沙利度胺联合地塞米松治疗多发性骨髓瘤的实验及临床研究

 目的　探讨沙利度胺（THD）联合地塞米松（Dex）对多发性骨髓瘤（MM）KM3细胞的作用及其可能的机制，进一步用THD联合Dex治疗初治MM患者，观察治疗前、治疗后患者血清IL-6、TNF-α、VEGF、ES、Survivin的表达水平。方法　采用细胞毒性试验（MTT法），确定最佳药物干预条件，使用该条件药物对KM3细胞进行处理，并采用间接ELISA法检测KM3细胞上清和初治MM患者TD方案治疗前后血清中IL-6、TNF-α、VEGF、ES、Survivin的表达水平。结果　THD 80 μg／ml和100 μg／ml联合Dex（4 μg／ml）可使KM3细胞IL-6、Survivin表达下降，ES表达增加（P＜0.05）；而对VEGF、TNF-α的表达无影响。MM患者经TD方案治疗后血清IL-6、TNF-α、Survivin表达下降（P＜0.01），ES表达升高（P＜0.01）。动态观察2例MM患者治疗前、治疗后1、2、4个月，血清IL-6、TNF-α、VEGF、Survivin表达呈下降趋势，而ES表达呈上升趋势。结论　THD联合Dex可能通过下调IL-6、TNF-α、Survivin的表达，上调ES的表达而发挥抗MM的作用。     

CCR5受体参与CIK细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层的过程

目的:选用高表达MIP-1α的人CIK细胞作为模式细胞对穿过人脑微血管内皮细胞单层机制进行探讨.方法:通过应用蛋白免疫印迹技术、真核表达载体的构建与细胞转染技术,同时进行跨内皮迁移和抗体封闭实验,集中探讨HBMEC膜受体趋化因子受体5(CCR5)在CIK细胞穿过HBMEC单层过程中的作用.结果:在CIK细胞与HBMEC单层单独孵育过程中,引起HBMEC膜受体CCR5表达变化;HBMEC膜受体CCR5的高表达使Jurkat细胞穿过HBMEC单层能力增强.结论:HBMEC膜受体CCR5参与了CIK细胞穿过HBMEC单层过程.     

逆转录病毒载体介导大鼠乳腺癌细胞共表达MIP1α和B71

目的：建立共表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的大鼠乳腺癌细胞株，并进行体外活性检测。方法：应用含不同选择标记的重组逆转录病毒载体，经1mg／ml G418和2rLg／ml puromycin双药物筛选后获得MIP-1α＋B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株。RT-PCR、免疫组化检测mMIP-1α的表达，RT—PCR、流式细胞术检测mB7-1的表达；将共表达MIP-1α和B7-1的肿瘤细胞与大鼠脾淋巴细胞混合培养后，MTT法检测淋巴细胞的增殖指数、琼脂糖打孔法检测共表达MIP-1α和B7-1肿瘤细胞对单个核细胞的趋化活性。结果：经脂质体转染包装细胞产生的重组逆转录病毒上清病毒滴度达4．6×10^7CFU／L。细胞生长曲线显示，重组逆转录病毒感染对乳腺癌细胞增殖无明显影响。重组逆转录病毒感染的大鼠乳腺癌细胞株SHZ-88／mMIP-1α＋mB7—1有B7-1和MIP-1αmRNA及蛋白的表达。淋巴细胞增殖指数PI值SHZ-88／PLXSN组为（0．76±0．25），SHZ-88／mMIP-1α＋mB7-1组为（1．95±-0．31），后者体外刺激淋巴细胞增殖能力增强（P〈0．01），SHZ-88／pBabe puro组的趋化指数为（0．99±-0．19），mMIP-1α＋mB7—1组的为（3．88±0．33），后者显著增强了趋化活性。结论：通过逆转录病毒载体介导建立MIP-1α和B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株具有招引单个核细胞，并将其激活的体外生物学活性。     

氟达拉滨对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞分泌IL-6的影响

目的：研究氟达拉滨（fludarabine）在体外对多发性骨髓瘤细胞KM3细胞生长的影响及对细胞上清液IL-6、sIL-6R的影响。方法：采用MTT法及细胞计数法分别观察不同浓度氟达拉滨对KM3细胞生长的影响；用双抗夹心法检测不同浓度氟达拉滨作用KM3细胞后上清液白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）和可溶性白细胞介素6受体（soluble interleukin-6 receptor，sIL-6R）的表达水平。结果：MTT法及细胞计数法均显示氟达拉滨对KM3细胞有明显的抑制作用，氟达拉滨作用KM3细胞72h后，25、50、100、200、400nmol／L组的增殖抑制率均高于对照组（P〈0．01），且与浓度成正比。400nmol/L组对KM3细胞增殖抑制率随时间的延长而增加。双抗夹心法检测结果显示KM3细胞经氟达拉滨作用96h后，其IL-6水平先升高后明显下降，而sIL-6R水平随药物浓度的升高而逐渐下降。结论：氟达拉滨能明显抑制KM3细胞的增殖，同时能抑制KM3细胞自分泌IL-6和sIL-6R。     

细胞核受体RXRα在2,2',4,4'-四溴二苯醚神经毒性中的作用及其机制

目的：探讨视黄醛X受体（RXRs）为核心的多个核受体在2，2'，4，4'-四溴二苯醚（BDE-47）致神经细胞毒性中的相互作用，揭示受体介导的多溴二苯醚（PBDEs）神经毒性效应的分子机制。方法：构建人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的RXRα基因敲除细胞株及高表达细胞株（分别命名为RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞）；CCK-8法分别检测SK-N-SH（野生型）、RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞在BDE-47浓度分别为1、5、10、20、50、100、150、200 μmol/L处理12、24、48、72 h时的细胞增殖率；qPCR和Western blot法分别检测上述3种细胞中RXRα、TRα、TRβ、PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果：在染毒时间分别为12、24、48、72 h时，不同浓度BDE-47作用下3种细胞的增殖率比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。BDE-47对RXR/KO-SK-N-SH细胞的IC₅₀是野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞的1/2。BDE-47处理3种细胞后，RXRα的mRNA和蛋白表达水平在野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞中显著升高，SK-N-SH细胞和RXR/OE-SK-N-SH细胞中TRα和PPARα的表达升高，此两种受体在RXR/KO-SK-N-SH细胞中表达降低。在本实验所采用的BDE-47处理浓度下，TRβ和PPARγ表达在3种细胞中均无明显变化。结论：RXRα在提高SK-N-SH细胞生存能力中发挥重要作用。RXRα可以介导TRα和PPARα的表达，而BDE-47并未激活或者抑制SK-N-SH细胞TRβ和PPARγ的表达。说明BDE-47对于SK-N-SH细胞的毒性主要是通过激活RXRα，进一步诱导TRα和PPARα的表达而介导的。     

细胞核受体RXRα在2,2',4,4'-四溴二苯醚神经毒性中的作用及其机制

目的：探讨视黄醛X受体（RXRs）为核心的多个核受体在2，2'，4，4'-四溴二苯醚（BDE-47）致神经细胞毒性中的相互作用，揭示受体介导的多溴二苯醚（PBDEs）神经毒性效应的分子机制。方法：构建人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的RXRα基因敲除细胞株及高表达细胞株（分别命名为RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞）；CCK-8法分别检测SK-N-SH（野生型）、RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞在BDE-47浓度分别为1、5、10、20、50、100、150、200 μmol/L处理12、24、48、72 h时的细胞增殖率；qPCR和Western blot法分别检测上述3种细胞中RXRα、TRα、TRβ、PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果：在染毒时间分别为12、24、48、72 h时，不同浓度BDE-47作用下3种细胞的增殖率比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。BDE-47对RXR/KO-SK-N-SH细胞的IC₅₀是野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞的1/2。BDE-47处理3种细胞后，RXRα的mRNA和蛋白表达水平在野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞中显著升高，SK-N-SH细胞和RXR/OE-SK-N-SH细胞中TRα和PPARα的表达升高，此两种受体在RXR/KO-SK-N-SH细胞中表达降低。在本实验所采用的BDE-47处理浓度下，TRβ和PPARγ表达在3种细胞中均无明显变化。结论：RXRα在提高SK-N-SH细胞生存能力中发挥重要作用。RXRα可以介导TRα和PPARα的表达，而BDE-47并未激活或者抑制SK-N-SH细胞TRβ和PPARγ的表达。说明BDE-47对于SK-N-SH细胞的毒性主要是通过激活RXRα，进一步诱导TRα和PPARα的表达而介导的。     

趋化因子受体MCP-1/CCR2在多发性骨髓瘤中基质细胞与瘤细胞的异常表达

 [摘要] 目的 观察趋化因子（MCP-1）及其趋化因子受体（CCR2）在多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓单个细胞,骨髓基质细胞中的表达。方法 选择2011年5月—2011年9月山西医科大学第一附属医院血液科住院患者,15例经国内统一标准确诊为多发性骨髓瘤的初发病人,10例为一般血液病患者。①实验方法,取样本进行骨髓瘤细胞与骨髓基质细胞的分离培养,在含13%小牛血清的RPMI1640培养液中培养,每2天更换1次培养液,本实验用的细胞均处于对数生长期。②实验评估,采用流式细胞术检测骨髓瘤患者骨髓瘤细胞,骨髓基质细胞中MCP-1、CCR2。结果 实验评估方法显示约2/3的多发性骨髓瘤患者骨髓均表达MCP-1、CCR2,而对照组的骨髓中趋化因子MCP-1、CCR2基本无表达。结论 大部分多发性骨髓瘤患者骨髓均表达MCP-1、CCR2。 MCP-1及其特异性受体CCR2是MM细胞表面表达的主要趋化因子,对MM的疾病的进展起着一个比较重要的作用。     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞SOCS-1基因去甲基化及其对P—STAT3蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷（AS2O3）对多发性骨髓瘤（MM）细胞内细胞因子信号转导抑制因子-1（SOCS-1）基因甲基化状态的影响及其对磷酸化的信号转导与转录激活因子-3（P．STA33）表达的影响。方法采用甲基特异性PCR法检测AS2O3作用前后MM细胞株U266和CZ-1细胞内SOCS-1基因的甲基化状态,应用蛋白免疫印迹法检测AS2O3处理前后细胞内P—STAT3蛋白的表达变化,并采用流式细胞技术检测AS2O3作用前后MM细胞增殖和凋亡的变化。结果MM细胞株内SOCS-1基因存在程度不同的甲基化状态,与对照组相比,AS2O3作用后MM细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱或消失,P—STAT3蛋白的表达也明显减弱,同时细胞生长受抑,凋亡比率升高。AS2O3浓度分别为0、0．5、1．0、2．0μmol／L时,U266细胞株的总凋亡率分别为0．06％、0．56％、48．96％、61．07％（x2=9．19,P〈0．05）;而CZ-1细胞株的总凋亡率分别为4．20％、40．30％、47．72％、68．49％（X2=8．96,P〈0．05）。结论AS2O3可能通过诱导MM细胞内SOCS-1基因去甲基化作用,进-步抑制细胞增殖信号Janus激酶（JAK）-STAT通路的活化,从而诱导MM细胞的凋亡。     

miRNA-181a对多发性骨髓瘤细胞生物学特性影响的初步研究

目的 探讨miRNA-181a(miR-181a)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达情况及其对MM细胞生物学特性的影响.方法 应用免疫磁珠筛选的方法分离并纯化25例初治、复发难治MM患者及10例非恶性血液病患者骨髓CD138+细胞,应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-181a表达情况.同时检测RPMI 8226、H929及U266三种MM细胞株中miR-181a的表达.应用miR-181a抑制剂及激动剂观察下调和上调miR-181a表达对MM细胞生物学特性的影响,并对miR-181a进行靶基因预测.结果 与非恶性血液病患者相比,MM患者CD138+细胞中miR-181a表达上调.对MM细胞株的观察发现,与非恶性血液病患者骨髓CD138+细胞相比,RPMI 8226及U266细胞株miR-181a高表达,而H929细胞株则低表达.相比对照组,应用100 nmol/L miR-181a抑制剂下调miR-181a后,U266细胞的增殖活力在24、48及72 h分别为(50.5±4.1)%、(52.3±2.2)%和(69.5±4.3)%,低于对照组的(67.1±3.3)%、(71.5±3.6)%和(78.1±5.4)%(均P<0.05),提示细胞增殖受抑.而应用100 nmol/L miR-181a激动剂上调miR-181a后,H929细胞在24、48 h时的增殖活力分别为(38.5±3.6)%和(82.2±6.9)%,高于对照组的(21.2±2.4)%和(61.3±5.4)%(均P<0.01),提示细胞增殖增强.细胞周期分析提示,miR-181a抑制剂使U266细胞周期阻滞在G0/G1期.细胞药敏实验结果显示,多柔比星、紫杉醇及5-氟尿嘧啶作用后,与药物单独处理的细胞相比,miR-181a抑制剂下调U266细胞miR-181a表达的细胞增殖活力下降.在48 h和72 h的吸光度(A)值显著低于对照组.细胞迁移实验显示,miR-181a抑制剂下调miR-181a能抑制U266细胞的迁移能力,实验组细胞的迁移比例为(62±10)%,低于对照组的(89±12)%(P<0.05),而miR-181a激动剂则能提高H929细胞的迁移能力,实验组细胞的迁移比例[(242±9)%]高于对照组的(98±8)%(P<0.01).结论 MM细胞高表达miR-181a.miR-181a的高表达可能会促进MM细胞的增殖、转移及耐药,可能与MM患者预后有关,是MM预后评估一个重要的候选生物标志物.对miR-181a靶基因进行进一步预测,同时应用基因缄默的策略可能会改善MM患者的预后.     

APE1表达增强与多发性骨髓瘤细胞对马法兰耐药的关系研究

目的：探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶（apurinic/apyrimidinic endonucle ase,APE1）在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞中的表达及其与马法兰耐药的关系.方法：采用双荧光抗体免疫标记法结合激光共聚焦显微镜和免疫细胞化学观察KM3细胞、32例MM患者和10例正常自愿者骨髓标本APE1蛋白定位及表达,并通过免疫细胞化学和Western blot检测0～15 μmol/L马法兰作用KM3细胞1～2 d后APE1表达的变化.结果：APE1和CD38蛋白在MM细胞存在共表达,APE1蛋白表达尤以细胞核周围表达明显;APE1阳性表达在正常对照组、MM初治组和MM复发或难治组间依次增高,P＜0.05;马法兰可诱导KM3细胞APE1表达增强,并与其作用时间及剂量成正比.结论：APE1蛋白表达强度与MM疗效有关,且马发兰作用可诱导其表达增强,提示APE1基因表达增强可能在MM对马发兰耐药中起一定作用.     

sFlt-1基因转染多发性骨髓瘤细胞的体外实验研究

背景与目的:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)最重要的促血管形成因子。本研究探讨人可溶性VEGF受体sFlt-1基因转染MM细胞株RPMI8226后对其生长的影响。方法:采用已构建的真核表达载体pcDNA3-sFlt-1,使用脂质体介导的方法转染RPMI8226细胞,RT-PCR及ELISA法检测sFlt-1的表达,MTT及ELISA法检测转染前后RPMI8226细胞生长及VEGF含量变化。结果:真核表达载体pcDNA3-sFlt-1成功转染RPMI8226细胞。转染后的RPMI8226细胞培养上清液中可检测到sFlt-1蛋白的表达,转染组RPMI8226细胞的生长受抑制,培养上清中VEGF的含量减少。结论:sFlt-1基因转染RPMI8226细胞后可表达具有生物活性的sFlt-1蛋白,抑制RPMI8226细胞的生长。     

环孢素A 抑制亲环素A 对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

  目的  亲环素A（cyclophilinA,CyPA）在多种肿瘤组织中高表达,在肿瘤形成发展中扮演重要的角色。本研究对CyPA在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者骨髓标本中的表达及其对MM细胞增殖、凋亡能力的影响进行研究,探讨其与MM发生、进展的相关性。  方法  采用ELISA法检测骨髓标本及细胞培养上清中CyPA水平。不同浓度环孢素A（cyclosporin A,CsA）刺激MM细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力、Western blot法检测PARP蛋白裂解评价细胞凋亡水平。  结果  单克隆免疫球蛋白血症、冒烟型骨髓瘤、MM患者骨髓中CyPA浓度逐渐升高,至MM达最高值,患者治疗后CyPA浓度明显下降。CsA处理MM细胞后,CyPA分泌减少,随时间延长细胞增殖能力呈浓度依赖性逐渐减弱,PARP蛋白裂解增加、细胞凋亡增多。  结论  随MM恶性程度增加,骨髓中CyPA浓度显著升高,经治疗缓解后CyPA浓度显著下降,CyPA介导的细胞增殖在MM致癌机制中可能起关键作用。CsA作为CyPA作用的抑制剂,具有促进细胞凋亡、阻碍细胞增殖的作用,无免疫抑制作用的CsA衍生物可能是潜在的MM有效治疗手段。      

多发性骨髓瘤患者SDF-1α、OPN、CD44v6和TRACP-5b表达的研究

目的探讨基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）、骨桥蛋白（OPN）、变异的CD44受体（CD44v6）和抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用。方法用ELISA法检测了32例MM患者和15例对照骨髓单个核细胞（MNCs）和骨髓基质细胞（BMSCs）的SDF-1α、OPN、CD44v6和TRACP-5b水平。结果 MNCs产生的SDF-1α、OPN、CD44v6水平在初发和复发组、病情稳定MM组和对照组显著下降（P〈0.05）。9例初发和复发患者的BMSCs与人骨髓瘤细胞系U266加入rhIL-6混合培养后,SDF-1α水平明显增高（P〈0.05）。SDF-1α、OPN、TRACP-5b水平在MM患者骨质破坏≥3处、〈3处和对照组显著下降（P〈0.05）。结论 SDF-1α、OPN和CD44v6水平升高与MM发病或病情进展、骨质破坏有关。     

调节性T细胞从移植物局部迁移至引流淋巴结抑制同种异体排斥反应的发生

调节性T细胞（Treg）在维持免疫稳态中发挥了重要作用。Treg的功能发挥需要其向组织或二级淋巴组织的迁移。根据CD103的表达情况可将Treg分为两个亚群：表达L选择素和CCR7的CD103-初始Treg主要在淋巴组织内循环;高表达E、P选择素和黏附分子CD54、ICOS、LFA-1的CD103^＋效应Treg高表达趋化因子受体CCR2、CCR6和CXCR3,可以有效地向免疫反应部位迁移。Treg恰当的迁移定位对其免疫抑制功能有效的发挥是至关重要的。     

姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞的抑制作用及其机制

目的：探讨姜黄素（curcumin）对人多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）细胞H929、RPM18226的抑制作用及其机制。方法：姜黄素处理细胞后，采用MTT法检测细胞的增殖抑制作用；FCM分析细胞凋亡和周期的变化；RT－PCR法检测存活蛋白（survivin）、Bcl-2和BaxmRNA表达的变化。结果：姜黄素可抑制细胞H929和RPM18226的增殖，并呈时间和浓度依赖性。姜黄素诱导RPM18226细胞凋亡，发生G2／M期阻滞。姜黄素处理H929和RPM18226细胞后，survivin和BCl-2 mRNA的表达明显下调，而BaxmRNA的表达明显上调。结论：姜黄素可抑制人MM细胞增殖并诱导其凋亡，推测姜黄素在转录水平影响survivin、Bcl-2、Bax的表达，可能是其抑制肿瘤的作用机制之一。     

艾拉莫德通过活化AMPK对骨髓瘤细胞株U266增殖的影响

目的:探讨艾拉莫德对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞株U266细胞增殖的影响。方法:艾拉莫德（10、20和30 μg/ml）作用于骨髓瘤细胞株U266细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测U266细胞活力;细胞周期染色试剂盒检测U266细胞周期分布情况;Western blot检测细胞周期相关蛋白CDK2、AMPK及p-AMPK的表达水平。结果:10、20和30 μg/ml的艾拉莫德处理24 h后,U266细胞活力呈剂量依赖性的降低。艾拉莫德（10、20和30 μg/ml）处理U266细胞24 h后,G0/G1期细胞数明显增加,S期细胞数明显降低。本研究还进一步发现10、20和30 μg/ml的艾拉莫德处理24 h后可显著下调U266细胞的CDK2蛋白表达水平。此外,艾拉莫德人处理骨髓瘤细胞株U266细胞24 h后,U266细胞的p-AMPK/AMPK水平明显增加。结论:艾拉莫德可抑制骨髓瘤细胞株U266细胞增殖以及细胞周期,其作用机制可能涉及促进AMPK的活化。     

AS2O3对多发性骨髓瘤细胞凋亡及其对自分泌VEGF的影响

目的研究三氧化二砷(AS2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3凋亡及其对自分泌VEGF的影响。方法不同浓度AS2O3分别作用于KM3细胞24、48及72小时，用锥虫蓝拒染法检测细胞生长抑制率，经形态学(光镜，透射电镜)和DNA电泳观察KM3细胞凋亡；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液上清血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果AS2O3可抑制KM3细胞的生长，诱导KM3细胞凋亡；AS2O3对KM3细胞白分泌VEGF的抑制作用具有代偿机制，且与时间浓度有关。24小时时，随着AS2O3浓度的增加，VEGF分泌逐渐增强；48和72小时时，随着AS2O3浓度的增加，VEGF分泌则先上升后下降。结论AS2O3可诱导MM细胞凋亡，同时可抑制MM细胞自分泌VEGF。     

多发性骨髓瘤细胞株PRIM8226侧群细胞分选及其生物学特性的研究

目的 检测和分选多发性骨髓瘤（MM）细胞株PRIM8226中的侧群细胞（SP细胞）并鉴定其生物学特性.方法 以Hoechst33342/碘化丙啶（PI）荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞术荧光激活分选法检测并分选MM细胞株PRIM8226 SP细胞,并通过细胞生长曲线、细胞周期、免疫表型、集落形成实验、RT-PCR检测干细胞特异标志物mRNA表达量、裸鼠体内成瘤实验等对SP细胞的生物学特性进行初步探讨.结果 MM细胞株PRIM8226 SP细胞含量为（1.78±0.89）％,采用流式细胞术成功分选SP细胞.生长曲线显示：SP细胞分选初期生长较主群细胞（MP细胞）缓慢,进入稳定增长期后增殖能力与MP细胞差异无统计学意义（P＞0.05）.细胞周期分析显示：SP细胞与MP细胞相比,周期多处于Go/G1期[（44.34±3.09）％、（28.49±1.97）％,P＜0.05],较少的细胞处于S期[（38.83±3.69）％、（51.49±4.62）％,P＜ 0.05].在免疫表型研究中,观察到SP和MP细胞的CD138、CD38表达分别为（78.5±8.5）％、（82.0±4.0）％和（72.3±15.7）％、（84.3±11.9）％,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.MM细胞株PRIM8226 SP细胞的单细胞克隆直径、克隆形成数、克隆形成率均高于MP细胞[0.280±0.016和0.118±0.019、1 722±127和358±14、（86.1±3.46）％和（17.9±1.88）％,P＜0.05].RT-PCR显示SP细胞干细胞标志性基因的表达高于MP细胞：c-myc[（29.90±3.73）％、（16.84±2.35）％]、KIF4[（29.97±2.89）％、（19.06±1.23）％]、SOX2[（40.00±4.58）％、（16.62±2.09）％]、OCT4[（32.96±1.56）％、（23.27±0.92）％]（均P＜0.05）.裸鼠体内成瘤实验显示SP细胞成瘤能力显著高于MP细胞（最低成瘤数量分别为5×103、5×105个）.结论 MM细胞株PRIM8226的SP细胞在静止期细胞比例、集落形成能力、干细胞标记c-myc、KIF4、SOX2、OCT4基因表达量、体内成瘤能力上与MP细胞差异均有统计学意义,而SP细胞和MP?     

多发性骨髓瘤患者骨髓基质细胞IL-1β.IL-6.SCF.TPO表达的研究

 【摘要】　目的　研究多发性骨髓瘤 （MM） 患者骨髓基质细胞多种细胞因子在mRNA水平的表达情况，探讨不同因子在MM发生、发展中可能存在的作用。方法　采用半定量RT-PCR方法在mRNA水平上检测MM患者骨髓基质细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、干细胞因子（SCF）、血小板生成素（TPO）的表达。结果　IL-1β、IL-6的表达：MM组与正常对照组和非MM组相比差异均具有统计学意义（P＜0.01）。SCF的表达：自体移植后患者组与正常对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05），初发MM组和难治复发MM组与正常对照组和非MM组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。TPO的表达：MM组与正常对照组相比差异具有统计学意义（其中初发组P＜0.01，其余两组P＜0.05）。初发组与非MM组相比差异有统计学意义（P＜0.01），难治复发MM组和移植后患者组与非MM组相比差异无统计学意义。结论　体外培养的MM患者骨髓基质细胞 IL-1β、IL-6、SCF和TPO存在表达异常，这些因子在疾病进展中可能起重要作用。     

cAMP信号通路与多发性骨髓瘤

多发性骨髓瘤（MM）细胞克隆性增殖涉及细胞内多个信号通路.环腺苷酸（cAMP）信号通路作为一种重要的细胞内信息传递系统,与包括骨髓瘤细胞在内的多种恶性淋巴细胞增殖和凋亡的失调相关.靶向调变cAMP信号通路可以诱导包括骨髓瘤细胞在内的多种恶性淋巴细胞增殖阻滞和凋亡,其机制涉及线粒体介导细胞凋亡和cAMP调控多种细胞内递质.对cAMP介导骨髓瘤细胞凋亡深入研究分析,将为临床治疗MM提供可能途径和潜在靶点.