积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞凋亡

目的 探讨积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞系 HSC-T6 凋亡的作用。方法 用乳酸脱氢酶 (LDH) 法和 MTT 法检测积雪草酸对 HSC-T6 细胞的细胞毒性和增殖的影响。不同浓度积雪草酸作用外源性β-转化生长因子 (TGF-β) 激活的 HSC-T6 细胞，通过 Western blotting 方法检测 HSC-T6 细胞凋亡信号分子 Caspase-3 以及Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 积雪草酸 (≤30 μmol/L) 对 HSC-T6 细胞无显著的细胞毒性且对细胞增殖无明显作用。积雪草酸可上调 HSC-T6 细胞 cleaved-caspase-3，同时抑制Ⅰ型胶原蛋白表达。结论 积雪草酸可通过诱导 HSC-T6 细胞凋亡达到抑制肝纤维化的作用。     

基于线粒体凋亡通路探讨仙鹤草促HepG_2细胞凋亡的机制

目的:研究仙鹤草水提物对人肝癌HepG_2细胞增殖、凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:MTT法检测仙鹤草不同浓度(1、0.75、0.5、0.25 mg/mL)及不同作用时间(24、48、72 h)对HepG_2的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Realtime-PCR和Western blotting检测线粒体凋亡信号通路中Bax、Caspase-3表达情况。结果:仙鹤草水提物对HepG_2的增殖具有显著抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P0.05);同时其能显著促进HepG_2凋亡。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示仙鹤草水提物1、0.75、0.5 mg/mL可显著上调HepG_2细胞Bax、Caspase-3 mRNA与蛋白表达(P0.01)。结论:仙鹤草水提物能显著抑制HepG_2增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调线粒体凋亡通路中的Bax、Caspase-3表达从而诱导细胞凋亡。     

红芪多糖对高糖培养下雪旺细胞Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的 通过观察红芪多糖（HPS）对高糖培养下雪旺细胞（SCs）B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）信号通路的影响,探讨HPS在治疗糖尿病周围神经病变（DPN）过程中可能的作用机制。方法 选取出生5~7 d的SD乳鼠4只,随机分为正常组、高糖组、HPS+高糖组、α-硫辛酸（α-LA）+高糖组,从坐骨神经部位提取SCs,放入37 ℃,5% CO₂培养箱中培养,待细胞达整瓶的80%后,细胞增殖与活性检测（CCK-8）法筛适宜高糖,HPS及α-LA干预的实验浓度,蛋白免疫印迹法（Western blot）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与mRNA的表达情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法流式细胞术检测各组SCs的凋亡率。结果 Western blot,Real-time PCR检测结果显示,与正常组比较,高糖组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与高糖组比较,HPS+高糖组、α-LA+高糖组的Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。Annexin V/PI法流式细胞术检测结果显示,与正常组比较,高糖组SCs凋亡率明显增加;与高糖组比较,HPS+高糖组和α-LA+高糖组SCs凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 HPS可以减轻SCs凋亡反应状态,其作用机制可能与抑制Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。     

补肾壮督方对大鼠退变髓核组织中miR-155-5p及凋亡相关蛋白的影响

目的 观察大鼠退变椎间盘髓核组织miR-155-5p及凋亡相关蛋白表达差异，及补肾壮督方对其的影响。方法 SD雄性大鼠，采用纤维环全层针刺造模，随机分为空白对照组，模型组，低剂量中药组、中剂量中药组及高剂量中药组。中药干预4周后，TUNEL法检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率，qRT-PCR检测miR-155-5p及Bax、Bcl-2、Cytc mRNA的表达；Western Blot检测髓核组织中active Caspase-3，Bcl-2、Cytc及Bax蛋白表达水平。结果 模型组大鼠髓核细胞凋亡率明显增加(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著增加(P < 0.05)。中药干预后检测，髓核细胞凋亡率明显减少(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均明显下降(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白显著增加(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著减小(P < 0.05)。结论 补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3、Cytc和Bax蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达，抑制线粒体凋亡通路，从而改善椎间盘退变；miR-155-5p可能参与髓核细胞凋亡的线粒体凋亡通路。     

白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨

目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制。方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达。结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21μmol·L~(-1),在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡。     

姜黄素联合FOLFOX诱导胃癌细胞发生凋亡及其机制研究

目的观察姜黄素联合FOLFOX（folinic acid fluorouracil oxaliplatin）对胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并探讨其可能的发生机制。方法设立空白对照组、姜黄素组、FOLFOX组［5-FU（0.1 mmol/L）+奥沙利铂（5 μmol/L）］及姜黄素联合FOLFOX组。CCK8法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性, 实时荧光定量PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,Western blot法测定Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均能抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Caspase-3的活性、降低Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达而增加Bax mRNA及Bax蛋白表达,且姜黄素联合FOLFOX组疗效优于姜黄素组及FOLFOX组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论姜黄素联合FOLFOX组能够明显抑制BGC-823细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax的表达及Caspase-3的活性、抑制Bcl-2表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

基于线粒体凋亡通路探讨仙鹤草促HepG_2凋亡的机制研究

目的:研究仙鹤草水提物对人肝癌HepG_2细胞增殖、凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:MTT法检测仙鹤草不同浓度(1、0.75、0.5、0.25 mg/mL)及不同作用时间(24、48、72 h)对HepG_2的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Realtime-PCR和Western blotting检测线粒体凋亡信号通路中Bax、Caspase-3表达情况。结果:仙鹤草水提物对HepG_2的增殖具有显著抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P0.05);同时其能显著促进HepG_2凋亡。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示仙鹤草水提物1、0.75、0.5 mg/mL可显著上调HepG_2细胞Bax、Caspase-3 mRNA与蛋白表达(P0.01)。结论:仙鹤草水提物能显著抑制HepG_2增殖,促进其凋亡,可通过上调线粒体凋亡通路中的Bax、Caspase-3表达从而诱导细胞凋亡。仙鹤草可能通过该通路实现抗肿瘤作用。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞

目的: 研究斑蝥酸钠维生素B6（艾易舒）注射液对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,探讨其分子机制。 方法: 将不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6注射液（0,1,5,10 mg·L^-1）作用于人肝癌HepG2细胞12,24,48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞学技术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（pAkt）,B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白（Bax）,B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）及细胞周期依赖性激酶抑制因子p21蛋白表达变化,RT-PCR检测Bax,Bcl-2及p21 mRNA表达变化。 结果: 斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有显著的时间和浓度效应（P<0.05）;同时G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低（P<0.05）。Western blot结果显示斑蝥酸钠维生素B6可下调HepG2细胞中pAkt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax和p21蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果显示Bax,p21 mRNA的表达水平明显升高,而Bcl-2 mRNA的表达水平下降（P<0.05）。 结论: 斑蝥酸钠维生素B6可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡并引发G₀/G₁期阻滞,其机制可能与斑蝥酸钠维生素B6参与调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。     

血三七醋酸乙酯提取物促进肺癌细胞凋亡的调控机制研究

目的研究血三七Polygonum amplexicaule var. sinense醋酸乙酯提取物(EAEP)对人肺癌A549和H1299细胞凋亡的影响及其机制。方法通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测EAEP对A549和H1299细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblotting法检测EAEP对A549和H1299细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果 EAEP能显著促进A549和H1299细胞凋亡;显著提高促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA表达水平,降低抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达水平;显著提高Bax蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平。结论 EAEP能通过促进Bax的表达和抑制Bcl-2的表达诱导肺癌细胞凋亡。     

薯蓣皂苷的次皂苷元B（DRG）体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机制研究

 目的 探讨中药单体薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机制。方法 采用Western blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及逆转录PCR（RT-PCR）对DRG诱导细胞凋亡的机制进行了研究。结果 在HCT-15细胞中,DRG促发了线粒体调控的凋亡途径,细胞色素c呈时效性地从线粒体中释放到胞质中,同时Bax与Bcl-2蛋白表达的相对比例上调,caspase-9、caspase-3和PARP等被剪切成具有活性的片段,但是caspase-7却未见剪切,同时还不影响P53和Bcl-xL的表达;而与死亡受体途径相关的FADD表达无明显变化,caspase-8酶原也未见剪切;另外,DRG也不抑制BH3短肽与Bcl-xL的结合;RT-PCR检测结果表明,DRG诱导HCT-15细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA水平的改变,进而导致Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平则明显增加,说明DRG诱发的细胞凋亡中涉及到Bcl-2和Bax基因水平的变化。结论 DRG诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax和Bcl-2靶基因的转录表达,上调Bax/Bcl-2蛋白表达水平比例,并最终通过激活经典的线粒体途径而不是死亡受体途径来发挥其HCT-15细胞凋亡诱导作用,且对P53呈非依赖型。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

生黄合剂对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察生黄合剂对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白( Bcl-2)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达的影响.方法:将48只SD大鼠随机分为6组,即对照组、模型组、阳性药物组、生黄含剂低、中、高剂量组(17.5,35,70 mg·kg-1分别加入5 mL·kg-生脉饮),每组8只,分别给药7d后,建立心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型.采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白的表达.结果:与模型组比较,生黄合剂能减少心肌细胞凋亡指数(AI)及Bax,Caspase-3蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值( P＜0.05),其中以生黄合剂高剂量组作用较为明显.结论:生黄合剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其抗心肌细胞凋亡的机制可能与通过上调Bcl-2,下调Bax和Caspase-3基因表达,提高Bcl-2/Bax的比值有关.     

南蛇藤茎提取物对人胶质母细胞瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据。方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,设空白组和COE组,应用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法观察COE对细胞活力的抑制作用;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)标记检测COE对U251细胞增殖的影响;Annexin V/碘化丙啶(PI)双标法检测COE对U251细胞凋亡的作用;透射电镜下观察经COE干预后U251细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对凋亡标志基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,COE能够明显抑制U251细胞的增殖(P0.05);诱导U251细胞的早期凋亡,电镜下可见到凋亡小体,影响并改变U251细胞超微结构;COE能促进Caspase-3,Bax蛋白表达,降低Bcl-2,Bcl-2/Bax蛋白表达(P0.05)。结论:COE能有效抑制胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2和Caspase-3表达有关。     

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg~(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。     

从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制

目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L~(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L~(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L~(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L~(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。     

山楂乙醇提取物对肝癌细胞HepG2凋亡及相关因子表达的影响

目的:探讨山楂提取物体外对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法:山楂乙醇提取,并采用不同质量浓度(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L-1)山楂提取物处理HepG2细胞24,48,72 h。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测提取物对肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测提取物处理细胞48 h后的凋亡率;实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达;免疫印迹法(Western blot)检测激活型Caspase-3(CleavedCaspase-3),Bcl-2,Bax蛋白表达。结果:山楂提取物对HepG2细胞的活力有显著抑制作用(P0.05),并以浓度及时间依赖的形式诱导细胞凋亡。山楂提取物可以显著促进Bax和Cleaved-Caspase-3基因和蛋白表达,抑制Bcl-2基因和蛋白表达。结论:山楂提取物抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进其发生凋亡,与Bax和Cleaved-Caspase-3的表达增加,Bcl-2/Bax降低有关。     

槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞大鼠脑细胞的作用及机制研究

目的探究槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)大鼠脑细胞的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和槐定碱低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0mg/kg)组,给予槐定碱5d后,建立p MCAO大鼠模型。考察槐定碱对pMCAO大鼠神经功能评分的影响;考察槐定碱对pMCAO大鼠脑梗死率的影响;采用流式细胞术检测各组大鼠缺血半暗带区细胞凋亡率;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织病理变化;采用Western blotting法考察各组大鼠脑组织B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated Xprotein,Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果与模型组比较,槐定碱组大鼠神经缺陷症状改善,脑梗死率显著降低(P0.05、0.01),缺血半暗带细胞凋亡率明显降低(P0.05、0.01),脑组织损伤有所改善,脑组织Caspase-3和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05、0.01)。结论槐定碱对pMCAO大鼠脑细胞具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2及下调Bax、Caspase-3蛋白表达水平,进而抑制细胞凋亡有关。     

雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞增殖凋亡作用及对Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的增殖诱导作用及其相关机制.方法:将大鼠C6胶质瘤细胞培养于含10％ (FBS),100 mg·L-1青霉素链霉素的DMEM培养液中,置37℃5％ CO2培养箱中培养,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测C6胶质瘤细胞凋亡情况,用逆转录-聚合酶链反应(Real Time-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),免疫印迹法(Western blotting,WB)检测细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax) mRNA及蛋白的表达变化情况.结果:1.2 mg·L-1浓度的雷公藤甲素溶液对C6胶质瘤细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性;雷公藤甲素作用C6胶质瘤细胞24 h后,1.2 mg·L-1浓度对其凋亡诱导作用最为明显;雷公藤甲素可明显下调细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白质表达,且该作用呈剂量-时间依赖性,而Bax mRNA及蛋白质表达呈上调趋势.结论:雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞具有较好的生长抑制和凋亡诱导作用,两其作用机制可能与Bcl-2,Bax mRNA及蛋白质表达有关.     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。