MTT法检测促肝细胞生长素注射液生物活性的研究

应用正交实验的方法优化促肝细胞生长素注射液的MTT法检测活性的条件,采用SPSS 软件对各种影响因素在不同的水平下的结果进行分析,确定最佳的检测条件.其最佳检测条件为：细胞浓度3×10^4个/ml,培养时间72 h,药物浓度0.2 ml/孔,小牛血清含量10%.此方法的活性测定结果与3H-TdR掺入法的测定结果无显著性差异.     

兔角膜上皮细胞短时暴露试验的影响因素

目的观察兔角膜上皮细胞短时暴露试验(short-term exposure test,STE test)的影响因素。方法兔角膜上皮细胞分别按3×10~3和6×10~3细胞/孔的初始密度接种,苯扎氯胺等12种化学物质分别以5%和0.05%剂量对细胞染毒5 min后,采用MTT法和CCK-8法显色,计算细胞存活率,采用传统法和STE积分法对上述化学物质的眼刺激性进行评价。结果以3×10~3细胞/孔和6×10~3细胞/孔两种密度接种的细胞,染毒后细胞存活率结果相关性显著。MTT和CCK-8两种显色法测定的细胞存活率结果相关性显著。传统法和STE积分法两种判定标准对重度眼刺激性物质和轻微眼刺激性物质分级判断结果一致。结论细胞初始接种密度、不同显色方法和结果判定标准是兔角膜上皮细胞短时暴露试验结果的影响因素,可采用3×10~3细胞/孔或6×10~3细胞/孔作为试验初始接种密度,采用CCK-8法测定细胞活性,STE积分法判定受试物对眼的刺激强度。     

三种检测大肠杆菌O157：H7酶免疫传感器的比较

目的比较三种检测E．coli O157：H7的酶免疫传感器性能。方法采用吸附法、分子自组法、电沉积法制备用于检测Ecli O157：H7的酶免疫传感器。通过循环伏安法和恒电位法测定E．coli O157：H7被固定在电极表面引起的电信号改变进行定量分析。结果吸附法、分子自组法、电沉积法在含0．1mol／LPBS（pH7．4）,1mmol／L二甲氨基甲基二茂铁,0．2mmol／L H2O2,30℃的底液中酶免疫传感器的检出限分别为5×10^2CFU／mL,2×10^2CFU／mL,1×10^2CFU／mL,检测线性范围为1×10^3～1×10^5CFU／mL,相关系数R分别为0．970,0．992,0．997。结论电沉积法传感器与前两种方法相比更简单,灵敏度更高。     

临床实验室检查结果解读血常规结果解读（二）

2红细胞计数 红细胞（RBC）计数正常参考值：男性为（4．0～5．5）×10^12／L、女性为（3．5-5．0）×10^12／L、新生儿为（6．0～7．0）×10^12／L。当红细胞〉6．8×10^12／L时，应采取相应的治疗措施；〈3．5×10^12／L为诊断贫血的界限，应继续寻找病因；〈1．5×10^12／L时，应考虑输血。     

污水中吡虫啉含量的高效液相色谱测定法

目的研究建立污染水中的吡虫啉液相色谱分析方法。方法样品经0．45μm滤膜过滤,高效液相色谱仪测定。流动相为乙腈-水（40＋60）,检测波长、270nm。结果最小检出量为6．4×10^-3ng／ml,平均回收率为105．44％,RSD为5．66％,回归曲线Y=7×10^7X,r=0．9991。结论该方法的灵敏度、精密度和准确度,均符合农药残留分析的要求。     

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株增殖及凋亡影响的研究

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株SGC7901增殖和凋亡的影响和机制。方法体外培养的SGC7901细胞与1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HPNCTC11637标准菌株共孵育,分别在24、48、72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测细胞survivin在蛋白水平的表达。结果1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HP菌对SGC7901细胞作用72h的细胞增殖抑制率分别为54．5％、58．9％、67．6％、72．9％。流式细胞仪和TUNEL法检测不同浓度梯度的HP菌处理72h后细胞凋亡率分别为42．51％、45．67％、48．57％、54．61％与49．51％、51．26％、59．41％、62．46。幽门螺杆菌可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达。这些作用均随幽门螺杆菌浓度和作用时间的延长而增强。结论幽门螺杆菌感染可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SGC7901细胞增殖,并促进其凋亡。并且,这种作用呈时间剂量效应。     

培养方式对乳酸菌检出率的影响

目的为了提高乳酸菌的检出率，以保证酸奶的总体质量。方法采用4种培养方式进行实验比较。结果4种培养方式乳酸菌计数分别为：常规倾注法为30×10^7个／ml，双层倾注法为62×10^7个／ml，涂布需氧法为76×10^7个／ml，涂布厌氧胶法为290×10^7个/ml。结论涂布厌氧胶法的检出率最高，并且操作简便，乳酸菌生长良好，可提高产品中的乳酸菌的计数水平。     

乳鼠成纤维细胞在人血清中的存活与增殖的研究

目的：本研究旨在证明人血清直接培养乳鼠成纤维细胞是可行的。方法：将乳鼠成纤维细胞分别在胎牛血清及人血清中培养,通过在显微镜下观察成纤维细胞形态及密度,同时用MTT比色法检测吸光度来对比成纤维细胞在胎牛血清及人血清中的增殖活性。结果：两种实验方法均显示：两组成纤维细胞在第一天的增殖活性无显著性差异,第四天人血清组的成纤维细胞增殖明显比胎牛血清组活跃。结论：乳鼠成纤维细胞在人血清中不仅可以存活,而且有增殖行为。     

磺酰罗丹明B法和噻唑蓝法检测皮肤来源细胞活力比较

目的比较两种细胞活力检测方法 ,即磺酰罗丹明B(SRB)法和噻唑蓝(MTT)法在皮肤来源细胞中的应用。方法选用几种化妆品研究中常用的皮肤来源细胞系,包括角质细胞Ha Ca T、黑色素细胞B16及成纤维细胞BALB/C 3T3,分别应用MTT法和SRB法检测细胞活力,并对两种方法进行比较,包括线性范围、信噪比、变异系数、信号稳定时间等。结果 SRB法的线性范围大于MTT法,变异系数小于MTT法,信号稳定时间比MTT法长。SRB法检测过程中可以暂停,有利于进行批量检测。SRB法可以进行重复检测,如果检测过程中发生意外或者对检测结果存有质疑,可以通过重复检测进行补救。结论在3种皮肤来源细胞系中,使用SRB法检测细胞活力,实验方法灵活、高效,检测结果稳定、精确,可以与MTT法互为补充使用,尤其是在大批量样本检测中具备优势。     

金纳米粒子共振光散射法测金属硫蛋白

[目的]建立并应用金纳米粒子共振光散射（RLS）法,测定人尿样中金属硫蛋白（MTs）的含量。[方法]在pH4．56的B-R缓冲液中,MTs与金纳米粒子结合形成较大聚集体,导致体系RLS增强,于545nm波长处RLS强度与MTs的浓度有线性关系,据此建立测定MTs的新方法。[结果]在最佳实验条件下,在545nm波长处RLS强度与MTs在7．98×10^-9-1．0×10^-7g／mL范围内线性关系良好,其线性回归方程为A／Rts=16．69p-23．09,相关系数r=0．9995,检出限为2．39×10^-9g／mL。[结论]本方法操作简便、快速、仪器设备简单,检出限低,灵敏度高,可用于尿中痕量MTs的测定。     

酒精性痴呆细胞模型的建立

目的：建立Ethanol诱导脑细胞凋亡的细胞模型，探讨酒精性痴呆的发病机制。方法：以PCI2细胞为模型，PCI2细胞常规培养于RPMI-1640培养液中，细胞长至对数生长期，加不同浓度的Ethanol，连续培养12h或24h。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖；台盼蓝染色观察细胞膜完整性；荧光染料Hoechst 33258和PI联染检测细胞死亡形式。结果：Ethanol抑制PCI2细胞增殖并呈浓度依赖关（系P〈0．05）。用1×10^-4mol／L浓度的Ethanol处理细胞24h，凋亡细胞明显增多。结论：Ethanol诱导PCI2细胞凋亡模型成功建立。     

姜黄素对人肺成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)体外生长、细胞周期及凋亡的影响。方法应用CCK-8、Annexin-V/PI、PI流式细胞分析术、免疫印迹法,检测姜黄素对细胞的增殖、凋亡、细胞周期和Bax蛋白表达的影响。结果姜黄素对HLFs的增殖有抑制作用,可促进HLFs的早期凋亡,对细胞周期可产生G2/M期阻滞,增加HLFs的Bax蛋白的表达。结论姜黄素可抑制HLFs的增殖并能诱导其凋亡,其机制可能与细胞的G2/M期阻滞及凋亡相关蛋白的表达增强有关。     

灵芝孢子提取物对Lactacystin致PC12细胞损伤的保护作用

[目的]探讨灵芝孢子提取物对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的保护作用。[方法]体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞活力,annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡。[结果]用不同浓度的灵芝孢子提取物处理PC12细胞时,细胞存活率与对照几乎一致,并未表现出细胞毒性。经20μmol/L的Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比对照组降低,仅为对照组的63.2%。模型组经不同浓度的灵芝孢子提取物预处理后,细胞活力明显提高,其保护作用随浓度升高而升高。Lactacystin诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为48.86%,经灵芝孢子提取物处理后,细胞凋亡率明显降低。[结论Lactacystin能诱PC12细胞凋亡,灵芝孢子提取物能对Lactacystin致PC12细胞损伤有一定的保护作用。     

单细胞凝胶电泳方法评价肿瘤细胞辐射敏感性研究

目的 探讨单细胞凝胶电泳用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性。方法 选取三种不同肿瘤细胞株:肝癌细胞(HepG₂)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7)。采用MTT法检测肿瘤细胞经γ射线照射后的存活分数(SF);单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE)检测肿瘤细胞的DNA断裂水平。结果 MTT法:2Gy、4Gy和8Gy照射后,HepG₂和EC-9706的SF显著低于MCF-7,表明HepG₂和EC-9706细胞具有更高的辐射敏感性。SCGE:三种肿瘤细胞在8Gy照后表现出的辐射敏感性差别最显著。结论 多种生物学指标的综合应用,有希望更加客观准确地评价肿瘤细胞的辐射敏感性。     

浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响

目的:研究不同浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响。方法:采用不同的浸提方法制备了浸提液,以MTT法评价药用卤化丁基橡胶塞浸提液对小鼠成纤维细胞L929活性与增殖的影响。结果:通过不同的浸提方法制备的浸提液,11批中的9批样品体外细胞毒性实验出现了有统计学意义的差异。结论:破坏原有样品的正常形态即改变表面积与体积比对于评价卤化丁基橡胶塞的体外细胞毒性实验(MTT)是有影响的。     

缬沙坦质量分析

目的：建立高效液相色谱法测定缬沙坦原料的含量及有关物质测定方法。方法：以乙腈-水-冰醋酸（500：500：1）为流动相;检测波长为225nm,流速为1．0ml／rain。结果：在线性范围5．0～75．0ug／ml,r=0．9999,平均回收率100．9％（RSD％=0．49％,n=9）结论：该方法专属性好,准确,灵敏,用于缬沙坦含量的测定结果可靠。     

miR-99a对帕金森模型细胞活力及ROS水平的影响

目的:分析miR-99a对帕金森病细胞模型作用。方法:采用Western blotting以及Real-time PCR方法,对miR-99a以及其靶基因FZD5表达水平进行研究。采用CCK-8方法,检测细胞存活力。结果:过表达miR-99a,可将MPP+抑制PC12细胞存活作用明显缓解,该作用是通过调控miR-99a/FZD5轴完成的。结论:miR-99a在帕金森病细胞模型中,可对MPP+导致的PC12细胞存活抑制作用明显缓解,是通过靶向及下调FZD5实现的。     

白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白所致细胞损伤的防护作用

目的探讨白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法白藜芦醇预处理细胞,再加入不同浓度oxLDL,通过噻唑蓝(MTT)实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、TUNEL实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase3)活性测定,观察白藜芦醇对细胞存活率、细胞膜通透性、细胞核及Caspase3活性的影响。结果10mg/LoxLDL组细胞存活率、LDH释放率、TUNEL阳性细胞数、Caspase3活性分别为(62±3)%、(23±3)%、(26±5)%和(0811±0049)mol·min-1·μg-1;10mg/LoxLDL+50μmol/L白藜芦醇组分别为(84±7)%、(13±4)%、(12±4)%和(0553±0048)mol·min-1·μg-1,两组比较差异有统计学意义。结论白藜芦醇具有减轻oxLDL致PC12细胞的毒性作用;对PC12细胞具有神经保护作用。     

中药仙鹤复方水提取物对肝癌H22细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的：观察中药仙鹤复方水提取物（aqueousextract of Xian-he Compound,XHC）对肝癌H22细胞增殖与凋亡的影响度对炎症因子COX-2的影响。方法：栗用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度的H22肝癌细胞增殖情况;Hoechst33342染色观察细胞形态学变化;western blot检测COX-2蛋白质表达;RT-PCR法检测COX-2mRNA水平表达的变化。结果：XHC各剂量组较空白对照组对肝癌H22细胞均有明显的抑制作用,以作用24h后的1．8g／mL XHC组作用最显著,抑制率为71．25％±0．32％;与空白对照组相比,LPS诱导后加1．8g／m LXHC组有较显著的凋亡率．凋亡率由1．91％±0．45％增加至8．53％±0．13％;同样作用条件下与空白对照组及阳性对照组相比COX-2蛋白质及mRNA的表达明显下调。结论：XHC的抑瘤作用与下调COX-22蛋白质及mRNA的表达有密切关系。     

大蒜多糖及其硒化产物抗氧化活性的比较研究

目的比较大蒜多糖与硒化大蒜多糖对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的大鼠嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用。方法用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测PC12细胞的活力;化学比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内和细胞培养液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果硒化大蒜多糖、大蒜多糖500μg/ml及以上剂量组和亚硒酸钠12.50μg/ml及以上剂量组均能有效抑制由H2O2引起的细胞存活率的下降(P<0.01)。硒化大蒜多糖、大蒜多糖2000μg/ml可显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,以及提高SOD活性(P<0.01),表现出良好的抗氧化活性,而硒化大蒜多糖的抗氧化作用更为明显(P<0.05)。结论硒化大蒜多糖对经H2O2诱导损伤的PC12细胞具有保护作用,这种保护作用明显优于大蒜多糖或单纯硒,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。