姜黄素逆转电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化

目的 探讨姜黄素对电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法 用电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化,将其命名为A549R。CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测姜黄素对A549R上皮/间质标志物表达的影响;划痕实验及Transwell实验检测姜黄素对A549R细胞迁移能力的影响。结果 A549R细胞经姜黄素处理后,细胞形态由纺锤形转变为椭圆形上皮形态;E-cadherin表达下调,pan-Keratin表达上调,Vimentin、Twist表达显著下调,N-cadherin表达水平无明显变化;划痕愈合面积随姜黄素浓度的升高而显著下降;A549R细胞迁移能力随姜黄素浓度的升高而显著下降。结论 姜黄素通过下调E-cadherin、Vimentin、Twist的表达,并上调Keratin的表达,从而逆转电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化。     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

IFN-γ通过诱导上皮间质转化增强人乳头状甲状腺癌细胞株的侵袭转移能力

目的:观察IFN-γ对人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1侵袭和转移能力的影响,并探讨上皮间质转化过程（EMT）在其中的作用。方法:采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测IFN-γ对TPC-1侵袭转移能力的影响;实时定量PCR和Western检测EMT标志物E-cadherin,N-cadherin,Vimentin的mRNA水平及蛋白水平变化;免疫荧光检测上述标志物的定位表达。结果:划痕愈合实验和Transwell侵袭实验结果显示:IFN-γ增强了TPC-1的侵袭转移能力（P＜0.05）,实时定量PCR结果显示EMT的上皮标志物E-cadherin的mRNA表达水平明显下降,间质标志物Vimentin的mRNA表达上调,而N-cadherin的mRNA未见明显变化。Western结果显示E-cadherin在IFN-γ作用下表达下调;N-cadherin与Vimenin表达上升;免疫荧光结果与Western结果一致。结论:INF-γ可以通过诱导EMT,促进TPC-1侵袭转移,提示炎性介质IFN-γ可能参与人乳头状甲状腺癌的侵袭转移。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

E-钙黏蛋白在人非小细胞肺癌细胞多西他赛耐药中的作用

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549、H1299、H358、H441多西他赛（docetaxel，DTX）耐药细胞株与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的关系，并初步研究逆转E-cadherin的表达对NSCLC细胞多西他赛耐药性的影响。方法:应用Real-time PCR 和Western blot 方法检测上皮间质转化相关标志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Snail在亲本细胞和多西他赛耐药细胞之间的表达差异；应用慢病毒载体介导构建稳定表达E-cadherin的NSCLC多西他赛耐药细胞；MTS法检测NSCLC细胞多西他赛耐药特性。结果:与A549、H1299、H358、H441四株亲本细胞相比，多西他赛耐药细胞（A549DTX，H1299DTX，H358DTX，H441DTX）形态呈长梭形，呈上皮间质转化（EMT）样改变。多西他赛耐药细胞中E-cadherin表达下调，Vimentin、N-cadherin、Snail表达上调。成功构建了过表达E-cadherin的NSCLC多西他赛耐药细胞。过表达E-cadherin细胞株细胞形态与空载对照细胞株以及亲本耐药细胞株相比呈间质上皮转化(MET)样改变。MTS结果显示四种不同E-cadherin过表达的NSCLC多西他赛耐药细胞对多西他赛的敏感性均强于其亲本耐药细胞和空载对照细胞。结论:NSCLC多西他赛耐药细胞发生EMT样改变，上调E-cadherin能增加NSCLC多西他赛耐药细胞对多西他赛的敏感性。     

CPNE7通过上皮间质转化影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CPNE7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA 从转录水平分析CPNE7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测CPNE7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中的表达,选择表达量相对较高的AGS细胞作为后续实验细胞。通过慢病毒转染AGS细胞敲减CPNE7的表达,根据不同处理分为RNAi-vector组、RNAi-1组、RNAi-2组、RNAi-3组,qRT-PCR、Western blot验证细胞转染效率,选择敲减效率最有效的RNAi-1(实验组)和RNAi-vector(对照组)进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,EdU和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax、Bcl-2)及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果:CPNE7在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P＜0.05)。与正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)相比较,CPNE7在胃癌细胞中明显高表达(P＜0.05),在AGS胃癌细胞中CPNE7相对表达量最高（P＜0.001)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可增加上皮标志物蛋白(E-cadherin)的表达水平(P＜0.01),降低间质标志物蛋白(N-cadherin、Vimentin)的表达水平（P＜0.01)。结论:CPNE7在胃癌组织和细胞中表达上调,敲减CPNE7可通过影响EMT进程抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其可能成为胃癌的潜在分子标志物。     

MicroRNA-100调节mTOR表达对肝癌细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响及机制研究

目的:探讨microRNA-100调节m TOR表达对肝癌细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响并研究其可能的分子机制。方法:通过脂质体介导将microRNA-100模拟物及阴性对照转染Hep G2细胞,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和microRNA-100 mimic(miRNA-100 mimic)组。采用realtime PCR检测转染后细胞中miRNA-100的表达水平,Western blot检测m TOR的表达变化,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Tranwell检测细胞的侵袭能力,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和E-cadherin的表达。结果:过表达miRNA-100通过抑制m TOR的表达抑制肝癌细胞的迁移及侵袭能力,并通过下调肝癌细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin和α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达,阻抑上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的发生。结论:MicroRNA-100可能通过降低m TOR的表达抑制肝癌细胞的转移侵袭能力,并抑制上皮间质转化过程的发生。     

慢病毒介导的RNA干扰沉默KIF14表达对结肠癌细胞生长和转移的影响

目的:探讨慢病毒介导RNA干扰沉默KIF14表达对结肠癌SW480细胞生长和转移的影响。方法:采用脂质体法将构建的慢病毒靶向siRNA-KIF14干扰载体转入SW480细胞后，采用RT-PCR和Western blot检测KIF14 mRNA和蛋白的表达，MTT法、流式细胞仪和Transwell小室实验分别检测SW480细胞增殖、凋亡和侵袭，Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白N-cadherin、E-cadherin和Vimentin的表达。结果:转染SW480细胞后成功下调KIF14 mRNA和蛋白的表达。与未转染细胞相比，下调KIF14的表达可抑制SW480细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化，并促进细胞凋亡（P＜0.05）。结论:下调KIF14表达可抑制结肠癌SW480细胞生长和转移。     

miR-532抑制Sema4C逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗的敏感性

目的:探讨miR-532抑制Sema4C逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用。方法:检测宫颈癌细胞Caski经过沉默Sema4C表达后EMT标志物表达水平；利用Transwell迁移与侵袭实验检测沉默Sema4C表达所引起的宫颈癌细胞Caski迁移与侵袭能力变化；预测Sema4C是miR-532直接的靶基因并用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性；Western blotting及qRT-PCR检测表达miR-532后EMT标志物E-cadherin、Vimentin、Snail的蛋白表达水平及mRNA表达水平；利用Transwell迁移与侵袭实验检测Caski细胞经过转染miR-532 mimic后迁移、侵袭能力的变化；CCK8检测过表达 miR-532及沉默 Sema4C对宫颈癌细胞顺铂化疗敏感性的影响。结果:Sema4C参与调节宫颈癌细胞Caski上皮间质转化，下调Sema4C可逆转这一过程；Sema4C是miR-532直接的靶基因；miR-532可逆转宫颈癌细胞的EMT；过表达miR-532及沉默Sema4C能显著提高宫颈癌细胞对顺铂敏感性。结论:miR-532通过抑制靶基因Sema4C的表达水平在宫颈癌中扮演抑癌基因的角色，逆转了宫颈癌细胞Caski的上皮间质转化及增加对顺铂化疗的敏感性。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

小白菊内酯对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究小白菊内酯（parthenolide,PTL）对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法:应用0、2.5、5、10、20 μmol/L的PTL处理甲状腺癌TPC-1细胞24 h,CCK-8法检测不同浓度的PTL对TPC-1细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell实验观察PTL对TPC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9、TGF-β、Smad3、p-Smad3蛋白表达水平的变化。结果:CCK-8实验结果表明,PTL可抑制TPC-1细胞的增殖,并呈一定的浓度依赖性;划痕实验和Transwell实验表明,PTL可减弱TPC-1细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting结果显示,PTL可上调E-cadherin的表达量,下调N-cadherin、Vimentin、MMP-9、TGF-β、p-Smad3的表达水平。结论:PTL以浓度依赖的方式抑制甲状腺癌TPC-1细胞增殖;PTL可能通过下调TGF-β的表达和抑制Smad3的磷酸化,逆转上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的发生,从而降低甲状腺癌TPC-1细胞的侵袭、迁移能力。     

ALMS 1-IT1在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:探讨lncRNA ALMS1-IT1在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达及预后意义,明确ALMS1-IT1对CRC细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:通过GEPIA网络平台分析癌症基因图谱(The Ca...     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响，并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation，EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中，SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中，SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后，细胞E-cadherin的表达增高，N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05），同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

罗哌卡因抑制Rac1/JNK1/FAK通路的活化抑制黑色素瘤M21细胞生长、侵袭和迁移

目的:本文旨在探究罗哌卡因(ropivacaine,RPC)对黑色素瘤M21细胞生长,运动和上皮间质形态转换的影响。方法:采用0、0.25、0.5、1 mmol/L剂量罗哌卡因处理M21细胞,将细胞随机分为四组:RPC 0 mmol/L组、RPC 0.25 mmol/L组、RPC 0.5 mmol/L组和RPC 1 mmol/L组进行后续试验。EDU染色检测细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell检测侵袭细胞数;划痕试验检测细胞迁移;显微镜观察上皮间充质转化形态学变化;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Rac1、JNK1、p-JNK1、FAK、p-FAK蛋白表达水平。结果:结果表明,与RPC 0 mmol/L组相比较,RPC 0.5、1 mmol/L组EDU阳性细胞数显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,划痕愈合率显著降低（P＜0.05）,上皮间充质转化受到抑制,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,Vimentin、N-cadherin、Rac1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,p-JNK1/JNK1、p-FAK/FAK比值显著降低（P＜0.05）。结论:罗哌卡因抑制Rac1/JNK1/FAK通路的活化调节黑色素瘤M21细胞生长,运动和上皮间质形态转换。     

小檗碱通过上调miR-145-5p抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭、迁移和谷氨酰胺代谢北大核心

目的:探索小檗碱(berberine,BBR)对宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞增殖、侵袭、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法:qRT-PCR法检测miR-145-5p表达水平;MTT法和集落形成实验检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白水平;使用相应的试剂盒测量谷氨酰胺消耗量、α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)产量和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)产量。初步在小鼠体内,探究BBR对异种移植物及miR-145-5p表达水平的影响。结果:BBR能够抑制CC细胞增殖、迁移、侵袭和谷氨酰胺代谢,且可显著下调MMP-9、N-cadherin和Vimentin水平,上调miR-145-5p、E-cadherin水平(P<0.05)。抑制miR-145-5p表达能够逆转BBR对CC细胞的影响(P<0.05);另外,在小鼠体内,BBR可显著降低肿瘤组织的重量及体积,同时上调miR-145-5p表达水平(P<0.05)。结论:BBR通过上调miR-145-5p抑制CC细胞的增殖、迁移、侵袭和谷氨酰胺代谢。     

下调叉头框转录因子3a促进鼻咽癌侵袭转移

目的 探讨下调叉头框转录因子3a（FOXO3a）对促进鼻咽癌侵袭转移的影响。方法 慢病毒shRNA和空载病毒液Mock shRNA按复感染指数（multiplicity of infection,MOI）为50转染鼻咽癌CNE2和HNE1细胞,构建低表达FOXO3a的稳定转染细胞。采用Western blot、Real-time PCR检测其转染效率。划痕实验和Transwell 实验检测下调FOXO3a对诱导鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白 E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Twist和Snail的表达,免疫荧光检测EMT相关蛋白定位。Western blot和Real-time PCR检测基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的表达。结果 成功构建低表达FOXO3a稳定转染鼻咽癌CNE2和HNE1细胞。划痕实验和Transwell 实验结果显示,与空载体转染鼻咽癌细胞比较,低表达FOXO3a稳定转染鼻咽癌细胞的侵袭和转移能力增强,EMT相关蛋白E-cadherin表达下调,而Vimentin、N-cadherin、Twist和Snail表达显著升高,MMP2和MMP9表达亦升高。结论 下调FOXO3a可促进鼻咽癌的侵袭转移。