姜黄素逆转电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化

目的 探讨姜黄素对电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法 用电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化,将其命名为A549R。CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测姜黄素对A549R上皮/间质标志物表达的影响;划痕实验及Transwell实验检测姜黄素对A549R细胞迁移能力的影响。结果 A549R细胞经姜黄素处理后,细胞形态由纺锤形转变为椭圆形上皮形态;E-cadherin表达下调,pan-Keratin表达上调,Vimentin、Twist表达显著下调,N-cadherin表达水平无明显变化;划痕愈合面积随姜黄素浓度的升高而显著下降;A549R细胞迁移能力随姜黄素浓度的升高而显著下降。结论 姜黄素通过下调E-cadherin、Vimentin、Twist的表达,并上调Keratin的表达,从而逆转电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

肿瘤坏死因子-β1通过诱导上皮-间质转化促进人膀胱癌T24细胞株的侵袭

目的:体外实验研究TGF-β1诱导人膀胱癌细胞T24发生上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制。方法:以人膀胱癌细胞T24作为研究对象,使用不同浓度TGF-β1干预24 h,光镜下观察T24细胞形态学变化;分别采用Real time-PCR（RT-PCR）和Western blot 法检测细胞中上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin mRNA 和总蛋白的表达。Transwell小室实验检测细胞的侵袭与迁移潜能。结果:TGF-β1可激活T24细胞的EMT程序,并上调Vimentin mRNA 和蛋白的表达水平和下调E-cadherin mRNA 和蛋白的表达水平。此外,TGF-β1可促进T24细胞体外侵袭潜能,而TGF-β1拮抗剂LY2109761可阻断这一过程。结论:EMT过程的激活参与了TGF-β1介导的人膀胱癌T24细胞的侵袭。     

罗勒多糖抑制TGF-β诱导的A549细胞侵袭运动能力研究

目的 罗勒多糖具有抗肿瘤侵袭转移、化疗增效以及降血糖、降血脂和抗血栓等多种生物活性作用.本研究探讨罗勒多糖对转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)诱导的人肺癌A549细胞侵袭运动能力的抑制作用,揭示罗勒多糖抑制上皮间质转化作用的可能机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,实验分为3组:(1)正常对照组,不加任何处理;(2)模型组,TGF-β5 ng/mL;(3)罗勒多糖组,TGF-β5 ng/mL+罗勒多糖200μg/mL.免疫荧光检测罗勒多糖对E-cadherin、vi-mentin和α-SMA表达的影响,细胞侵袭实验和运动实验检测细胞对人工基底膜的降解和运动能力,细胞划痕实验检测细胞运动能力.结果 与正常对照组比较,模型组细胞vimentin和α-SMA表达增强,E-cadherin表达减弱.罗勒多糖处理后vimentin和α-SMA表达减弱,E-cadherin表达增强.TGF-β可提高细胞降解人工基底膜的能力,单位视野下侵袭至下室的细胞数模型组为69.0±4.3,与正常对照组(42.0±4.30)和罗勒多糖组(37.0±4.41)比较,差异有统计学意义,均P<0.05.TGF-β增强了细胞的侵袭能力,罗勒多糖可以抑制TGF-β诱导的A549细胞侵袭能力.TGF-β使FN趋化的迁移细胞数目增多,单位视野下侵袭至下室的细胞数模型组为95.2±3.83,与正常对照组(69.2±5.11)和罗勒多糖组(68.2±6.18)比较,差异均有统计学意义,均P<0.05.划痕实验显示,TGF-β增强了细胞的迁移能力,罗勒多糖可以抑制TGF-β诱导的A549细胞迁移能力.结论 罗勒多糖能够调节A549细胞上皮间质转化,这可能是其抑制A549细胞的侵袭转移能力的重要机制.     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

下调RAB3C减低上皮间质转化抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨RAB3C表达对非小细胞肺癌细胞A549及NCI-H1299细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:构建siR-RAB3C慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,使用qRT-PCR及Western blotting法验证每种细胞中RAB3C的mRNA及蛋白表达情况。应用Transwell实验及细胞划痕试验检测下调RAB3C后细胞侵袭情况的变化。Western blotting法比较对照组及siR-RAB3C组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达水平。结果:siR-RAB3C转染组细胞RAB3C的mRNA及蛋白表达量均下调。划痕试验结果显示,与对照组细胞相比,siR-RAB3C组细胞迁移率显著减少。Western blotting实验结果显示,下调RAB3C表达促进E-cadherin,抑制N-cadherin及Vimentin蛋白的表达。结论:调控RAB3C表达通过抑制上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549及H1299细胞侵袭转移。     

川芎嗪联合顺铂通过调控PI3K/AKT/mTOR通路对人肺癌A549细胞侵袭能力及线粒体功能的影响

目的：探讨川芎嗪联合顺铂对人肺癌A549细胞侵袭能力及线粒体功能的影响。方法：体外培养人肺癌A549细胞,经顺铂联合川芎嗪干预后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,透射电镜观察线粒体超微结构,JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比,川芎嗪呈剂量依赖性抑制肺癌A549细胞增殖;经高、中、低剂量川芎嗪联合顺铂处理细胞24h后,各组肺癌A549细胞侵袭能力下降,线粒体损伤减轻,膜电位升高,PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达降低,且其效果与剂量呈正相关。结论：川芎嗪联合顺铂可抑制人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力,其可能与改善线粒体功能,影响癌细胞能量代谢有关。     

川芎嗪联合顺铂通过调控PI3K/AKT/mTOR通路对人肺癌A549细胞侵袭能力及线粒体功能的影响

目的：探讨川芎嗪联合顺铂对人肺癌A549细胞侵袭能力及线粒体功能的影响。方法：体外培养人肺癌A549细胞,经顺铂联合川芎嗪干预后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,透射电镜观察线粒体超微结构,JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比,川芎嗪呈剂量依赖性抑制肺癌A549细胞增殖;经高、中、低剂量川芎嗪联合顺铂处理细胞24h后,各组肺癌A549细胞侵袭能力下降,线粒体损伤减轻,膜电位升高,PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达降低,且其效果与剂量呈正相关。结论：川芎嗪联合顺铂可抑制人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力,其可能与改善线粒体功能,影响癌细胞能量代谢有关。     

去泛素化酶USP33对胃癌上皮细胞-间质转化的影响及对癌细胞迁移、侵袭的作用

摘 要：［目的］ 观察去泛素化酶USP33对胃癌上皮细胞-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及细胞迁移侵袭能力的影响,并探究其作用机制。［方法］ qRT-PCR法检测胃癌上皮细胞MGC-803、SGC-7901和人胃黏膜上皮细胞GES-1中去泛素化酶USP33的表达。MGC-803和SGC-7901细胞转染USP33-siRNA沉默USP33基因表达,qRT-PCR检测沉默效率,使用转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路抑制剂SB431542处理沉默USP33后的MGC-803和SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、TGF-β、Smad2和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。［结果］ qRT-PCR检测结果显示,与GES-1细胞比较,MGC-803、SGC-7901细胞中USP33表达水平显著性降低。MTT实验、划痕实验和Transwell实验检测结果显示,USP33基因敲低后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著性提高。Western blot检测结果显示,沉默USP33可使MGC-803和SGC-7901细胞E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、TGF-β、Smad2和α-SMA表达升高,而TGF-β抑制剂SB431542则逆转了这一现象,上述指标差异均有统计学意义（P＜0.05）。［结论］ USP33能够抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT转化,沉默USP33可增加其增殖、迁移和侵袭能力并促进EMT转化过程,其作用机制与抑制TGF-β信号通路的活化有关。     

沉默泛素结合酶E2O对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

  目的  研究泛素结合酶E2O（ubiquitin-conjugating enzyme E2O,UBE2O）蛋白在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。  方法  通过慢病毒介导的shRNA靶向抑制人NSCLC细胞株A549中UBE2O基因的表达,应用CCK-8法、流式细胞术分别检测UBE2O对A549细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,应用Transwell实验检测下调UBE2O表达后对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）两种标志分子E-cadherin蛋白、N-cadherin蛋白和PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达量的变化。  结果  下调UBE2O表达后,A549细胞UBE2O mRNA和蛋白表达均下调（均P < 0.01）,CCK-8实验结果显示沉默UBE2O可以抑制A549的增殖（P < 0.001）,Transwell实验显示下调UBE2O的表达能够抑制A549细胞的迁移、侵袭（均P < 0.001）。Western blot结果表明下调UBE2O的表达可使A549细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高、p-Akt蛋白表达水平下降。  结论  UBE2O蛋白能够促进NSCLC细胞侵袭和迁移,作用机制可能是通过诱导肺癌细胞发生EMT和促进pI3K-Akt信号通路的激活。      

LPS诱导宫颈癌上皮间质转化的作用

目的:探讨LPS在宫颈癌细胞株Hela细胞增殖和上皮间质转化中的作用。方法:体外培养Hela细胞,以LPS(10μg/ml)诱导后,利用MTT法检测细胞的增殖情况。qPCR检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的RNA水平上的表达。Western blot检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白水平上的表达。Transwell检测LPS对Hela细胞迁移能力的影响。结果:在LPS诱导后能够明显的促进Hela细胞的增殖。E-cadherin在RNA和蛋白水平上都明显下降,N-cadherin、Vimentin在RNA和蛋白水平上都明显升高;LPS诱导后,明显促进Hela细胞的迁移能力。结论:LPS能够诱导宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖和上皮间质转化。     

TRPM7通过PI3K/AKT/ERK信号途径影响脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化

目的 探讨沉默M型顺时受体电位通道7（melastatin transient receptor potential channel 7,TRPM7）对脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化的影响及其作用机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7在人正常星形胶质HA1800细胞株以及脑胶质瘤细胞株（U251、U87、U373）中的表达。将U251细胞分为U251组（未转染的U251细胞）、U251/shNC组、U251/shTRPM7组,然后采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7的表达,细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验检测E-cadherin和Vimentin表达情况;Western blot检测PI3K/AKT/ERK信号途径相关蛋白的表达情况。结果 与HA1800细胞比较,TRPM7在脑胶质瘤细胞系中高表达（P<0.05）;沉默TRPM7后,U251细胞中TRPM7表达降低（P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降（P<0.01）;E-cadherin表达增加（P<0.001）,Vimentin表达降低（P<0.01）;PI3K蛋白表达水平下调（P<0.01）,AKT和ERK1/2蛋白磷酸化程度明显降低（P<0.01）。结论 沉默TRPM7可抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力及上皮-间质转化,其作用机制可能与激活PI3K/AKT/ERK信号途径有关。     

TGF-beta1诱导人肺腺癌PC9细胞上皮-间质转化的研究

背景与目的研究表明上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅参与胚胎形成与发育,而且参与肿瘤侵袭转移。此外,人转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂。本研究旨在探讨TGF-β1诱导人肺腺癌PC9细胞发生EMT及其对PI3K/AKT信号通道的影响。方法将体外培养的PC9细胞用不同浓度TGF-β1处理48h,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot和细胞免疫荧光验证EMT相关标记蛋白表达变化。同时,采用Western blot方法检测AKT和P-AKT的表达水平。结果TGF-β1可诱导PC9细胞向间质型细胞形态转化,并上调间质标记蛋白Fibronectin的表达及下调P-AKT的表达。结论TGF-β1可诱导PC9细胞发生EMT,并影响PI3K/AKT信号通道。     

阿托伐他汀调控上皮间质转化抑制结肠癌细胞生长的机制研究

目的:探讨阿托伐他汀调控上皮间质转化（EMT）对人结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的影响。方法:0.1、1、10、100 μmol/L的阿托伐他汀处理SW480细胞24 h、48 h和72 h，MTT检测细胞活力。100 μmol/L的阿托伐他汀处理细胞48 h，Transwell小室检测细胞侵袭能力及迁移能力，Western blotting检测EMT相关蛋白E-cadherin、β-catenin和Twist及PI3K/AKT信号通路PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:随着阿托伐他汀浓度升高，作用时间延长，对SW480细胞活力抑制越明显，各浓度阿托伐他汀组与对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05），同一实验组不同时间点间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，阿托伐他汀组细胞侵袭及迁移能力均明显降低，E-cadherin蛋白表达明显升高，β-catenin、Twist、PI3K和p-AKT蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论:阿托伐他汀可抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移能力，机制可能与抑制EMT及PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2，FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1，以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞，运用划痕愈合实验和Transwell小室实验，检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响，采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05），而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01），且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后，可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05），引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因，且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01），以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比，共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01），其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路，进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

MicroRNA-29a靶向抑制PTEN基因诱导非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨microRNA-29a（miR-29a）及其靶蛋白PTEN在TGF-β1诱导非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用机制。方法:选择A549细胞经终浓度为10 ng/ml TGF-β1诱导48 h后,分为Blank组（不转染任何序列）、阴性对照（negative control,NC）组（转染阴性对照序列）、IN组（转染miR-29a inhibitors）、siRNA组（转染PTEN-siRNA）和IN+siRNA组（共转染miR-29a inhibitors和PTEN-siRNA）。普通显微镜观察各组细胞形态学变化;免疫荧光检测各组细胞中E-cadherin表达水平;qRT-PCR法检测EMT相关因子及PTEN mRNA表达水平;Western blotting法检测转染后EMT相关因子、PTEN、Akt和p-Akt蛋白的表达;划痕实验检测各组细胞迁移能力。构建裸鼠移植瘤模型,观察肿瘤生长,免疫组化检测裸鼠肿瘤组织中PTEN及EMT相关因子蛋白表达水平。结果:A549细胞转染miR-29a inhibitors后TGF-β1诱导细胞的上皮间质转化显著受到抑制,N-cadherin、Vimentin及Slug的mRNA和蛋白表达水平在IN组中显著低于Blank组和NC组,但在siRNA组和IN+siRNA组中显著上调（均P<0.05）。与Blank组和NC组相比,IN组PTEN mRNA和蛋白表达水平明显升高,且p-Akt的表达显著降低,细胞迁移率显著下降,而siRNA组和IN+siRNA组PTEN mRNA和蛋白表达明显降低,p-Akt的表达显著上升,细胞迁移率显著升高（均P<0.05）。裸鼠移植瘤实验结果显示与Blank组和NC组相比,IN组肿瘤生长较慢,重量降低,E-cadherin和PTEN蛋白表达显著升高,N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Slug蛋白表达显著降低（均P<0.05）。结论:TGF-β1能诱导NSCLC细胞发生EMT,且能上调miR-29a并抑制PTEN的表达水平;抑制miR-29a的表达水平可能通过上调靶基因PTEN,促进Akt磷酸化,抑制EMT的发生。     

内质网激动剂调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡

目的 检测内质网应激能否通过PI3K/AKT/mTOR通路对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡产生作用.方法 采用MTT法检测不同浓度衣霉素对人小细胞肺癌NCI-H446的细胞毒性,Annexin V/PI检测药物作用下人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡情况,Western Blot检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达.结果 衣霉素可抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞的活性,且呈时间和浓度依赖性.衣霉素能够激活内质网应激,抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,使PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化下调,诱导细胞凋亡.结论 内质网激动剂能够调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡.     

小白菊内酯对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究小白菊内酯（parthenolide,PTL）对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法:应用0、2.5、5、10、20 μmol/L的PTL处理甲状腺癌TPC-1细胞24 h,CCK-8法检测不同浓度的PTL对TPC-1细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell实验观察PTL对TPC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9、TGF-β、Smad3、p-Smad3蛋白表达水平的变化。结果:CCK-8实验结果表明,PTL可抑制TPC-1细胞的增殖,并呈一定的浓度依赖性;划痕实验和Transwell实验表明,PTL可减弱TPC-1细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting结果显示,PTL可上调E-cadherin的表达量,下调N-cadherin、Vimentin、MMP-9、TGF-β、p-Smad3的表达水平。结论:PTL以浓度依赖的方式抑制甲状腺癌TPC-1细胞增殖;PTL可能通过下调TGF-β的表达和抑制Smad3的磷酸化,逆转上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的发生,从而降低甲状腺癌TPC-1细胞的侵袭、迁移能力。