一例May-Hegglin异常家系临床及分子生物学研究

目的　探讨May Hegglin异常 (MHA)患者的血小板改变及其分子遗传学特征。 方法　对先证者及其家系成员的静脉血 ,分别进行机数和镜数血小板计数 ,观察血小板形态 ,以流式细胞术分析血小板膜蛋白 ,ELISA法检测血小板膜抗体 ,用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增先证者及其父亲非肌性肌球蛋白重链 9基因 (MYH 9)的 2 5 ,30 ,38,4 0号外显子 ,分析PCR产物的核苷酸序列 ,确定突变点 ,用间接免疫荧光结合细胞核染色技术显示粒细胞中的包涵体 (D hle小体 )。结果　患者机数血小板数明显低于镜数血小板数 ,巨大血小板占 90 %以上 ,血小板膜糖蛋白 (CD4 1、CD6 1、CD4 2a、CD4 2b)均在正常范围内 ,膜抗体未能检测到 ,血小板功能正常 ,MYH 9基因 38号外显子第 5 5 2 1位核苷酸存在G→A杂合突变 (GAG→AAG) ,从而导致其编码的非肌性肌球蛋白重链A(NMMHC A)第184 1位谷氨酸变为赖氨酸 ,正常对照及家系中正常者未见此突变 ,MHA患者中性粒细胞胞浆中荧光分布显示了“梭形”包涵体的形态和轮廓。结论　MYH 9基因点突变并伴有血小板减少和巨大血小板是MHA的主要特征。     

一例Fechtner综合征临床与分子缺陷研究——附文献复习

目的对1例Fechtner综合征先证者及其家系进行临床与实验室研究并检测非肌性肌球蛋白重链9基因（MYH9）突变。方法采用瑞特染色观察先证者及其家系患者的外周血涂片血小板和中性粒细胞的特殊形态；透射电镜观察先证者血小板及中性粒细胞的超微结构。从先证者及其家系成员外周血白细胞中提取基因组DNA，PCR扩增MYH9的40个外显子及侧翼内含子序列，检测其基因突变。结果该家系中Fechtner综合征患者表现为血小板减少、巨大血小板、中性粒细胞包涵体，伴或不伴遗传性肾炎。先证者及其家系患病成员的MYH9改变为外显子40第5981位核苷酸C-T杂合改变，使第1933位密码子CGA（编码Arg）突变为终止密码TGA。结论国内首次报道Fechtner综合征家系。MYH9（外显子40）R1933X杂合改变是导致Fechtner综合征的原因。     

非肌球蛋白重链9相关疾病大家系患者中性粒细胞包含体特点分析

目的分析一非肌球蛋白重链9相关疾病（MYH9-RD）大家系患者中性粒细胞包涵体的形态和结构特点,阐明MYH9-RD中性粒细胞包涵体形成的特点,以探讨MYH9-RD中性粒细胞包涵体的致病机制。方法应用光学显微镜（瑞姬染色）和电子显微镜观察中性粒细胞包涵体形态和超微结构特点;应用间接免疫荧光复染技术观察MYH9-RD患者与正常对照者之间非肌性肌球蛋白IIA（NMMHC—IIA）在胞浆中的分布情况。结果光学显微镜和电子显微镜下可见中性粒细胞中明显的包涵体,形态多样,大多位于细胞边缘;间接免疫荧光复染技术显示患者和正常人之间NMMHC—IIA在中性粒细胞中的分布有差异,中性粒细胞胞浆中存在明显绿色荧光的包涵体,其形态和轮廓与瑞一姬氏染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰;正常对照的粒细胞胞浆中未见包涵体。结论光学显微镜和电子显微镜进一步确认了家系患者包涵体的存在。免疫荧光技术显示患者和正常人之间NMMHC—IIA在中性粒细胞中的分布有差异;MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要构成成份是NMMHC—IIA;包涵体的形态结构复杂多样可能与本家系临床表型复杂多样有关,该家系对进一步揭示MYH9-RD的致病机制具有重要的意义。     

一例原发性肾性糖尿患者的临床与基因突变分析

  目的  探讨1例原发性肾性糖尿(primary renal glucosuria, PRG)患者的临床表现及其分子生物学基础。  方法  详细收集患者的临床资料、生化检查及影像学检查结果, 抽取外周静脉血, 提取基因组DNA, 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增SLC5A2基因的14个外显子及其与内含子的交界区, 测序确定突变情况。  结果  患者临床表现、实验室检查和影像学检查符合PRG诊断。基因突变分析显示, 患者SLC5A2基因cDNA序列的第877位腺嘌呤A突变为胸腺嘧啶G(c.877 A>G), 造成第293位氨基酸由丝氨酸改变为半胱氨酸(p.Ser293Cys), 该突变位于SLC5A2的第7外显子。蛋白序列的保守性分析和突变蛋白的功能分析均表明p.Ser293Cys为致病性突变。  结论  通过SLC5A2基因突变分析, 从分子遗传学方面证实患者PRG的诊断。临床上血糖正常的患者出现尿糖阳性且无其他近端肾小管功能障碍表现的患者应该考虑到该疾病可能, 基因分析有助于确诊。     

新发基因突变致成人线粒体神经胃肠脑肌病

  目的  探讨线粒体神经胃肠脑肌病患者的临床表现及基因突变情况。  方法  分析1例成人线粒体神经胃肠脑肌病患者临床资料, 对患者及其家系线粒体病相关基因应用NimbleGen固相芯片进行目标区域捕获测序。  结果  该患者表现为进行性加重的假性胃肠梗阻、脑白质病、恶液质、周围神经病、眼外肌无力及多种代谢紊乱。基因检测发现TYMP基因c.217G>A纯合突变为该患者的致病突变, 患者父母(近亲婚配)及姐姐均为该突变杂合子, 该突变为新发突变。  结论  经基因检测确诊TYMP基因新发突变致成人线粒体神经胃肠脑肌病。     

六例非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病患者的临床特征与基因分析

目的 分析6例非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)基因相关疾病患者临床特征和基因.方法 取患者外周血,光镜下计数血小板数目、涂片并瑞氏染色后观察血小板形态以及有无中性粒细胞包涵体;抽提患者外周血基因组DNA,PCR扩增MYH9基因的40个外显子及两端侧翼序列,DNA测序并与基因库序列进行比对以确定基因异常,用限制性核酸内切酶和聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析排除多态性.结果 6例患者血小板计数下降、体积增大,中性粒细胞内可见淡蓝色包涵体.基因分析发现在1号、30号和40号外显子中存在T97C(W33R)、4335InsCAGAAGAAG(1445InsQKK)、G4269A(D1424N)和G5833T(E1945Stop)4种基因突变,其中前2种突变为首次发现,并排除基因多态性的可能.结论 6例MYH9相关疾病患者的基因突变中T97C(W33R)和4335InsCAGAAGAAG(1445InsQKK)是国际上首次发现的新突变.病史较长且治疗反应不佳的原发免疫性血小板减少症患者应考虑MYH9基因相关疾病的可能性.     

一个May-Hegglin异常家系MYH9基因突变新位点研究

目的 鉴定一个May-Hegglin异常家系MYH9基因突变位点.方法 报告一个May-Hegglin异常家系的临床及实验窜检查资料,包括外周血和骨髓瑞姬染色涂片的细胞形态学检查,静脉血检测肝、肾功能,血小板功能、血块退缩时间及凝血功能,用PCR技术扩增先证者及其母亲的MYH9基因1、10、25、30、38、39、40号外显子,用直接测序的方法 分析PCR产物的核苷酸序列.结果 先证者及其母亲均有巨大血小板、血小板减少和粒细胞内包涵体,2位患者肝、肾功能,血小板功能、血块退缩时间及凝血功能均正常.此家系患者存在30号外显子第4270位碱基G>A突变,使第1424位密码子由GAC>AAC.编码的氨基酸由天冬氨酸转变为天门冬酰胺.而正常对照者无此突变.结论 该May-Hegglin异常家系存在30号外显子上Asp1424Asn突变,此突变为中国人May-Hegglin异常家系的首次报道.     

TGFB1基因突变导致罕见进行性骨干发育不良

  目的  分析1个进行性骨干发育不良(progressive diaphyseal dysplasia, PDD)家系患者的临床表型, 并检测转化生长因子β1编码基因TGFB1的突变类型。  方法  1例幼年起病, 表现为下肢骨痛、无力和肌肉减少的PDD患者, 来自非近亲婚配家庭, 评估其临床表现、骨骼X线特点、骨转换生化指标水平; 采用聚合酶链式反应及其产物直接Sanger测序法检测TGFB1突变。  结果  患者骨转换水平增高, 影像学提示患者四肢骨皮质不均匀性增厚、硬化。基因检测提示患者TGFB1基因第4外显子存在c.652C > T杂合性错义突变(p.Arg218Cys), 患儿父母均未发现该突变。予患者糖皮质激素治疗, 治疗4个月后患者骨痛缓解、活动能力明显改善。  结论  四肢骨痛和骨干皮质增厚是PDD的典型临床表现, TGFB1第218位点错义突变为PDD热点致病突变类型, 糖皮质激素治疗能够缓解PDD病情。     

一例含葡萄糖-6-磷酸酶新突变的复合杂合突变致华人糖原累积症Ia型的遗传特点

  目的  探讨1例糖原累积症Ia型(glycogen storage disease type Ia, GSD Ia)患者的临床特点及遗传机制。  方法  详细收集患者临床资料, 包括病史、体格检查、实验室检查结果。提取患者及其父母的外周血DNA, 进行葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(glucose-6-phosphatase catalytic subunit, G6PC)基因5个外显子测序, 对新突变进行蛋白功能预测。  结果  患者为27岁男性, 有低血糖、高乳酸血症、高尿酸血症和高脂血症的典型临床表现, 肝穿刺活检支持GSD Ia。患者G6PC基因第2个外显子检测到c.248G > A(p.R83H)错义突变, 第5个外显子检测到c.674T > C(p.L225P)错义突变, 患者父亲和母亲分别是携带c.674T > C(p.L225P)及c.248G > A(p.R83H)突变的杂合子。采用Polyphen 2和SIFT软件对新发现的c.674T > C(p.L225P)突变蛋白功能进行预测, 提示为致病突变, 可能损害葡萄糖-6-磷酸酶蛋白功能。  结论  G6PC基因的复合杂合突变是本例GSD Ia患者的致病基础, 发现G6PC基因新的致病突变, 拓宽了华人GSD Ia的致病基因谱。     

中国遗传性视网膜劈裂症患者临床特征及RS1基因突变筛查

  目的  探讨中国遗传性视网膜劈裂症(X-linked retinoschisis, XLRS)患者的临床特征及致病基因突变位点。  方法  研究纳入北京协和医院眼科经临床确诊的5个XLRS家系(包含12例患者)、10例散发病例、16名女性携带者和100名无眼疾的正常对照者。5个家系的先证者及10例散发病例(共15例患者)接受了详细的眼科检查。采集22例患者及16名携带者的外周静脉血3 ml用于提取基因组DNA。采用聚合酶链反应法对RS1基因的6个外显子片段进行扩增后直接测序, 以明确突变位点及突变类型。  结果  RS1基因检测共发现11种致病性突变, 包括p.E72K、p.W92C、p.R102Q、p.W112X、p.S134P、p.R156G、p.P193S、p.R200H、p.R209C、p.R213W和p.R213Q, 其中p.W112X和p.S134P突变为新发突变。1例散发病例未确定RS1基因突变位点。在确定突变的所有患者中, 5个家系的先证者和9例散发患者主诉均为不同程度的视力下降, 最佳矫正视力在0.04~0.8之间。眼底检查均存在特征性黄斑区劈裂, 其中有6例患者合并周边视网膜劈裂。携带RS1基因突变的患者中有10例接受视网膜电图检查, 结果显示9例患者的混合反应均呈特征性的负波形。携带同一致病性突变的不同患者病情轻重程度有所不同。  结论  XLRS患者在临床表型上存在较大差异, 未观察到基因型与表型间的相关性。     

Inherited Platelet Disorders: Diagnosis and Management

Inherited platelet disorders are rare but they can have considerable clinical impacts, and studies of their causes have advanced understanding of platelet formation and function. Effective hemostasis requires adequate circulating numbers of functional platelets. Quantitative, qualitative and combined platelet disorders with a bleeding phenotype have been linked to defects in platelet cytoskeletal elements, cell surface receptors, signal transduction pathways, secretory granules and other aspects. Inherited platelet disorders have variable clinical presentations, and diagnosis and management is often challenging. Evaluation begins with detailed patient and family histories, including a bleeding score. The physical exam identifies potential syndromic features of inherited platelet disorders and rules out other causes. Laboratory investigations include a complete blood count, blood film, coagulation testing and Von Willebrand factor assessment. A suspected platelet function disorder is further assessed by platelet aggregation, flow cytometry, platelet dense granule release and/or content, and genetic testing. The management of platelet function disorders aims to minimize the risk of bleeding and achieve adequate hemostasis when needed. Although not universal, platelet transfusion remains a crucial component in the management of many inherited platelet disorders.     

白血病患者输注浓缩血小板的临床探讨

目的探讨白血病患者输注浓缩血小扳的效果及时限。观察临床止血效果是否得到改善,提出把握血小板输注的最佳时机,治疗性输注和预防性输注的适应证,分析某些因素对血小板输注效果的影响,为临床提供可靠依据,便于及时合理地进行血小板输注,以取得较好的疗效。方法白血病患者输注浓缩血小板前做血液常规检验,输注后12小时,再次进行血液常规检验。结果白血病患者输注新鲜机采血小板明显高于输注冰冻血小板且差异显著。结论白血病患者应输注机采新鲜血小板,尽量减少冰冻血小板输注的次数和剂量。     

2006～2012年龙岗区血站临床供血分析

目的通过对龙岗区血站7年来临床供血分析,了解龙岗区的供血规律与发展趋势,更好地做到采供血的动态平衡,科学合理供血。方法统计2006～2012年龙岗区血站临床供血情况,主要分析红细胞悬液、血浆、血小板每年的供血量及ABO血型所占的比例,并分析本地区供血发展趋势及ABO血型所占的比例。结果 2006～2012年红细胞悬液用量呈上升趋势,增加了39%,血小板用量上升趋势明显,增加了446%,血浆用量呈下降趋势,下降了20%。每年红细胞悬液、血浆、血小板用量及ABO血型所占的比例基本一致。结论通过制定科学合理的供血计划,做到采供血的动态平衡及加强对临床用血医疗机构科学合理用血的检查和监督,本地区临床供血的科学性、合理性将得到明显提高。     

Cord blood platelet gel for the treatment of inherited epidermolysis bullosa

The management of patients affected by epidemolysis bullosa requires an integrated approach involving different specialties. A cornerstone of clinical management is the prevention and treatment of mechanobullous ulcerations of the patient’s skin, which significantly impact the quality of life and can be the cause of septic and neoplatic complications. This article describes the preliminary clinical evaluation of the use of allogeneic cord blood platelet gel, a novel blood component obtained from umbilical cord blood of healthy, term neonates, for the treatment of skin ulcers in patients with dystrophic epidermolysis bullosa. The promising clinical results obtained in this small patient group support the development of larger controlled clinical trials to compare the efficacy of platelet gel obtained from cord blood versus traditional platelet gel prepared from adult blood donors and versus current standard approaches of wound care in these patients.     

The alloimmune thrombocytopenic syndromes

We have summarized five thrombocytopenic syndromes caused by platelet-reactive alloantibodies. Increased awareness of these five syndromes, together with the greater availability of highlyspecialized laboratory methods to detect and to characterize platelet-reactive alloantibodies, will lead to their more frequent diagnosis. It is important for the clinician to consider unusual alloimmune thrombocytopenic disorders in clinical settings in which alloantigens that could be limited to just one family could cause important disease (ie, NAT caused by a private alloantigen; theoretically, PAT or TAT related to directed donations of blood or bone marrow). These considerations underscore the need for serological investigations to involve the family members rather than to rely on standard platelet typing donor pools.     

血小板膜糖蛋白与高血压脑梗死的关系研究

目的通过测定高血压脑梗死患者血小板膜糖蛋白指标,为临床治疗高血压脑梗死提供有用的参考数据。方法采用流式细胞术对80例高血压脑梗死患者、30例正常血压脑梗死患者及35例原发性高血压患者血小板膜糖蛋白进行检测。结果高血压脑梗死组、正常血压脑梗死组与原发性高血压组血小板膜糖蛋白CD62P、CD63均显著高于健康对照组,且高血压脑梗死组、正常血压脑梗死组血小板膜糖蛋白CD62P、CD63均明显高于高血压组。高血压脑梗死组与正常血压脑梗死组血小板膜糖蛋白差异无统计学意义。血小板膜糖蛋白不同梗死灶各组之间均有明显差异。结论脑梗死和高血压患者均存在血小板活化,脑梗死患者血小板活化与病情及梗死灶大小有关。血小板膜糖蛋白检测对高血压患者的病情分析和脑梗死的预防及早期诊断和治疗具有重要意义。     

2018-2022年南昌地区单采血小板捐献情况分析

目的 分析2018-2022年南昌地区单采血小板献血者年龄、性别、职业、献血量变化等特征,为发展本地区单采血小板固定献血队伍提供依据,保障临床供血安全。 方法 收集2018-2022年江西省血液中心血站信息管理系统中单采血小板捐献信息,分年度统计献血人次、年龄、性别、职业、献血量、户籍、献血次数、二次献血占比,并进行比较。 结果 2018-2022年,南昌地区单采血小板捐献人次呈前增后降变化态势,2021年最多,达9662人次;年龄分布上,35岁及以上年龄段单采血小板献血者人次占比达到61.78%后逐步下降,最低至48.70%。18-24岁年龄段单采血小板献血者人次占比由18.35%开始逐步增高,最高至32.71%;男性是主要的单采血小板献血人群,占年度总献血人次77.61%～78.40%;登记职业为其他的人群是主要单采献血人群,占年度总献血人次43.71%-51.56%;单次捐献2U血小板人次比例持续增长,最高达82.03%;年度内献血1次人数占比较高,最高至66.42%;首次单采血小板献血者年度内二次献血比例较低,最高仅为21.48%。 结论 2018-2022年间,南昌地区单采血小板献血事业取得了一定发展,但基础不够牢固,应对风险能力不足。在后疫情时代,应针对本地区单采血小板献血者以年轻人、男性、其它类职业为主的特点,制定定向招募政策;应开发不定期单采血小板献血者、首次单采血小板献血者二次招募动员专项策略,提升二次献血率;应积极贯彻落实全流程优质服务理念,增强献血者粘性;应组建好应急单采献血队伍并定期更新,并确保应急单采献血队伍能联系、能响应以加强应急保障潜力。通过一系列举措,有效组建并扩大本地区单采血小板固定献血者队伍,夯实单采血小板献血事业发展基础,保障地区单采血小板临床供血安全。     

Sysmex XS-1000i全自动血液分析仪分析血小板性能评价

目的探讨SysmexXS-1000i全自动血液分析仪分析血小板的性能并作评价。方法对SysmexXS-1000i分析血小板的精密度、线性范围和携带污染率进行测定，再对SysmexXS-1000i测定的80例住院患者血标本的血小板结果与显微镜计数结果进行相关性分析。结果SysmexXS-1000i全自动血液分析仪分析血小板的精密度、线性范围和携带污染率均在允许范围内；SysmexXS-1000i分析血小板结果与显微镜计数结果相关性良好（r=0．9832，P〈0．01）。结论SysmexXS-1000i血液分析仪分析血小板的性能良好。具有准确度高、重复性好、检测速度快和简便快捷等优点，是常规实验室测定血小板的较理想仪器。     

Platelet utilization in the developing world: Strategies to optimize platelet transfusion practices

There is perennial shortage of blood and blood components in most of the developing world. The resources are inadequate in terms of meeting the ever growing demand of blood components especially platelets. A poor health care system has led to underdevelopment of blood transfusion services which ultimately affect the transfusion practices. There is a paucity of comprehensive data on the platelet usage from the developing countries which is reflective of their modest development in blood component therapy. This is in sharp contrast to the fast pace of development in platelet transfusion practice in developed world where platelet substitutes are to become a reality for clinical use in near future. In developing world a considerable heterogeneity exists for platelet transfusion practices between countries, and even within countries in hospitals where this precious resource is available. This variation in existing practices can partly be explained by factors like individual preferences, lack of any hospital transfusion policy with regard to platelet transfusion, problems of platelet availability, etc. There is a need to implement best platelet transfusion practices as platelet products are scarcely available and expensive. Few interventions are emphasized in this article in the context of improving the status of platelet utilization in developing countries.