丹参内生真菌的分离鉴定及抗血小板凝集活性菌株的筛选

目的:分离鉴定丹参内生真菌,考察其代谢产物粗提物的体外抗二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板凝集活性。方法:对丹参的叶、茎和根中的内生真菌进行分离,采用ADP诱导血小板凝集实验测试丹参内生真菌粗提物的抗血小板凝集活性,并用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定。结果:共分离得到80株内生真菌,发现5株内生真菌的粗提物具有良好的抗血小板凝集的作用。结论:丹参中分离的多种活性内生真菌具有潜在的抗血小板凝集活性,值得进一步研究和开发。     

银杏内生真菌菌种的分离及鉴定

目的对4个不同来源银杏G inkgo bilobaL.的根、茎中内生真菌进行分离、鉴定。方法用组织块法分离,用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果分离获得内生真菌178株,鉴定为1纲、4目、6科、28属。结论不同来源的银杏内生真菌的种群、数量及分布部位存在着显著差异。     

闽浙马尾杉内生真菌分离纯化及产石杉碱甲菌株LC-MS／MS筛选

目的通过组织块分离法从闽浙马尾杉中分离内生真菌,利用LC-MS／MS筛选产石杉碱甲的内生真菌。方法将采集到的新鲜植物闽浙马尾杉进行表面灭菌消毒及将植物的根际土壤稀释,接种于含有3％的链霉素的PDA平板培养基上,挑取尖端菌丝进行分离、纯化和保藏;通过石杉碱甲菌株LC-MS／MS法对分离到的内生真菌进行快速的筛选,筛选出产石杉碱甲的内生真菌。结论通过组织块及稀释平板法从闽浙马尾杉植物中分离到306株内生真菌,其中根（G）8株,茎（J）65株,叶（Y）173株,茎尖（M）60株。通过LC-MS／MS筛选法共筛选到产石杉碱甲菌株15株,其中根（c）o株,茎（J）2株,叶（Y）11株,茎尖（M）2株。     

一株产吴茱萸碱结构类似物的内生真菌的筛选和初步鉴定

目的筛选产吴茱萸碱结构类似物的内生真菌。方法采用平板分离法对湖南新晃、湘乡、娄底,贵州铜仁,江西万载和浙江温州等地的吴茱萸内生真菌进行分离纯化。采用TLC、LC-MS等分析技术对产吴茱萸碱、吴茱萸次碱及其结构类似物等成分的内生菌进行分析。结果从6个吴茱萸产区共分离到31种内生真菌。分别从吴茱萸的叶、茎和果实中分离到不同的内生真菌,表现为组织特异性,且在不同产地的内生真菌的种类和优势种群存在明显的差异,即具有地域特异性;通过筛选找到了5株产吴茱萸碱和吴茱萸次碱类似成分的内生真菌,该成分可能为去氢吴茱萸碱。并对其中的1株内生真菌进行了形态学鉴定和ITS序列分析,初步判断该菌属子囊菌纲。结论从吴茱萸内生真菌中分离得到1株产去氢吴茱萸碱的子囊菌,为去氢吴茱萸碱的资源开发开辟了新途径。     

东北红豆杉一株产三尖杉宁碱内生真菌Xylaria Primorskensis Y32的分离与鉴定

目的:从东北红豆杉中分离纯化出一种产三尖杉宁碱的内生真菌,为三尖杉宁碱的来源提供了新的途径.方法:采用组织块分离法分离东北红豆杉叶内生真菌,利用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-Orbitrap-MS/MS)法对内生真菌发酵液提取物成分进行分析,并通过表面形态观察及真菌ITS序列对产三尖杉宁碱的内生真菌进行种属鉴定.结果:内生真菌Y32可特异性产三尖杉宁碱,菌落呈现花纹放射状,中心呈现棕色,边缘呈现白色;经ITS序列比对,该菌与Xylaria primorskensis ITS序列相似性为98％.结论:从东北红豆杉中分离到一株产三尖杉宁碱的内生真菌Y32,鉴定为滨海炭角菌(Xylaria primorskensis).     

金荞麦中具抗菌活性内生真菌的筛选和鉴定

目的 研究药用植物金荞麦的抗菌活性内生真菌.方法 采用PDA培养基,从金荞麦的块根、茎、叶中分离到20株内生真菌,鉴定其抗菌活性,并对抗菌活性菌株进行形态学特征和分子鉴定.结果 发现其中1株内生真菌FD12对金黄色葡萄球菌有抗菌活性,但对大肠杆菌、黑曲霉无抑制作用;经形态学特征和分子鉴定,确定菌株FD12为黑肉座菌Hypocrea nigricans.结论 文中结果可为保护金荞麦野生资源,寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径.     

具有抗氧化活性的北五味子内生真菌的筛选及鉴定

目的:对具有抗氧化活性的北五味子内生真菌进行筛选及鉴定。方法:利用组织分离法,从野生北五味子的根、茎、叶及果实中分离内生真菌,分别采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法及羟自由基清除法筛选具有抗氧化活性的内生真菌;并对菌株的总DNA进行提取,利用通用引物ITS1和ITS4对菌株18S r DNA ITS序列进行扩增和测序,将测序结果进行同源性比对分析,确定活性菌株的分类地位。结果:从北五味子中共分离得到23株内生真菌。其中,从根部分离出的编号为GSR-12的菌株表现出较强的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率和羟自由基清除率分别为87.96%和82.31%;经比对分析后鉴定GSR-12为粉红粘帚霉(Clonostachys rosea)。结论:分离自野生北五味子根部的1株粉红粘帚霉具有较强的抗氧化活性。     

金银花内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 从药用植物金银花中筛选出对指示菌有抑制作用的内生真菌,并对其抑菌特性进行研究.方法 采用组织块法对金银花内生菌进行分离;用形态学方法对内生真菌进行鉴定;以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,对内生真菌发酵产物进行抑菌试验,并对活性物质的热稳定性进行了研究.结果 分离获得38株内生真菌,鉴定为5目、5科、8个属;其中2株有抑菌活性,且发酵液具有良好的热稳定性.结论 金银花组织中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用.     

瓶花木内生真菌C22发酵液中生物活性成分的分离、纯化与鉴定

目的 分离、鉴定红树林植物瓶花木内生真菌C22的活性次生代谢产物.方法 利用硅胶柱层析等方法进行分离纯化:利用光谱分析进行结构解析.结果 内生真菌C22的活性次生代谢产物为一大环内酯类抗生素布雷菲尔德菌素A和一倍半菇类抗生素木霉菌醇.结论 以上两种抗生素对肺癌细胞SMMC-7721、胃癌细胞SGC-7901具有较强的肿瘤细胞毒活性,并且在内生真菌C22中含量较大,因此,红树林植物瓶花木内生真菌菌株 C22具有广阔的应用价值和开发前景.     

不同生长期川贝母内生真菌的多样性

目的 比较不同生长期川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don内生真菌的差异性,为其品质评价提供基础.方法 采用纯培养法对不同生长期的川贝母内生真菌鳞茎中的内生真菌进行分离和鉴定.结果 分别分离得到一年生内生真菌10株,鉴定为8个属;一年生内生真菌8株,鉴定为7个属;二年生内生真菌13株,鉴定为9个属;三年生内生真菌48株,鉴定为14个属;四年生内生真菌11株,鉴定为7个属.结论 不同生长期川贝母的内生真菌在类别和数量上存在着显著差异,其中树儿子内生真菌在类别和数量上最多,这与川贝母的品质有密切的联系.     

两株牛肝菌内生真菌的分离鉴定及活性初步研究

目的 从牛肝菌中分离内生真菌,并对其活性进行初步研究.方法 采用组织培养法从秦巴山区牛肝菌子实体中分离内生真菌,基于形态特征及ITS系统发育分析对内生真菌进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌为指示菌,检测内生真菌发酵产物的抑菌活性,并对其绿豆芽的抑制活性进行了研究.结果 分离获得2株内生真菌L3和L5,L3和黄瘤孢菌(Hypompces chrysosperums)序列同源性为99％;L5和毛霉属序列同源性为100％;两株菌的形态学特征分别与黄瘤孢菌和毛霉属形态特征一致.结论 内生真菌L3和L5,分别鉴定为黄孢瘤菌和毛霉属;这两株菌发酵液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,对绿豆芽生长均具有抑制作用.     

三尖杉内生真菌的季节动态和组织分布研究

目的 研究不同季节药用植物三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.f.)不同组织部位内生真菌的种类组成、数量和分布规律的差异.方法 采用组织分离法分离出春、夏、秋、冬4次采样的三尖杉叶片、枝条和树皮中的内生真菌,根据形态分型后进行分子鉴定.结果 从4次采样的3个组织部位中共分离得到内生真菌1 851株.根据培养特征共划分为77个形态型,分子鉴定为70个分类单元.研究表明,季节和组织对内生真菌定殖率、分离率和种类组成均有明显的影响,但是季节的影响远大于组织的影响.结论 三尖杉内生真菌具有丰富的生物多样性,结合内生真菌丰度和多样性指数综合分析,春季为获得较多种类的内生真菌的最佳取样时间.     

一种安徽产野生铁皮石斛内生真菌的分离鉴定及其组织分布

目的 分离鉴定安徽地区野生铁皮石斛内生真菌,旨在丰富其内生真菌资源种类。 方法 通过组织块法对内生真菌进行分离,运用形态学和分子生物学方法进行鉴定。结果 从中分离得到11株内生真菌,鉴定为5属11种。 结论 铁皮石斛内生真菌种类资源广泛分布,为研究其与宿主石斛共生关系提供理论依据。     

大狼毒内生真菌的分离、鉴定与抑菌活性研究

目的 分离和鉴定大狼毒根中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 用组织块法分离,点植法对分离菌株进行分类鉴定;选择3种人类病原细菌作为指示菌进行体外抑菌试验.结果 分离获得内生真菌41株,鉴定为1纲、4目、6科、15属;其中9株有稳定的抑菌活性,尤其对大肠杆菌有显著抑制作用.结论 大狼毒根中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源.     

三角叶黄连内生真菌的多样性及其抑菌活性的筛选

目的分离和鉴定三角叶黄连Coptis deltoidea根状茎、叶柄及叶中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用平板法分离菌株,对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基的颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行分类鉴定;选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌的发酵上清液进行体外抑菌试验。结果从三角叶黄连中分离获得的297株内生真菌,分属2目、3科、32属;抑菌实验表明:22株内生真菌的发酵液对指示菌均有不同程度的抑制作用,其中6号内生真菌同时对两种致病菌的抑菌效果明显。结论三角叶黄连内生真菌在种类、不同部位呈多样性分布,且部分内生真菌的代谢产物具有较强的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

虎杖内生真菌与有效成分的相关性研究

目的 探讨不同产地虎杖内生真菌的种群与有效成分的关系.方法 采用平板分离法分离虎杖的内生真菌,采用插片培养方法和点植法分类鉴定分离的菌株;采用HPLC法测定大黄素和虎杖苷的含量.结果 从10个不同产地虎杖的根和根茎中共分离获得164株内生真菌,经显微形态观察,鉴定为3目、10属、4科;不同产地虎杖内生真菌的种群与有效成分大黄素、虎杖苷存在相关性.结论 小同产地虎杖的内生真菌在数量、分布、种群及组成上存在差异,不同的内生真菌种群与其质量的形成有关.     

泰山白首乌内生真菌多样性及其抗肿瘤活性研究

目的 分析白首乌内生真菌多样性及其种群结构分布规律,挖掘潜在的微生物资源及功能,为寻找新的抗肿瘤内生真菌提供理论基础。方法 通过传统的内生菌分离法以及18sRNA高通量测序技术,对不同组织部位、不同物种和不同产地白首乌内生真菌群落组成进行多样性分析;采用 MTT 法检测泰山白首乌内生真菌的细胞毒活性。结果 从泰山白首乌的根、茎、叶中共分离得到 90个形态的内生真菌,其中,镰刀菌属Fusarium和链格孢属Alternaria 为优势菌属;泰山白首乌根、茎、叶分别有8、9和13个属,链格孢属Alternaria和炭疽菌属Colletotrichum为共有属; 13株泰山白首乌内生真菌对HEPG2、HGC27、HT-29和HeLa肿瘤细胞株产生抗肿瘤活性,占总数的14.4%,极细链格孢菌A. tenuissima LTJ2和链格孢菌A. alternata LTJ6抗肿瘤活性显著。结论 泰山白首乌内生真菌具有丰富的多样性,部分菌株具有显著的抗肿瘤活性,为寻找新的抗肿瘤药物提供了菌株资源。     

忽地笑鳞茎中产加兰他敏内生真菌的分离与鉴定

目的筛选产加兰他敏的内生真菌,为生产加兰他敏寻找新的途径。方法以忽地笑鳞茎为实验材料,分离内生真菌,利用HPLC对其发酵代谢产物进行检测,筛选能产生加兰他敏的菌株。结果从忽地笑鳞茎中分离出5株内生真菌,经HPLC分析,真菌GF-1能产生加兰他敏。经初步鉴定,GF-1为半知菌亚门(Deuteromycotina)青霉属(Penicillium LK.ex Fries)。结论忽地笑内生真菌有希望成为生产加兰他敏的新资源。     

内生真菌固体发酵提高穿山龙中薯蓣皂苷元的研究

目的 分离提取穿龙薯蓣内生真菌,筛选能够发酵提高穿山龙药材中薯蓣皂苷元的菌种.方法 采用PDA培养基分离纯化穿龙薯蓣内生真菌,将内生真菌与121℃湿热灭菌后的穿山龙药材粗粉在28℃条件下固体发酵培养15d,以HPLC法测定发酵物中薯蓣皂苷元,并与穿山龙原药材、灭菌空白药材以及未经灭菌药材的发酵物进行比较.结果 分离筛选的穿龙薯蓣内生真菌C39能够稳定提高灭菌后穿山龙药材中薯蓣皂苷元的水平,提高幅度达原药材的70％～75％.结论 采用固体发酵的方法可以使穿龙薯蓣内生真菌C39稳定提高穿山龙药材中薯蓣皂苷元.     

红树林内生真菌多样性及其次级代谢产物GH-9-1抗肺癌活性的研究

摘 要：目的 分析湛江观海长廊红树林内生真菌多样性,筛选具有抗肺癌活性的内生真菌次级代谢产物,对其中1株内生真菌Penicillium sp. GH-9发酵产物4-甲基-3-甲氧基-2,4-戊二烯酸（GH-9-1）进行抗肺癌活性研究。方法 利用微生物培养和发酵技术对红树林内生真菌进行分离纯化及液体发酵,通过16S rRNA基因序列构建系统发育树分析红树林内生真菌多样性,利用高效液相色谱（HPLC）检测技术对其次级代谢产物进行特征峰追踪分离,根据核磁共振数据鉴定化合物结构,采用CCK-8法、流式细胞术、Western blot技术评价单体化合物的体外抗肺癌活性。结果 从湛江市观海长廊采集6种红树林植物组织标本及红树林根部土壤标本,共分离得到130株内生真菌,从真菌Penicillium sp. GH-9的发酵产物中获得其主要特征性代谢产物4-甲基-3-甲氧基-2,4-戊二烯酸（GH-9-1）。化合物GH-9-1可抑制非小细胞肺癌细胞A549和H460细胞生长增殖,并可诱导A549和H460细胞发生凋亡和细胞周期阻滞。结论 湛江市观海长廊红树林内生真菌具有丰富的多样性,从其中1株内生真菌Penicillium sp. GH-9的次级代谢产物分离得到的GH-9-1具有显著的抗肺癌活性。