益气活血组方对大鼠缺血心肌血管新生作用及对血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子的影响

目的：探讨益气活血组方对急性心肌梗死后大鼠缺血心肌组织血管新生作用和对血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的影响。方法：建立心梗模型后,将40只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为4组：模型组、假手术组、麝香保心丸、益气活血组方。运用免疫组化法检测梗死心肌边缘区微血管计数（MVC）和微血管密度（MVD）及VEGF和bFGF表达;同时应用Western blot技术检测各组大鼠缺血心肌VEGF和bFGF蛋白质水平表达变化。结果：益气活血组方和麝香保心丸组分别与模型组比较,梗死心肌边缘区微血管计数和微血管密度都显著高于后者(P<0.01）。益气活血组方、麝香保心丸组中缺血心肌VEGF和bFGF表达以及其蛋白表达水平较其余组显著升高（P<0.01）。结论：益气活血组方能明显促进心梗后大鼠缺血心肌血管新生,上调心肌VEGF和bFGF蛋白表达可能是其中一个重要的作用机制。     

剪切应力环境中当归补血汤对大鼠内皮祖细胞功能的影响

目的 观察大小不同的层流剪切应力（SS）环境中当归补血汤对大鼠内皮祖细胞（EPCs）功能的影响。方法 制备大鼠骨髓EPCs细胞爬片,置于平行平板层流小室,加载稳定层流SS（0,0.12,1.2,2.4 Pa）6 h后,将不同SS作用下的EPCs随机分为8组,分别为空白组予以无血清培养液灌流、辛伐他汀组予以含0.1 μmol·L^-1辛伐他汀的培养液灌流、当归补血汤组予以含低、中、高浓度的当归补血汤培养液灌流、抑制剂组则在当归补血汤各浓度组中加入LY294002（共3组）,以上各组加载SS 12 h后,检测灌流液中一氧化氮（NO）含量,同时检测细胞增殖、迁移和成小管功能,细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA及蛋白激酶B（Akt）的表达。结果 与空白组比较,辛伐他汀及当归补血汤高浓度均可提高不同SS作用下的细胞功能及NO分泌,促进eNOS mRNA及Akt蛋白的表达（P<0.05）,而当归补血汤中浓度只能促进SS为0 Pa时的细胞功能及NO,eNOS mRNA,Akt蛋白的表达（P<0.05）,抑制剂则阻断当归补血汤高、中浓度对细胞的这些作用。结论 不同的SS环境是影响当归补血汤调节EPCs功能的重要因素之一,SS环境中当归补血汤可通过上调NO/eNOS/Akt表达来维护EPCs的功能。     

保和消积方体外对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

目的：探讨保和消积方对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响,在mRNA和蛋白水平上阐明其分子机制。方法：选取对数生长期的胃癌SGC7901细胞作为研究对象,分为空白对照组和不同浓度（0.5、1、2、4、8、12和16 mg/mL）组,采用噻唑蓝（MTT）法检测不同时间（24、48、72 h）SGC7901细胞增殖情况;采用Transwell小室迁移试验检测SGC7901细胞的迁移能力;利用流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡情况;定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测胃癌SGC7901细胞增殖、迁移、血管生成相关的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,作用不同时间后不同浓度的保和消积方组的胃癌SGC7901细胞增殖抑制率显著增加（均P<0.05）,穿膜细胞数显著降低（均P<0.05）,显著抑制了微管的形成（均P<0.05）,AKT、mTOR、PI3K、VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低（均P<0.05）。结论：保和消积方通过抑制AKT、mTOR、PI3K、VEGF的mRNA和蛋白表达,从而抑制了SGC7901胃癌细胞增殖、迁移,促进了胃癌细胞的凋亡。     

益气活血方对心梗后大鼠缺血心肌血管新生及PDGF—B蛋白表达的影响

目的：探讨益气活血方对心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生的影响及其分子学机制.方法：建立心梗模型并分为5组（益气活血方大剂量组、益气活血方小剂量组、麝香保心丸组、假手术组、模型组）,灌胃6周后把存活的大鼠处死,免疫组化法测定心梗边缘区新生血管数及微血管面密度;检测缺血心肌血小板源性生长因子-B（PDGF-B）蛋白的表达.结果：与假手术组相比,模型组大鼠心梗边缘区新生血管数、微血管面密度及PDGF-B蛋白表达明显升高（P＜0.05）;大剂量组和麝香保心丸组的新生血管数、微血管面密度及PDGF-B蛋白表达均有明显的升高,与模型组比较均有显著差异（P＜0.05）,小剂量组也有不同程度表达.PDGF-B蛋白表达与微血管数增多呈一致性.结论：益气活血方能够促进心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生,对缺血心肌具有保护作用,上调心肌局部PDGF-B蛋白表达可能是其作用机制之一.     

基于VEGF/PI3K/Akt通路的补肺益肾组分方干预慢性阻塞性肺疾病改善肺血管重构机制研究北大核心CSCD

目的基于血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探讨补肺益肾组分方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺血管重构的影响。方法选取32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、补肺益肾组分方组(简称组分方组)和氨茶碱组,每组8只。采用香烟烟雾熏吸联合肺炎克雷伯氏菌反复感染法制备COPD大鼠模型。正常组和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃(雄鼠2.0 mL/次,雌鼠1.5 mL/次),补肺益肾组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方[5.5 mg/(kg·d)]和氨茶碱[54.0 mg/(kg·d)]混悬液灌胃,干预8周后取材。观察大鼠肺功能和肺组织病理变化,免疫荧光和免疫组化法检测细胞分化因子34(CD34)、VEGF、内皮素-1(ET-1)蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测VEGF、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、ET-1 mRNA表达,Western Blot法检测VEGF、VEGFR2、PI3K、Akt、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)、50%呼气流速(EF50)、用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气容积(FEV 0.1)、平均肺泡数(MAN)、管腔面积占血管总面积百分比(LA%)降低,功能残气量(FRC)、肺泡平均截距(MLI)、支气管壁厚度(BWT)、管壁厚度占外径百分比(WT%)、管壁面积占血管总面积百分比(WA%)、VEGF、ET-1、VEGFR2、PI3K、Akt、p-Akt、m TOR蛋白表达及VEGF、VEGFR2、ET-1 mRNA表达升高(P<0.01),肺组织CD34蛋白阳性表达增多。与模型组同期比较,氨茶碱组干预后TV、PEF、EF50、MAN、LA%升高(P<0.05,P<0.01),MLI、WT%、WA%、VEGF、ET-1、VEGFR2、PI3K、m TOR蛋白表达及VEGF、VEGFR2、ET-1 mRNA表达降低(P<0.01),肺组织CD34蛋白阳性表达降低;组分方组干预后TV、PEF、EF50、FEV 0.1、MAN、LA%升高,FRC、MLI、W%、WA%、BWT、VEGF、ET-1、VEGFR2、PI3K、m TOR、p-Akt蛋白表达及VEGF、VEGFR2、ET-1 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),肺组织CD34蛋白阳性表达降低。与氨茶碱组同期比较,组分方组干预后PEF、EF50升高,MLI、WT%降低(P<0.05,P<0.01)。结论补肺益肾组分方能够改善COPD模型大鼠肺小血管重构,其作用机制可能与调控VEGF/PI3K/Akt通路有关。     

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的 观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关因子改善卵巢储备功能下降（DOR）大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法 运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠，将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组（0.000 9 g·kg^-1），补肾活血方高、中、低剂量组（33，16.5，8.25 g·kg^-1），同时另设正常组，每组12只；各组相应药物治疗，正常组和模型组给予等体积生理盐水，连续灌胃14 d，每天1次。治疗结束后，苏木素-伊红（HE）染色卵巢组织，光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化；免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少（P<0.05，P<0.01），卵巢组织中VEGF，Caspase-3表达升高（P<0.05），PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显（P<0.05），补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降，补肾活血方中、高剂量组PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.05，P<0.01），且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论 补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能，促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关，进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，从而调节Caspase-3的含量，最后促进卵泡数量的增加。     

养阴通络方对脑缺血大鼠海马p-Akt、Akt及PI3K蛋白表达的影响

目的:观察养阴通络方对脑缺血损伤大鼠磷酸化Akt(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达作用,对其神经保护作用机制进行探讨。方法:在长期激怒法致肝肾阴虚证动物模型基础上,采用大鼠线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型,免疫印迹法检测海马p-Akt(Ser473)、Akt、PI3K蛋白的表达。结果:与模型组比较,养阴通络方16g/kg组大鼠海马Akt蛋白表达增加(P<0.01),p-Akt(Ser473)、PI3K蛋白表达水平有升高趋势。结论:养阴通络方对脑缺血损伤保护作用的机制,可能是通过上调PI3K、Akt的表达,促进Akt的磷酸化。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

益气活血方对大鼠缺血心肌血管新生及HGF影响的研究

目的 观察益气活血方对急性心肌梗死后大鼠缺血心肌组织血管新生和对促血管新生因子肝细胞生长因子(HGF)蛋白表达的影响.方法 建立心梗模型后,32只雄性SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,麝香保心丸组,益气活血方组4组,用免疫组织化学法检测缺血心肌微血管计数(MVC)和微血管密度(MVD)及缺血心肌HGF蛋白表达.结果 益气活血方组心肌梗死范围小于模型组(P＜0.05).益气活血方组、麝香保心丸组的微血管密度均高于模型组(P＜0.05).益气活血方组、麝香保心丸组的HGF蛋白表达较其余组显著升高(P＜0.05);益气活血方组与麝香保心丸组的HGF蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益气活血方能明显减小大鼠心肌梗死面积、促进缺血心肌血管新生,可能与其促进HGF表达有关.     

安胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠PI3K/Akt信号传导通路的影响

目的:从PI3K/Akt信号传导通路角度探讨安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠疗效的作用机制。方法:采用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)慢性萎缩性胃炎大鼠模型,应用安胃汤进行干预;运用HE染色观察安胃黏膜组织形态改变;采用实时荧光定量PCR方法、Western blot检测PTEN、PI3K、Akt、PDK1、XIAP基因表达及其蛋白含量的水平。结果:安胃汤能够明显改善CAG大鼠胃组织的病理变化,该方可以明显上调PTEN基因以及其蛋白含量的表达,下调PI3K、Akt、PDK1、XIAP基因以及其蛋白含量的表达。结论:安胃汤能够明显改善CAG大鼠胃组织的病理变化,具有明显的抗CAG作用,其作用机制可能通过提高PTEN基因及蛋白的表达,降低PI3K、PDK1、Akt基因及蛋白表达,抑制CAG大鼠胃黏膜细胞P13K/Akt信号传导通路,降低XIAP基因及蛋白,促进胃黏膜细胞凋亡,可能是安胃汤防治CAG的关键机制之一。     

葛根芩连汤对2型糖尿病模型大鼠胰岛细胞IRS-2/PI3K-Akt通路的影响

目的探讨葛根芩连汤保护2型糖尿病大鼠胰岛细胞的可能作用机制。方法 24只雄性ZDF(fa/fa)大鼠给予高脂饲料诱导2型糖尿病模型,造模成功后随机分为葛根芩连汤组、二甲双胍组、模型组,每组8只。8只雄性ZDF(fa/+)大鼠设为正常组。模型组、正常组给予生理盐水10 ml/kg灌胃,葛根芩连汤组给予葛根芩连汤13.8g/kg灌胃,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍肠溶片300 mg/kg灌胃。给药8周后检测空腹血糖(FPG),采用蛋白免疫印迹法检测胰腺胰岛素受体底物2(IRS-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)p85、蛋白激酶B(Akt2)、磷酸化胰岛素受体底物2(p-IRS2)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(pPI3K)p85、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt2)的蛋白表达。实时荧光定量PCR法检测胰腺IRS-2、PI3K p85与Akt2 mRNA表达。ELISA法测定空腹胰岛素(FINS)含量,免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白(Hb A1c)的百分含量。结果与模型组比较,葛根芩连汤组FPG、FINS水平及Hb A1c下降,IRS-2、PI3K p85、Akt2、p-IRS2、p-PI3K p85、p-Akt2蛋白表达上升,IRS-2、PI3K p85和Akt2 mRNA表达上升(P<0.05或P<0.01)。结论葛根芩连汤可能是通过提高IRS-2/PI3K-Akt信号转导通路的活性起到保护胰岛β细胞的作用。     

栝楼薤白半夏汤预处理保护缺血再灌注大鼠心肌PI3K/Akt通路机制

目的:研究栝楼薤白半夏汤预处理对缺血再灌注大鼠心肌组织的保护作用及其机制是否与PI3K/Akt信号通路相关。方法:40只SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、预处理组、栝楼组。模型组及栝楼组大鼠行结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注2 h的方法造模,并设预处理组为对照。预处理组造模方法为短暂缺血5 min、再灌注5 min,反复3次后行缺血30min、再灌注120 min。栝楼组给予中药汤剂栝楼薤白半夏汤灌胃,其余各组灌胃同体积的生理盐水。生化自动仪检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、c Tn T(肌钙蛋白T)含量;采用免疫组化法检测心肌凋亡相关蛋白bax、bcl-2表达情况,采用免疫印迹法检测心肌组织的Akt、p-Akt表达。结果:栝楼组和预处理组血清CK-MB、LDH、c Tn T含量及心肌组织的bax蛋白表达低于模型组,而bcl-2、p-Akt蛋白表达高于模型组。结论:栝楼薤白半夏汤预处理对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,通过激活PI3K/Akt信号通路,与调节凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白的表达有关。     

榆栀止血颗粒对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt信号通路及异位内膜体积的影响

目的:探索榆栀止血颗粒对子宫内膜异位症大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路及异位内膜体积的影响。方法:构建子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型组、榆栀止血颗粒低、中、高剂量组、孕三烯酮组,每组12只,另取12只设为假手术组,分组处理后处死大鼠,测定大鼠异位子宫内膜体积,以免疫组织化学染色检测大鼠异位子宫内膜组织中微血管密度(CD31阳性细胞表达),以免疫酶联吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9、IL-6、TNF-α水平;以蛋白免疫印迹法检测大鼠异位子宫内膜组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠CD31阳性细胞比例、血清VEGF、MMP-9、IL-6及TNF-α水平、异位子宫内膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均升高(P0.05);与模型组比较,榆栀止血颗粒低、中、高剂量组及孕三烯酮大鼠异位子宫内膜体积、CD31阳性细胞比例、血清中VEGF、MMP-9、IL-6及TNF-α水平、异位子宫内膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均降低(P0.05),且榆栀止血颗粒各组之间呈剂量依赖性(P0.05);榆栀止血颗粒高剂量组与孕三烯酮组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:榆栀止血颗粒可抑制子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成,减轻炎性反应,进而减小其异位内膜体积,可能通过阻滞PI3K/Akt信号传导实现。     

芪丹通脉片对大鼠缺血心肌的血管新生作用与机制研究

目的观察益气活血复方芪丹通脉片对大鼠缺血心肌的血管新生作用，并探讨其可能机制。方法复制大鼠急性心肌缺血模型，设生理盐水对照组和芪丹通脉片治疗组，分别于第7、14日取左心室心肌组织，采用N—BT染色法测定心肌梗死区面积，采用免疫荧光和免疫组化法检测心肌微血管密度（MVD）、心肌血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况。结果治疗组第7、14日心肌梗死面积减少，心肌微血管密度增加，VEGF蛋白表达增加，与对照组存在显著性差异，两组第14日心肌微血管密度和VEGF蛋白表达与第7日比较均有增加，而治疗组明显高于对照组。结论以益气活血为治疗原则的中药复方芪丹通脉片具有增加急性心肌缺血犬鼠心肌微血管密度、减少心肌梗死面积的作用，其作用机制可能与增加心肌VEGF蛋白表达有关。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型乳腺癌细胞PI3K/Akt通路HER-2,PI3K,p-Akt表达的机制

目的:观察阳和化岩汤与磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3[人表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达型]PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路中HER-2,PI3K,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,研究阳和化岩汤的干预机制。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3分为空白组,阳和化岩汤组,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组,阳和化岩汤(125 g·L-1),LY294002 (0. 05 g·L-1),阳和化岩汤+LY294002 (阳和化岩汤125 g·L-1,LY294002 0. 05 g·L-1),用药干预24 h后通过免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HER-2,PI3K,p-Akt蛋白表达,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HER-2,PI3K,p-Akt mRNA表达。结果:与空白组比较,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组均能抑制乳腺癌细胞株HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05);阳和化岩汤组能抑制乳腺癌细胞株HER-2,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05),但对PI3K的抑制作用不明显;联用LY294002较单用LY294002具有进一步抑制PI3K表达的作用(P 0. 05)。与阳和化岩汤组,LY294002组比较,LY294002+阳和化岩汤组能够明显抑制HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05)。结论:阳和化岩汤能够抑制乳腺癌脉管生成和侵袭,主要作用机制为通过干预PI3K/Akt通路,降低通路中HER-2,PI3K,p-Akt表达。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨莲甲散结方对肺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的：基于PI3K/Akt信号通路探究莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响，并探索其作用机制。方法：采用CCK-8法检测不同浓度的莲甲散结方对H1975细胞活力的影响。在CCK-8结果基础上将H1975细胞分为空白组和莲甲散结方低、中、高剂量组（3、6、9 g/L）。采用克隆形成、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EDU）细胞增殖实验检测H1975细胞的增殖能力；Transwell迁移和Transwell侵袭实验检测H1975细胞迁移和侵袭能力；Hoechst 33342染色法和流式细胞术Annexin VFITC/PI双染检测H1975细胞凋亡情况。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定H1975细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白，凋亡相关蛋白，磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路蛋白的表达水平。结果：莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞的48 h半数抑制浓度（IC50）为7.51 g/L。与空白组比较，莲甲散结方各剂量组克隆数目减少，EDU阳性数目减少（P <0.05,P <0.01）；与空白组相比，莲甲散结方各剂量组迁移能力下降，侵袭能力减弱（P <0.05,P <0.01）；与空白组相比，莲甲散结方各剂量组促进H1975细胞的凋亡率显著增加（P <0.01）。Western blot结果显示，与空白组相比，莲甲散结方中、高剂量组E-cadherin表达升高（P <0.05,P <0.01）,N-cadherin表达降低（P <0.01）。与空白组相比，莲甲散结方各剂量组Cleaved Caspase-3、Bax表达均升高（P <0.05,P <0.01）,Bcl-2表达均下降（P <0.05,P <0.01）。与空白组相比，莲甲散结方中、高剂量组p-PI3K表达下降（P <0.05,P <0.01），莲甲散结方各剂量组p-Akt表达均下降（P <0.05,P <0.01），且呈浓度依赖性。结论：莲甲散结方可以抑制肺腺癌细胞H1975的恶性表型，诱导H1975细胞的凋亡，抑制PI3K/Akt信号通路的活化，下调PI3K/Akt的蛋白磷酸化水平可能是其机制之一。     

当归-骨碎补配伍治疗骨折三期辨证中期的网络药理学机制

【目的】 通过网络药理学探讨当归-骨碎补配伍治疗骨折三期辨证中期的作用机制。【方法】 借助中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选出当归、骨碎补的有效化合物及其靶点,通过STRING、CTD及GeneCards数据库对当归-骨碎补治疗闭合骨折的靶点进行数据分析,利用Cytoscape 3.7.1开放源码的生物信息分析软件构建化合物-靶点网络、蛋白-蛋白互作网络、化合物-靶点-疾病网络。应用ClueGO插件对当归-骨碎补治疗闭合骨折的靶点进行基因本体论（GO）分析,并对核心靶点基因进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。【结果】 共筛选出当归、骨碎补有效化合物20个,闭合骨折核心靶点25个, 当归-骨碎补治疗闭合骨折的KEGG富集通路共51条,包括低氧诱导因子1（HIF-1）信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、血管内皮生长因子（VEGF）信号通路等。【结论】 当归-骨碎补配伍可能通过主要活性成分β-谷甾醇、山柰酚、柚皮素、木犀草素、黄烷酮类、固醇类、海州骨碎补苷等,作用于HIF-1、TNF、PI3K/Akt、VEGF等信号通路促进骨折三期辨证中期的愈合。     

当归补血汤对衰老心肌梗死大鼠冠状动脉侧枝血管生成的影响及其机制

目的:探讨当归补血汤促进衰老心肌梗死大鼠冠状动脉侧枝血管生成的作用及其机制。方法:采用皮下连续注射D-半乳糖6 w的方式复制衰老大鼠模型,选取60只造模成功大鼠中的12只作为对照组,其余48只采取结扎冠脉左前降支的方式复制衰老大鼠衰心肌梗死模型,并随机分为模型组、倍他乐克阳性对照组及当归补血汤低(1.5 g/kg)、高(5 mg/kg)剂量组,连续干预2 w,比较各组大鼠心功能、心肌梗死面积及血清中一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮合酶(NOS)的水平,采用免疫组化技术检测心肌VEGF蛋白相对表达强度、Ⅷ因子血管密度及微血管密度。结果:各给药组的心肌梗死面积/总面积比值显著低于模型组(P0.05),VEGF蛋白相对表达强度、心肌Ⅷ因子血管密度、微血管密度及血清VEGF、NO、NOS水平显著高于模型组(P0.05);各给药组LVEF显著高于模型组(P0.05),LVIDd、LVIDs显著低于模型组(P0.05)。结论:当归补血汤具有显著的促进衰老心肌梗死大鼠冠状动脉侧枝血管生成作用,其作用机制可能与提高VEGF、NO水平有关。     

清脑益智方通过调控PI3K/Akt信号通路抗缺氧复氧诱导皮层神经元细胞凋亡的实验研究

目的观察清脑益智方含药脑脊液对缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）神经元存活率、凋亡及PI3K/Akt信号转导通路的影响,探讨清脑益智方治疗血管性痴呆的部分机制。方法原代培养皮层神经元,将神经元细胞（CNC）按照1×106的浓度接种于细胞培养板,将CNC分为正常组（简称NC组）、缺氧复氧组（简称MC组）、正常脑脊液组（简称N-CSF组）、清脑益智方含药脑脊液高剂量组（简称QN-H组）、清脑益智方含药脑脊液低剂量组（简称QN-L组）、恩必普组（简称NBP组）。除NC组外,其余各组均在添加相应干预措施后进行缺氧24 h复氧24 h处理。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;采用TUNEL法检测细胞的凋亡情况;采用Western blot法检测磷酸化PI3K及磷酸化Akt蛋白表达;采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测PI3K、Akt、mTOR基因表达。结果与NC组比较,MC组CNC活力（OD值）下降 （P<0.01）。CNC凋亡数目明显增多（P<0.01）。PI3K、Akt、mTOR基因表达均显著降低,p-PI3K、p-Akt蛋白表达升高（P<0.05）;与MC组比较,QN-H组OD值升高明显（P<0.01）;QN-H、QN-L、NBP组神经元凋亡数目明显减少（P<0.01）,其中QN-H组神经元凋亡数目较NBP组更少（P<0.01）;QN-H组PI3K、Akt、mTOR基因表达水平均提高（P<0.05, P<0.01）,QN-L组PI3K、Akt基因表达水平亦升高 （P<0.01）;QN-H、QN-L、NBP组的p-PI3K蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论清脑益智方能提高缺氧复氧致皮层神经细胞活力,减少缺氧复氧引起的皮层神经元的凋亡数目,此作用可能与清脑益智方对PI3K/Akt信号转导通路的调节有关。