA聚合酶β对氢醌诱导的小鼠成纤维细胞遗传毒性的影响

目的探讨DNA聚合酶β(polβ)的表达水平在氢醌(HQ)遗传毒性中的作用。方法以polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)及polβ高表达型(polβoe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色法检测HQ对3种细胞的毒性效应;2’,7’-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)法检测不同浓度HQ染毒后细胞内活性氧(ROS)的含量;彗星试验分析HQ诱导的3种细胞的DNA损伤及修复效应的差异;体外微核试验检测3种细胞微核率。结果随着HQ浓度的增加,3种细胞的存活率均下降,IC50以polβoe细胞最高,polβ+/+细胞次之,polβ-/-细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05);3种细胞内ROS水平随HQ浓度的增加而上升,相同HQ浓度下polβ-/-细胞内ROS水平显著高于polβ+/+细胞(P<0.05);彗星试验显示HQ作用后3种细胞均有不同程度DNA损伤,在相同HQ染毒剂量下polβ-/-细胞损伤较polβ+/+细胞和polβoe细胞严重,而polβoe细胞损伤最为轻微;损伤修复效应显示polβoe细胞修复最快,polβ-/-细胞更不易修复;HQ可诱导3种细胞微核率增加,在相同HQ作用剂量下polβ-/-细胞的微核率最高,polβ+/+细胞次之,polβoe细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HQ可诱导细胞内ROS的产生,从而导致DNA和染色体水平的氧化损伤,表现出其遗传毒效应,polβ可以提高细胞应对氧化损伤的能力,从而对HQ的遗传毒性效应起到一定的保护作用。     

ShRNA-mediated Ku80 gene silencing inhibits cell proliferation and sensitizes to gamma-radiation and mitomycin C-induced apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma lines

To investigate the effects of Ku80 depletion on cell growth and sensitization to gamma-radiation and MMC-induced apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma lines. Six human carcinoma cell lines (LNcaP, K562, MDA-MB-231, MCF-7, EC9706, and K150) and normal HEK293 cell line were examined for basal levels of Ku80 protein by western blotting analysis. The suppression of Ku80 expression was performed using vector-based shRNA in EC9706 cells. Cell proliferation was determined with MTT assay and colony formation assay and tumorigenicity in a xenograft model in vitro and in vivo. Sensitivity of EC9706 cells treated with shRNA vector to gamma-radiation and MMC was determined with colony formation assay and MTT assay. The cell cycle distribution was determined by Flow cytometry. Apoptosis induced by gamma-radiation and MMC was analyzed using GENMED-TUNEL FACS kit. Ku80 showed higher basal levels in six carcinoma cell lines than in HEK293. The suppression of Ku80 expression decreased cellular proliferation, colony formation and inhibited tumorigenicity in a xenograft model. Furthermore, it sensitized apoptosis of the cancer cells induced by gamma-radiation and MMC. Ku80 plays an important role not only in tumorigenesis but also in radiation resistance and chemotherapy resistance in esophageal cancer cells. Hence Ku80 may serve as a promising therapeutic target, particularly for recurrent esophageal tumors.     

CCK-8法与MTT法检测兔成纤维细胞活性的比较研究

目的：探讨CCK-8法和MTT法检测兔成纤维细胞活性的最佳实验条件,并比较其优略。方法;以传至第3代的兔成纤维细胞为研究对象,分别用CCK-8法和MTT法检测兔成纤维细胞的增殖活性。结果：MTT法的最佳检测波长490nm,CCK-8法最佳检测波长为450nm,两法的最佳检测时间均为加入试剂后4h。适宜检测的细胞数量范围为2×10^3／ml-1×10^5／ml个。结论：CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测兔成纤维细胞增殖活性的方法。     

Anti-mutagenic and pro-apoptotic effects of apigenin on human chronic lymphocytic leukemia cells

Diet can play a vital role in cancer prevention. Nowadays the scientists are looking for food materials which can potentially prevent the cancer occurrence. The purpose of this research is to examine anti-mutagenic and apoptotic effects of apigenin in human lymphoma cells. In present study human chronic lymphocytic leukemia (Eheb cell line) were cultured in RPMI 1640 (Sigma), supplemented with 10% fetal calf serum, penicillin-streptomycin, L-glutamine and incubated at 37 oC for 2 days. In addition cancer cell line was treated by and apigenin and cellular vital capacity was determined by MTT assay. Then effect of apigenin in human lymphoma B cells was examined by flow cytometry techniques. The apigenin was subsequently evaluated in terms of anti-mutagenic properties by a standard reverse mutation assay (Ames test). This was performed with histidine auxotroph strain of Salmonella typhimurium (TA100). Thus, it requires histidine from a foreign supply to ensure its growth. The aforementioned strain gives rise to reverted colonies when exposed to sodium azide as a carcinogen substance. During MTT assay, human chronic lymphocytic leukemia revealed to have a meaningful cell death when compared with controls (P<0.01) Apoptosis was induced suitably after 48 hours by flow cytometry assay. In Ames test apigenin prevented the reverted mutations and the hindrance percent of apigenin was 98.17%.These results have revealed apigenin induced apoptosis in human lymphoma B cells in vitro.     

MTT法、CPE观察法用于药物细胞毒性实验的比较与分析

目的比较和分析应用于检测药物细胞毒性的MTT法和CPE观察法。方法用MTT法和目测法分别检测麻黄、黄芩、病毒唑对Hela细胞的毒性,通过SPSS软件计算药物的TC50,用统计方法分析两种方法的差异。结果MTT法和CPE观察法得到的结果差异无统计学意义。结论药物毒性实验中MTT法较目测法更为简单直观。     

西红花酸抗氧化干预脂肪肝细胞的研究

目的探讨西红花酸对于非酒精性脂肪肝细胞的干预作用及其作用机制。方法 :采用油酸和棕榈酸的脂肪酸混合液诱导L02肝细胞株,建立非酒精性脂肪肝模型,并加入一定浓度的西红花酸进行干预。通过观察细胞形态,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞活力,并检测细胞内三酰甘油(TG)含量,以及细胞内氧化还原指标包括谷胱甘肽(GSH)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平,以反映西红花酸对脂肪肝细胞模型的干预作用。结果使用西红花酸后脂肪肝细胞中TG含量降低,细胞中脂质沉积有效缓解,ROS、MDA水平呈明显下降,且NADPH,GSH,SOD等抗氧化系统指标明显改善。结论西红花酸通过降低脂肪肝细胞内氧化应激水平可能对脂肪肝防治有一定作用。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞铁死亡影响的研究

目的 探究三氧化二砷是否会诱导肝癌细胞铁死亡,并比较Alamar blue 法和MTT法在肝癌细胞铁死亡中检测细胞活力的差异。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,分为对照组、三氧化二砷处理组、公认的铁死亡诱导剂Erastin处理组以及联合铁死亡抑制剂Ferrostatin-1处理组,分别采用倒置生物显微镜观察各组细胞形态及存活情况,采用MTT法和Alamar blue 法检测各组细胞活力,探索三氧化二砷是否可以诱导铁死亡。结果 不同浓度三氧化二砷或Erastin处理后,HepG2细胞出现不同程度的死亡;铁死亡抑制剂Ferrostatin-1可以抑制Erastin诱导的细胞铁死亡,但不能抑制三氧化二砷诱导的细胞死亡;与MTT法相比,Alamar blue 法在检测细胞铁死亡时与显微镜观察结果一致,且各浓度组内检测值标准差较小。结论 三氧化二砷可能不会诱导肝癌细胞铁死亡;Alamar blue 法较MTT法在肝癌HepG2细胞铁死亡后活力检测中有更高的灵敏性,是细胞铁死亡研究中活力检测的首选方法。     

Ad-ING4诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的研究腺病毒介导的ING4基因(简称Ad-ING4)体外对人前列腺癌细胞PC-3的生长抑制作用。方法将携有绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒空载体Ad(简称Ad-GFP)及Ad-ING4分别感染PC-3细胞,RT-PCR检测ING4基因的转录;荧光显微镜观察Ad-ING4对PC-3细胞的细胞毒作用;用MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算生长抑制率;流式细胞仪(FCM)检测Ad-ING4对细胞凋亡的影响;Hoechst 33258核荧光染色检测细胞凋亡的核形态学变化。结果 RT-PCR显示Ad-ING4能在PC-3细胞内转录;MTT结果提示Ad-ING4感染72 h和96 h后对细胞生长抑制率达39.29%和50.00%;FCM检测Ad-ING4感染细胞72 h后凋亡率为76.19%;核荧光染色结果进一步证明Ad-ING4对PC-3细胞可呈现典型的细胞凋亡核形态学改变。结论 Ad-ING4能够明显抑制PC-3细胞的生长,并诱导细胞凋亡。     

低浓度氢醌的细胞毒性及DNA损伤作用

目的了解氢醌(HQ)细胞毒性及DNA损伤作用,探讨HQ遗传毒作用的机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测低浓度HQ对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)作用2 h后,细胞的增殖抑制作用;用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测不同浓度HQ处理V79细胞2 h后DNA的损伤情况,并观察修复2 h和4 h后彗星图像的变化。结果HQ对V79细胞生长产生明显抑制作用,并呈剂量反应关系。单细胞凝胶电泳结果显示,在设置的5个浓度范围内,彗星细胞拖尾率随着浓度的增加而增加,且有统计学意义(P<0.01);在0.405 mmol/L浓度组,尾长、Olive尾矩、彗星矩和尾/头长4个彗星损伤形态学指标随着修复时间的延长而逐渐降低,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论在体外培养条件下,低浓度HQ能明显抑制V79细胞的增殖并呈浓度依赖关系,并能引起DNA损伤,主要是单链断裂,这种损伤部分可自身修复。     

四种细胞毒性试验测定柴油机尾气颗粒物提取物急性毒性的比较

目的比较四种体外细胞毒性试验检测柴油机尾气颗粒物(DEP)提取物急性毒性的能力。方法用浓度分别为5、10、20、40、80和160μg/ml的DEP提取物作用于16HBE细胞,于12、24及48h后,通过MTT法、中性红法、乳酸脱氢酶(LDH)法及蛋白测定法测细胞存活率。结果 MTT法在检测急性毒性方面与其它三种方法相比,染毒12h时就表现出了很高的敏感性。随着染毒时间的增加,MTT法与中性红法的敏感性逐渐提高,染毒24h后与对照组相比,各剂量组细胞存活率明显降低(P<0.05)。LDH法测定DEP提取物染毒24h后细胞存活率有所降低,但继续增加染毒时间,存活率不再发生变化。蛋白法测定染毒12h和24h的细胞存活率,仅高剂量组显著降低,染毒48h后,各剂量组细胞存活率均显著降低。结论四种不同的细胞毒性试验测定结果存在差异,MTT法和中性红法比蛋白法和LDH法更为敏感。结合各试验检测的毒性指标可以看出,DEP提取物主要影响16HBE细胞内各细胞器的功能,如线粒体、溶酶体;对于细胞贴壁的影响和细胞膜损伤程度的影响较弱。